毒理学第六章一般毒性作用及其试验与评价方法

③根据预试验的死亡资料确定组距。
可根据以下公式计算出剂量分组：
i=(lgLD90-lgLD10)／(n-1) 或：
i=(lgLD100-lgLD0)／(n-1) 公式中i为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)；n 为设计的剂量组数。
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正式试验
一般来说、根据试验设计所选用的LD50计算方法来确 定组数。例如寇氏法、几率单位法一般设6～10个剂 量组；霍恩法固定设4个剂量组。求得i值后，以最低 剂量组(LD0或LD10)的对数剂量加上一个i值，即是第 二个剂量组的对数剂量，依此类推直至最高剂量组， 查各自的反对数即得出各组剂量的真实值。
1、实验动物的物种和品系
急性毒性试验一般首先选择哺乳动物， 选择两种或两种以上的动物。包括啮齿 类和非啮齿类。啮齿类以大鼠、小鼠为 最常用。非啮齿类以犬或猴最常用。
急性毒性试验所用大鼠的品系以 Sprague-Dawley（SD）、Wistar为主， 小鼠则以昆明种、NIH、ICR为多。
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发生时间和体征发展的经过。
机体对毒物作用的反应可以表现出各个
系统的特征。
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2、死亡情况和时间分布
急性毒性试验中实验动物的死亡数是计算
LD50值的依据，动物死亡数量每增加或减少
一只都会对LD50值产生明显影响，因此应认
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第一节 急性毒性作用及其试验与评价方法
一、急性毒性的概念 二、急性毒性试验的目的
三、急性毒性试验方法的要点
四、急性毒性分级和评价
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第一节 急性毒性作用及其试验与评价方法
第六章 一般毒性作用及其试验与评价方法
第一节 急性毒性作用及其试验与评价
第二节亚慢性毒性作用及其试验与评价方 法 第三节 蓄积毒性作用及其试验与评价
第四节 慢性毒性作用及其试验与评价
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外来化学物在一定剂量、一定接触时间和接 触方式下对试验动物产生的综合毒效应称为 一般毒性作用。 一般毒性作用根据接触毒物的时间长短又可 分为急性毒性、亚慢性毒性和慢性毒性。
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体重可以反映动物中毒后的整体变化。 对存活动物尤其是对低于LD50剂量组的存活动物。 应在观察期28天内称量其体重的变化,以便了解受 试物引起毒效应的持续时间。
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吞咽胶囊
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（五）染毒方法
2、经呼吸道染毒
研究生产条件下以气体、蒸气、粉 尘、烟、雾等形式存在于车间空气 中的工业毒物，评价环境空气污染 物，以吸入为给药途径的药物，常
常采用经呼吸道染毒的途径。
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（五）染毒方法
3、经皮肤染毒
大、小鼠等小动物每组数量通常为
不少于10只，家兔每组不少于8只，
犬等大动物每组不少于6只。 严格按照随机分组进行。
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（三）受试物及处理
受试物的接受、分样、保管、称量、配制以及
在此过程中严格的质量保证是急性毒性试验成
功与否的重要环节。
受试物的化学结构、纯度、杂质成分、理化性 质特别是挥发性、溶解性等均需了解。 计算试验所需受试物的总量，一次备齐全部实 验的用量。应以同一批号为宜。
⑦吸入2mg/L；
⑧鼻：猴或犬每鼻孔0.1ml。
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（五）染毒方法
染毒途径（exposure routes）的选择需考虑：
1. 模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的
途径和方式；
2. 有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较；
3. 受试物的性质和用途；
4. 各种受试物毒性评价程序的要求等。
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（七）毒性作用观察
急性毒性试验一般是以死亡为主要记录内容。 除此之外还要注意： 中毒体征及发生过程； 死亡情况和时间分布； 体重 病理形态学变化。
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（七）毒性作用观察
1、中毒体征及发生过程
应详细观察和记录动物出现的中毒体征、
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（四）染毒剂量及分组
一般推荐，染毒最大量为：
①经口20ml/kg（对空腹动物）； ②经皮2ml/kg（根据体表面积计算，限于染毒的 准确性）； ③静脉1ml/kg（5min以上）； ④肌内注射0.5ml/kg（一个部位）； ⑤每眼0.01ml； ⑥直肠0.5ml/kg；
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（一）实验动物的选择和要求
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4、实验动物的预检
应先进行动物的给药前检疫观察。 大鼠、小鼠、豚鼠、兔的检疫期为1周，犬、 猴等适当地延长至2～3周。 设定检疫期有两个主要目的：
一是让外购来的实验动物要适应一段时间，减 少环境和生理条件变化对试验结果的影响；
二是筛检健康等不符合试验要求的动物
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（六）剂量选择
一般来说，化学结构和性质比较近似的毒 物，毒性也比较近似。通过以上资料从而 对受试物毒力做出估计，以预期毒性剂量 设计预实验方案。 每个剂量组间的组距可大些，以便寻找出 受试物的致死剂量范围。
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经皮肤染毒的方式：先使用化学法 脱毛（常用脱毛剂为硫化钡加滑石 粉1：4或硫化钠加淀粉1：4）或机 械法脱毛（剪剃去毛），将动物脊 柱两侧背毛脱去，去毛面积常为体 表面积的10％。 局部涂敷受试物并以玻璃纸覆盖固 定一定时间接触染毒。
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（五）染毒方法
4、经注射途径染毒 对注射药品或需作比较毒性观察 的药品进行急性毒性试验时，须 作经注射途径染毒。 注射途径可分为静脉注射或滴注、 腹腔注射(ip)、肌内注射(im)、 皮下注射(sc)、皮内注射(id)、椎 管内注射等。
急性毒性效应一般是指机体接触化学物后，在
较短时间内观察到的毒性症状。
3、中毒效应的强度
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二、急性毒性试验的目的
1、测试和求出毒物的致死剂量以及其他急性毒 性参数，通常以LD50为最主要的参数； 2、初步评价毒物对机体的毒效应特征、靶器官、 剂量-反应（效应）关系和对人体产生损害的危 险性； 3、研究受试物在动物体内的动力学变化规律； 4、为亚慢性、慢性毒性试验研究以及其他毒理 试验提供接触剂量和观察指标选择的依据。
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（五）染毒方法
最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、 经皮及注射途径。 吸收速率依次排列，一般是静脉注射＞吸 入＞肌内注射＞腹腔注射＞皮下注射＞经 口＞皮内注射＞经皮。
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（五）染毒方法
1、经口（胃肠道）染毒 灌胃 喂饲
一、急性毒性的概念
急性毒性是指机体（实验动物或人）一次或24h 内多次接触外源化学物后在短期内所产生的毒性
效应，包括一般行为和外观改变、大体形态变化
以及死亡效应。
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急性毒性概念中的几个问题
1、急性接触的次数
（一次或多次） 24h内
2、中毒效应出现的时间（一般为7-28d）
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（一）实验动物的选择和要求
5、实验动物的给药前禁食处理
采用经口途径染毒，实验动物胃肠 道内食物存留量对化学毒物的毒性 可产生较明显的干扰，因此在试验 给药前应作禁食处理。
大鼠在前一天傍晚下班时或晚间将 饲料撤掉。 小鼠由于其消化吸收和代谢速度较 快，可隔夜禁食也可禁食4h以上。
（一）实验动物的选择和要求
尽量选择急性毒性反应与人近似的动物；
易于饲养管理、试验操作方便的动物；
繁殖生育力较强，数量较大能够保障供应；
价格较低，易于获得的动物。
实验动物的选择包括物种和品系、年龄、体重、 数量等方面，必须按照其规范要求进行。
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（一）实验动物的选择和要求
1 2 3 4 5 6
LgLD0
LgLD0+i
LgLD0+2i LgLD0+3i
LgLD0+4i
•••
（六）剂量选择
对未知毒性的化学物，估计毒性较低时，预试验也 可以5g/kg剂量进行摸索，来决定是否需正式求 LD50。一般来说，化学物LD50如大于5g/kg已表明 毒性不大。
我国药品的毒理研究指导原则规定要以最大容积最 高浓度给予动物后未见死亡，方可不进一步试验求 出LD50值。 急性毒性试验除设立几个剂量组外，是否设正常和 溶剂对照组，根据需要确定。
预试验
目的是找出0％及100％估计致死量。更确 切地说是找到一个0死亡的最大剂量和100 ％死亡的最小剂量的估值以决定实验中采 用的最大剂量(Dm)和最小剂量(Dn)，这在 测定中非常重要，是实验成败的关键。
预试验
①设定以此预期值作为待测化学物的中间剂量组， 并在该剂量的上下各设计l~2个剂量组作为预试验剂 量； ②根据确定的剂量组进行染毒；
25g、家兔2～2.5kg、豚鼠200～
250g、Beagle犬4～6kg、杂种犬
8～15kg。
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（一）实验动物的选择和要求
3、实验动物的性别
通常要求为雌雄各半。
但如有资料或预试验发现试验品对
雌、雄动物毒效应有明显的性别差
异，则应单独分别试验并求出雌性
和雄性动物各自的LD50值。
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昆明种小鼠 （KM小鼠） 特 点：体型小，产仔多，生 长繁殖快，饲养管理方便， 对环境的适应性和对疾病的 抵抗力强。广泛应用于药理 毒力病理和细菌学研究，以 及生物制品和药品的鉴定。
NIH小鼠 特 点：体型小，产仔多，生 长繁殖快，饲养管理方便，对 环境的适应性和对疾病的抵抗 力强。广泛应用于药理毒力病 理和细菌学研究，以及生物制 品和药品的鉴定。
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三、急性毒性试验设计
包括实验动物、染毒途径、染毒剂
量、观察周期、观察指标的选择、
计算方法和评价等。 一般来说，一个新化学物在研制初 期就要进行急性毒性试验。 如果急性毒性试验通不过，则后面
的所有试验都不必进行了。
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Wistar大鼠 特 点： 抗病力强，自 发性肿瘤发病率低， 多用于肿瘤、免疫、 药理、内分泌。
SD大鼠 特点 ：白色，产仔多， 生长发育较Wistar大 鼠快，对疾病的抵抗 力较强，尤以对呼吸 道疾病的抵抗力强。
（一）实验动物的选择和要求
2、实验动物的年龄和体重
通常要求刚成年的动物，且为健 康未受孕的动物。 通常大鼠180～240g、小鼠18～
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（一）实验动物的选择和要求
6.试验动物的饲养环境
恒定的温度：22±3℃
湿度：30~70%
光照度：昼夜各半
饲料合格、饮水合格、垫料合格
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（二）实验动物分组与数量
不同的LD50计算方法对动物组数的
要求有所不同，一般为5~7组。
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（六）剂量选择
查阅文献
①了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、 熔点、沸点、密度、闪点、挥发度、蒸气压、水溶性和脂 溶性等理化特性，生产批号及纯度，杂质成分与含量等。
②确定使用哪一种计算方法求LD50，然后再设计剂量分组。 LD50的计算方法常用改良寇氏法、概率单位法、霍恩氏法 等。 ③找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒 性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径 所测得的LD50(LC50)值作为受试化学物的预期毒性中值。
真观察和记录。 分析中毒死亡时间的分布规律，也可以提供 重要信息。
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3、体重
实验动物体重变化指标，可以反映动物中毒后
综合性整体变化，是一个比较客观简便的量化
指标。 因此在观察实验动物中毒体征的同时，对存活 动物应定期多次称量动物的体重变化，一般为 每周1次或2次。