新城疫抗体水平检测精编版
新城疫抗体水平检测
新城疫抗体水平检测文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-新城疫的血凝和血凝抑制试验高若开 一、实验目的1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法。
2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素，用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断。
二、实验内容1.血凝试验(HA)检测新城疫抗原2.血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体 三、实验原理1.血凝试验（HA ）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA ）,也称直接血凝反应。
2.血凝抑制试验（HI ）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。
这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI ）反应，也称血凝抑制反应。
病毒颗粒红细胞四、实验材料离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版（5块）、微量移液器（20-100微升可调）、吸液尖（若干）、洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND 标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。
五、实验步骤 （一）抗凝剂的配制将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用。
1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液。
（二）10%红细胞悬液的配制1、用注射器吸取0.5毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞4.5毫升。
2、1500转离心5分钟，吸弃上清液。
3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次，前两次5分钟，后一次10分钟。
4、吸弃上清液，用吸量管吸取红细胞，配制成10%红细胞悬液。
5、2-6摄氏度储存，备用。
（三）血凝试验（HA)1.在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul 生理盐水抗体抗原2.将系苗用生理盐水5毫升稀释，在第1孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul。
赛鸽感染新城疫的诊断及抗体水平检测
37摘要：鸽新城疫又称鸽I 型副粘病毒病或鸽瘟，是由鸽Ⅰ型副粘病毒引起的一种急性、高度接触性传染病，该病对养鸽业危害巨大。
利用RT-PCR 快速诊断法和抗体检测等综合诊断，确诊山西省忻州市某赛鸽公棚感染鸽I 型副粘病毒，全棚赛鸽采取紧急免疫、隔离治疗等治疗措施后，疫情得到控制，鸽群基本痊愈。
关键词：赛鸽；鸽新城疫；RT-PCR；抗体赛鸽感染新城疫的诊断及抗体水平检测*李婷婷，刘华栋，陆冰洋，唐娟，王彩先，丁树荣，詹丽娥**（山西省农业科学院畜牧兽医研究所 太原 030032）鸽新城疫又称鸽I 型副粘病毒病或鸽瘟，是由鸽I 型副粘病毒（Pigeon Paramyxovirus 1，PPMV-I）引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。
鸽新城疫与鸡新城疫的病原和临床症状十分相似，PPMV-I 传播迅速，主要通过呼吸道和消化道传播，一年四季均可发生，不同年龄、品种的鸽都易感，发病率100%，死亡率80%以上。
主要临床表现为胃肠道出血、严重腹泻和神经症状。
鸽群一旦感染PPMV-I 后，其神经症状将严重影响赛鸽的飞行功能，使赛鸽失去比赛的资格。
鸽新城疫对养鸽业造成巨大威胁和损失，是养鸽业重点防控的传染病之一。
2018年7月下旬，山西省忻州市某赛鸽公棚从一养殖户处收340羽赛鸽，其中部分赛鸽陆续出现精神不振、采食量减少、饮水量增加、拉黄绿色水样稀粪、扭颈、斜翅等症状，5d 开始出现死亡，养殖户紧急前来就诊。
为了及时查明该病发生的原因，减少对养殖户的损失，经过流行病学、临床症状、病理剖检、PCR 鉴定和抗体检测等综合诊断，确诊为感染鸽新城疫。
1 发病情况发病初期病鸽精神不振、羽毛蓬乱无光泽、食欲减退、饮水增加，部分病鸽呼噜、咳嗽、呼吸困难，排黄绿色水样稀便。
后期个别鸽呈现神经症状，头颈向背后扭曲、不能站立、双翅下垂。
剖检病变主要集中在消化道，腺胃乳头肿胀、出血，腺胃与肌胃交界处出血；十二指肠黏膜出血、水肿，盲肠扁桃体肿大、出血。
门源县泉湾养鸡场新城疫抗体水平监测
６ ０一
中国动物检 疫 ２ １ 年 第２ ０１ ８卷第 ６期
门源县 泉湾养鸡场 新城疫 抗体水 平监 测
童海 龙
（ 青海省 门源县青石嘴兽 医站 ， 青海 门源
摘
８ ０ ０） １ ３１
要 ： 过抽取 鸡血清作血凝 （ Ａ 实验来进行新城疫检疫 ， 通 Ｈ ） 作血凝抑制 （ Ｉ实验进行 抗体 水平的监 测， 以 了解养鸡场 的 Ｈ） 可
出现 。
被 引格 式 ：
童海 龙． 门源县泉 湾养鸡场 新城疫 抗体水平 监测 ［ ． Ｊ 中国动物 ］ 检疫 ，０ １２ （） ６ ．１ ２ １ ， ８６ ：０６ ．
４ 根据 试验 结果 对该 鸡场 新城 疫 防治 的建 议 ４ １ 由试验 结果可 知新城疫抗ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 效价 ５ｏ２的仅 为 ． １ｇ
的 鸡 只死 亡 的情 况 出现 ， 过 病 理表 现 及 （ ） 验 通 ＨＡ 实 检 疫 ， 发病 鸡 为 新城 疫 感 染 ， 虑 到 该场 已作 过 新 所 考
单 位 的稀释 度 为 １１８ 将 １ ： ， ２ ｍＬ抗 原 加 入 １７ｍＬ生 ２
理 盐水 ， 即为 ４单位 抗 原【 ３ ］ 。 ２ ４ 配制 １ ． ％的红细 胞 悬浮 液
中国动物检 疫 ２ １ 年第２ ０１ ８卷第 ６期
一６ １一
细胞应 该 明显 呈纽 扣状 。 定 血凝 滴度 ： 判 将板 倾斜 ， 观
分 依赖 疫 苗接 种 。今 年 来 的研 究 表 明 ， 要 Ｎ 只 ＤＶ 强
察红细胞有无蹭泪珠状流淌 ， 完全血凝 的最高稀释倍
数 代表 一个 血凝 单位 。 ２５ ２ 血凝 抑制 试验 （ ） ．． ＨＩ 微 量 反 应 板 每 孔 加 入 ０００ｍＬ 理 盐 水 。第 １ ． 生 ５ 孔 加入 ００ ０ｍＬ 品血 清 。将 血清 做 ００ ０ｍＬ 积 ．１ 样 ．１ 体 作倍 比稀 释 。倍 比稀 释至 最后 １ ， 出 ０００ｍＬ 孔 吸 ．１ 液 体弃 去 。弃去 之后 ， 每孔 加 入含 有 ４个单 位 的病 毒 抗
蛋鸡抗体检测报告
重要说明
1本中心检测报告仅对本次送检样品负责，不作其他证明。
2报告涂改无效。
3如有异议，应于10日内向检测单位提出。
4．养殖场信息只供数据分析使用，不向外散发任何信息。
血清学检测报告单
送检单位：
报告编号：
送检时间：
完成日期：
附表1新城疫、禽流感抗体水平〔单位：log2〕
样品编号
新城疫〔ND〕
禽流感〔H9〕
2、H9抗体分析：H9抗体水平到达临界保护值，但极差和离散度偏大，抗体水平不太均匀，对局部鸡群的保护作用较强。
3、H5-4抗体分析：抗体水平到达临界保护值，且极差和离散度较小，抗体水平较均匀，对鸡群有较强的保护作用。
4、H5-6抗体分析：抗体水平到达临界保护值，极差和离散度较小，抗体水平较均匀，对鸡群的保护作用较强。
禽流感〔H5-4〕
禽流感〔H5-6〕
1
11
10
11
9
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8
8
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7
9
9
西藏林芝某鸡场鸡新城疫抗体水平检测
不 良， 肾脏苍 白肿胀 ， 腺 出血肿 胀 ， 胃、 胃交 界 胰 腺 肌 处 出血 ， 切胫 骨可 见 骨 髓 颜 色 变 淡 发 白。３只 鹅 横 的肝脏 均肿胀 出血 ， 中 １只鹅肝 脏呈 “ 其 青铜 肝” 肝 ， 脏表 面有 出血 和坏死 。
４ 实 验 室 检 验
中 图分 类 号 ：８ ８ ３ ￥ ５．３
文 献 标 识 码 ： Ｂ
文 章 编 号 ：５９６ ０ （ ０ ２０ —０ ００ ０ ２ —０ ５２ １ ） ４０ ５—２
河 南省 新乡 市某种 鹅养 殖基地 ２ １ 年 ３月 初 ， ０１ 从 宁 波引进 朗德 鹅 ２５ ０只 ， 底开始 零 星发病 ， ０ ４月 ５
月 １ 日送 检 ， 时 鹅 群 ７ ４ 此 ０日龄 。
３ 剖 检 变 化
剖检 ３只濒死 病鹅 ， 均可 见血 液稀 薄如水 ， 易 不 凝 固 。皮 下 呈 胶 样 浸 润 ， 肤 、 肉 表 现贫 血 性 苍 皮 肌 白， 有散 在 的小 出血 点 。心脏 动 脉 血 管 内血 液 充盈
孔 中 ； 时 ， 抗 原 、 性 血 清 和 稀 释 液 ３个 对 照 ， 同 设 阳 放微 量 振 荡 器 上 摇 匀 ， 匀 后 置 ３ ℃ 培 养 箱 内 ３ 混 ７ ０ ｍｉ ｎ后 ，每 孔加 入 １ 鸡 红 细 胞 ２ Ｌ。再 放 微 量 ５ 振荡器 上摇 匀 ， ３ ℃培养 箱 内约 ３ ｎ观 察 。 置 ７ ０ｍｉ １ ４ ３ 结 果判 断 ．． 免疫 后 的 ＨＩ 价 ≥ ５ｌｇ 为 阳 效 ｏ
提前 １ ～３ｄ接 种 ， 将 剂 量 加 大 ０ ５ １ 。 当用 并 ．～ 倍
入 一个 大离 心管 中进 行 ３０ ０ｒｍｉ ０ ／ ｎ离心 ５ｍｉ ， ｎ 弃 上 清液 ， 以上操作 重 复 ３至 ４次 。操作 完毕 之后 ， 以 微 量加 样枪 吸取 ５ Ｌ的红 细胞加 入 ４ ５ Ｌ生 理盐 ９ 水 中 ， 分 混匀 ， 充 即制 成 １ 红细 胞悬 浮液 。 １ ４ ２ 抗 体 效 价 的 测 定 方 法 血 凝 抑 制 试 验 ．． （ ） 微量 反应 板 的每一 孔 内加 人生理 盐水 ２ Ｌ， ＨＩ ： ５
1-鸡新城疫抗体水平测定
附件1：高职农林牧渔专业类鸡新城疫抗体水平测定赛项技能竞赛规程、评分标准及选手须知一、竞赛内容本项目为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定方法按《新城疫抗体诊断技术》（GB/T16550-2008）标准进行。
本赛项不设理论考试，只对技能操作进行综合考核，技能竞赛题为公开试题，见本赛项规程的主要技术规程及要求。
二、竞赛方式本赛项为2人小组赛，以院校为单位组队参赛，不得跨校组队。
三、竞赛时量比赛时间为3小时。
比赛时由参赛队自行确定分工完成相关竞赛内容。
四、名次确定办法本赛项满分100分，采用分项计分法。
按总分由高到低排序，总分相同按完成时间先后排序，用时少者列前；若二项均相同，则按抗体滴度报告、西凝试验得分高低依次排序。
五、评分标准与评分细则1．评分标准及分值项目技能竞赛评分标准及分值见表1。
表1 项目技能竞赛评分标准及分值2．评分细则项目技能竞赛评分细则见表2。
表2 项目技能竞赛评分细则六、赛点提供的设施设备仪器清单仪器设备按《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）标准要求配制，且均为常用仪器、设备与材料。
本赛项所用的仪器、设备与材料见表3。
七、选手须知（一）主要技术规程及要求鸡新城疫抗体水平测定（微量法）按《新城疫抗体诊断技术》（GB/T16550-2008）标准进行,具体步骤及其分值如下：（一）试验器材准备（占总成绩的8%）按照操作规程进行器材准备，要求器材摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。
（二）配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的18%）按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液，要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜等。
（三）血凝试验（占总成绩的20%）按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板滴加稀释液、新城疫标准抗原，充分混匀，倍比稀释后，添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡混匀，正确判定抗原的血凝效价。
要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果正确等。
实验一-鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法讲解
鸡新城疫血凝（HA)和血凝抑制(HI）抗体水平测定法1．本次实验的目的和要求掌握鸡新城疫血凝（HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。
2．实验内容或原理某些病毒（如新城疫病毒,禽流感病毒等）能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象（HA)。
这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验（HI）。
3．需用的仪器或试剂等动物健康成鸡2-5只,被检鸡15—25只.器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0。
025mm微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。
药剂（1)浓缩抗原;（2）生理盐水或磷酸缓冲盐水（PBS）；（3）Alsever细胞保存液;（4）红细胞悬液;(5）待检血清4．实验步骤（1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。
（2）诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体效价有4倍以上升高,即有诊断意义。
（3)免疫机体抗体效价的测定：3。
鸡新城疫(ND）的HA和HI（1）试验准备①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原,进行试验。
② 0.7%细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂）内，迅速混匀.如当时不用,可直接采血放入红细胞保存液内(保存液2份,血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。
红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000转／分钟，离心5—10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水）洗涤。
再用离心机3000转／分钟离心5-10分钟，弃上清,再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液（0。
2019年安徽职业院校技能大赛高职组鸡新城疫抗体水平测
2019年安徽职业院校技能大赛高职组鸡新城疫抗体水平测一、简介2019年安徽职业院校技能大赛高职组鸡新城疫抗体水平测是一项专门针对鸡新城疫的技能比赛，旨在检测参赛选手对于鸡新城疫的了解和技能水平。
二、比赛原理和流程比赛原理：选择参赛选手在比赛现场采集的鸡血样本，进行检测鸡新城疫抗体水平，从而评判参赛选手对鸡新城疫的掌握情况。
比赛流程如下：1.选手准备：参赛选手需要提前了解比赛规则和对鸡新城疫的知识，并准备好相关试剂和设备。
2.采集样本：参赛选手在比赛现场采集鸡血样本。
3.检测鸡新城疫抗体水平：参赛选手将鸡血样本制成血清，并使用ELISA方法进行检测鸡新城疫抗体水平。
4.结果评价：参赛选手根据检测结果，评价样本中鸡新城疫的抗体水平。
三、技能要求参赛选手需要具备以下技能：1.掌握鸡新城疫的相关知识和防治措施。
2.熟练掌握鸡血样本的采集和血清制备方法。
3.较好地了解ELISA检测方法的原理和操作步骤。
4.能够熟练使用ELISA试剂盒。
四、比赛考察内容比赛考察内容包括以下方面：1.参赛选手对于鸡新城疫知识的理解和应用能力。
2.参赛选手对于鸡血样本的采集和血清制备技能掌握情况。
3.参赛选手对于ELISA试剂盒的操作技巧和应用能力。
4.检测结果的准确性和评价能力。
五、比赛影响2019年安徽职业院校技能大赛高职组鸡新城疫抗体水平测旨在促进鸡新城疫防治技术的提高和推广，同时也可以激发参赛选手的学习兴趣和实际应用能力。
比赛的影响将包括：1.推广鸡新城疫防治知识，促进兽医学技术的提升。
2.培养参赛选手的实际操作技能和应用能力。
3.促进行业内技术的交流和合作，推动行业快速发展。
六、总结2019年安徽职业院校技能大赛高职组鸡新城疫抗体水平测是一项重要的技能比赛，旨在检测参赛选手对于鸡新城疫的了解和技能水平。
比赛要求选手具备一定的理论基础和实际操作能力，考察内容涉及鸡新城疫的防治技术、鸡血样本的采集和ELISA试剂盒的应用等方面。
新城疫HI抗体监测
新城疫HI抗体监测新城疫HI抗体监测王晓泉刘慧谋高架上养鸡的肉鸡场工厂化笼养蛋鸡场一．实验目的二．实验原理三．实验材料四．实验步骤和方法一、实验目的 掌握新城疫的免疫监测技术二、实验原理病毒的红细胞凝集现象：许多病毒表面有血凝素，能与各种动物的红细胞表面受体结合，而出现红细胞凝集现象，简称为病毒的血凝现象。
三、实验材料96孔V型微量反应板、微量振荡器、病毒材料、红细胞悬液、生理盐水或PBS、微量移液器、注射器、抗凝剂、离心机、恒温箱等。
四、实验步骤和方法1.血清样品的采集、运送和保存2.制备鸡红细胞悬液3.病毒的红细胞凝集试验（HA）4.病毒的红细胞凝集抑制试验（HI）1、血清样品的采集、运送和保存（1）血清样品的采集颈静脉或翅静脉采血１ml左右。
每个鸡群随机采集30-50份样品。
（2）样品的运送和保存样品采集后应立即送到实验室，如实验室距离较远或一时无法立即传送时，应将样品放入冰箱4℃或装有冰块的冰壶内，尽快送检。
最好在样品采取后1~2h内送到实验室，立即进行分离血清，尽快检测。
暂时不能检测时，应将样品存放在-20℃低温冰箱内保存。
*注：也可采集卵黄样品翅静脉采血2、制备鸡红细胞悬液（1）制备鸡红细胞悬液：A.用注射器抽取抗凝剂。
B.上述注射器，采用无菌法抽取健康的未免疫鸡的静脉血，与抗凝剂等量。
C.混匀，加生理盐水或PBS适量，洗涤离心，共离心三次（第一、二次1500转/分5分钟、第三次2000转/分8分钟）洗去血清及白细胞。
D.所余的纯红细胞，用生理盐水或PBS稀释100倍，即成1%的鸡红细胞悬液。
3、病毒的红细胞凝集试验（HA）（1）凝集价的测定（2）HA方法与步骤（3）判定结果（1）凝集价的测定将已知病毒材料，稀释成不同的稀释倍数，进行HA 试验，出现血凝现象的各稀释孔中，能出现病毒的红细胞凝集现象的病毒的最大稀释倍数者即定为凝集价。
又称为该病毒的血凝滴度。
4单位病毒即将一个血凝单位的稀释度增加4倍浓度，例如一个血凝单位为1:64，4个血凝单位则为64/4=16倍稀释。
新城疫抗体测定的规范操作___
1测定的器材及使用方法1.1托盘天平托盘天平测量开始前,必须先将游码移到标尺左端的零刻度处,然后才开始调节平衡螺母,使天平平衡。
若将平衡螺母左右移至尽头天平仍不得平衡,则应检查原因,不能移动游码来达到平衡。
1.2离心机离心机使用时离心管液体不能装得太满,对称放置的试样必须配平。
1.3移液枪移液枪吸头装配时需将移液器垂直插入吸头,左右微微转动,上紧即可,切勿用移液器反复撞击吸头来上紧。
1.4移液器移液器吸液时应垂直吸液,吸头尖端侵入液面3mm以下,吸液时枪头应预润湿,然后再正式移液。
吸液可将按钮按到第一档吸液,释放按钮。
放液时先按下第一档,打出大部分液体,再按下第二档,将余液排出。
吸取的过程应该做到“慢吸快打”,在吸液时要慢、准,放液时对准后速度要快,可以避免打完后吸头下存留液体,保证加入的液体体积一致。
2规范的采血方法采血前采血者先将注射器内吸入3.8%的枸橼酸钠。
采血时,一人将鸡侧卧保定,一人固定鸡的头部和脚;从侧翅膀采血,一手固定采血部分,一手采血;采血完毕后采血者一手将抗凝剂和血液轻轻摇匀,一手用干棉球按压采血部位止血。
采血部位最好从翅静脉丛刺入,比较容易采血成功且不容易淤血。
3红细胞悬液的配制血液采集完毕需取下针头,把血液沿离心管的管壁缓慢注入离心管中,防止红细胞的破坏。
然后轻轻来回晃动离心管,使血液与抗凝剂充分混合,配平后置于离心机中开始离心。
离心完毕,应先选用5mL的移液器吸取上面的液体,然后再选用1 mL或200μL的移液器吸取,最好以画圈的方式吸取,比较容易把白细胞和血小板吸干净。
最后一次离心完毕,按照计算量用移液器从离心管底部吸取红细胞放入加好生理盐水的烧杯中,再反复回用生理盐水将移液器吸头里的红细胞洗下来,保证配制红细胞浓度的准确性。
4血凝试验血凝试验操作过程中需要注意的是使用微量移液器吸取液体时,吸头需碰壁以除去多余的液体;加样时应将所加物在V型板的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出;倍比稀释时,要注意避免产生过多的气泡,影响结果的准确性;加红细胞时最好悬滴或由后往前加,因为孔内已有稀释的抗原,如果吸头接触到孔内混合液,会造成各个孔间液体相互污文章编号:1004-2342(2013)02-0048-02中图分类号:S852.65+9.5文献标识码:C新城疫抗体测定的规范操作向双云,周珍辉(北京农业职业学院,北京房山102442)疫病防控经费管理办法》出台,完善财政投入机制,构建与国家动物疫病防治工作相适应的财政支持政策。
《兽医免疫学》实验课件：实验九(2)新城疫抗体水平评估—综合
二、实验内容
血清样品的采集 抗体效价的测定（HA和HI）实验
HA实验得到NDV效价，配置8U和4U病毒液 ； HI实验得到被检鸡血清的抗体效价。 据HI检测结果，分析鸡群的免疫状态
作业
完成实验报告, 据所得结果说明鸡群的免 Nhomakorabea疫状态，评价疫苗的免疫效果。
附：实验方法
（一）鸡血清分离
(1)右手持注射器，左手将家禽双翼提起，露出翼静脉的采血位 置，把覆盖血管的羽毛拔开，即可见到明显一条较粗的静脉血管； (2)用酒精棉球将采血部位消毒。采血时用左手大拇指夹住覆盖 静脉的羽毛，食指协调大拇指夹住双翼，中指、无名指和手掌轻 轻提起或轻按背部保定鸡只，待其安静方可刺针； (3)针头由翼根部向翅膀方向沿静脉平行刺入血管,见有少量回血 即可采集血液，采血完成后马上用手压迫伤口止血；
以抑制50％鸡红细胞凝集的血清稀释度作为 判定终点； 以抑制50％鸡红细胞凝集（++）的最高血 清稀释倍数作为该血清的血凝抑制价。
➢ ++++为全部血球发生凝集，呈颗粒状薄膜铺于孔底；
➢ +++约有75％血球发生凝集； ➢ ++约有50％血球发生凝集；
➢ +约有25％血球发生凝集；
➢ －不凝集，表现为血球沉于孔底，呈一致密小圆点，与对照孔相同。
结果判定
以红细胞凝集50％的稀释度作为判定终点； 以50％鸡红细胞凝集（++）的最高病毒稀释倍 数
实验二 鸡群新城疫抗体水平检测
某鸡场免疫新城疫疫苗后，免疫效果须进行评 估，请用免疫学技术检测鸡群抗体效价，据测 定结果评估免疫效果。
鸡群对NDV的免疫状态评价标准
新城疫抗体水平测定
A.保证枪头扣紧 B.匀速将生理盐水吸打至孔内
(要避免枪头附着多余生理盐水滞留在孔内，引起误差)
A.要匀速吸打保证枪头顶端始终处于液面下方 B.避免出现气泡，以免出现试验误差。
1.5 结果判定:
A B C D
血凝价: A:26
B:25
C:22 D:27
2. HI(血凝抑制试验):
稀释液
Ag
2.1 四位病毒的制备
重复5次）
A.清洗红细胞时，先用1000微升量程的移液枪吸取上清液; B.临界底层红细胞时，换用100微升量程的移液枪，
轻轻沿离心管内壁一周吸取红细胞上层的杂质， 避免大量吸取纯红细胞造成浪费。
稀释液
纯红细胞
1.3 1%红细胞悬液的制备：
1.3.1计算出所需红细胞总量之后， 1.3.2于弃去上清液的纯红细胞中吸取定量红细胞 1.3.3于相应生理盐水中， 1.3.4反复吸打混匀，完成配置。
2.4 完成抗体滴度报告单
谢谢观 看！
HA （血凝试验）
Hemagglutination
“ 血凝素与红细胞（RBC）表面相应受体结合， 引起红细胞（RBC）凝集，以测定病毒的含量 ”
HI （血凝抑制试验）
HemagglutinationIn
“ 抗体与血凝素结合，封闭血凝素， 使之不能与红细胞结合 ”
“ 新城疫抗体水平测定试验 ”
怎么做？
器材及耗材的准 备：
活体SPF公鸡一只及消毒用品
1. HA(血凝试验）：
1.1 采血（ 3ml鸡血 + 0.6ml抗凝 剂）
A.采血完毕后立即将采血器内的血液轻轻摇匀，避免凝血； B.摇匀后，沿离心管壁缓慢注入离心管 C.加入适量的生理盐水作为清洗缓冲液。
新城疫抗体水平检测
价(㏒2)的几何平均值表示的。如果某鸡群的10份样品中，HI抗体效价 (㏒2)为8的有3份样品，为7的有5份样品，为6的有2份样品，它们的平 均值为：
（ 8×3＋7×5＋6×2）/（3＋5＋2）＝7.1平均水平在4(10g2)以 上，说明该鸡群为免疫鸡群。若在检样中HI抗体效价的最高值与最低值 相差太大时，则不能用上法计算平均水平，应根据临界水平以下的样品 数在全部样品中所占的百分比决定免疫与否。
25％凝集； 5、－ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。 血凝价的判定
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒的血凝价，即为一个凝集 单位。上表看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:32，则l:32为1个血凝单 位，1:16、l:8分别为2、4个血凝单位，或将32/4=8，即1:8稀释的病毒 液为4个血凝单位。 （四）4个血凝单位抗原的配制 根据判定结果，吸取1毫升已稀释的病原溶液再以8倍稀释，即为4个血 凝单位的标准抗原。 （五）血凝抑制试验 1、在血凝板上1－12孔内各加入50ul生理盐水； 2、在第1孔内加入被检血清50ul，然后倍比稀释至第11孔，最后弃 50ul； 3、第1－12孔内加入4单位抗原50ul（第12孔为病毒对照）； 4、每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul； 5、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟 6、结果判定 血凝抑制效价测定
新城疫的血凝和血凝抑制试验
高若开 一、实验目的 1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法。 2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素，用以确定最佳免疫时间、判定 免疫效果和辅助疾病诊断。
二、实验内容 1.血凝试验(HA)检测新城疫抗原 2.血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体
三、实验原理 1.血凝试验（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动 物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直 接血凝反应。
新城疫抗体水平检测
新城疫的血凝和血凝抑制试验高若开 一、实验目的1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法。
2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素，用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断。
二、实验内容1.血凝试验(HA)检测新城疫抗原2.血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体三、实验原理1.血凝试验（HA ）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA ）,也称直接血凝反应。
2.血凝抑制试验（HI ）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。
这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI ）反应，也称血凝抑制反应。
抗体病毒颗粒红细胞四、实验材料离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版（5块）、微量移液器（20-100微升可调）、吸液尖（若干）、洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。
五、实验步骤（一）抗凝剂的配制将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用。
1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液。
（二）10%红细胞悬液的配制1、用注射器吸取0.5毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞4.5毫升。
2、1500转离心5分钟，吸弃上清液。
3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次，前两次5分钟，后一次10分钟。
4、吸弃上清液，用吸量管吸取红细胞，配制成10%红细胞悬液。
5、2-6摄氏度储存，备用。
（三）血凝试验（HA)1.在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul生理盐水2.将系苗用生理盐水5毫升稀释，在第1孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul。
3.每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul4.轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟5.结果判定血凝效价测定结果判定标准1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集；2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集；3、＋＋：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集；4、＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集；5、－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。
武汉周边地区部分鸡场新城疫抗体水平检测与分析
武汉周边地区部分鸡场新城疫抗体水平检测与分析作者：罗玲王红琳温国元罗青平汪宏才卢琴邵华斌来源：《湖北农业科学》2018年第22期摘要：对武汉周边8个养鸡场474份血清进行新城疫抗体检测。
结果表明，新城疫平均抗体水平在5.96log2～8.23log2，7/8养鸡场新城疫抗体水平比较一致，抗体水平在6log2～10log2，比较理想;1/8养鸡场新城疫整体抗体水平不均匀，部分鸡的抗体水平过低，不具有保护力，鸡群整体存在发病风险。
该结果可为养殖场新城疫防控提供参考。
关键词：新城疫;抗体水平;监测中图分类号：S855.3; ; ; ; ;文献标识码：A文章编号：0439-8114（2018）22-0101-02DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2018.22.027; ; ; ; ; ;开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Abstract： This research was to surveil the immune antibody level of Newcastle disease in eight chicken farms around Wuhan. The result demonstrated that the average antibody titers of Newcastle disease was from 5.96log2 to 8.23log2. The antibody titers in most poultry farms were consistent（6log2～10log2） and ideal. The level of the whole antibody of Newcastle disease in the fourth poultry farm was highly uneven，and the antibody level of many chickens was too low to protective，and there was risk of disease in the whole chicken group. This research would provide reference for the prevention and control of Newcastle disease in farms.Key words： Newcastle disease;antibody level;surveillance新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引起的主要侵害鸡和火鸡等禽类的一种急性、高度接触性传染病，是危害养禽业生产的最严重传染病之一，也是中国规定的一类动物疫病[1]，因而一直是防制的重点。
2022全国职业院校技能大赛——鸡新城疫抗体检测赛卷+答案
全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项理论竞赛试卷（A）工位号：考试时长：120分钟一、填空题（每空0.5分，共10分）1.某些细菌（如猪链球菌、炭疽杆菌等）在生活过程中，可以在细胞壁外面产生一层粘液性物质，包围整个菌体，称为。
2.病料的采集要求进行无菌操作，所用器械、容器及其他物品均需事先。
3.《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2020）中1%红细胞悬液的配制使用作为抗凝剂，采集至少3只或无新城疫抗体的非免疫鸡的抗凝血液。
4.在病毒的血凝试验中，以完全凝集的病毒最大稀释度为该抗原的。
5.当两种病毒感染同一细胞时，可发生一种病毒抑制另一种病毒复制的现象，称为病毒的现象。
6.机体受到抗原刺激后，由B淋巴细胞转化为浆细胞产生的，能与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白称为。
7.农业农村部制定的《高致病性禽流感疫情应急实施方案（2020年版）》中划定的高致病性禽流感的疫区一般是指由疫点边缘向外延伸公里的区域。
8.凡是能引起宿主细胞迅速裂解的噬菌体，称为噬菌体。
9.病原微生物侵入动物机体，并在一定的部位定居、生长繁殖，从而引起机体一系列病理反应的过程，称为。
10.禽曲霉菌病的主、次要病原体是烟曲霉和黄曲霉。
主要侵害4～12日龄的雏鸡，其病变特征为__________。
11.动物突然发病死亡，天然孔出血应首先怀疑是。
12.按照免疫的产生及其特点，可分为和两大类。
13.Ⅳ型变态反应又称为____________________，发生过程最为缓慢。
14.机体发生吞噬作用产生的结果有__________和__________。
15.异染颗粒成分是和无机聚偏磷酸盐，功能是储存磷酸盐和能量。
16.建立免疫带是为了提高动物特异性免疫力，防止__________扩散17.500只鸡中有40只发病，其中20只死亡，其病死率为__________。
二、单项选择题（每小题1分，共10分）1.参与凝集试验抗体主要为（）A.IgG和IgAB.IgA和IgMC.IgA和IgBD.IgM和IgG2.病猪体温升高，呼吸急促、腹式呼吸、夹杂阵发性痉挛性咳嗽。
沂南县养鸡场新城疫抗体水平监测
沂南县养鸡场新城疫抗体水平监测张桂贤【摘要】新城疫是危害养禽业的一种主要传染病，通过其抗体水平监测，分析免疫状态，对鸡群科学饲养，确保养鸡业健康发展。
本次检测沂南县某蛋鸡场血样50份，分离血清，通过微量血凝及血凝抑制试验（HI）进行新城疫抗体水平监测。
试验结果表明样品平均HI抗体效价为9．4log2，说明整场免疫合格，不需要补种，新城疫疫苗能达到最佳效果，能抵抗新城疫病毒的侵入。
【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2012(029)005【总页数】2页(P48-49)【关键词】沂南县;新城疫;抗体水平;监测【作者】张桂贤【作者单位】临沂大学生命科学学院动物疫病抗体检测中心,山东临沂276005【正文语种】中文【中图分类】S858.31新城疫以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征[1]。
目前出现的鸡新城疫发病率一般在10%～25%，死亡率在15%～35%，产蛋鸡产蛋率下降30%左右，是危害养禽业的一种主要传染病[2]。
沂南县某规模化蛋鸡场采血样50份向我院动物疫病抗体检测中心送检，以监测鸡场新城疫抗体水平，为鸡场后续免疫计划的制定奠定基础。
1 材料1.1 仪器电子天平、离心机、高压锅、pH计、冰箱、移液枪（0-100 μL，0-1000 μL）、恒温箱。
1.2 试剂1.2.1 试验试剂阿氏液（红细胞保存液）、3.8%柠檬酸钠、pH值7.2 0.01 mol/L PBS、1%鸡红细胞悬液均自配。
1.2.2 生物制品鸡新城疫血凝抑制试验抗原、鸡新城疫血凝抑制试验阳性血清均购自哈尔滨维科生物技术开发公司批号分别为201105、201101。
2 方法2.1 血样的处理血液样品50份，将其编号，待样品凝固后自然析出血清可直接吸取血清待检或将血液样品2000-3000 rpm离心15 min，用移液枪吸取血清加入灭菌的0.5 mL 离心管。
若需较长时间保存血清，可置于4 ℃或 -20 ℃冰箱。
新城疫抗体检测
新城疫的抗体检测某些病毒具有凝集某种（些）动物红细胞的能力, 称为病毒的血凝, 利用这种特性设计的实验称血球凝集试验, 以此来推断被检材料中有无病毒存在, 是非特异性的, 但病毒的血凝可为相应的抗体所抑制, 即血球凝集抑制实验（HI）, 通过血凝与血凝抑制试验, 可用已知血清来鉴定未知病毒, 也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。
一目的意义1免疫监测（1）免疫效果评价（2）免疫时机确定2诊断疾病（根据有无抗体或抗体的高低）3流行病学调查二试验仪器与试剂1试验仪器离心机、离心管两支、50ml量筒一个、V型微量反应板、微量加样器（移液器）、塑料吸头（黄色）若干、1ml吸管1支、胶头滴管两支、微量振荡器、电热恒温培养箱、托盘天平。
2试验试剂鸡新城疫抗原、流感H5.H9抗原、1%鸡红细胞、生理盐水、3.8%柠檬酸钠抗凝剂、待检血清。
三方法1病毒的血凝试验1.1 3.8%柠檬酸钠抗凝剂的配制: 用托盘天平称取柠檬酸钠3.8克溶于100ml蒸馏水或纯净水中, 摇匀使其充分溶解即可, 有条件的可121℃高压蒸汽灭菌20分钟, 冷却至室温后置4℃冰箱中保存备用。
1.2 1%鸡红细胞制备过程：事先用5ml（或10ml）的注射器吸入抗凝剂若干（其量为所需血量的1/5）,从健康公鸡（未经新城疫疫苗注射）的心脏或翅下静脉采取2-4毫升血液,以2000转每分钟, 离心5分钟, 吸去上清液（注意要将血细胞泥表面的一种薄膜吸净）。
然后用生理盐水（用量为血细胞泥的5-10倍）洗红细胞, 离心5分钟, 弃去上清液, 如此反复洗3-5次, 直至上清液透明清亮为止, 最后一次要用生理盐水将血细胞泥稀释成1%浓度, 然后置4℃冰箱备用（一般可保存3天）。
1.3 红细胞凝集试验（血凝试验）操作方法（见表1）:（1）取一块洁净的96孔V型微量血凝反应板, 用微量移液器从第一列第一孔开始依次加入生理盐水, 每孔25微升, 直至加到第十五孔（第一列12孔, 第二列3孔）。
新城疫抗体水平与免疫保护相关性试验
新城疫抗体水平与免疫保护相关性试验汪文斌;张小荣;焦库华;吴艳涛【摘要】@@ 新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽类的一种急性、高度接触性传染病,给养禽业带来巨大的经济损失.免疫接种是控制ND的重要措施,而科学合理的免疫程序是确保免疫效果的关键.随着疫苗的广泛应用,近年来ND的流行已得到明显控制.但由于我国养殖模式多样,生物安全水平不一,以及免疫程序混乱,免疫鸡群仍经常发生ND[1-4].本试验从免疫保护抗体水平临界值、疫苗的免疫期等方面研究了影响ND免疫程序的因素,为制定合理的免疫程序提供依据.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2010(046)008【总页数】3页(P23-25)【作者】汪文斌;张小荣;焦库华;吴艳涛【作者单位】扬州大学兽医学院,农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏,扬州,225009;扬州大学兽医学院,农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏,扬州,225009;扬州大学兽医学院,农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏,扬州,225009;扬州大学兽医学院,农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏,扬州,225009【正文语种】中文【中图分类】S852.65+9.5新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽类的一种急性、高度接触性传染病,给养禽业带来巨大的经济损失。
免疫接种是控制ND的重要措施,而科学合理的免疫程序是确保免疫效果的关键。
随着疫苗的广泛应用,近年来ND的流行已得到明显控制。
但由于我国养殖模式多样,生物安全水平不一,以及免疫程序混乱,免疫鸡群仍经常发生ND[1-4]。
本试验从免疫保护抗体水平临界值、疫苗的免疫期等方面研究了影响ND免疫程序的因素,为制定合理的免疫程序提供依据。
1 材料1.1 疫苗与抗原 NDV标准抗原和阳性血清购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,用于测定NDV HI抗体效价。
ND活疫苗(LaSota株):武汉中博生化有限公司,兽药生字(2006)170262007;ND灭活疫苗:齐鲁动物保健品有限公司,兽药生字(2006)150252008。
门源县泉湾养鸡场新城疫抗体水平监测
门源县泉湾养鸡场新城疫抗体水平监测童海龙【摘要】通过抽取鸡血清作血凝(HA)实验来进行新城疫检疫,作血凝抑制(HI)实验进行抗体水平的监测,可以了解养鸡场的抗体水平和掌握其动态变化.本次检测是从门源县某鸡场随机采取的60个样品血清进行抗体水平监测,结果样品抗体水平大于5log2的占67.65%为免疫合格部分.而整场免疫不合格,注射疫苗后为能达到最佳效果,需要补免和再次免疫,以防新城疫病毒入侵鸡场.【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2011(028)006【总页数】2页(P60-61)【关键词】新城疫;抗体水平;监测【作者】童海龙【作者单位】青海省门源县青石嘴兽医站,青海门源810301【正文语种】中文【中图分类】S852.43本次检测对门源县某鸡场已经过新城疫免疫的鸡群进行新城疫抗体水平监测。
该鸡场有零星散发的鸡只死亡的情况出现，通过病理表现及（HA）实验检疫，所发病鸡为新城疫感染，考虑到该场已作过新城疫免疫接种，采用（HI）实验详细了解该场新城疫抗体水平，并作出相应处理措施以进一步深入防止新城疫病毒的入侵。
1 材料1.1 试验仪器注射器、玻棒、96孔微量板、微量加样枪、恒温水浴箱、冰箱、针头、试管、微型震荡器、离心机。
1.2 试验试剂生理盐水、枸橼酸钠抗凝剂、任氏液、1%的鸡红细胞。
1.3 诊断抗原新城疫病毒。
2 方法2.1 血液样品的处理在养鸡场随机采血样60份，对其进行编号，保存于10℃左右，在3天之内，将血样以3000 r/min离心10min，将上层的血清吸入干净的离心管中，置于4℃下保存。
2.2 枸橼酸钠抗凝剂的制备先称取柠檬酸钠3.8 g粉末，加入100mL蒸馏水定容，装瓶，121℃高压灭菌15min，得到的抗凝剂浓度为3.8%。
2.3 单位抗原的配制先从冰箱中取出保存的冻干的浓缩抗原，将其放在室温条件下待完全溶化。
与2mL蒸馏水稀释溶化后，通过血凝试验测其抗原效价，以能引起100%血凝的病毒最高稀释度作为抗原的效价，此稀释度为1个HA单位抗原。
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新城疫抗体水平检测精
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新城疫的血凝和血凝抑制试验
高若开 一、实验目的
1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法。
2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素，用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断。
二、实验内容
1.血凝试验(HA)检测新城疫抗原
2.血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体 三、实验原理
1.血凝试验（HA ）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞
2.血凝抑制试验（HI ）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。
这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI ）反应，也称血凝抑制反应。
抗体
病毒颗粒
红细胞
四、实验材料
离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版（5块）、微量移液器（20-100微升可调）、吸液尖（若干）、洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。
五、实验步骤
（一）抗凝剂的配制
将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用。
1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液。
（二）10%红细胞悬液的配制
1、用注射器吸取毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞毫升。
2、1500转离心5分钟，吸弃上清液。
3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次，前两次5分钟，后一次10分钟。
4、吸弃上清液，用吸量管吸取红细胞，配制成10%红细胞悬液。
5、2-6摄氏度储存，备用。
（三）血凝试验（HA)
1.在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul生理盐水
2.将系苗用生理盐水5毫升稀释，在第1孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul。
3.每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul
4.轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟
5.结果判定
1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集；
2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集；
3、＋＋：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集；
4、＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集；
5、－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。
血凝价的判定
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒的血凝价，即为一个凝集单位。
上表看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:32，则l:32为1个血凝单位，1:16、l:8分别为2、4个血凝单位，或将32/4=8，即1:8稀释的病毒液为4个血凝单位。
（四）4个血凝单位抗原的配制
根据判定结果，吸取1毫升已稀释的病原溶液再以8倍稀释，即为4个血凝单位的标准抗原。
（五）血凝抑制试验
1、在血凝板上1－12孔内各加入50ul生理盐水；
2、在第1孔内加入被检血清50ul，然后倍比稀释至第11孔，最后弃50ul；
3、第1－12孔内加入4单位抗原50ul（第12孔为病毒对照）；
4、每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul；
5、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟
6、结果判定
1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集；
2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集；
3、＋＋：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集；
4、＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集；
5、－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。
血凝抑制价的判定
将反应板倾斜成45度角，沉于管底的细细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。
能将4单位病毒物质凝集红细胞的作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的红细胞凝集抑制效价，用被检血清的稀释倍数或以2为底的对数(10g2)表示。
如上例，该血清的红细
该血清的血凝抑制滴度。
(1)一般认为鸡的免疫临界水平为1:8(成年)或1:16(雏鸡)，随地区不同而稍
有差异。
(2)鸡血清HI抗体效价高于1:16时可适当推迟新城疫免疫的时间，HI抗体效价在1:16以下，须进行新城疫疫苗接疫种，在新城疫流行的地区或鸡场，鸡的免疫临界水平应稍提高。
(3)鸡群的HI抗体水平（血凝抑制滴度）是以抽检样品的HI抗体效价(㏒2)的几何平均值表示的。
如果某鸡群的10份样品中，HI抗体效价(㏒2)为8的有3份样品，为7的有5份样品，为6的有2份样品，它们的平均值为：（ 8×3＋7×5＋6×2）/（3＋5＋2）＝平均水平在4(10g2)以上，说明该鸡群为免疫鸡群。
若在检样中HI抗体效价的最高值与最低值相差太大时，则不能用上法计算平均水平，应根据临界水平以下的样品数在全部样品中所占的百分比决定免疫与否。
(4)大型养鸡场，每次进行抽测时，抽样率一般不低于％一％，小型鸡群，抽样率应有所增加，一般认为理想的抽样率应为％。
(5)鸡群接种新城疫疫苗后，经2～3周测血清中的HI抗体效价，若提高2个滴度以上，表示鸡的免疫应答良好，疫苗接种成功；若HI抗体效价无明显提高，表示免疫失败。
（6）若有10%以上的鸡群出现11(10g2)以上的高血凝抑制滴度，说明鸡群已受新城疫强毒感染。
若监测鸡群的免疫水平，用血凝抑制滴度在4(10g2)的鸡群保护率为50%左右；在4(10g2)以上保护率达90-100%；在4(10g2)以下的非免疫鸡群保
护率约9%，免疫过的鸡群为43%。
六、注意事项
1、红细胞用前请摇匀。
2、用枪加样定要准确，尽量不要有气泡。
3、结果判定要有耐心。
4、HA和HI勿相混。