神经元细胞培养步骤

神经元细胞培养

灭菌准备：

1、将玻璃培养皿（3个）、滤器（清洗、换滤片、锡纸包裹）放入盒中、将盒拿到桶中灭菌

2、将显微镜搬至超净台灭菌

3、将直头镊（1个）、弯头镊（1个）放入盛有酒精的小烧杯，放入超净台

材料准备：17天孕鼠、冰块、75%酒精、50mL离心管、PBS、胰酶、培养基、双抗、注射器、灭菌的显微镜、灭菌的玻璃培养皿（3个）、10cm培养皿（1个）、计数器、包被好的培养板

1、处死孕鼠，取小鼠，放入50mL离心管（冰块上），移至超净台，

2、将小鼠倒入盛有PBS的玻璃培养皿中，关灯，开显微镜

3、将头取出（左手直头镊，右手弯头镊），放入盛有PBS的玻璃培养皿中

4、夹取皮层（皮质及髓质），放入盛有PBS培养皿中，移去显微镜

5、将PBS倒入50mL离心管

6、用枪弃去PBS，再以PBS洗3次，晃匀

7、弃去PBS，加入5mL胰酶，放于37℃细胞培养箱内5分钟

8、弃去胰酶，以PBS洗2次，吸掉

9、加入5mL PBS,对着底面吹打成悬液

10、吸至50mL离心管中，

11、灭菌后的滤器置于15mL离心管，用注射器将细胞加入，抽空气再吹数次

12、离心，25℃，1500rpm，5分钟

13、配制培养液，混匀

14、弃上清，将离心管中加入5mL培养液，吹打成悬液

15、再加入5mL培养液，再次吹打

16、加1滴加至计数器中央，显微镜下观察，

17、20—50个/每16小格，即20—50 ×104 = 2—5×105，若密度加大，则加入培养液稀释

18、加100uL至96孔板中（四边不用），晃匀，

19、放37℃细胞培养箱