脑脊液常规检查标准操作手册

脑脊液常规检查标准操作手册

1.目的：建立脑脊液常规检查的标准化操作；

2.范围：适用于脑脊液的常规检查(物理检查、蛋白定性、细胞检查)；

3.标本采集：

3.1 标本种类：脑脊液，由临床医师进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或

侧脑室穿刺获得。

3.2 标本要求：将脑脊液分别收集于3个无菌试管中，第一管作细菌培养，第二管

作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查。每管收集1-2毫升。

3.3 遇高蛋白标本时可采用EDTA K2抗凝。

4.标本储存：立即送检。

5.标本运输：室温运输。

5.标本拒收标准：污染，久置标本。

6.器材试剂：5%苯酚溶液：取纯苯酚25ml,加蒸馏水至500ml，用力振摇，置37℃

温箱内1-2天，待完全溶解后，置棕色瓶内保存。细胞计数板；显微镜。

7.物理检查：

7.1 目测脑脊液颜色与透明度:

(1)观察颜色。(2)观察透明度。

(3)观察凝块或薄膜：收集脑脊液于试管内，静置12-24小时，正常脑脊液不形成

薄膜、凝块和沉淀物。

7.2 结果判断与分析：

7.2.1颜色：正常脑脊液是无色透明的液体。在病理情况下，脑脊液可呈不同颜色改变: (1)红色：常由于各种出血引起。脑脊液中出现多量的红细胞，主要由于穿刺损伤出

血、蛛网膜下腔或脑室出血引起。前者在留取三管标本时，第一管为血性，以后两管颜色逐渐变淡，红细胞计数结果也依次减少，经离心后上清液呈无色透明。

当蛛网膜下腔或脑室出血时，三管呈均匀红色，离心后上清液显淡红色或黄色。

红细胞在某些脑脊液中5分钟后，即可出现皱缩现象，因此红细胞皱缩现象不能用以鉴别陈旧性或新鲜出血。

(2)黄色：可因出血、梗阻、郁滞、黄疸等引起。陈旧性蛛网膜下腔或脑室出血，由于

红细胞缺乏蛋白质和脂类对膜稳定性的保护，很易破坏、溶解，出血4-8小时即可出现黄色。停止出血后，这种黄色仍可持续3周左右。椎管梗阻如髓外肿瘤，格林-巴利综合征，当脑脊液蛋白质量超过1.5g/L时，颜色变黄，其黄色程度与蛋白质含量呈正比。化脓性脑膜炎、重症结核性脑膜炎时，因脑脊液蛋白质含量明显增加而呈淡黄色或黄色。重症如核黄疸、新生儿溶血病时脑脊液也呈黄染。

(3)白色或灰白色：多因白细胞增加所致常见于化脓性脑膜炎。

(4)褐色或黑色：常见于脑膜黑色素瘤。

7.2.2 透明度：正常脑脊液应清晰透明。病毒性脑炎、神经梅毒等疾病的脑脊液也

可呈透明外观。脑脊液中白细胞如超过300×106/L时可变为混浊；蛋白质含量增加或含有大量细菌、真菌等也可使其混浊；结核性脑膜炎常呈毛玻璃样微混；

而化脓性脑膜炎常呈明显混浊。

填写报告时用“清晰透明”、“微浑”、“浑浊”等描述。

7.2.3 凝块或薄膜：正常脑脊液不形成薄膜、凝块和沉淀物。若脑脊液内蛋白质包

括纤维蛋白质多于10g/L即可出现凝块或沉淀物，结核性脑膜炎的脑脊液静置12-24小时后，可见表面有纤维的网膜形成，取此膜涂片检查结核杆菌，阳性率较高。蛛网膜下隙梗阻时，由于阻塞，远端的脑脊液蛋白质含量常高达15g/L，此时脑脊液呈黄色胶冻状。

填写报告百可用“无凝块”、“有凝块”、“有薄膜”、“胶冻状”等描述。

8.蛋白定性试验(潘氏法)：

8.1实验原理：脑脊液中球蛋白与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白

色浑浊或沉淀。

8.2试验方法：取潘氏试剂2-3ml于小试管内，用毛细滴管滴入脑脊液1-2滴，衬

以黑背景，立即观察结果。

8.3结果判断：

阴性：清晰透明，不显雾状；

极弱阳性（±）：微呈白雾状，在黑色背景下才能看到；

弱阳性（+）：灰白色云雾状；

阳性（+）：白色浑浊；

强阳性（3+）：白色浓絮状沉淀；

最强阳性（4+）：白色凝块；

9.细胞检查：在显微镜下对脑脊液有形成分进行计数和分类检查。

9.1 细胞总数：

9.1.1 对澄清的脑脊液可混匀后用滴管直接滴入计数池，计数10个大方格内红、

白细胞数，其总和即为每µl的细胞数。再换算成每升脑脊液中的细胞数。如细胞较多，可计数一大格内的细胞×10，即得每µl脑脊液中细胞总数。如用升表示，则再乘以106。也可用生理盐水或红细胞稀释液稀释后再用人工计数，或直接用血细胞分析仪进行计数；

9.1.2 浑浊或带血的脑脊液可用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20µl，加入含红细

胞稀释液0.38ml的小试管内，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数，乘以50，即为每µl脑脊液的细胞总数。

9.2 白细胞数：

9.2.1 非血性标本：小试管内放入冰乙酸1-2滴，转动试管，使内壁沾有冰乙酸后

倾去之，然后滴加混匀的脑脊液3-4滴，数分钟后，混匀充入计数池，按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数。

9.2.2 血性标本：将混匀的脑脊液用1%冰乙酸溶液稀释后进行计数。为剔除因出血

而来的白细胞数，用下式进行校正。

每µl脑脊液内白细胞校正数：

每µl脑脊液内红细胞数×每µl脑脊液内白细胞数=每µl脑脊液内白细胞未校正数－

每µl血液内红细胞数

例示：血液内红细胞4 000 000/µl；脑脊液内红细胞20 000/µl；

血液内白细胞10 000/µl；脑脊液内白细胞60/µl

20 000×10 000

则：60－ =60-50=10；即该患者脑脊液内白细胞之校正数为10。

4 000 000

9.2.3 成人脑脊液内无红细胞，白细胞极少，其参考范围：

腰池中为（0-10）×106/L；脑室内为（0-5）×106/L；

儿童为（0-15）×106/L，新生儿为（0-30）×106/L。

如白细胞达（10-50）×106/L为轻度增加，（50-100）×106/L为中度增加，200×106/L以上显著增加。

9.3 细胞分类：

9.3.1 直接分类法：白细胞计数后，将低倍镜换为高倍镜，直接在高倍镜下根据细

胞核的形态分别计数单个核细胞（包括淋巴细胞及单核细胞）和多核细胞，应数100个白细胞，并以百分率表示。若白细胞少于100个，应直接写出单核、多核细胞的具体数字。

9.3.2 染色分类法：如直接分类不易区分细胞时，可将脑脊液离心沉淀，取沉淀物

2滴，加正常血清1滴，推片制成均匀薄膜，置室温或37℃温箱内待干，进行瑞氏染色后用油镜分类。

如见有不能分类的细胞，应另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤时。

9.3.3正常脑脊液中白细胞主要为单个核细胞，多为淋巴细胞及大单核细胞，两者之比

约为7：3，偶见内皮细胞：软脑膜和蛛网膜细胞、室管膜细胞、脉络膜细胞等。

9.4寄生虫学检查：经沉淀涂片认真寻找虫卵、幼虫等。

10.质量控制：进行室内工作人员比对分析，要求差异在10％以内。

11.临床意义：

11.1 脑脊液蛋白质含量增加，提示患者血脑屏障受破坏，常见于脑、脊髓及脑膜

的炎症、肿瘤、出血等以及脑软化、脑退化性疾病、神经根病变和引起脑脊液循环梗阻的疾病等，当脑脊液中蛋白质在10g/L以上时，流出后呈黄色胶冻状凝固，而且还有蛋白-细胞分离现象，临床上称为Froin综合征，是蛛网膜下腔梗阻性