华南师范大学 生命科学学院 生物工程下游技术 实验报告
生物下游技术实验!!!!
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生物下有技术期末大实验一、实验目的:1、熟练酵母扩大培养的技术。
2、学习酵母蔗糖酶的提取方法以及原理。
3、了解双缩脲法测蛋白质含量。
二、酵母的扩大培养:●一级培养:取新鲜苹果汁液,分装在两只经过杀菌的试管中,每只装量10~20毫升,加绵塞。
在0.06~0.10兆帕压力下杀菌30分钟,冷却至常温,接入纯酵母菌1~2针,摇动分散,在25~28摄氏度下培养24~48小时,使发酵旺盛。
●二级培养:用杀过菌的三角瓶(1000毫升),装鲜果汁500毫升,如上法杀菌,接入培养旺盛的试管酵母液两支,在25~28 摄氏度下培养24~28小时,待发酵旺盛期过后使用。
三、酵母蔗糖酶的提取(一)、部分纯化试剂:1 .啤酒酵母2 .一氧化硅3 .甲苯(使用前预冷到0 ℃以下)4 .去离子水(使用前冷至4 ℃左右)5 .冰块、食盐6 . 1N 乙酸7 . 95 %乙醉(二)、仪器:1 .研钵1 个2 .离心管3 个3 .滴管3 个4 .量筒50ml 1个5 .水浴锅1 个6 .恒温水浴7 .烧杯1000ml 2个8 .广泛pH 试纸9 .高速冷冻离心机(三)、操作步骤:1 .提取(1)准备一个冰浴,将研钵稳妥放入冰浴中。
(2)称取5g 干啤酒酵母和20g 湿啤酒酵母,称20mg 蜗牛酶及适最(约10g)一几氧化硅,放入研钵中.二氧化硅要预先研细。
(3)量取预冷的甲苯3Oml 缓慢加入酵母中,边加边研磨成糊状,约需60 分钟.研磨时用显微镜检查研磨的效果,至酵母细胞大部分研碎。
(4)缓慢加入预冷的40ml 去离了水,每次加2ml 左右,边加边研磨,至少用30 分钟。
以便将蔗糖酶充分转入水相。
(5)将混合物转入两个离心管中,平衡后,用高速冷离心机离心,4 ℃, 4000rpn ,30min 。
如果中间白色的脂肪层厚,说明研磨效果良好。
用滴管吸出上层有机相.(6)用滴管小心地取出脂肪层下面的水相,转入另一个清洁的离心管中,4℃,4000rpn,离心30min 。
华南师范大学 生命科学学院 生物工程下游技术 往年真题试卷及答案 指导老师:廖劲松
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华南师范大学生命科学学院生物工程下游技术考试:考试题型:名词解释(20分)、简答题(35分)、论述题(35分)B卷:一、名词解释(共10小题,每题2分,共20分):1. 浸取:过程系指出溶媒进入细胞组织溶解、浸取目的产物后,变成浸取液的全部过程。
(知识要点第4页)2.超滤:从小分子溶质或溶剂中,将比较大的溶质分子筛分出来,能截流相对分子量在500以上的高分子的膜分离过程。
(知识要点192页)3.晶体的二次成核:受已存在的宏观晶体的影响而形成晶核的现象。
在二次成核中起决定作用的两种机理:液体剪应力成核和接触成核。
(知识要点352页)4.冷冻干燥:将含水物料冷冻到冰点以下,使水转变为冰,然后在较高真空下将冰转变为蒸气而除去的干燥方法。
物料可先在冷冻装置内冷冻,再进行干燥。
但也可直接在干燥室内经迅速抽成真空而冷冻。
升华生成的水蒸气借冷凝器除去。
升华过程中所需的汽化热量,一般用热辐射供给。
(知识要点生物工程设备361页)5.等电点沉淀法:是利用蛋白质在等电点时溶解度最低而各种蛋白质又具有不同等电点的特点进行分离的方法。
(百度)6.热泵蒸发:将蒸发器蒸出的二次蒸汽用压缩机压缩,提高它的压力,使它的压力,使它的饱和温度提高到溶液的沸点以上,然后送入蒸发器的加热室作为加热蒸汽,二次蒸汽压缩机称为热泵,这种方法称为热泵蒸发。
(知识要点381页)7.双水相萃取:利用组分在两个互不相溶的水相间分配的差异而达到分离的萃取技术。
(知识要点:王巧娥,傅博强,王小如著.甘草深加工技术.北京:中国轻工业出版社.2011.第52-53页.)8降膜式蒸发器:原料液由加热管的顶部经分配器导流进入加热管,沿管壁成膜状向下流。
液体的运动是靠本身的重力和二次蒸汽运动的拖带力的作用,其下降的速度比较快,因此成膜的二次蒸汽流速可以较小,对黏度高的液体也较易成膜,并被蒸发浓缩。
气液混合物由加热管底部进入分离室,经汽液分离后,二次蒸汽由分离室顶部逸出,完成液则从底部排出。
《生物工程下游技术实验》项目一
![《生物工程下游技术实验》项目一](https://img.taocdn.com/s3/m/1d59d3d56f1aff00bed51e5c.png)
《生物工程下游技术实验》讲义实验项目一:“超氧化物歧化酶SOD的分离纯化技术”实验一:植物超氧化物歧化酶(SOD)活性测量(6学时)过程1.每组30g绿豆,洗涤,蒸馏水浸泡过夜,倒去浸泡的水,加入300 ml蒸馏水液,匀浆机匀浆,二层纱布过滤,离心(3000 rpm)得清液,取少量清液进行SOD活性及蛋白质含量测量,计算材料中SOD总活性单位及比活性单位(units/mg Pr)。
2.所得清液测量其总体积,缓慢加入硫酸铵至35%饱和度(查一般实验手册,约19.4g/100ml清液),5℃冰箱中静置备用下一实验。
SOD活性的测定:(二种方法取一种,本次实验用前者,要求理解后者的原理)●邻苯三酚自氧化法:这是最简单的一种检测方法,但干扰因素较多。
●NBT光化还原法:比较稳定,但受酚类物质干扰。
一、利用连苯三酚自氧化测SOD活性的方法溶液配制:1,连苯三酚:630 mg------→100 ml 10 mmol/L HCl (0.085 ml 36%的浓HCl ,用蒸馏水配成100 ml)。
共配500ml.2,pH 8.30 50 mmol/L Tric-HCl:A) 0.1 mol/L Tris: 12.114g-----1000 ml (储备液)B) 0.1 mol/L HCL: 浓盐酸稀释得到(8.5 ml 36%的浓HCl ,用蒸馏水配成1000 ml)(储备液)●0.05mol/L pH 8.3: 500ml A+199ml B-------定容到1000ml..操作:25︒C,3 ml 50 mmol/L pH8.30 的Tric-HCL 缓冲液,加入10 μl 50 mmol/L 连苯三酚(具体加入量应每次测量前校正,加入的原则是使下面的A325变化控制在0.07 /min左右),迅速摇匀,倒入光径1 cm的比色杯(应该用石英杯)中,每30秒测一次A325值,自氧化速率的变化(∆A)控制在0.07 /min左右,加入酶液后再测连苯三酚自氧化速率的变化(∆A’),酶量的加入控制在使加样后的∆A’在0.035/min左右。
生物下游技术总结提纲
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一、生物产品的特点:1、是产物浓度低的溶液原因:①细胞间接触抑制限制细胞量②产物对细胞有反馈抑制③培养条件限制氧传递2、培养环境组分复杂3、产物稳定性差:①产物易受物化条件影响发生化学降解②产物易受生物酶降解4、由于分批操作,细胞变异性大,使产物批间差异大。
5、产品用于食品与药物,对质量要求高。
二、生物工程下游加工一般工艺流程:1、预处理和固液分离该步对产物浓缩与质量改善不大,可选用操作有限。
①预处理:将悬浮液中与溶液浓度相近的细胞分离出来方法:加热、调pH、絮凝②固液分离:不溶物的去除方法:I、细胞移动:沉降、浮选II、溶液移动:过滤(上压力、下压力、错流过滤)III、离心IV、膜分离(不常用)此外,若目标产物为胞内产物,则需要:①细胞破壁:匀浆法、研磨法、酶解法②碎片分离:离心、双水相、膜分离2、提取(初步分离)该步去除与目标产物性质差异大的杂质,使产物浓度与质量显著提高。
其可选操作范围广:沉淀、吸附、萃取、超滤、结晶、膜分离3、精制(高度纯化)该步去除与目标产物有类似化学功能和物理性质的杂质。
其可选操作要求对产物有高度选择性:重结晶、离子交换、色谱分离、膜分离4、成品加工该步采用方法由产品最终用途要求决定,方法:浓缩、干燥、无菌过滤、成型等。
一、悬浮液预处理方法:根据可分离物质的性质选择处理方法:1、对热稳定性好的产品:加热作用:降低黏度,加速聚集以除杂。
要求:温度不宜过高,处理时间不宜过长。
2、利用产品不同的电离度与电荷性质:调节pH方法:加入草酸、无机盐或碱应用:等电点沉淀、膜过滤、絮凝3、根据产品在不同条件下分散状态的差异:凝聚与絮凝①凝聚:加入无机带电离子(如铁盐)中和胶粒电荷、胶体脱稳,胶粒聚集形成凝聚体。
②絮凝:加入天然或合成的大分子量聚电解质(如甲壳素或PAM)将胶粒交联成网形成絮凝团。
4、为防止滤孔阻塞使用惰性助滤剂。
如将硅藻土、石棉等预涂在滤布上或按一定比例与悬浮液混合后进行过滤,使混合颗粒形成格子型滤饼结构,方便清液通过。
生物工程下游技术实验讲义
![生物工程下游技术实验讲义](https://img.taocdn.com/s3/m/d6a4d796ed3a87c24028915f804d2b160b4e86ec.png)
⽣物⼯程下游技术实验讲义⽣物⼯程下游技术实验讲义⽬录实验⼀层析柱装填及柱效测定实验⼆溶菌酶粗提取实验三溶菌酶分离纯化实验四酶活⼒及蛋⽩质浓度的测定实验五溶菌酶纯度鉴定与分⼦量测定实验⼀层析柱装填及柱效测定⼀、实验⽬的1. 掌握凝胶过滤层析的原理,掌握凝胶柱柱效测定⽅法;2. 熟悉凝胶层析的⼀般过程;⼆、实验原理凝胶过滤层析也称分⼦筛层析、排阻层析。
是利⽤具有⽹状结构的凝胶的分⼦筛作⽤,根据被分离物质的分⼦⼤⼩不同来进⾏分离。
相对分⼦质量⼤的⽣物分⼦由于不能进⼊或不能完全进⼊凝胶内部的⽹孔,沿着凝胶颗粒间的空隙或⼤的⽹状孔通过,⼤分⼦相对于⼩分⼦迁移的路径短,保留值⼩,所以在层析过程中迁移速度最快,先从柱中流出;反之,分⼦量⼩的⽣物分⼦保留值⼤,后从柱中流出。
凝胶层析常⽤于分离纯化蛋⽩质(包括酶类)、核酸、多糖、激素、病毒、氨基酸和抗⽣素等⽣物⼤分⼦, 也可⽤于样品的浓缩和脱盐及测定⽣物⼤分⼦的分⼦质量等⽅⾯。
三、实验试剂与器材层析柱( 1.6×30 cm ),砝码天平,玻璃棒,烧杯,刻度试管及试管架,滴头吸管,Sephadex G-50,0.02mol/L pH8.0的PBS缓冲液,5%丙酮(PBS缓冲液作为溶剂),⽔浴锅,蓝⾊葡聚糖四、实验内容与步骤(⼀)测量层析柱的内径、⾼度,计算所需凝胶量⼲胶⽤量(g)=柱床体积(ml)/凝胶的溶胀体积(ml/g)由上式计算出的⼲胶⽤量再增加10%-20%(⼆)Sephadex G-50凝胶预处理称取相应质量的⼲凝胶,加⼊适量的0.02 mol/L PBS 在100℃⽔浴中加热溶胀1⼩时以上,溶胀之后将极细的⼩颗粒倾泻出去。
⽤真空⼲燥器抽尽凝胶中空⽓,并将凝胶上⾯过多的溶液倾出。
(三)层析柱的装填1 清洗:每组取⼀⽀层析柱,⽤清⽔冲洗⼲净。
2 安装与检查:检查柱下部烧结滤板是否完好⼲净。
安装层析柱,让其垂直固定于滴定台架上。
对准出⼝处,放⼀只250mL烧杯。
2024年生物技术专业实习报告(2篇)
![2024年生物技术专业实习报告(2篇)](https://img.taocdn.com/s3/m/c368072903768e9951e79b89680203d8ce2f6aee.png)
2024年生物技术专业实习报告[实习目的]1通过深入各实习岗位进行综合性的实习,将所学的基础理论、基础知识和基本技能运用于实践之中,将所学的知识转化为能力,培养实际工作能力、科研能力。
2掌握现代生物技术手段与运用能力,训练实际操作技能。
3了解校外科研机构的实际工作情况,尤其是与所学专业相关的学科如生物学、化学、医学、药学等学科的研究情况和前沿状况。
4从实际出发,检验自己在态度、知识、能力、技能等四项指标方面所达到的程度。
[实习时间]xx[实习地点]中国科学院xx植物研究所[实习内容]1、植物组织培养技术---------组培室2、标本的采集、制作、鉴定、保藏技术---------标本馆内3、植物分类、引种、栽培、鉴定、管理---------植物园内的苗圃基地4、植物化学方面的研究-------------植物化学实验室5、专业讲座、科普训练、学术报告----------专家指导[实习人员]xx化学与生物技术学院05级生物技术专业[实习方式]1以小组为单位轮转到各个点实习,根据指导教师的安排及要求完成各项实习任务。
2积极主动,充分发挥个人能动性和团队合作精神。
[正文]实习,是一种期待,是对自己成长的期待,是对自己角色开始转换的期待,更是对自己梦想的期待;实习,也有一份惶恐,有对自己缺乏信心的不安,有对自己无法适应新环境的担忧,更有怕自己会无所适从的焦虑.带着一份希望和一份茫然来到了来到隶属中国科学院的昆明植物研究所,开始我的实习生涯。
为期一个月的时间我们先后在植物所的苗圃、标本管、植化室、组培室进行了实习。
这次实习让我见识了许多,也收获了许多,不仅仅感受在这的那份自豪与优越,而是感染他们的那份敬业、求实与无私精神以及实习给我带来的种种思考。
一:苗圃苗圃主要负责花卉的培育,植物园的花都是在苗圃先培养到一定程度后,再拿到园内供游客观赏,如秋海棠、千日红、石榴花、一串红等等,都是在苗圃先通过各种方法培养。
生物工程下游技术教学分析的研究论文
![生物工程下游技术教学分析的研究论文](https://img.taocdn.com/s3/m/37fbcc172e60ddccda38376baf1ffc4ffe47e28e.png)
生物工程下游技术教学分析的研究论文生物工程下游技术教学分析的研究论文摘要:通过制定适当的课程教学目的和教学内容,采取多媒体教学和双语教学相结合的教学方式,旨在有效地指导学生深入了解生物工程产品分离和纯化的核心内容,使学生能较为直观地了解课程理论和实际操作技术,了解当前学科发展的前沿动态,提高课程教学水平,促进学生学业。
关键词:生物工程下游技术;双语教学;多媒体生物工程下游技术又称为生物分离工程,是生物工程及相关专业的必修课程。
该课程的理论与具体实践结合十分紧密,其教学活动的成功与否能够直接影响到相关专业学生的专业素质以及实际问题的解决能力。
在我国,生物工程“下游技术”概念主要包括动植物以及微生物细胞大规模培养后细胞的收集、产物的分离纯化、产品的成型加工和质量监控等一系列单元操作和过程中的主要技术。
其中,生物发酵产物以及生化产物的分离和纯化是最重要的核心内容。
半个多世纪以来生物技术的长足进步带动了生物工程下游技术的极大发展。
近年来,人们认识到生物技术产业化进程的经济环节和最重要的技术是“下游技术”,可以对生物工程工业制品的质量和产量产生直接影响,其中最重要的问题是减少损耗成本目前可占总成本的50%以上,因此愈来愈受到人们的关注。
因此,教授好生物工程下游技术,对于生物工程以及相关的专业至关重要。
在实际的教学过程中,主要是通过以下几个方面来实现良好的教学规范和特色。
1确立良好的教学目的和教学内容在具体教学活动中,首先要确立良好的教学目的和教学内容,通过大量的检索和研究分析,制定合理的教学要求和教学内容,是树立良好教学规范和特色的第一步。
教学目的是一堂课的方向盘,是衡量一堂课的首要尺度。
而教学内容是教学目的的具体化,是一堂课的中心,是评定一堂课的主要标准。
正确的教学内容要求:①科学性、思想性、系统性;②理论联系实际;③主次分明突出重点和难点。
比如:“膜分离”一章,该章的教学目的就是要学生在掌握各种膜分离方法和原理的基础上,进一步了解膜特性及操作特点和影响膜分离速度的因素以及膜分离过程。
生物工程下游技术实验报告思考题
![生物工程下游技术实验报告思考题](https://img.taocdn.com/s3/m/86068ce10740be1e650e9aee.png)
答案仅供参考1、简述发酵液预处理的目的及常用方法。
降低粘度,保护敏感目标物质,浓缩目标物质,沉淀杂蛋白降低过滤阻力,便于过滤;方法有加热加水、等电点法、加絮凝剂、凝集剂或反应剂。
2、你认为发酵液固液分离常用方法有哪些?离心分离和过滤分离3、针对某一具体产品的分离纯化,在进行发酵液预处理时,一般要考虑哪些因素?目标产物的所在位置,是胞内还是胞外;目标物质的分子量是多少,可否通过超滤膜;目标物质对哪些物质或条件敏感(温度、pH、有机溶剂等);如何保护目标物质的活性;目标物质在发酵液里的浓度是多少;发酵液的粘度;发酵液固形物的含量和性质。
4、此次实验,你所在小组处理的是哪种原料,采取何种预处理和固液分离方法?简述选择依据,请分析实验结果是否达到预期。
处理的是大肠杆菌的发酵液,为浅黄色,略显透明,有类似石楠花的刺激性气味;预处理是采用加入絮凝剂聚丙烯酰胺和助滤剂硅藻土的方式,搅拌后,用抽滤机抽滤,以此进行预处理,因为发酵液比较粘稠;抽滤完成后,使用超滤膜过滤。
1、简述微生物细胞破碎方法的选择依据及注意事项。
选择破碎方法的依据有很多,主要有需要破碎细胞的数量,细胞壁的强度,目标物质对破碎条件的敏感程度和提取目标物质所需要的破碎度。
2、此次实验,你所在小组处理的哪种细胞,采取何种破碎技术?简述选择依据,请分析实验结果是否达到预期。
处理的是酿酒酵母的培养液,呈乳白色,无刺激性气味,采用了超声波破碎,效果非常差;考虑到酵母菌细胞壁非常厚实,加入海盐手动研磨一个小时,镜检后发现略微有一点效果。
总的来说,没有达到预期效果,原因可能是手动研磨功率太低,酵母细胞壁又太后,酵母细胞应该经过预处理,比如说葡聚糖酶处理,再破碎,效果会比较好。
3、细胞破碎率的测定方法有哪些?简述其区别。
内容物的释放率(蛋白质含量或酶活力)、显微镜下镜检(完整细胞的数量,可以用染色剂染色来辅助计数,用以区分活细胞和死细胞)、测定破碎前后电导率的变化(细胞内容物的释放会导致溶液电导率的变化)、也可以用平板培养基培养一段时间后计数,检测剩余活细胞的数量,不过时间过长。
2024生物技术专业实习报告范文5篇2
![2024生物技术专业实习报告范文5篇2](https://img.taocdn.com/s3/m/71ad8291ac51f01dc281e53a580216fc710a5342.png)
2024 生物技术专业实习报告范文12024 生物技术专业实习报告范文1精选5篇(一)2024年生物技术专业实习报告一、引言生物技术作为一门新兴的学科,涵盖了生物学、化学、数学和计算机科学等多个领域。
本次实习是我对生物技术知识的实践运用,旨在提升自己的实践能力和掌握先进的生物技术实验技能。
本报告将详细描述我在实习期间所参与的项目及所学到的知识与经验。
二、实习项目1. 实习单位:XX生物技术有限公司2. 项目内容:基因工程方面的研究与应用3. 实习时间:2024年6月1日-2024年8月31日三、实习经历1. 实习内容在实习期间,我主要负责参与公司正在进行的基因工程项目。
我在导师的指导下,学习了基因工程的基本理论知识以及实验操作技能。
我主要参与了以下几个方面的工作:(1)基因克隆:学习了基因的克隆原理和操作方法,通过PCR扩增目标基因,然后将其插入到载体中。
(2)蛋白表达和纯化:学习了蛋白表达系统的构建和操作技巧,对目标蛋白进行表达和纯化。
(3)基因编辑:学习了CRISPR-Cas9系统的原理和应用,通过设计合适的引物和控制条件,对目标基因进行编辑。
(4)转基因植物培育:学习了转基因植物的培育原理和方法,参与了转基因植物的构建和扩增工作。
2. 实习收获通过本次实习,我获得了以下收获:(1)对基因工程领域有了更深入的了解:在实习期间,我学到了许多基因工程的理论知识和实验技巧,对基因工程的原理和应用有了更深入的了解。
(2)培养了实验操作能力:通过参与实验项目,我掌握了许多实验操作和技巧,提高了自己的实验操作能力。
(3)锻炼了团队合作能力:在项目中,我与其他实习生和导师一起工作,学会了与他人合作、协调和沟通,培养了团队合作能力。
(4)增强了问题解决能力:在实习过程中,我遇到了许多实验操作中的困难和问题,通过积极探索和与导师交流,我学会了解决问题的方法和策略。
四、实习总结与展望通过本次实习,我不仅学到了许多实践知识和实验技能,还通过工作与导师和其他实习生的交流,认识到了自身的不足和需要提高的地方。
生物工程实习报告
![生物工程实习报告](https://img.taocdn.com/s3/m/24228a50571252d380eb6294dd88d0d232d43c54.png)
生物工程实习报告生物工程实习报告在当下社会,需要使用报告的情况越来越多,多数报告都是在事情做完或发生后撰写的。
那么你真正懂得怎么写好报告吗?下面是小编收集整理的生物工程实习报告,希望对大家有所帮助。
生物工程实习报告1一、实习时间:20xx.06.16-20xx.06.23二、实习地点:广东省汕尾市遮浪镇沙滩、泥石滩和石砾滩;汕尾湿地;广东省广州市华南植物园。
三、实习目标:1、通过实习,巩固和提高课堂所学的知识,进一步培养学生的独立工作能力。
2、学习用正确的思维方法观察和研究动物。
3、初步掌握动物的采集。
培养、麻醉、巩固、保存、标本制作等一系列的基本操作方法。
4、通过实习了解动植物学在生产中的应用级在教学科研领域的重要性,进而巩固专业思想。
四、实习过程:期末考试前期,唐老师电话跟我说本次夏季学期实习由湖南衡山植物认知实习改为广东汕尾遮浪镇海滨实习,大家兴奋不已,对于期末考试更加有动力,更加期待此次实习之旅。
期末考完后期,大家都忙于筹备实习的物品,泳衣、泳裤、泳镜、墨镜、沙滩裤、沙滩鞋等等。
大家准备得都非常完善,期待出发的那一刻。
出发之时,每位同学提着大包小包在天马停车场集合座大巴出发前往长沙火车站。
整理行李:带好充电器、插排(宾馆电源插口一般是不够用的)、衣架(宾馆的衣架也少之甚少)、蚊香液、花露水(野外防虫室内驱蚊必备之选)、防晒霜、防晒服(不然皮肤一定会变黑脱皮的)、人字拖(洞洞鞋鞋里进沙子出不来)、火车篇等个人证件。
组织站队:每一个即将行动的点都要集合一次清点人数,排队行走时女生在前男生在后,负责人在整个队伍的两极。
要有时间观念,集体集合要提前五到十分钟站好,每人迟到一分钟,就等于浪费了大家每人一分钟。
火车前往:准备好一切可以充实时间的东西,MP3、MP4、MP5、三国杀、纸牌等,并注意防盗,贵重物品不要拿出来。
由于是硬座,大家一晚休息得不是很好,一个个蓬头垢面,无精打采,在广州火车站下车无过多的停留,直接沿地下通道直径走到广州到汕尾遮浪镇的大巴上,3个小时的路程,车上鸦雀无声全部在补觉。
生物专业的实习报告5篇
![生物专业的实习报告5篇](https://img.taocdn.com/s3/m/c9851305876fb84ae45c3b3567ec102de3bddf52.png)
生物专业的实习报告5篇际操作却没有这么的简单。
通过十一点作为国人的物流人士有着切肤的体会。
货物运转速度慢,货差货损率高难以避免,高层货架利用率严天的简单了解,使我对于物流配送有了更加深刻的认识。
中国的物流业虽然没有国外发达,但这并代表中国物流业的落后,一些原则性严重的制约了中国物流业信息技术化的发展速度。
野蛮的装卸态度更是制约中国物流业发展的瓶颈之一。
这次实习让我从实践中了解到了物流,使实践与理论更好的结合。
在这里我深刻的领悟到了一个观点:推动你的事业,不要让你的事业来推动你。
四、实习结论及建议1、进货堆放货物时不能只顾着一时的方便,应该考虑到出货时的方便,不能耽误客户的时间,因此要按照标准把货物堆起,堆放要整齐合理,以免倒塌。
2、要严格按照仓储管理的要求,对于过期的货物要及时与厂家联系,并得到应允后及时销毁,不要堆积在仓库中,浪费仓库容积,更不要和正常的商品同放一起,带给人一种杂乱无章的感觉,应该另外准备一间仓库,使那些一时无法销毁的商品有地方储存。
3、目前物流中心正面临许多问题,批次越来越多而批量却越来越小,造成物流管理上的一个难点。
产前物流,企业内部物流,销售物流,在供应链的管理上如何把握住这三块之间的关系。
国内的物流利润太低,仅占5%,如何把利润搞上去,面临一系列的难题,物流中心还得多借鉴国外的物流策略,提高自己企业的效益原理:以大豆、小麦为主要原料,采用传统天然发酵工艺,经十余道工序精酿而成,内含多种人体必需的氨基酸、还原糖等营养成份。
色泽鲜艳、质纯味正、酱香浓郁、咸甜适口,-是烹任各式菜肴、冷拌、餐桌盛宴的佐餐调味佳品。
分特级、特鲜、精制佳酿优级等1有瓶装及复全薄膜软包装,计14个品种。
工艺流程:制作方法1、种曲制造①菌种②培养:试管菌种→锥形瓶菌种→曲盒种曲(或曲池、曲匾)逐级扩大培养。
试管菌种应定期进行纯化、复壮。
③质量要求:感官指标——孢子丛生,黄绿色,无异味,无污染。
理化指标——每克菌种(干基)含孢子数510____9个以上。
生物工程下游技术实验指导
![生物工程下游技术实验指导](https://img.taocdn.com/s3/m/1fa1c76748d7c1c708a145c3.png)
生物工程下游技术实验指导何伟 编南京师范大学生命科学院2006-06南京师范大学生物学实验教学中心课程说明根据教学计划,对理科基地、生物技术、生物教育各专业方向的本科学生开设生物工程下游技术实验36学时。
现编列11个实验项目,供实验教学时选用。
生物工程下游技术实验单独设课,1个学分。
平时实验操作成绩占30%,主要考核学生的预习情况、实验态度、动手能力及操作的规范性、实验结果、实验报告、课堂纪律等情况。
期末实验理论考试成绩占70%。
南京师范大学生物学实验教学中心实验注意事项1.自觉遵守课堂纪律,维护课堂秩序,不迟到,不早退。
2.实验前必须认真预习,熟悉每次实验的目的、原理、操作步骤,懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法,否则不能开始实验。
3.实验过程中要听从教员的指导,严肃认真地接操作规程进行实验,并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上,文字要简练、准确。
完成实验后经教员检查同意,方可离开实验室。
4.实验台面应随时保持整洁,仪器、药品摆放整齐。
公用试剂用毕,应立即盖严放回原处。
勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。
实验完毕.仪器须洗净放好,将实验台面抹拭干净,才能离开实验室。
5.使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约。
洗涤和使用仪器时,应小心仔细,防止损坏仪器。
使用贵重精密仪器时,应严格遵守操作规程,发现故障须立即报告教员,不得擅自动手检修。
6.实验室内严禁吸烟!电炉应随用随关,严格做到:人在火在,人走火灭。
乙醇、丙酮、乙醇等易燃品不能直接加热,并要远离火源操作和放置。
实验完毕,应立即关好仪器开关和水龙头,拉下电闸。
离开实验室以前应认真、负责地进行检查,严防发生安全事故。
7.废液体可倒入水槽内,同时放水冲走。
强酸、强碱溶液必须先用水稀释。
废纸、火柴头及其他固体废物和带渣滓的废物倒入废品缸内,不能倒入水槽或到处乱扔。
8.仪器损坏时,应如实向教员报告,并填写损坏仪器登记表,然后补领。
生物技术专业实习报告
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生物技术专业实习报告生物技术专业实习报告7篇随着社会不断地进步,报告不再是罕见的东西,报告包含标题、正文、结尾等。
那么一般报告是怎么写的呢?以下是小编为大家收集的生物技术专业实习报告7篇,欢迎大家分享。
生物技术专业实习报告篇1首先,我想谈一下实习的意义。
作为一名学生,我想学习的目的不在于通过结业考试,而是为了获取知识,获取工作技能,通过实习工作了解到工作的实际需要,使得学习的目的性更明确,得到的效果也相应的更好。
再次,我要总结一下自己在实习期间的体会。
在实习期间,通过在生产现场观摩,经过专业人员的讲解,了解了微生物发酵技术在制药、酿酒和作为生物菌肥等方面的在作用。
参观实习是对自己在学校学习的补充,这次实习让我对《发酵工程》这门学科有了更深的认识,亲眼看见了发酵的设备,及其整个的生产流程,对这三个企业有了初步的理解,让我对好氧发酵、厌氧液体发酵、厌氧固体发酵等过程中的灭菌、制种、放大、发酵控制、检测、生产流程等以及生化药物的提取、精制、冷冻干燥、包装等生物分离工程获得了感性认识,建立了从理论到实际的跨越。
也对传统的白酒酿造工艺有了进一步的了解,对酿酒时制曲、原料的选取与处理、配料搅拌及烝酒蒸粮、入窖发酵等工艺过程有了直观的认识。
另外还参观了微生物肥料生产的工艺流程,看到了发酵罐的罐体及一些管路,对微生物发酵的用途又多了一份理解。
在这次实习当中,我领悟到不论什么时候都要充分发挥自己学习的主观能动性,要主动的去学习,只有这样才能正真的实现实习的目的。
通过这次实习让我认清了自己的很多不足和缺点。
第一个就是缺乏实际操作的经验。
因为自己缺乏经验,很多问题而不能分清主次。
第二是态度仍不够积极。
在平时的实验课程中仅仅能够完成布置的工作,若没有工作做时就会松懈,不能做到主动学习。
通过这一段时间的实习,从中获得的实践经验使我终身受益,并会在我毕业后的实际工作中不断地得到印证,我会持续地理解和体会实习中所学到的知识,期望在未来的工作中把学到的理论知识和实践经验不断的应用到实际工作中来,充分展示我的个人价值和人生价值,为实现自我的理想和光明的前程而努力。
华南师范大学生命科学学院生物工程下游技术实验报告
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华南师范⼤学⽣命科学学院⽣物⼯程下游技术实验报告华南师范⼤学⽣命科学学院⽣物⼯程下游技术实验报告实验⼀酵母RNA的提取及含量测定(紫外吸收法)实验⼆⿊曲霉β-D⽢露聚糖酶的纯化盐析实验三盐析β-D⽢露聚糖酶活⼒测定实验四柠檬酸摇瓶发酵及结晶提取姓名: _义忠仁Ricky_学号:指导教师:江学⽂实验⼀酵母RNA的提取及含量测定⼀、实验⽬的与要求1、了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和⽅法。
2、熟悉和掌握紫外吸收法测定核酸含量原理和操作⽅法,3、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使⽤⽅法。
⼆、实验原理由于RNA的来源和种类很多,因⽽提取制备⽅法也很各异。
⼀般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。
其中苯酚法⼜是实验是最常⽤的。
组织匀浆⽤苯酚处理并离⼼后,RNA即溶于上层被酚饱和的⽔相中,DNA和蛋⽩质则留在酚层中。
向⽔层加⼊⼄醇后,RNA即以⽩⾊絮状沉淀析出,此法能较好的除去DNA和蛋⽩质。
上述⽅法提取的RNA具有⽣物活性。
⼯业上常⽤稀碱法和浓盐法提取RNA,⽤这两种⽅法所提取的核酸均为变性的RNA,主要⽤作制备核苷酸的原料,其⼯艺⽐较简单。
浓盐法使⽤10%左右氯化钠溶液,90℃提取3-4h,迅速冷却,提取液经离⼼后, 上清液⽤⼄醇沉淀RNA。
稀碱法使⽤稀碱使酵母细胞裂解,然后⽤酸中和,除去蛋⽩质和菌体后的上清液⽤⼄醇沉淀RNA或调pH2.5利⽤等电点沉淀。
酵母含RNA达2.67-10.0%,⽽DNA含量仅为0.03-0.516%,为此,提取RNA多以酵母为原料。
核酸、核苷酸及其衍⽣物的分⼦结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统(-C=C⼀C=C-),能够强烈吸收250-280nm 波长的紫外光。
核酸(DNA,RNA)的最⼤紫外吸收值在260nm 处。
遵照Lambert-Beer 定律,可以从紫外光吸收值的变化来测定核酸物质的含量。
在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同,紫外吸收光也随之表现出明显的差异,它们的摩尔消光系数也随之不同。
生物技术专业实习报告范文2篇
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生物技术专业实习报告范文生物技术专业实习报告范文精选2篇(一)实习报告生物技术专业实习报告一、实习单位和实习时间我所实习的单位是XX生物技术有限公司,实习时间从xxxx年x月到xxxx年x月。
二、实习内容在实习期间,我主要参与了以下几个方面的实际工作:1. DNA提取和PCR分析在实习的第一阶段,我主要学习了DNA提取和PCR分析的基本原理和操作方法。
我了解到PCR是一种通过放大DNA片段来检测和分析基因的技术。
在实践中,我学会了使用试剂盒提取DNA样本,并通过PCR反应来放大目标基因。
通过此项实践,我对PCR 反应的基本步骤和技术要点有了更深的理解。
2. 细胞培养和细胞传代在实习的第二阶段,我参与了细胞培养和传代的实验。
我学习了培养基的配制和细胞的处理方法,了解了细胞传代的操作过程。
通过细胞培养实验,我了解了细胞在培养基中不断生长和繁殖的过程,学会了控制细胞的生长速度和传代次数。
3. 酶联免疫吸附实验(ELISA)在实习的第三阶段,我学习了酶联免疫吸附实验(ELISA)的原理和操作方法。
ELISA是一种常用的检测特定蛋白质或抗体的方法。
在实践中,我学会了制备ELISA试剂盒、操作微孔板和进行光谱检测。
通过ELISA实验,我对特定蛋白质的检测和定量有了更深入的了解。
三、实习收获在实习期间,我不仅学到了生物技术实验的基本理论和操作方法,还锻炼了实验操作的技能和实践能力。
以下是我在实习中的主要收获:1. 熟悉了生物技术实验的基本原理和方法,对PCR、细胞培养和ELISA等技术有了更深入的认识。
2. 掌握了实验操作的基本技巧和注意事项,提高了实验操作的准确性和效率。
3. 培养了良好的实验室安全意识和规范操作习惯。
4. 培养了团队合作精神和沟通能力,学会了与同事合作共事,解决实验中遇到的问题。
四、实习总结通过这次实习,我对生物技术专业的实验操作和实践能力有了更全面的了解和提高。
实习期间,我克服了实验中的各种困难和挑战,不断提高自己的实验能力和解决问题的能力。
生物专业的实习报告
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生物专业的实习报告生物专业的实习报告锦集十篇随着社会一步步向前发展,报告的使用频率呈上升趋势,我们在写报告的时候要注意逻辑的合理性。
一听到写报告马上头昏脑涨?以下是小编整理的生物专业的实习报告10篇,欢迎大家分享。
生物专业的实习报告篇1转眼之间,两个月的实习期即将结束,回顾这两个月的实习工作,感触很深,收获颇丰。
这两个月,在领导和同事们的悉心关怀和指导下,通过我自身的不懈努力,我学到了人生难得的工作经验和社会见识。
我将从以下几个方面总结生物技术岗位工作实习这段时间自己体会和心得:一、努力学习,理论结合实践,不断提高自身工作能力。
在生物技术岗位工作的实习过程中,我始终把学习作为获得新知识、掌握方法、提高能力、解决问题的一条重要途径和方法,切实做到用理论武装头脑、指导实践、推动工作。
思想上积极进取,积极的把自己现有的知识用于社会实践中,在实践中也才能检验知识的有用性。
在这两个月的实习工作中给我最大的感触就是:我们在学校学到了很多的理论知识,但很少用于社会实践中,这样理论和实践就大大的脱节了,以至于在以后的学习和生活中找不到方向,无法学以致用。
同时,在工作中不断的学习也是弥补自己的不足的有效方式。
信息时代,瞬息万变,社会在变化,人也在变化,所以你一天不学习,你就会落伍。
通过这两个月的实习,并结合生物技术岗位工作的实际情况,认真学习的生物技术岗位工作各项政策制度、管理制度和工作条例,使工作中的困难有了最有力地解决武器。
通过这些工作条例的学习使我进一步加深了对各项工作的理解,可以求真务实的开展各项工作。
二、围绕工作,突出重点,尽心尽力履行职责。
在生物技术岗位工作中我都本着认真负责的态度去对待每项工作。
虽然开始由于经验不足和认识不够,觉得在生物技术岗位工作中找不到事情做,不能得到锻炼的目的,但我迅速从自身出发寻找原因,和同事交流,认识到自己的不足,以至于迅速的转变自己的角色和工作定位。
为使自己尽快熟悉工作,进入角色,我一方面抓紧时间查看相关资料,熟悉自己的工作职责,另一方面我虚心向领导、同事请教使自己对生物技术岗位工作的情况有了一个比较系统、全面的认知和了解。
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华南师范大学生命科学学院生物工程下游技术实验报告实验一酵母RNA的提取及含量测定(紫外吸收法)实验二黑曲霉β-D甘露聚糖酶的纯化盐析实验三盐析β-D甘露聚糖酶活力测定实验四柠檬酸摇瓶发酵及结晶提取姓名: _义忠仁Ricky_学号:指导教师:江学文实验一酵母RNA的提取及含量测定一、实验目的与要求1、了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。
2、熟悉和掌握紫外吸收法测定核酸含量原理和操作方法,3、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。
二、实验原理由于RNA的来源和种类很多,因而提取制备方法也很各异。
一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。
其中苯酚法又是实验是最常用的。
组织匀浆用苯酚处理并离心后,RNA即溶于上层被酚饱和的水相中,DNA和蛋白质则留在酚层中。
向水层加入乙醇后,RNA即以白色絮状沉淀析出,此法能较好的除去DNA和蛋白质。
上述方法提取的RNA具有生物活性。
工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA,用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA,主要用作制备核苷酸的原料,其工艺比较简单。
浓盐法使用10%左右氯化钠溶液,90℃提取3-4h,迅速冷却,提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。
稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解,然后用酸中和,除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。
酵母含RNA达2.67-10.0%,而DNA含量仅为0.03-0.516%,为此,提取RNA多以酵母为原料。
核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统(-C=C一C=C-),能够强烈吸收250-280nm 波长的紫外光。
核酸(DNA,RNA)的最大紫外吸收值在260nm 处。
遵照Lambert-Beer 定律,可以从紫外光吸收值的变化来测定核酸物质的含量。
在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同,紫外吸收光也随之表现出明显的差异,它们的摩尔消光系数也随之不同。
所以,在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行。
核酸的摩尔消光系数(或吸收系数),通常以ε(ρ)来表示,即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260nm 波长处的消光值(即光密度,或称为光吸收)。
核酸的摩尔消光系数不是一个常数,而是依赖于材料的前处理、溶液的pH 和离子强度发生变化。
RNA 溶液(pH = 7.0)的ε(ρ)= 7 700-7 800,RNA 的含磷量为9.5%,含1μg /mL RNA 溶液的光密度为0.022-0.024。
因此,测定未知浓nm,即可计算测出其中核酸的含量。
该法简度的DNA(RNA)溶液的光密度OD260单、快速、灵敏度高,如核酸3μg/mL 的含量即可测出。
对于含有微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质的核酸样品,测定误差较小。
蛋白质由于含有芳香族氨基酸,因此也能吸收紫外光。
通常蛋白质的吸收高峰在280nm 波长处,在260nm 波长处的吸收值仅为核酸的十分之一或更低,故核酸样品中的蛋白质含量较低时对核酸的紫外测定影响不大。
三、主要仪器和试剂啤酒酵母粉0.04M NaOH溶液95%乙醇、乙醚、酸性乙醇溶液:30mL乙醇加0.3mL HCl。
紫外分光光度计离心机真空干燥箱三角瓶、烧杯水浴锅四、实验步骤1、称取2g干酵母粉,用30mL 0.04M NaOH溶液分步在研钵中研磨均匀后,转入2支50ml比色管,沸水浴加热45min,冷却,转入离心管,4000r/min,离心15min,将上清慢慢倾入装有10mL酸性乙醇的离心管,边加边搅动。
2、加毕,静置,待RNA沉淀完全后,5000r/min离心5min。
弃去上清液。
用95%乙醇分步将沉淀转移至布氏漏斗抽滤并洗涤,消耗95%乙醇体积总约30ml;3、再用乙醚洗涤沉淀两次,消耗体积总约20ml,沉淀在空气中干燥。
称量所得RNA粗品的重量(减去滤纸重量),并记录该数据。
4、RNA粗品中RNA纯度测定:将样品配制成含5~50μg核酸/mL的溶液:将上述RNA粗品溶解于100ml容量瓶,定容,静置,取上清液于紫外分光光度计上测定260nm 吸收值,按下式计算纯品RNA 浓度。
若O.D 260读数过大,则根据O.D 260值再做适当稀释。
滤纸重m1=0.32425gRNA 粗品重量m2=0.4603g吸光度O.D 260=0.100五、计算:%)3(1,;/1024.0;260.10024.0./)2(;2;%,50%2)1(2606260⨯=----⨯⨯⨯⨯-⨯-⨯=-=量抽滤干燥粗品浓度纯品含量;,比色杯厚度(非壁厚);定容体积毫升吸光度微克纯品吸光度量抽滤干燥粗品量抽滤干燥粗品毫升)浓度(微克纯品啤酒酵母,量抽滤粗品量抽滤干燥粗品量抽滤干燥粗品产率定容定容RNA RNA RNA L ml V RNA nm D O RNA RNA V L D O RNA g g RNA RNA RNA RNA 抽滤干燥粗品RNA 量=(0.4603-0.32425)×50%=0.068025gRNA 产率=3.4%纯品RNA 浓度=2.08×10-4克/克干酵母RNA 含量=0.31% 六、思考题1. 破酵母细胞时为什么要在沸水浴中进行?答:沸水浴的作用主要是破碎酵母细胞,使胞内蛋白质变性,并破坏RNA 水解酶活性来保护RNA 。
由于酵母细胞外有一层厚厚的细胞壁,而RNA 存在于细胞质中,所以必需将酵母细胞的细胞壁研磨破碎后才能提取出RNA。
加入NaOH之后水浴煮沸35min的作用是促进细胞壁变性,使类脂、甘露聚糖、葡聚糖等成分部分分解,使蛋白质变性,从而使细胞破裂,RNA则从细胞中分离出来。
另外细胞中含有多种分解RNA的酶类(如RNase等),为了避免RNA 在提取过程中被降解,得到较为完整的RNA分子,破碎酵母细胞时应在沸水中进行,这样可以使细胞中降解RNA的蛋白酶类活性受到抑制甚至变性失活,从而起到保护RNA分子的作用。
2.为什么用酵母作为实验原料?如何使RNA从酵母中释放出来?RNA的等电点是多少?答:因为酵母核酸中含RNA为2.67~10.0%,而DNA 含量仅为0.03~0.516%,而且菌体易收集,RNA 也易于分离。
因此,提取RNA多以酵母为原料。
RNA可溶于稀碱溶液,本实验中利用NaOH使细胞壁变性,可以使RNA从酵母中释放出来。
RNA的等电点为pH2.0-2.5.3. 为什么用稀碱溶液可以使酵母细胞裂解?答:酵母菌的细胞壁呈“三明治”结构——外层为甘露聚糖,内层为葡聚糖,中间层为一层蛋白质分子(包括多种酶类)。
此外细胞壁上还有少量的脂质和酶。
稀碱溶液可以分解膜壁上的脂质,使细胞穿孔。
在碱性溶液中,细胞壁上的甘露聚糖和葡萄糖会水解,蛋白质变性,而增加细胞通透性,细胞就会破裂释放RNA。
4.核酸的溶解性质是什么?常用什么试剂分离沉淀核酸?答:核酸均为极性化合物,微溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。
DNA和RNA 可溶于10%氯化钠溶液但难溶于50%左右乙醇溶液,所以常用乙醇从溶液中分离沉淀核酸。
实验二黑曲霉β-D甘露聚糖酶的纯化一.实验目的1、粗酶的制备2、硫酸铵分级沉淀3、透析袋的处理方法和使用二.原理1、盐析原理;2、透析袋脱盐三.实验试剂和器材纱布1卷、脱脂棉1包、琼脂条1包、透析袋MWCO(分子量) 14000或7000。
四.实验步骤1、将黑曲霉ASP.Niger 菌株斜面接种三角瓶固体发酵培养基,30.5℃恒温培养72 h。
2、称取10克发酵麸曲,加100毫升pH5.6的醋酸缓冲液,温度37℃,转速135rpm,摇床摇60 min后,用¢15㎝滤纸过滤。
3、量取滤液40毫升,在不断搅拌下分步加入(NH4)2SO422.0克(待加入部分溶解后再加入剩余部分)。
4、置冰箱中5℃下静置、沉淀过夜。
5、标准曲线的绘制:分别吸取0.1 %标准甘露糖溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL,于50mL比色管中,分别定容至25 mL。
再分别吸取上述溶液各2.5 mL置于25 mL比色管中,各加2.5 mL 3,5-二硝基水杨酸显色液(DNS试剂),置沸水浴5 min(另作1管对照,取2.5 mL蒸馏水,加2.5 mL DNS试剂,同样煮沸5 min)。
冷却后,再统一定容至10mL,用721型分光光度计在530 nm波长下比色,记录各管的光密度值,以光密度值作纵座标,对应标准甘露糖溶液浓度(微克/毫升,µg/mL)为横座标,绘制标准曲线。
五、实验结果表1 各管OD 值表组别0 1 2 3 4 5 甘露糖含量 mg/mL0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 OD 值 0 0.294 0.718 1.303 1.934 2.804 绘制标准曲线如下:图1甘露糖标准曲线六、思考题1、(NH 4)2SO 4沉淀蛋白质的原理是盐析,与其它盐相比其优点有那些? 答:(NH4)2SO4与其他常用盐类相比有十分突出的优点:1) 溶解度大:由于酶和各种蛋白质通常是在低温下稳定,因而盐析也要求在低温下进行。
硫酸铵在低温时仍有相当高的溶解度,而且远远高于其它盐类。
2) 分离效果好:有的提取液加入适量硫酸铵盐析,一步就可以除去75%的杂蛋白。
3) 不易引起变性,有稳定酶与蛋白质结构的作用。
4) 价格便宜,废液不污染环境。
2、影响盐析的因素有那些?答:影响盐析的因素有以下几点:1)溶液温度:蛋白质溶解度在一定范围内随温度增加而增加。
2)pH 值:当pH 值接近蛋白质的等电点时盐析效率高。
3)蛋白质浓度:适当高浓度的蛋白质可提高盐析效率,但过高会发生共沉淀作用。
过低浓度所用盐量较高。
4)离子强度:一般说来,离子强度越大,蛋白质溶解度越低。
实验三盐析β-D甘露聚糖酶活力测定一.实验目的1、掌握β-D甘露聚糖水解各种甘露聚糖之间β糖苷键的机制和理论。
2、掌握以魔芋精粉为底物测定发酵制品中β-D甘露聚糖活力的操作方法。
二.基本原理水解含B一1,4甘露糖苷键的甘露多糖(包括甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡萄甘露聚糖等)的内切水解酶,属于半纤维素酶类。
B一甘露聚糖酶能将广泛存在于豆类籽实中的甘露聚糖降解为甘露低聚糖,不仅消除了甘露聚糖对单胃动物的抗营养作用,同时生成的甘露低聚糖在动物肠道中起着重要的调节作用。
三、实验试剂和器材721型分光光度计、恒温水浴锅、秒表。
pH5.6的醋酸缓冲液四、实验步骤1、倾去部分上清液,立即将沉淀部分在8000rpm,离心10min。
收集沉淀,加约20毫升蒸馏水溶解,倒入事先准备好的透析袋中。
(透析袋处理:剪成15㎝长度,沸水浴中煮10min,捞起、扯开,在一端1㎝处用细绳扎紧口,用水试一下是否有漏,若有漏需重新绑扎,直至不漏为止。
处理过程中需戴手套!)2、酶液倒入透析袋后,另一端1㎝处也用细绳(应用长一点的!)扎紧口,浸于4~5℃的蒸馏水中(250ml烧杯),持续时间1.0h,并不时搅拌,期间每隔20min更换1次4~5℃的新鲜蒸馏水,以利迅速达到平衡,每次用水量约150毫升。