丹参酮
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二 方法与结果……………………………………………………………………37 三 讨论 ……………………………………………………………………………41 第 9 章 高效液相色谱法测定隐丹参酮原料药中有关物质的含量……………43 一 仪器和试药……………………………………………………………………43 二 方法与结果……………………………………………………………………43 三 讨论 ……………………………………………………………………………47 第 10 章 隐丹参酮的残留溶剂测定 ……………………………………………48 一 药品与试剂……………………………………………………………………48 二 仪器与色谱条件………………………………………………………………48 三 方法……………………………………………………………………………48 四 结果……………………………………………………………………………52 五 讨论……………………………………………………………………………53 第11章 隐丹参酮原料药稳定性研究……………………………………………55 谢辞…………………………………………………………………………………58 参考文献……………………………………………………………………………59 原创性声明…………………………………………………………………………60
丹参酮 IIA 原料药、隐丹参酮原料药的质量标准研究
【论文摘要】 目的：研究丹参酮 IIA 原料药、隐丹参酮原料药的质量标准。方法：1. 按《中 华人民共和国药典》（2005 年版）二部凡例和附录要求进行性状、鉴别、检查的 研究。2. 建立反相高效液相色谱法测定原料药主成分和有关物质的含量。3. 建 立气相色谱法测定原料药中残留溶剂的含量。4. 进行原料药的稳定性研究，包 括影响因素试验和加速试验。结论：各方法准确、可靠，可分别用于丹参酮 IIA 原料药、隐丹参酮原料药的质量控制。 关键词：丹参酮 IIA 隐丹参酮 质量标准 高效液相色谱法
数；鉴别项下的可见－紫外吸收光谱特征、红外光吸收图谱；检查项下的晶型、 干燥失重、炽灼残渣等等，Leabharlann Baidu定方法参照按《中华人民共和国药典》（2005 年版） 二部凡例和附录的要求[3]。 （二）原料药主成分含量测定
药品的含量测定是评价药品质量、保证药品疗效的重要手段。用于丹参酮 IIA、隐丹参酮含量测定的方法一般有分光光度法[4]和高效液相色谱法[5]，本实验 采用反相高效液相色谱法进行含量测定，是因为其相对其他含量测定方法来说， 具有很高的分离能力、准确度、精密度及灵敏度。 （三）原料药有关物质含量测定
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第 1 章 前言
一 丹参酮ⅡA、隐丹参酮简介 中药丹参是唇形科鼠尾草属的多年生草本植物丹参的干燥根及根茎，因其色
红且形状似参而得名。 丹参作为一传统中药在我国沿用已久,始载于《神农本草经》，被列为上品。
《本草经疏》、《本草纲目》中都有记载丹参具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦 的功效[1]。
丹参主要含两类成分：一为脂溶性的二萜类化合物，一为水溶性的多聚酚酸 类成分。在丹参脂溶性成分中,丹参酮IIA是丹参治疗冠心病的主要有效成分之 一，在丹参中的含量可达 0.5%以上；隐丹参酮抗菌活性很强，比小檗碱强许多 倍，含量亦高,常作为抗菌消炎类丹参制剂的质量控制指标成分[2]。
丹参酮ⅡA（Tanshinone）性质：桔红色针状结晶，其化学名为 1，6，6-三 甲基-6，7，8，9-四氢菲并[1，2-b]呋喃-10，11-二酮；分子式为C19H18O3。
隐丹参酮（Cryptotanshinone）为橙红色针状结晶；其化学名为 1,6,6-三甲基 -1,2,6,7,8,9-六氢菲并[1,2-b]呋喃-10,11-二酮；结构式为C19H20O3。
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目录
【摘要】 …………………………………………………………………………… 1 【关键词】……………………………………………………………………………1 Abstract ……………………………………………………………………………… 2 Keywords .…………………………………………………………………………… 2 目录 ………………………………………………………………………………… 3 第1章 前言 …………………………………………………………………………5 一 丹参酮ⅡA、隐丹参酮简介 ………………………………………………… 5 二 实验目的、内容和方法…………………………………………………………6 第 2 章 丹参酮 IIA 基本理化性质测定……………………………………………8 一 性状 ……………………………………………………………………………9 二 鉴别 ……………………………………………………………………………9 三 检查 ……………………………………………………………………………11 第 3 章 高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA 原料药的含量…………………………12 一 仪器和试药 ……………………………………………………………………12 二 方法与结果 ……………………………………………………………………12 三 讨论 …………………………………………………………………………… 16 第 4 章 高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA 原料药中有关物质的含量……………17 一 仪器和试药 ……………………………………………………………………17 二 方法与结果 ……………………………………………………………………17 三 讨论 ……………………………………………………………………………21 第 5 章 丹参酮ⅡA 的残留溶剂测定 ……………………………………………23 一 药品与试剂 ……………………………………………………………………23 二 仪器与色谱条件 ………………………………………………………………23 三 方法 ……………………………………………………………………………23 四 结果 ……………………………………………………………………………27 五 讨论 ……………………………………………………………………………28 第6章 丹参酮 IIA 原料药稳定性研究……………………………………………30 第 7 章 隐丹参酮基本理化性质测定 ……………………………………………33 一 性状 ……………………………………………………………………………33 二 鉴别 ……………………………………………………………………………34 三 检查 ……………………………………………………………………………36 第 8 章 高效液相色谱法测定隐丹参酮原料药的含量 …………………………37 一 仪器和试药 ……………………………………………………………………37
特殊杂质是在药物生产和贮存过程中产生的，由于特殊杂质的化学结构与主 药相似，结构不甚明确或结构明确但难以获得标准品，因此采用HPLC法，以自 身对照法[6]进行检查。特别检查隐丹参酮在贮存过程中是否被氧化为丹参酮IIA。 （四）原料药溶剂残留量测定
药品中的残留溶剂是指在原料药或赋形剂的生产中，以及在制剂制备过程 中产生或使用的有机挥发性化合物，在工艺中不能完全除尽。由于残留溶剂没有 疗效，故所有残留溶剂均应尽可能除去。近年来，药品中残存有机溶剂的毒性和 致癌作用日益引起各方面的关注。为了保护患者免受药品中残留有机溶剂的伤 害，需对药品在生产过程中引入的有机溶剂残留量进行控制。
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第 3 类：具有低毒性的溶剂――这类溶剂包括人们认为在药物中以一般量存 在时对人体无害的溶剂，但该类溶剂中许多尚未进行长期毒性或致癌研究。急性 毒性或短期毒性试验表明，这类溶剂几乎无毒、无遗传毒性。
第 4 类：这类溶剂还没有合适的毒性数据证明其有毒性。 目前，随着科学技术的进步，国内外陆续有大量的新药上市。为保证用药安 全，各国对新药在研究过程中的质量控制均有严格的规定，其中规定药物原料或 制剂中有机溶剂残留量必须进行检查。国内关于有机溶剂残留量分析的报道日益 增多，多采用气相色谱法测定有机溶剂残留量，按进样方式的不同，可分为溶液 直接进样法[8]及顶空进样法[9]；按所使用色谱柱的类型，可分为填充柱测定及石 英毛细管柱测定。 丹参酮 IIA、隐丹参酮原料药在生产工艺过程中采用了乙醇、乙酸乙酯、二 氯甲烷和石油醚等有机溶剂，其中二氯甲烷属于第 2 类有机溶剂，乙醇、乙酸乙 酯属于第 3 类有机溶剂，石油醚属于第 4 类有机溶剂。本实验采用直接进样的毛 细管气相色谱法分别测定丹参酮 IIA 原料药中乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷的含量， 方法简便，结果准确。 （五）原料药稳定性试验研究 药品的贮藏条件，例如：是否需要避光，是否需要低温贮藏等；药品在一定 条件下贮藏多长时间仍有效，即有效期的确定。这些内容都是通过药品稳定性试 验来确定的。药品稳定性试验包括影响因素试验、加速试验和长期试验。
中山大学药学院新药研究开发中心对中药丹参脂溶性成分丹参酮ⅡA 和隐 丹参酮分别进行药理试验，发现丹参酮ⅡA 具有降低高胆固醇的作用，可用于治 疗动脉粥样硬化；隐丹参酮具有清除人体内高浓度血氨和脑氨（胺）的功能，可 用于肝性脑病和亚临床肝性脑病治疗和预防用药。因此将其开发成丹参酮ⅡA 胶 囊和隐丹参酮胶囊，并申报一类新药。
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Abstract Objective To establish a quality standard method for Tanshinone IIA and Cryptotanshinone drug substance respectively. Methods 1.The indexes of characteristics, identification and examination were determined based on procedures recorded in general notices and appendix of Chinese pharmacopoeia, published in 2005. 2. HPLC was used to determine the content of main constituent and related substance in drug substance. 3. The content of residual organic solvents was determined by GC. 4. Study the stability of frug substance in conditions of high humidity, hight temperature , strong light irradiation and in accelerated test. Conclusion The quality control method is accurate and reliable. It is suitable for the quality control of Tanshinone IIA and Cryptotanshinone drug substance respectively． Keywords Tanshinone IIA , Cryptotanshinone, quality standard, HPLC
ICH（人用药品注册技术规范国际协调会）关于有机溶剂残留量的指导原则 将有机溶剂分为 4 类[7]：
第 1 类：避免使用的溶剂――对人体有致癌性，或有较大致癌嫌疑及对环境 造成危害的溶剂。
第 2 类：限制使用的溶剂－－可能引起神经中毒或畸变等不可逆毒性，或怀 疑具有其他严重的但可逆的毒性。因其固有的毒性，应限制使用。
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二 实验目的、内容和方法 由于丹参酮ⅡA 和隐丹参酮有着显著的药理作用，拟将其开发成单体药物，
为了控制该单体药物的质量，对其质量标准进行了研究。研究内容主要包括： 1、基本理化性质测定 2、含量测定方法研究 3、有关物质含量测定方法研究 4、溶剂残留量测定方法研究 5、加速稳定性研究
（一）基本理化性质测定 该部分内容包括性状项下的外观、臭、味和一般稳定情况、溶解度、物理常
二 方法与结果……………………………………………………………………37 三 讨论 ……………………………………………………………………………41 第 9 章 高效液相色谱法测定隐丹参酮原料药中有关物质的含量……………43 一 仪器和试药……………………………………………………………………43 二 方法与结果……………………………………………………………………43 三 讨论 ……………………………………………………………………………47 第 10 章 隐丹参酮的残留溶剂测定 ……………………………………………48 一 药品与试剂……………………………………………………………………48 二 仪器与色谱条件………………………………………………………………48 三 方法……………………………………………………………………………48 四 结果……………………………………………………………………………52 五 讨论……………………………………………………………………………53 第11章 隐丹参酮原料药稳定性研究……………………………………………55 谢辞…………………………………………………………………………………58 参考文献……………………………………………………………………………59 原创性声明…………………………………………………………………………60
丹参酮 IIA 原料药、隐丹参酮原料药的质量标准研究
【论文摘要】 目的：研究丹参酮 IIA 原料药、隐丹参酮原料药的质量标准。方法：1. 按《中 华人民共和国药典》（2005 年版）二部凡例和附录要求进行性状、鉴别、检查的 研究。2. 建立反相高效液相色谱法测定原料药主成分和有关物质的含量。3. 建 立气相色谱法测定原料药中残留溶剂的含量。4. 进行原料药的稳定性研究，包 括影响因素试验和加速试验。结论：各方法准确、可靠，可分别用于丹参酮 IIA 原料药、隐丹参酮原料药的质量控制。 关键词：丹参酮 IIA 隐丹参酮 质量标准 高效液相色谱法
数；鉴别项下的可见－紫外吸收光谱特征、红外光吸收图谱；检查项下的晶型、 干燥失重、炽灼残渣等等，Leabharlann Baidu定方法参照按《中华人民共和国药典》（2005 年版） 二部凡例和附录的要求[3]。 （二）原料药主成分含量测定
药品的含量测定是评价药品质量、保证药品疗效的重要手段。用于丹参酮 IIA、隐丹参酮含量测定的方法一般有分光光度法[4]和高效液相色谱法[5]，本实验 采用反相高效液相色谱法进行含量测定，是因为其相对其他含量测定方法来说， 具有很高的分离能力、准确度、精密度及灵敏度。 （三）原料药有关物质含量测定
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第 1 章 前言
一 丹参酮ⅡA、隐丹参酮简介 中药丹参是唇形科鼠尾草属的多年生草本植物丹参的干燥根及根茎，因其色
红且形状似参而得名。 丹参作为一传统中药在我国沿用已久,始载于《神农本草经》，被列为上品。
《本草经疏》、《本草纲目》中都有记载丹参具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦 的功效[1]。
丹参主要含两类成分：一为脂溶性的二萜类化合物，一为水溶性的多聚酚酸 类成分。在丹参脂溶性成分中,丹参酮IIA是丹参治疗冠心病的主要有效成分之 一，在丹参中的含量可达 0.5%以上；隐丹参酮抗菌活性很强，比小檗碱强许多 倍，含量亦高,常作为抗菌消炎类丹参制剂的质量控制指标成分[2]。
丹参酮ⅡA（Tanshinone）性质：桔红色针状结晶，其化学名为 1，6，6-三 甲基-6，7，8，9-四氢菲并[1，2-b]呋喃-10，11-二酮；分子式为C19H18O3。
隐丹参酮（Cryptotanshinone）为橙红色针状结晶；其化学名为 1,6,6-三甲基 -1,2,6,7,8,9-六氢菲并[1,2-b]呋喃-10,11-二酮；结构式为C19H20O3。
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【摘要】 …………………………………………………………………………… 1 【关键词】……………………………………………………………………………1 Abstract ……………………………………………………………………………… 2 Keywords .…………………………………………………………………………… 2 目录 ………………………………………………………………………………… 3 第1章 前言 …………………………………………………………………………5 一 丹参酮ⅡA、隐丹参酮简介 ………………………………………………… 5 二 实验目的、内容和方法…………………………………………………………6 第 2 章 丹参酮 IIA 基本理化性质测定……………………………………………8 一 性状 ……………………………………………………………………………9 二 鉴别 ……………………………………………………………………………9 三 检查 ……………………………………………………………………………11 第 3 章 高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA 原料药的含量…………………………12 一 仪器和试药 ……………………………………………………………………12 二 方法与结果 ……………………………………………………………………12 三 讨论 …………………………………………………………………………… 16 第 4 章 高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA 原料药中有关物质的含量……………17 一 仪器和试药 ……………………………………………………………………17 二 方法与结果 ……………………………………………………………………17 三 讨论 ……………………………………………………………………………21 第 5 章 丹参酮ⅡA 的残留溶剂测定 ……………………………………………23 一 药品与试剂 ……………………………………………………………………23 二 仪器与色谱条件 ………………………………………………………………23 三 方法 ……………………………………………………………………………23 四 结果 ……………………………………………………………………………27 五 讨论 ……………………………………………………………………………28 第6章 丹参酮 IIA 原料药稳定性研究……………………………………………30 第 7 章 隐丹参酮基本理化性质测定 ……………………………………………33 一 性状 ……………………………………………………………………………33 二 鉴别 ……………………………………………………………………………34 三 检查 ……………………………………………………………………………36 第 8 章 高效液相色谱法测定隐丹参酮原料药的含量 …………………………37 一 仪器和试药 ……………………………………………………………………37
特殊杂质是在药物生产和贮存过程中产生的，由于特殊杂质的化学结构与主 药相似，结构不甚明确或结构明确但难以获得标准品，因此采用HPLC法，以自 身对照法[6]进行检查。特别检查隐丹参酮在贮存过程中是否被氧化为丹参酮IIA。 （四）原料药溶剂残留量测定
药品中的残留溶剂是指在原料药或赋形剂的生产中，以及在制剂制备过程 中产生或使用的有机挥发性化合物，在工艺中不能完全除尽。由于残留溶剂没有 疗效，故所有残留溶剂均应尽可能除去。近年来，药品中残存有机溶剂的毒性和 致癌作用日益引起各方面的关注。为了保护患者免受药品中残留有机溶剂的伤 害，需对药品在生产过程中引入的有机溶剂残留量进行控制。
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第 3 类：具有低毒性的溶剂――这类溶剂包括人们认为在药物中以一般量存 在时对人体无害的溶剂，但该类溶剂中许多尚未进行长期毒性或致癌研究。急性 毒性或短期毒性试验表明，这类溶剂几乎无毒、无遗传毒性。
第 4 类：这类溶剂还没有合适的毒性数据证明其有毒性。 目前，随着科学技术的进步，国内外陆续有大量的新药上市。为保证用药安 全，各国对新药在研究过程中的质量控制均有严格的规定，其中规定药物原料或 制剂中有机溶剂残留量必须进行检查。国内关于有机溶剂残留量分析的报道日益 增多，多采用气相色谱法测定有机溶剂残留量，按进样方式的不同，可分为溶液 直接进样法[8]及顶空进样法[9]；按所使用色谱柱的类型，可分为填充柱测定及石 英毛细管柱测定。 丹参酮 IIA、隐丹参酮原料药在生产工艺过程中采用了乙醇、乙酸乙酯、二 氯甲烷和石油醚等有机溶剂，其中二氯甲烷属于第 2 类有机溶剂，乙醇、乙酸乙 酯属于第 3 类有机溶剂，石油醚属于第 4 类有机溶剂。本实验采用直接进样的毛 细管气相色谱法分别测定丹参酮 IIA 原料药中乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷的含量， 方法简便，结果准确。 （五）原料药稳定性试验研究 药品的贮藏条件，例如：是否需要避光，是否需要低温贮藏等；药品在一定 条件下贮藏多长时间仍有效，即有效期的确定。这些内容都是通过药品稳定性试 验来确定的。药品稳定性试验包括影响因素试验、加速试验和长期试验。
中山大学药学院新药研究开发中心对中药丹参脂溶性成分丹参酮ⅡA 和隐 丹参酮分别进行药理试验，发现丹参酮ⅡA 具有降低高胆固醇的作用，可用于治 疗动脉粥样硬化；隐丹参酮具有清除人体内高浓度血氨和脑氨（胺）的功能，可 用于肝性脑病和亚临床肝性脑病治疗和预防用药。因此将其开发成丹参酮ⅡA 胶 囊和隐丹参酮胶囊，并申报一类新药。
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Abstract Objective To establish a quality standard method for Tanshinone IIA and Cryptotanshinone drug substance respectively. Methods 1.The indexes of characteristics, identification and examination were determined based on procedures recorded in general notices and appendix of Chinese pharmacopoeia, published in 2005. 2. HPLC was used to determine the content of main constituent and related substance in drug substance. 3. The content of residual organic solvents was determined by GC. 4. Study the stability of frug substance in conditions of high humidity, hight temperature , strong light irradiation and in accelerated test. Conclusion The quality control method is accurate and reliable. It is suitable for the quality control of Tanshinone IIA and Cryptotanshinone drug substance respectively． Keywords Tanshinone IIA , Cryptotanshinone, quality standard, HPLC
ICH（人用药品注册技术规范国际协调会）关于有机溶剂残留量的指导原则 将有机溶剂分为 4 类[7]：
第 1 类：避免使用的溶剂――对人体有致癌性，或有较大致癌嫌疑及对环境 造成危害的溶剂。
第 2 类：限制使用的溶剂－－可能引起神经中毒或畸变等不可逆毒性，或怀 疑具有其他严重的但可逆的毒性。因其固有的毒性，应限制使用。
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二 实验目的、内容和方法 由于丹参酮ⅡA 和隐丹参酮有着显著的药理作用，拟将其开发成单体药物，
为了控制该单体药物的质量，对其质量标准进行了研究。研究内容主要包括： 1、基本理化性质测定 2、含量测定方法研究 3、有关物质含量测定方法研究 4、溶剂残留量测定方法研究 5、加速稳定性研究
（一）基本理化性质测定 该部分内容包括性状项下的外观、臭、味和一般稳定情况、溶解度、物理常