微量分光光度计使用说明书

杭州奥盛仪器有限公司

微量分光光度计原理------超微量溶液的形成

微量，检

测时最少

只需0.5ul

样品

由于液体张力的原因，微量的液体是圆半

球状的，使光线折射，无法穿透。

用外力结构，使半球状液珠变成圆柱状液

珠

0.2-1mm的间距，形

成圆柱状液体，便于

光线最大量的的穿透

利用光源通过滤光片调整光波长，射入样品液体中，再射入光电检

测器将光能转换成电讯号。

由样本及空白水样间所吸收之光能量差，与标准液之能量吸收值相

比较，便可定样本中待测物浓度。

光源滤光片测试样品光电检测器

测试结果

数据处理

Nano-100

光信号输

入转换成电

信号输出数据分析

结果

3864单元线性CCD阵列，实现200-800nm的光信号转换为电信号

230nm

260nm

280nm 光信号输入

转换成电信号输出

数据分析

结果

滤光片

光电转换器

Nano-200

微量分光光度计的准确性分析

紫外可见分光光度计的线性在定量分析工作中有着极其重要的意义。

因此我们可以将检测后的数据进行线性拟合，用R2值来检验分光光度计的准确性。

例如：我们将一个未知浓度的dsDNA样品，用TE缓冲液进行梯度稀释，稀释倍数为2倍，稀释6次，用Nano-100分别对6个样品进行检测结果如下图：

结论：R2值越接近1，仪器的准确性越高

微量分光光度计的测试稳定性分析

•分光光度计的稳定性测试我们可以用2个指标来验证：标准偏差（SD）和变异系数（CV），数值越大稳定性越差。

浓度倍数

Nano-100

Mean(3次l)SD CV%

1 3.59 1.2033.52

29.330.768.12

422.15 1.26 5.69

849.26 1.08 2.19

16106.040.790.74

32221.650.810.36

64433.030.290.07

128898.91 3.190.35

2561766.71 2.310.13

结论：Nano-100在50ng以下浓度，CV值就偏大了，测试的稳定性就比较差一些了，在10ng以下稳定性基本没什么参考价值了。

微量分光光度计的另一个重要指标：OD值比值

•1、260/280比值含义：代表核酸样品的纯度

•2、RNA纯净的状态下：OD260/OD280的值为2

•3、DNA纯净的状态下：OD260/OD280的值为1.8

•4、DNA比值介于1.8~2.0之间，如果比值大于2.0，表明有少量的RNA污染，小于1.8，表明有蛋白或氨基酸污染。

•5、RNA比值介于1.8~2.0之间，如果比值大于2.0表明可能有异硫氰酸残存，小于1.8，表明有蛋白污染

•6、260/230比值含义：代表核酸样品的受污染程度，正常范围

2.0~2.5

•7、纯DNA和RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2.0表明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。•8、若提的RNA是用来做RT-PCR的话，260/230的值小于2.0基本不会对实验有影响

曲线参数的认识

•比较纯净的样品吸收曲线图如下：