高效液相色谱法综述
高效液相色谱法在中药含量测定方面的应用
高效液相色谱法在中药含量测定方面的应用高效液相色谱技术(HPLC)是一种重要的分离与分析技术,其具有高压、高速、高效、高灵敏度、消耗样品少、色谱柱可反复使用、测定样品量少，容易回收等优势。
近年来，高效液相色谱检测中药的研究非常多,本文就HPLC在不同药物类型的中药活性成分中的应用进行综述，以供临床参考。
1.生物碱类成分含量测定生物碱结构复杂在植物界分布较广，大多具有生理活性，为许多中草药及药用植物的有效成分。
郑丽娜等人[1]表明高效液相色谱法测定山豆根中苦参碱和氧化苦参碱的含量,此方法线性关系良好,精密度、稳定性、重现性均较好,回收率较高.2.中药甙类成分的含量测定甙类在高等植物较为普遍，其种类繁多，结构不一，生理活性具有多样性，已成为目前研究天然药物很重要的一大类成分。
黄秋妹[2]采用高效液相色谱法,以甲醇:0.1%磷酸溶液(17∶83)为流动相,检测波长为233nm,流速为1mL?min-1. 结果，线性范围为0.08445～42.225mg,r值均为0.9999;回收率为99.46%,RSD分别为1.93%,1.74%。
3 .蒽醌类成分含量测定中药中以蒽醌及其衍生物为主的蒽醌类成分较为普遍，其中何首乌及制何首乌中以蒽醌类活性成分为主。
彭贵龙等[3]人表明高效液相色谱法对大黄酸、大黄素和大黄酚分别在0.0001~12.50μg/mL、0.0002~25.00μg/mL、0.00018~22.50μg/mL 范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.9999,定性检测限(S/N=3)依次是：0.0703 ng/mL、0.0282 ng/mL、0.0871 ng/mL；样品回收率为88.39%~107.2%。
高效液相色谱法操作简单快速、定量准确、灵敏度高、成本低,为何首乌中蒽醌类化合物的检测分离及含量测定提供了一个有效的科学方法.4 .黄酮类成分含量测定酮类化合物数量之多位列天然酚性中化合物之首，植物体内其主要与糖结合成甙，小部分以甙元形式存在。
论文 高效液相色谱在药物分析中的应用
高效液相色谱法在药物分析中的应用与发展摘要：色谱分析作为重要的分离分析技术，已成为药物研制开发、生产单位、药品检验部门及医院临床检验等各个领域中药物质量控制必不可少的方法和技术。
高效液相色谱法是20世纪60年代末70年代初出现的分析速度快、分离效率高、操作自动化的新型色谱分析方法。
它已逐渐成为药物分析领域中重要的分析手段及主要制备方式之一。
关键词：高效液相色谱法药物分析1.前言高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography , HPLC），又称“高压液相色谱法”或“高速液相色谱法”，是20世纪60年代末，在经典液相色谱的基础上引入气相色谱的理论与实验方法，并加以改进而发展起来的一种重要分离分析方法。
HPLC采用了高压输液泵，高效固定相和高灵敏度在线检测器等技术，具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高、色柱可以反复使用、流动相可选择范围宽、流出组容易收集、适用范围广和安全等优点，特别适合挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物以及离子型化合物的分离分析测试，广泛应用于医学、药学、化学、生化、工业、农业、环保、商检和法检等科学领域错误!未找到引用源。
近年来，高效液相色谱法在药物分析中发挥着越来越重要的作用，主要是鉴别相关物质、检查药物中有关物质的含量限度以及测定有效成分或主要成分含量，世界各国已将该法收载于药典。
本文就高效液相色谱法在药物分析研究中的应用和发展综述如下。
2.高效液相色谱法在药物分析中的应用2.1高效液相色谱法在药物鉴别中的应用在HPLC法中，保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数，可用于药物的鉴别。
如中国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致。
头孢拉定、头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液、曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别。
王维剑[7]王维剑,张军仁,庞华.替莫唑胺含量测定方法的研究[J].药物分析杂志,2003 ,23 (5) :344.等以ODS柱，甲醇-0.5%乙酸(1:9)为流动相，DVD检测器，波长329 nm测定了一种新型抗肿瘤药替莫唑胺(temzolo-mide)，为申报新药提供了数据。
高效液相色谱法在药品检验中的特点和价值分析
高效液相色谱法在药品检验中的特点和价值分析摘要：高效液相色谱法是一种广泛应用的检测方法，它使得总体检测更加灵敏、高效、检测效果明显，具有广泛的应用前景。
为推动药品生产的规范化，本文对高效液相色谱法的原理、特性、高效液相色谱法技术在药品检验中的应用进行了综述。
关键词：高效液相色谱；药品检验；特点；定价；目前，我国药品生产企业的质量管理受到了较大的制约。
随着现代医学的迅速发展，各种药物检测技术也随之产生。
药品检验是药品安全管理的重要环节，它涉及药品质量、成分、不良反应、理化、安全、缺陷等方面的检测。
目前，常用的方法有：毛细管电泳法、薄层扫描法、分光光度法、高效液相色谱法等。
其中，高效液相色谱法以可操作性强、适用范围广、灵敏度高、结果测定速度快等优势得到了快速发展和应用【1】。
本文主要介绍 HPLC技术在药品检验中的应用，以提高检测效率，减少误差。
高效液相色谱法属于色谱法中的一种，主要将液体作为流动相，将其泵入到装有固定相的色谱柱之中，通过对比色谱柱信息，检验出药品中的各种成分，并实现对各成分的化学分析，这一技术被广泛应用于药品检测中，极大地缩短检测时间。
1高效液相色谱法原理及特点与以往常规液相色谱法相似，但其在操作时引入高压输液泵，相较于常规液相色谱法来讲，能有效地提高检测的准确度和工作效率，有效提升药学检验水平。
此外，高效液相色谱法采用同一个色谱条件对药品中的多个成分进行分析，不易受外部因素影响，有效提高了分离效率，同时，该方法具有快速、高效、经济、成本低廉、适用范围宽、误差小等特点，能有效地提高测试精度，满足不同的测试要求，具有很好的推广价值【2】。
2高效液相色谱法在药品检验中的应用价值2.1药品中有效成分的测定药品成分是影响药品价格的主要因素，由于药品中的活性成分种类繁多，它们的药理作用机制也各不相同，因此在检测过程中要确定其有效成分，而常规的方法由于操作复杂、工作压力大，很容易产生误差。
高效液相检验法的应用与开展，能够通过信息技术手段对药品进行批量处理，提高药效，并通过对比色谱柱信息，正确测定出药品有效成分，减少了人工差错，提高了测定的准确性，为今后的检验工作提供了便利【3】。
高效液相色谱法检测大脑神经递质多巴胺-最新文档资料
高效液相色谱法检测大脑神经递质多巴胺多巴胺（dopamine， DA）是一类儿茶酚胺类物质（CAs），它存在于神经组织及体液中，是下丘脑和脑垂体腺中的一种重要的神经递质，脑垂体内分泌功能的协调与多巴胺在脑内特定区域的分布及含量有密切关系，导致神经功能紊乱，是帕金森病（Parkinson’s disease）发病的一个重要影响因素。
另外，多巴胺还能够引起心脏兴奋，使血流量增加，以用于感染性休克和心源性休克。
所以，进行多巴胺检测的研究具有重要的现实意义[1]。
本文就多巴胺的高效液相色谱法检测作一综述。
高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）[2，3]也是通用的DA的检测方法。
近年来，由于高效液相色谱技术的不断发展，用HPLC法分离测定体液和组织中CAs的方法日趋完善，检测灵敏度可达pmol水平。
高效液相色谱法具有高分离率，所以在CAs的分析中受到极大重视，HPLC法同电化学检测和荧光检测相结合是目前最有效且最常用的方法。
CAs本身有自然荧光，经HPLC法分离后，可以利用它的荧光进行检测，但是由于其自然荧光相对比较弱，不能用作生物样品灵敏的选择性测定方法。
儿茶酚胺类物质具有两个官能团（氨基和邻二羟基），因此可以通过衍生化形成具有强荧光的物质，借此提高检测灵敏度。
吴予明等[4]利用HPLC和荧光检测器对嗜铬细胞瘤患者和正常人24h尿中DA含量进行测定，对样品进行调酸、萃取、调碱、吸附、洗涤、解析处理后，100微升进样，结果可见：多巴胺浓度在1.3*10-7mol/L～3.8*10-6mol/L内与色谱峰峰高的线性关系良好（r=0.998）精密度RSD（n=6）4.2%～10.3%。
衍生化可分成柱前衍生化和柱后衍生化两种，在分离前需要制备荧光衍生物的柱前衍生化是，有邻苯二甲醛（OPA）、荧光胺（FA）、丹磺酞氯（DNSCI） l，2一二苯基乙二胺（DPE）及萘一2，3一二羧醛等属于柱前衍生化试剂。
高效液相色谱在食品农兽药残留中的检测应用
食品科技高效液相色谱在食品农兽药残留中的检测应用刘 姝（江苏省生产力促进中心理化测试服务中心，江苏南京 210042）摘 要：近年来，我国食品安全问题日益突出，食品农兽药残留检测作为保证食品安全的重要手段，具有十分重要的作用。
高效液相色谱法是一种迅速、灵敏、选择性高的检测方法，因操作简便、分离效率高等特点，在食品农兽药残留分析中得到广泛应用。
本文综述了高效液相色谱法在农药兽药残留分析中的应用，主要介绍了高效液相色谱在食品中农兽药残留检测中的作用和检测方法，以供相关人员参考。
关键词：高效液相色谱；食品；农兽药残留；检测Application of High Performance Liquid Chromatography in the Detection of Agricultural and Veterinary Drug Residuesin FoodLIU Shu(Jiangsu Provincial Productivity Promotion Center Physical and Chemical Testing Service Center,Nanjing 210042, China)Abstract: In recent years, China’s food safety issues have become increasingly prominent, the detection of residues of agricultural and veterinary drugs in food plays a very important role as an important means to ensure food safety. High performance liquid chromatography is a rapid, sensitive and selective detection method. It is widely used in the analysis of agricultural and veterinary drug residues in food because of its simple operation and high separation efficiency. This paper reviewed the application of high performance liquid chromatography in the analysis of pesticide and veterinary drug residues, mainly introduced the role and detection methods of high performance liquid chromatography in the detection of agricultural and veterinary drug residues in food, for the reference of relevant personnel.Keywords: high performance liquid chromatography; food; residues of agricultural and veterinary drugs; detection近年来，随着人们对食品安全关注度的不断提高，食品中农兽药残留问题成为公众关注的焦点。
综述-高效液相色谱-质谱联用技术在代谢组学中的应用进展
高效液相色谱-质谱联用技术在代谢组学中的应用进展摘要：代谢组学是对一个生物系统的细胞在给定时间和条件下所有小分子代谢物质的定性定量分析, 从而定量描述生物内源性代谢物质的整体及其对内因和外因变化应答规律的科学。
而高效液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS）作为代谢组学中一种重要的分离检测方法，在代谢组学中有着方方面面的应用。
本文介绍代谢组学中的高效液相色谱-质谱联用技术，并从药物分析、生理病理代谢、临床诊断标志物和细胞鉴定等方面介绍高效色谱-质谱联用技术在代谢组学中的应用。
关键词：高效液相色谱-质谱联用技术；代谢组学代谢组学的研究目的就是从尿液、血浆、血清、唾液和胆汁等生物体终端样本中检测代谢物，或跟踪代谢水平整体的动态变化，提取“组学”信息，以此来反映生物体在外源刺激作用下的体内生物学过程变化情况。
代谢组学研究的基本流程包括样品采集、预处理、代谢组分析、数据分析以及研究结果的解释与应用等。
1.检测工具其中的样品采集分离与分析离不开分离检测工具。
常用的分离检测工具包括色谱(Chromatography)、质谱(Mass Spectrometry，MS)、核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance，NMR)等。
【1】1.1核磁共振（NMR）NMR快速、选择性好,其样品处理简单且不造成破坏,只要含氢的代谢物都可以被检测,即可以对所有的分析对象达到无歧视分析。
对样品无损伤且重复性好,能够广泛应用于药物工业和病人的尿、血样分析。
样本制备简单且易自动化。
但是复杂混合物的NMR谱的解析非常困难。
对全面的代谢谱图分析, NMR最大的缺陷是灵敏度相对较低, 从而使得它不适合分析大量的低浓度代谢物。
【2】所需硬件投资也比较大1.2色谱（Chromatography）气相色谱(Gas Chromatography，GC)广泛用于微量、痕量组分的分析。
但是，气相色谱受组分挥发性和热稳定性的限制，需对样品进行衍生化处理。
高效液相色谱法 定义
高效液相色谱法定义
高效液相色谱法是一种分离和分析混合物的方法。
它基于混合物在流动相和固定相之间的分配差异来实现分离。
高效液相色谱法使用高压输液系统将流动相泵入色谱柱中，待分析的混合物通过进样器注入流动相中，然后在色谱柱中进行分离。
色谱柱通常填充有特殊的固体吸附剂或化学键合相，混合物中的成分在流动相和固定相之间分配，根据其分配系数的差异而分离。
分离后的成分依次通过检测器进行检测，常见的检测器包括紫外-可见检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
检测到的信号被记录下来，通过对信号的分析和比较，可以确定混合物中各成分的含量和性质。
高效液相色谱法具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高、适用范围广等优点，广泛应用于药物分析、环境监测、食品分析、生物化学等领域。
高效液相色谱仪法检测乳酸链球菌素含量的研究
《高效液相色谱仪法检测乳酸链球菌素含量的研究》一、引言在当今的生物医药领域，乳酸链球菌素（Lactobacillus）作为一种重要的生物活性物质，具有抗菌、抗氧化和抗炎等多种生物功能，因此备受关注。
为了更好地研究和应用乳酸链球菌素，科研人员需要一种准确、快速、稳定的检测方法。
而高效液相色谱仪法（HPLC）作为一种常用的分析方法，在乳酸链球菌素含量检测中具有广泛的应用前景。
二、乳酸链球菌素的生物活性及检测方法综述1. 乳酸链球菌素的生物活性乳酸链球菌素是一种由乳酸链球菌产生的多肽类物质，具有多种生物活性，包括抗菌、调节免疫功能、抗氧化等，因此被广泛应用于食品、药品和保健品等领域。
2. 乳酸链球菌素检测方法综述目前常用的乳酸链球菌素检测方法包括生物学法、免疫学方法和色谱法等。
其中，色谱法中的HPLC方法因其检测灵敏度高、分离效果好、定量准确等优点，成为乳酸链球菌素检测的首选方法之一。
三、HPLC方法在乳酸链球菌素检测中的应用1. 样品前处理在使用HPLC方法检测乳酸链球菌素含量时，首先需要对样品进行前处理。
常见的前处理方法包括提取、浓缩和净化等，通过前处理可有效提高样品中乳酸链球菌素的浓度，提高检测灵敏度。
2. 色谱条件优化在乳酸链球菌素的HPLC检测中，色谱条件的优化对于检测结果的准确性和稳定性至关重要。
包括流动相的选择、柱温、流速、检测波长等参数的优化，都能够有效地提高检测效果。
3. 标准曲线的建立为了定量分析样品中乳酸链球菌素的含量，需要建立标准曲线。
通过制备不同浓度的乳酸链球菌素标准溶液，利用HPLC方法测定其峰面积，建立标准曲线并进行定量分析。
四、乳酸链球菌素HPLC检测方法的优势与挑战1. 优势HPLC方法在乳酸链球菌素检测中具有灵敏度高、分离效果好、定量准确等优点，能够满足科研和生产中的实际需求。
2. 挑战在实际应用中，乳酸链球菌素的HPLC检测也面临着样品前处理复杂、色谱条件优化难度大等挑战，需要科研人员不断进行改进和优化。
多糖含量测定的方法综述
多糖含量测定的方法综述多糖是指由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的碳水化合物，是生物体中的重要成分之一，在食品工业、医药和生物技术领域具有重要的应用价值。
对多糖含量进行准确的测定是非常重要的。
目前，针对多糖含量测定的方法有很多种，包括光度法、比色法、高效液相色谱法、质谱法等。
本文将对多糖含量测定的方法进行综述，并对各种方法的原理、优缺点以及适用范围进行分析。
一、光度法光度法是一种常用的多糖含量测定方法，其原理是通过测定多糖在特定波长下的吸光度来确定其含量。
常用的方法有邻苯二甲酰氯法、硫酸-安替土林蓝法等。
邻苯二甲酰氯法是一种简便快速的多糖含量测定方法，其原理是多糖与邻苯二甲酰氯在酸性条件下反应生成二糖苷，然后与二甲基氨基苯酚生成有色产物，利用紫外分光光度计在510nm处测定吸光度。
该方法操作简便、灵敏度高，但只适用于测定淀粉样品。
硫酸-安替土林蓝法是一种比色法，通过多糖与硫酸反应产生的酸性羟乙基酚与安替土林蓝在酸性条件下产生有色产物，利用紫外分光光度计在620nm处测定吸光度。
该方法适用于多种多糖的含量测定，但操作相对复杂，且对于含有还原糖的多糖测定结果会存在误差。
二、比色法三、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种准确快速的多糖含量测定方法，其原理是通过高压注射将多糖样品进样到色谱柱中，利用高效液相色谱仪分离多糖，并通过紫外检测器在270nm处检测吸光度，从而确定多糖的含量。
该方法准确性高，适用范围广，但需要专用的设备和耗材，成本较高。
四、质谱法根据实际需要和条件，选择合适的多糖含量测定方法非常重要。
对于一般实验室而言，光度法和比色法是常用的方法，操作简便、成本低，适用于大多数多糖的含量测定。
对于要求准确性和高通量的实验室而言，高效液相色谱法和质谱法是更好的选择，能够满足实验需要。
不同的方法可以组合使用，以提高测定准确性和可靠性。
在实际操作中，需要根据样品的性质和含量范围，综合考虑方法的原理、操作难易度和设备条件，选择合适的多糖含量测定方法。
多糖含量测定的方法综述
多糖含量测定的方法综述多糖是一类广泛存在于动植物组织、细胞膜和微生物中的生物大分子，包括淀粉、纤维素、壳多糖、低聚糖等。
多糖在食品工业、医药工业、生物学研究等领域中有着广泛的应用。
因此，准确测定多糖含量是非常重要的。
目前，多糖含量测定的方法较多，本文将就其中常用的几种方法进行综述。
一、显色法显色法是测定多糖含量的一种简单、快速、经济的方法，可用于多种类型的多糖测定，包括淀粉、纤维素和壳多糖。
目前较为常用的显色法有三种：碘溶液显色法、酚硫酸显色法和亚硫酸还原显色法。
1.碘溶液显色法碘溶液显色法是测定淀粉和其他含碘能力的多糖的一种显色方法。
将待测物溶解于适当的溶液后加入碘溶液，多糖与碘发生空间结合，形成蓝黑色的复合物，比较准确地测定多糖含量。
测定过程：将待测样品溶解于适量的溶液中，加入适量的碘液，快速均匀搅拌，停留一段时间后读取吸光度。
测定时要注意，碘液应无色，且溶液的pH应在中性范围内，若PH超过范围会影响显色结果。
2.酚硫酸显色法酚硫酸显色法是测定纤维素含量的一种经典方法。
此法中，棕红色的多糖酚硫酸复合物会与多糖发生结合，从而产生蓝色的复合物。
本方法操作简单，准确性高，但对硫酸和酚的用量要求较高。
测定过程：取一定量的待测样品加入酚硫酸溶液，并适当加热。
混合搅拌直至均匀，并冷却。
最后度光密度，多糖含量与光密度成正比。
亚硫酸还原显色法在测定多糖含量时具有灵敏度和准确性。
此法中，亚硫酸会还原多糖羟基上的羟基，从而产生醛基，醛基与邻近的氨基酸或蛋白质结合，形成紫色复合物。
测定过程：将待测样品适当溶于适量的溶液中，加入亚硫酸溶液，并充分混合，之后再加入苯胺溶液混合反应，最后测定吸光度，获得样品中多糖的含量。
二、光化学检测法光化学检测法是一种新的多糖含量测定方法，在光学和化学技术的基础上，通过样品与化学反应后的荧光强度进行多糖含量测定。
光化学检测法可用于测定淀粉、葡聚糖、甘露聚糖等糖类物质的含量。
测定过程：将待测样品加入适当的试剂中进行混合均匀，之后将其迅速放入反应器中，启动荧光检测仪测定荧光强度。
高效液相色谱(文献综述)
高效液相色谱结合化学发光的简要介绍（孙鑫环境学院Z1009006）摘要：目前，高效液相色谱(HPLC)法由于对复杂样品中的分析物具有极高的分离效率而成为最有效的分离方法。
将具有高灵敏度的化学发光分析法和具有高分离效率的高效液相色谱分离法相结合已引起了国内外分析化学家的极大兴趣。
本文简单概述了高效液相色谱化学发光的特点、发展史、检测原理、化学发光反应体系以及发展前景。
1.引言高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）是一种具有高效、快速及应用广泛的现代分离技术，它是在经典液相色谱法的基础上，引入了气相色谱法的理论和技术，以高压输送流动相，采用高效固定相及较高灵敏度检测器，发展而成的现代液相色谱分析方法己经成为有机物质分析的支柱技术，在生物化学、临床医学、食品检验、石油化工及环境污染监测等领域得到广泛的应用，成为分析化学家和生物化学家用以解决他们面临各种实际分析和分离必不可缺的工具。
与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：①应用了颗粒极细、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱效高，分离效率高；②采用高压输液泵输送流动相，流速快，一般试样的分析需数分钟，复杂试样分析在数十分钟内即可完成；③广泛使用了高灵敏检测器，大大提高了灵敏度。
高效液相色谱仪是由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
从上个世纪70年代以来，人们经过努力已研究和开发了多种检测器，如紫外-可见光检测器(UV一Vls)、光电二极管阵列检测器(PDA)、荧光检测器(FLD)、示差折光检测器(RID)、电化学检测器(ECD)、蒸发激光散射检测器(ELSD)、光电导检测器(PCD)、磁旋光检测器(MDR)、放射性检测器(RD)、热离子化检测器(TID)、化学发光检测器(CLD)和质谱(Ms)检测器等等。
随着色谱技术的发展，结合计算机各种软件的开发，使HPLC与各种检测仪器联用。
高效液相色谱法综述
高效液相色谱法前言：高效液相色谱法适用的范围很广，是非常重要的分析方法之一，它在医药学及生命科学中成为一种主要的分离检测手段。
与分离方法的迅速发展的同时，检测技术的不断进步也是高效液相色谱技术得到广泛应用的原因之一。
近年来高效液相色谱检测技术从最常用的紫外可见分光光度检测器和差示折光检测器开始，已经发展了诸如能够实时定性和定量的二极管阵列紫外可见分光光度检测器，能够快速扫描和光谱分辨率更高的色散型紫外可见分光光度检测器以及适用于生物化学的电化学检测器等。
各种联用检测手段如与质谱联用的热喷雾和粒子束接口等已日趋成熟，与傅里叶变换红外光谱和拉曼光谱的联用技术亦在发展中。
各种检测器的灵敏度、线性范围、稳定性和重现性等主要指标日益提咼。
许多新的检测手段已为科技工作者所熟悉和使用。
目前比较引人注目和发展较快的为手性化合物的直接检测和通用型质量检测技术。
分离原理在互不相溶的两相一一流动相和固定相的体系中，当两相作相对运动时，第三组分（即溶质或吸附质）连续不断地在两相之间进行分配，这种分配过程即为色谱过程。
由于流动相、固定相以及溶质混合物性质的不同，在色谱过程中溶质混合物中的各组分表现出不同的色谱行为，从而使各组分彼此相互分离，这就是色谱分析法的实质。
也就是说，当一种不与被分析物质发生化学反应的被称为载气的永久性气体（例如H2、N2、He Ar、CQ等）携带样品中各组分通过装有固定相的色谱柱时，由于试样分子与固定相分子间发生吸附、溶解、结合或离子交换，使试样分子随载气在两相之间反复多次分配，使那些分配系数只有微小差别的组分发生很大的分离效果，从而使不同组分得到完全分离，例如一个试样中含A、B二个组分，已知B组分在固定相中的分配系数大于A,即K B > K A，如图1-1所示。
当样品进入色谱柱时，组分A、B以一条混合谱带出现，由于组分B在固定相中的溶解能力比A大，因此组分A的移动速度大于B,经过多次反复分配后，分配系数较小的组分A首先被带出色谱柱，而分配系数较大的组分B则迟被带出色谱柱，于是样品中各组分达到分离的目的。
制备型高效液相色谱法及其在中药研究中的应用
制备型高效液相色谱法及其在中药研究中的应用一、本文概述制备型高效液相色谱法（Preparative High Performance Liquid Chromatography, Prep-HPLC）是一种重要的色谱分离技术，以其高效、快速、自动化的特点在多个领域，特别是中药研究中发挥着越来越重要的作用。
本文旨在全面介绍制备型高效液相色谱法的基本原理、技术特点以及其在中药研究中的应用情况。
文章将概述制备型高效液相色谱法的基本原理和操作流程，包括色谱柱的选择、流动相的优化、样品的制备和分离等关键环节。
文章将重点讨论制备型高效液相色谱法在中药研究中的应用，包括中药成分的分离纯化、质量控制、药物代谢动力学研究等方面。
文章还将对制备型高效液相色谱法在未来的发展趋势和挑战进行展望，以期为相关领域的科研人员提供有益的参考和启示。
二、制备型高效液相色谱法的基本原理与技术制备型高效液相色谱法（Preparative High Performance Liquid Chromatography，Prep-HPLC）是高效液相色谱法（HPLC）的一个重要分支，它主要用于大规模分离、纯化和制备样品。
其基本原理基于混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配平衡，通过高压泵将流动相推动，使待测样品在固定相和流动相之间不断进行吸附、解吸、再吸附的分配过程，从而实现各组分的有效分离。
制备型高效液相色谱法通常使用更粗的色谱柱和更高的流速，以实现更大规模的分离和制备。
与分析型高效液相色谱法相比，制备型高效液相色谱法更注重样品的纯度和回收率，而不仅仅是各组分的定性和定量分析。
在制备型高效液相色谱法中，选择合适的固定相和流动相至关重要。
固定相的选择应根据样品的性质和目标组分的特性来确定，常用的固定相包括硅胶、氧化铝、聚合物等。
流动相的选择则要考虑其与固定相的相容性、对目标组分的洗脱能力以及分离效果等因素。
制备型高效液相色谱法还涉及到柱层析、梯度洗脱、循环洗脱等技术。
酿酒葡萄及葡萄酒中单宁酸含量的测定 高效液相色谱法-概述说明以及解释
酿酒葡萄及葡萄酒中单宁酸含量的测定高效液相色谱法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述酿酒葡萄及葡萄酒中的单宁酸含量一直是葡萄酒品质和特性评估的重要指标之一。
单宁酸是一种天然存在于葡萄皮、种子和葡萄酒中的多酚类化合物，具有抗氧化、抗菌和抗癌等多种生物活性。
其含量不仅影响着葡萄酒的风味和质感，还对葡萄酒的稳定性和品质有着重要的影响。
为了准确测定酿酒葡萄和葡萄酒中的单宁酸含量，研究人员开展了大量的研究工作，提出了多种测定方法。
其中，高效液相色谱法因其分离效果好、灵敏度高、操作简便等优点被广泛应用于单宁酸的测定。
本文将介绍酿酒葡萄和葡萄酒中单宁酸的重要性，以及高效液相色谱法的原理与应用，为后续研究提供参考。
1.2 文章结构本文主要包括引言、正文和结论三个部分。
在引言部分，将介绍酿酒葡萄及葡萄酒中单宁酸的重要性，以及本文的目的和意义。
在正文部分，将详细介绍高效液相色谱法的原理与应用，以及单宁酸含量的测定方法。
最后在结论部分，将对整个研究进行总结，探讨研究的意义，并展望未来可能的研究方向。
整个文章结构清晰，层次分明，具有逻辑性和连贯性，旨在为读者提供全面深入的了解和信息。
1.3 目的本文旨在探讨酿酒葡萄及葡萄酒中单宁酸含量的重要性，并介绍利用高效液相色谱法对单宁酸进行准确测定的原理和应用。
通过深入研究单宁酸的测定方法，可以帮助酿酒业者更好地控制葡萄酒的质量和口感，提高产品竞争力。
同时，对单宁酸的测定也有助于消费者了解葡萄酒的营养成分，选择适合自己口味和需求的产品。
在全面了解单宁酸的作用和含量后，可以更好地利用这一重要成分，促进葡萄酒产业的健康发展。
2.正文2.1 酿酒葡萄及葡萄酒中单宁酸的重要性酿酒葡萄是酿造葡萄酒的原料之一，其中的单宁酸是葡萄酒中的重要成分之一。
单宁酸是葡萄酒的主要质量指标之一，对于葡萄酒的口感、色泽和质地起着至关重要的作用。
首先，单宁酸是葡萄酒中的一种多酚类物质，具有抗氧化的作用。
它可以帮助延缓葡萄酒的氧化过程，保持葡萄酒的新鲜和持久口感。
高效液相色谱法检验方法
分发部门：1 目的建立高效液相色谱法检验程序2 范围本程序适用于高效液相色谱法检验标准操作3 职责3.1QC人员：严格按本程序操作3.2QC主管：严格按本程序检查4 内容4.1 定义及概述4.1.1 高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。
由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。
4.1.2 高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。
有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。
常用的色谱柱填充剂有：硅胶用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱离子交换填料，用于离子交换色谱，是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。
4.1.3 仪器的组成和一般要求：4.1.3.1 仪器的组成：高压输液泵、色谱柱、检测器、积分仪、打印机。
4.1.3.2 对仪器的一般要求：——所用的仪器为高效液相色谱仪。
色谱柱的填充剂和流动相的组分按各品种项下的规定。
常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学健合硅胶，后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用。
离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂用于分子排阻色谱等。
除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。
——在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法项下对溶剂的要求。
（紫外分光光度法项下对溶剂的要求：用1cm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质），测定其吸收度。
高效液相色谱法测定脱氢乙酸色谱条件综述
高效液相色谱法测定脱氢乙酸色谱条件综述摘要：本论文综述了高效液相色谱法测定脱氢乙酸的色谱条件。
通过文献回顾和实验总结，对色谱柱的选择、流动相的组成、流速、进样量、检测器的选择等关键参数进行了综述。
结果表明，脱氢乙酸可以在逆相和离子对色谱模式下得到有效分离。
同时，pH值、温度和样品前处理等因素也对分析结果产生影响。
本研究为脱氢乙酸的分析提供了可靠的参考，为相关领域的研究提供了重要的数据基础。
关键词：高效液相色谱法；脱氢乙酸色谱；处理因素引言脱氢乙酸是一种重要的有机物，在食品、药物和环境样品中具有广泛的应用。
因此，开发高效准确的分析方法对其检测和定量至关重要。
高效液相色谱法作为一种常用的分析技术，在脱氢乙酸的分析中得到了广泛应用。
本论文旨在综述高效液相色谱法测定脱氢乙酸的色谱条件，并总结相关文献和实验结果，为脱氢乙酸的准确分析提供可靠的参考和数据基础。
1.液相色谱法在脱氢乙酸分析中的应用概况液相色谱法在脱氢乙酸分析中的应用已得到广泛研究和应用。
常见的液相色谱模式包括反向色谱、离子对色谱和离子交换色谱。
反向色谱是最常用的方法，能够实现脱氢乙酸与其他有机酸的良好分离，但需要优化流动相组成来获得最佳结果。
离子对色谱则常用于对脱氢乙酸进行阳离子化处理，进一步增强分离度。
此外，离子交换色谱也被应用于脱氢乙酸的分析，通过离子交换树脂实现样品分离。
实验参数的优化，如流速、进样量和检测器选择，能够进一步提高脱氢乙酸分析的灵敏度和准确度。
总体而言，液相色谱法为脱氢乙酸分析提供了可靠的方法和技术支持。
2.实验方法与结果在本研究中，我们使用高效液相色谱法对脱氢乙酸进行分析。
我们选择了合适的色谱柱并对其性能进行评价。
通过对流动相组成的优化，找到了最适合分离脱氢乙酸的条件。
同时，我们进行了流速和进样量等操作参数的优化，以提高分析方法的灵敏度和准确性。
我们选择了合适的检测器来检测脱氢乙酸的峰信号。
实验结果表明，在逆相和离子对色谱模式下，能够有效地分离脱氢乙酸和其他有机物。
高效液相色谱技术在石油化工中的应用
高效液相色谱技术在石油化工中的应用摘要：高效液相色谱技术（HPLC）是一种高效的分离和分析技术，在石油化工行业中具有广泛的应用。
本论文综述了HPLC技术在石油化工中的应用，包括石油化工原料、成品的分析和质量控制，以及石油燃料分析和对环境监测的应用。
在石油化工行业中，HPLC技术已经成为重要的分析手段，可以快速、准确地分离和分析各种化合物，提高工作效率和质量。
关键词：高效液相色谱；石油化工；质量控制；石油燃料；环境监测引言石油化工是现代工业化的基础之一，广泛应用于汽车、航空、轮船、机械、电子、化学等行业中。
石油化工生产过程中涉及到大量的化学反应，需要对原料、中间体和成品进行检测和分析，以确保产品的质量。
而在这些检测和分析过程中，高效液相色谱技术（HPLC）被广泛应用，它可快速、高效地对复杂的样品进行分离检测和分析，提高工作效率和产品质量。
一、HPLC技术在石油化工原料和成品分析中的应用石油化工原料和成品的分析是石油化工生产的关键环节，也是确保产品质量的重要保障。
HPLC技术可以分析石油化工原料和成品中的各种化合物，包括烃类化合物、芳香烃、酯类化合物、萘、醇类化合物等。
目前，HPLC技术已经成为石油化工行业中重要的分析手段，用于检测原油、炼油产品、润滑油、塑料、橡胶、纤维材料、色素、催化剂等产品。
在石油炼制中，常常需要对石油中的各种化合物进行分离和分析，以确定炼油工艺和产品的质量。
例如，采用反相HPLC技术，可以分离石油中的芳香族和环烷烃类化合物，按照不同的色谱条件可以分离出分子量大小相近的化合物，或者加入流动相中的特定温度等因素，也可能增加分离区分度。
采用正相HPLC技术，则可以分离酸性化合物、醇类化合物、醛类化合物等。
而且，HPLC技术还可以检测用于炼油过程中的催化剂，分析催化剂中的有效成分，帮助炼油企业掌握催化剂的使用情况，调整生产工艺和质量控制。
二、HPLC技术在石油燃料分析中的应用石油燃料的分析是石油化工行业中的重要环节。
多糖含量测定的方法综述
多糖含量测定的方法综述多糖是一类重要的生物大分子，包括淀粉、葡萄糖、果糖、纤维素等多种类型。
多糖的含量测定对于食品、医药、生物工程等领域具有重要意义。
本文将对多糖含量测定的方法进行综述，并介绍其在不同领域的应用。
1. 酚硫酸法酚硫酸法是一种常用的多糖含量测定方法，其原理是将多糖与酚和浓硫酸混合反应，生成颜色复合物，通过测定颜色的深浅来确定多糖的含量。
2. 酶解法酶解法是利用酶的作用将多糖水解为单糖或低聚糖，然后通过比色法或高效液相色谱法测定生成物的含量，最终计算出多糖的含量。
4. 高效液相色谱法高效液相色谱法是利用色谱柱分离多糖，再通过检测器检测多糖的峰面积和浓度，从而确定多糖的含量。
5. 红外光谱法红外光谱法是利用多糖分子的振动特性来确定多糖的含量，通过检测特定的红外吸收峰来计算多糖的含量。
二、多糖含量测定方法的应用1. 食品工业在食品工业中，多糖含量测定方法可以用于检测食品中的淀粉、糖类和纤维素的含量，帮助生产商控制食品的质量和营养成分。
2. 医药领域在医药领域，多糖含量测定方法可以用于药物成分的测定，帮助药厂确保药物的质量和纯度。
3. 生物工程领域在生物工程领域，多糖含量测定方法可以用于检测微生物发酵产生的多糖含量，帮助研究人员确定最佳的发酵条件和提高产量。
4. 环境科学在环境科学领域，多糖含量测定方法可以用于检测土壤和水体中的多糖含量，帮助科研人员研究环境中的有机质循环和生物地球化学过程。
三、结语多糖含量测定方法具有重要的理论和应用价值，它可以帮助人们了解物质的成分和性质，为不同领域的科研和生产提供重要的依据。
随着科学技术的不断进步，相信多糖含量测定方法将会更加精确和全面，为人类社会的发展做出更大的贡献。
生物酶的高效液相色谱分离方法
生物酶的高效液相色谱分离方法张某某（大连大学医学院检验11X班学号：113520XX）摘要酶的制造和应用领域逐渐扩大，现在酶处理工艺已被公认为是一种符合环保要求的绿色生产工艺，本文综述生物酶的高效液相色谱分离方法。
引言生物酶是具有催化功能的蛋白质,也有极少数为RNA。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。
关键词生物酶、高效液相色谱(HPLC)、分离模式生物酶是具有生物活性的蛋白质或RNA，因为以RNA极少情况下为生物酶，所以分别讨论蛋白质的液相色谱分离方法和RNA的液相色谱分离方法。
1 蛋白质类生物酶的分离方法根据蛋白质的分离方法。
根据Regnier的说法[1]:蛋白质是半僵硬的,大小、形状和表面都不均一,是各有特征的分子。
这样就给分离和检测蛋白质赋予了不同的特点。
目前,HPLC技术广泛地应用于蛋白质的分离。
这是由于高效液相色谱法具有许多优点:①与结晶、过滤等传统分离方法比较,它可以提供更佳的分离效果,并且一次可以得到2个以上的高纯度组分;②分析速度快,一般可以在30min内完成;③样品回收简单,检出范围达ng或pg级;④方法灵活机动,一台高效液相色谱仪只需更换不同的色谱柱和检测器,便可适用于不同的分离要求。
近来,随着色谱泵的改进(可产生105MPa的压力)出现了特高效液相色谱(VHPLC),使蛋白质的分离更快速高效[2]。
目前,HPLC技术日趋成熟,它已成为分离和检测蛋白质的重要工具。
1.1 分离蛋白质的HPLC模式蛋白质在物理、化学及功能等特征上的差异为蛋白质的分离检测提供了基础。
根据蛋白质的大小、形状、电荷、疏水性、功能等特性以及蛋白质的来源、实验要求等可以选择不同的模式来分离目标蛋白质[3]。
高效液相色谱法-综述
Journal of Chromatography A,1217(2010)858–880Contents lists available at ScienceDirectJournal of ChromatographyAj o u r n a l h o m e p a g e :w w w.e l s e v i e r.c o m /l o c a t e /c h r o maReviewThe challenges of the analysis of basic compounds by high performance liquid chromatography:Some possible approaches for improved separationsDavid V.McCalley ∗Centre for Research in Biomedicine,University of the West of England,Frenchay,Bristol BS161QY,UKa r t i c l e i n f o Article history:Available online 3December 2009Keywords:HPLCBasic compounds Stationary phases Reversed-phase HILICa b s t r a c tThis review considers some of the difficulties encountered with the analysis of ionised bases using reversed-phase chromatography,such as detrimental interaction with column silanol groups,and over-loading which both lead to poor peak shapes.Methods of overcoming these problems in reversed-phase (RP)separations,by judicious selection of the column and mobile phase conditions,are discussed.Hydrophilic interaction chromatography is considered as an alternative method for the separation of some basic compounds.©2009Elsevier B.V.All rights reserved.Contents 1.Introduction.........................................................................................................................................8592.Choice of column....................................................................................................................................8592.1.Column testing procedures..................................................................................................................8592.2.The Tanaka test and the Snyder hydrophobic subtraction parison of results with direct peak shape measurements...8602.3.Monolithic silica columns ...................................................................................................................8632.4.Slow column equilibration.Anion-exchange behaviour of alkylsilica RP columns e of column materials other than silica...................................................................................................8653.Choice of mobile phase..............................................................................................................................8663.1.Choice of modifier ...........................................................................................................................8663.2.Choice of mobile phase pH.Problem of reduced retention of bases at low pH.............................................................8664.Overloading .........................................................................................................................................8674.1.Overview of the problem....................................................................................................................8674.2.Possible causes of overloading ..............................................................................................................8684.3.Effect of buffer anion on overload...........................................................................................................8704.4.Overloading on mixed-mode reversed-phase/cation-exchange columns..................................................................8714.5.Effect of buffer pH on overloading ..........................................................................................................8715.Temperature effects.................................................................................................................................8736.Hydrophilic interaction chromatography (HILIC)..................................................................................................8747.Concluding remarks.................................................................................................................................8787.1.Overloading..................................................................................................................................8787.2.Selection of mobile phase pH................................................................................................................8787.3.Quality and choice of column ...............................................................................................................8797.4.Temperature.................................................................................................................................8797.5.Alternative separation mechanisms—e.g.HILIC.............................................................................................879References...........................................................................................................................................879DOI of original article:10.1016/j.chroma.2009.11.067.∗Tel.:+441173282469;fax:+441173282904.E-mail address:david.mccalley@0021-9673/$–see front matter ©2009Elsevier B.V.All rights reserved.doi:10.1016/j.chroma.2009.11.068D.V.McCalley/J.Chromatogr.A1217(2010)858–8808591.IntroductionThe analysis of basic compounds by high performance liquid chromatography(HPLC)continues to be of interest,as over70% of pharmaceuticals are bases(with about20%being acids)[1–3].A large number of compounds of biomedical and biological signifi-cance are also bases.Reversed-phase(RP)separations are by far the most common in liquid chromatography(LC),due to advantages that include ease of use with gradient elution,compatibility with aqueous samples,versatility of the retention mechanism allowing changes in the separation to be brought about by changes in pH, organic modifier or additives,and long experience with the tech-nique,allowing the rapid establishment of suitable experimental conditions for the analysis of a given sample[4].Nevertheless,it has been recognised for a long time that the analysis of basic com-pounds poses particular difficulties in RP separations.Many of these problems are associated with the complex structure of the surface in silica-based RP packings,shown in Fig.1.The surface concentra-tion of silanols on bare silica is reported to be about8.0mol m−2 [5].C18ligands are too bulky to react completely with all silanols; thus,a maximum coverage of4–4.5mol m−2can be achieved.A further number of reactive silanols can be“endcapped”by reac-tion with smaller silylating agents such as trimethylchlorosilane, but as many as50%of the original silanol groups remain unreacted on a typical RP column.The average p K a of these silanol groups is around7.1,but their acidity can be enhanced by the presence of metal impurities in the silica.Some groups appear to be suffi-ciently acidic that their ionisation cannot be entirely suppressed using acidic mobile phases with a pH within the stability limit of typical RP columns(2.5–7.5).Over this range of operational pH values,basic compounds are likely to be ionised,leading to ionic interactions with ionised silanol groups.BH++SiO−M+→SiO−BH++M+(1) where BH+represents the protonated base,and M+the mobile phase buffer cation.The problem of poor column efficiency(N)and exponentially tailing peaks shown by small quantities of bases is often attributed to this mixed mechanism process of hydropho-bic interaction and ion-exchange with the silanols.The slower sorption–desorption kinetics of silanol ion-exchange sites(kinetic tailing)with sample ions may be responsible[6],which will occur regardless of sample size.The simple existence of two retention processes cannot per se be the sole cause of tailing,as mixed-mode phases with carboxylic acid functions embedded within a hydrophobic chain can show excellent peak symmetry for bases[7]. However,the kinetics of interaction of such embedded groups,and the stereochemistry around the active site,could be completely dif-ferent from that of ionised silanols,which may be buried beneath the hydrophobic chains on classical C18phases.Instead of sim-ple ion-exchange sites,Neue et al.[8]have proposed the existence of strong synergistic sites with combined RP and ion-exchange properties.The overall retention for bases was described by the equation:k=k RP+k IX+k∗RP k∗IX(2) where k is the total retention,k RP is the hydrophobic contribu-tion,k IX is the ion-exchange contribution from surface silanols,and k∗RP k∗IX is a multiplicative contribution of both processes.These syn-ergistic sites could correspond to the subset of very high-energy sites with slow kinetics which have been long suspected to be the cause of exponential tailing for bases,as they appear to be domi-nant in the retention process.It was shown that this type of tailing is not responsive to small changes in sample load in RP–LC at low pH[6].This result might indicate that exponential tailing is not caused by overload of a small number of strong sites on the column. In contrast,overload often gives rise to right-angled triangle peak shapes when ionisation of silanols is suppressed in RP–LC when working at low pH.Overload tailing still occurs even for the most modern columns operated under conditions where there are no or a negligible number of ionised silanols on the column surface.It was recognised more than20years ago that bonded phases synthesised from pure silica(Type B phases)made from the hydrol-ysis of metal-free tetraalkoxysilanes resulted in reduced silanol acidity,and their use has considerably improved the analysis of bases[9].Only small contamination of such materials occurs dur-ing the processing of such packings,or from the water used in the hydrolysis.Nevertheless,some other features of the analysis of these solutes(such as overloading)remain problematic,and these issues have not been resolved by the use of high-purity silica.Already in1988,Snyder and co-workers[10]had reviewed the problems of analysis of basic solutes and had proposed some pos-sible solutions.The following recommendations were made: (a)Judicious selection of the column to reduce the number of avail-able acidic sites.(b)Reduction of the mobile phase pH to suppress ionisation of thesilanols.(c)Increasing the mobile phase pH above the analyte p K a,such thatthe analyte is unprotonated.(d)Addition of a silanol blocker such as triethylamine to the mobilephase to interact preferentially with ionised silanols.(e)Reduction of the sample concentration to alleviate the satura-tion of the acidic sites.Most of the arguments in this paper remain true more than20 years later,and these conclusions can be used as a simple guide for the chromatographer aiming to achieve the best separations for basic solutes.Perhaps only the use of silanol blocking agents has fallen somewhat out of favour,as these are less necessary with modern high-purity silica phases,and can also have some undesirable effects.Such effects include the generation of addi-tional background in HPLC–MS,the difficulty of removal from the stationary phase after use leading to permanent alteration of its properties,and even chemical reaction with some solute types.This topic,and some other well-known aspects of the chromatography of bases have been covered adequately in earlier reviews[11–13]. However,other features of the chromatography of these“difficult”compounds are still extensively debated in the literature,for exam-ple,the problem of their ready overloading in RP separations.This review will concentrate on the latest research in these topics,while attempting to summarise briefly previousfindings.Thus,it will con-sider RP column choice by use of evaluation data obtained from the Tanaka and the Snyder“hydrophobic subtraction”tests;current theories and the effect of overload for ionised solutes;the use of high pH to improve peak shape;whether temperature is a useful parameter in improving peak shape;andfinally whether other sep-aration mechanisms such as HILIC can provide a viable alternative to RP–LC for the analysis of bases.2.Choice of column2.1.Column testing proceduresThe selection of an appropriate RP column for the analysis of bases can be a daunting task,as now many hundreds are com-mercially available,with a considerable number recommended especially by their manufacturers for the analysis of basic solutes. Nevertheless,several databases are now available where a large number of different columns have been subjected to the same test procedure by the same group of workers on the same or similar instruments,allowing a useful and objective comparison of perfor-860 D.V.McCalley /J.Chromatogr.A 1217(2010)858–880Fig.1.Structures present on a typical RP monomeric-bonded silica (C8)endcapped with trimethylsilyl groups.After U.D.Neue,“Silica Gel and its derivatization for Liquid Chromatography”,in “Encyclopedia of Analytical Chemistry”,R.A.Meyers,Ed.,John Wiley &Sons,Ltd.,Chichester (2000)11450–11472.mance to be made.A question arises as to the validity of databases constructed by evaluation of only a few or even a single column of a given type,as to whether the results obtained may be truly repre-sentative of the performance of this brand,due to column to column and batch to batch variations.However,a careful study [14,15]has suggested that columns from major manufacturers actually show a rather high degree of reproducibility,probably resulting from the use of stringent quality control procedures.Indeed,the industry is likely to be self-regulating to a degree,as dissatisfied customers would switch to the use of more reproducible brands.Tight reten-tion specifications exist in the HPLC user environment,especially in the pharmaceutical industry,and changes in the column can jeop-ardise product release.However,it is possible that a manufacturer could be forced to change the sourcing of a production raw mate-rial,which might occur for example,if the column manufacturer does not make their own silica.Thus,under some circumstances,a recently purchased column may not behave in the same way as one tested several years beforehand.Nevertheless,we believe that such situations are rare,and in most cases,manufacturers strive to main-tain the reproducibility of their products over a long period of time,as many customers have established methods on a given brand of phase.It appears more common to introduce a new name or name variant of an existing phase to mark definitively such changes or improvements to the production process.Taking this factor,and the reasonable reproducibility of commercial columns into account,it seems that the results of tests on a particular brand of column would generally reflect the performance of that brand throughout the product lifetime.Both of the column evaluation methods described in detail below incorporate strongly basic compounds as test probes.In each test,their retention is monitored at low and intermediate pH val-ues.Columns which give relatively low retention of basic probes are also likely to give higher efficiency for basic solutes,as shown by correlation studies for at least one of the procedures (see below).2.2.The Tanaka test and the Snyder hydrophobic subtraction parison of results with direct peak shape measurementsWhile many different column testing methods have been devel-oped,two have become prominent and have the distinct advantage that databases of results for many hundreds,rather than just a few columns,are available.The Tanaka method [16]and the hydropho-bic subtraction procedure developed by Snyder et al.[17]both incorporate tests which allow a user to select phases that are likely to be suitable for the separation of basic compounds.We will consider here the Tanaka method as adapted and applied by Euerby and Petersson [18]to the evaluation of over 200commercial columns that can be compared on a freely available program from Advanced Chemistry Development [19].These databases appear to be updated periodically;for instance,the ACD database contains evaluations of recently introduced sub-2m phases.An alternative adaptation of the Tanaka procedure and its application to a large number of different stationary phases has also been made [20],and data are again freely available [21].A fourth testing scheme is that published by the US Pharmacopeia.This protocol is an adaptation of the work of Sander and Wise [22].For activity towards bases,this method uses the tailing factor of amitriptyline (the same probe as used in the Snyder–Dolan procedure).At the time of writing,the database contained fewer columns than the two major proce-dures (∼100)and will not be considered further here.However,data for both this procedure and the Snyder–Dolan (S–D)method are available on the USP website [23].In the Tanaka–Euerby (T–E)procedure,columns are tested by measurement of k for pentylbenzene as a measure of sur-face area and surface coverage;hydrophobic selectivity from the ratio of k (pentylbenzene)/k (butylbenzene);shape selectivity from k (triphenylene)/k (o-terphenyl);hydrogen bonding capac-ity from k (caffeine)/k (phenol)in unbuffered methanol–water;total ion-exchange capacity from k (benzylamine)/k (phenol in methanol–phosphate buffer pH 7.6;and acidic ion-exchange capacity from k (benzylamine)/k (phenol)in methanol–phosphate buffer pH 2.7.The latter three tests are of particular interest for the analysis of basic solutes.The program [19]allows the comparison of the similarities and differences between various columns,and per-mits the separate weighting of the various factors—for example,columns can be ranked according solely to their total ion capacity at pH 7.6if so desired.The S–D model recognises that hydrophobic retention is the dominant process in RP chromatography,and in the absence of other retention mechanisms,plots of log k for one column versus another should be a straight line.However,these other mechanisms give rise to scatter in the plots.Clearly,ion-exchange and hydrogen bonding are important contributors to the retention of basic solutes.The general equation for retention in theD.V.McCalley/J.Chromatogr.A1217(2010)858–880861Table1Evaluation of some selected RP columns by two different procedures.For details on the procedure,see text.Column name k pentylbz k(pentbz)/k(butbz)k(triphen)/k(terph)k(caff)/k(phen)k(bzm)/k(phen)2.7k(bzm)/k(phen)7.6Tanaka–Euerby procedureChromolith 4.22 1.24 1.310.480.120.63Discovery Amide 1.65 1.35 1.810.490.190.44Discovery C18 3.32 1.48 1.510.390.100.28Inertsil ODS-37.74 1.45 1.290.480.010.29Resolve C18 2.40 1.46 1.59 1.29 1.23 4.06Spherisorb ODS-2 3.00 1.51 1.560.590.230.76Symmetry C18 6.51 1.46 1.490.410.010.68Symmetry Shield RP18 4.66 1.41 2.220.270.040.20Xterra MS C18 3.52 1.42 1.260.420.100.35Xterra RP18 2.38 1.29 1.830.330.070.20H S A B C(2.8)C(7.0)Snyder procedureChromolith 1.0030.0290.008−0.0140.1030.187 Discovery Amide0.7200.013−0.6250.218−0.092−0.025 Discovery C180.9840.027−0.1280.0040.1760.153 Inertsil ODS-30.9900.022−0.146−0.023−0.474−0.334 Resolve C180.968−0.1270.335−0.046 1.921 2.144 Spherisorb ODS-20.962−0.0760.070.0340.908 1.263 Symmetry C18 1.0520.0630.018−0.021−0.3020.123 Symmetry Shield RP180.8500.027−0.4110.093−0.7280.136 Xterra MS C180.9840.012−0.143−0.0150.1330.051 Xterra RP180.757−0.043−0.4830.097−0.170−0.173model is:log˛=log k/log k(ethylbenzene)=Á Hhydrophobic − S∗steric resistance(to bulky interactions)+ˇ Acolumn H-bond acidity(non-ionised silanols)+˛ BH-bond basicity(from sorbed water)+Ä Cion interaction(ionised silanols)(3)Ethylbenzene is used as a non-polar reference solute.Greek letters represent empirical,eluent-and temperature-dependent proper-ties of the solute,which are relative to the values for ethylbenzene, for which all solute parameters are identically zero.The selection of the optimum probes for evaluation of each retention mode has been made from detailed studies.Bold capitals represent eluent-and temperature-independent properties of the column;these val-ues are relative to a hypothetical average Type B C18column.Any column which behaves identically to this hypothetical reference column will have H=1and all other values S*,A,B,C=0.The dataset of columns evaluated by this procedure is even larger than that for the T–E procedure and presently extends to at least400columns.In some versions of the program,different weightings can be assigned to each evaluation parameter,as in the Euerby procedure.Results for some RP columns selected from each database are shown in Table1.The T–E data show clearly that the older Type A bonded phases(Resolve C18and Spherisorb ODS-2)give higher retention of benzylamine relative to phenol at pH7.6(alpha values 4.06and0.76,respectively)compared with newer Type B phases based on highly pure silica(Discovery C18and Inertsil ODS-3, alpha values0.28and0.29,respectively).Similarly with the S–D method,values of C(7.0)for Resolve C18and Spherisorb ODS-2 are high(2.144and1.263,respectively)compared with Discov-ery C18and Inertsil ODS-3(0.153and−0.334,respectively.Values of alpha(benzylamine/phenol)at pH2.7and values of C(2.8)are also higher for the Type A compared with the Type B phases using both procedures,indicating general agreement between them. Snyder and co-workers[24]have correlated a published dataset of“silanol activity”for a number of RP columns(measured by the average plate number for amitriptyline and pyridine with methanol-phosphate buffer pH6.0)with values of C at pH6.0,inter-polated from C(2.8)and C(7.0).Columns with a highvalue of C(6.0) correlated with columns of high silanol activity,and those with low values of C(6.0)with low silanol activity.In a later study[6]95%of Type B columns(designated either on the basis of manufacturer claims,or on the date a column wasfirst sold)were shown to have C(2.8)≤0.25,while only11%of Type A columns satisfied this crite-rion.Tailing of basic solutes(as measured by the asymmetry factor A s)was minimal for columns with C(2.8)<0.25(i.e.Type B columns) and tended to increase for larger values of C(2.8).From Table1,the Type A phases Resolve C18and Spherisob-ODS-2,now identified as such due to values of C(2.8)≥0.25,also give the highest values of hydrogen bonding acidity(parameter A,0.335and0.07,respec-tively,determined from the retention of amide probe compounds). Similarly,these phases also gave the highest relative retention of caffeine/phenol in the Tanaka procedure(1.29and0.59,respec-tively).The data can also be used to compare the effect of other features,e.g.the performance of embedded polar group phases (EPG)and the equivalent conventional C18phase,manufactured on the same silica.EPG phases include columns with embedded amide groups within the hydrocarbon chain:or carbamate groups:EPG phases have been proposed to give better peak shapes for the analysis of bases[24,27].The incorporation of an EPG in XTerra RP18reduces somewhat the Tanaka alpha(benzylamine/phenol) 7.6parameter to0.20,compared with0.35for the XTerra MS C18 column.Similarly,the S–D C(7.0)parameter is reduced to−0.173 for the EPG compared with0.051for the conventional phase.It is862 D.V.McCalley /J.Chromatogr.A 1217(2010)858–880possible that the reduced retention of benzylamine and other bases may be caused by a layer of water that is adsorbed close to the surface of EPG phases,providing some deactivating effect for the silanol groups [25,26].Other authors have compared conventional and EPG phases bonded on the same type of silica,on the basis of peak shape measurements.It was found that on average,peak shapes were indeed improved on the latter phases [27].Neverthe-less,it appears that the EPG technology gives more improvement in performance with phases bonded on older impure silicas,rather than the modern Type B silicas [27].This result seems to be reflected in the somewhat inconclusive data from Table 1concerning the rel-ative retention of bases on conventional and EPG phases.Thus the Discovery EPG phase (amide)has a slightly larger value of the T–E alpha (benzylamine/phenol)7.6parameter (0.44)compared with the regular C18phase (0.28).In contrast,the S–D C (7.0)parameter is smaller on Discovery Amide (−0.025)compared with Discovery C18(0.153).Similarly,while the T–E procedure indicates a con-siderable lower value of alpha (benzylamine/phenol)at pH 7.6for Symmetry Shield (0.2)compared with Symmetry C18(0.68),the S–D C (7.0)parameter for the EPG phases is slightly greater (0.136)compared with the regular phase (0.123).Euerby and Petersson pointed out that the extra retentiveness of phenols on EPG phases might invalidate the results of tests for silanophilic activity which involve the use of such solutes.They therefore suggested substitut-ing benzyl alcohol for phenol in the Tanaka test.Benzyl alcohol has retention properties similar to those of phenol but does not show excess retention on EPG phases [28].These particular comparisons point to some possible differences in the compatibility of column evaluations from either method.The Hoogmartens group looked more generally at the compati-bility of results from the S–D method and their own adaptation of the Tanaka procedure [29],finding a rather poor overall correlation between the two approaches.In a previous paper,this group had demonstrated a good correlation between their own method and the Euerby results.This latter finding is perhaps not surprising,as both are based on the Tanaka method.The problem of compatibility of the S–D and Tanaka methods may well be in the different mobile phase conditions and different probe solutes used in these tests.The S–D procedure uses the retention of the strong bases amitriptyline and nortriptyline in acetonitrile–phosphate buffer to calculate the cation-exchange term C (2.8)and derives the value of C (7.0)from the C (2.8)results by multiplying by the ratio of the retention fac-tors of the quaternary amine berberine at pH 7.0and 2.8;the T–E benzylamine tests use methanol as the organic modifier.Indeed the use of these different modifiers may explain the somewhat differ-ent evaluations of the EPG phases by either method.Even using the same mobile phase conditions,McCalley and Brereton [27,30–32]showed that peak shape data was not consistent between different basic probes.Thus,for example there was little correlation between A s for codeine and nortriptyline when using methanol–phosphate buffers at pH 3.0,whereas either of these solutes has been used as a single test compound to evaluate the relative silanol activity of different phases.One phase (Waters Symmetry Shield)gave,of 9highly inert RP columns,the highest N and lowest A s for nico-tine using acetonitrile–phosphate buffer at pH 7.0but the lowest efficiency for analysis of pyridine.Fig.2shows a principal compo-nents analysis (PCA)loadings plot for analysis of nine basic solutes on eight different RP columns using a mixture of methanol with a pH 3.0buffer.Lines can be drawn from the centre of the plot to each data point.Parameters that are opposed (i.e.appear at 180◦)measure equivalent but opposite trends.Thus N and A s values are opposed,with efficiency increasing as asymmetry decreases,as expected.Parameters that are at 90◦,like the asymmetry factors of pyridine and quinine,measure unrelated trends,and thus may be evaluating relatively different aspects of the detrimental inter-action of bases with the column surface.Conversely,the asymmetry parameters of nortriptyline and diphenhydramine have a smaller angle between them,and may be measuring more related proper-ties.It might therefore not be necessary to include both substances in a test mix for these particular mobile phase conditions.For over-all evaluation of column properties exploring different aspects of detrimental interactions,a test mix could include five compounds:codeine,quinine,amphetamine,nortriptyline and pyridine.The ranking of columns at pH 7using methanol was different from that at pH 7using acetonitrile;note that these correspond to the differ-ent modifiers of the T–E and S–D evaluation schemes,respectively.Snyder and co-workers [6]also observed that the tailing of basic (cationic)solutes on a given column appeared to be solute specific,finding that values of A s for the bases amitriptyline,nortriptyline,the quaternary compound berberine,and 4-n -hexylaniline corre-lated extremely poorly (r 2=0.01–0.19).The use of multiple basic test solutes and different mobile phase modifiers at different pH values would be a considerable task for the construction of these column evaluation databases.However,inclusion of a range of test compounds would undoubtedly improve the performance of these databases.It seems certain that these differences in test solutes and conditions contribute to the lack of correlation between the S–D and T–Etests.Fig.2.PCA loadings plots based on retention factor (k ),column efficiency (N ),Dorsey–Foley column efficiency (N df )and asymmetry factor (A s ).Data for eight different Type B reversed-phase columns and nine different probe compounds with methanol–phosphate buffer pH 3.0as mobile phase.See [30].。
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高效液相色谱法前言：高效液相色谱法适用的范围很广，是非常重要的分析方法之一，它在医药学及生命科学中成为一种主要的分离检测手段。
与分离方法的迅速发展的同时，检测技术的不断进步也是高效液相色谱技术得到广泛应用的原因之一。
近年来高效液相色谱检测技术从最常用的紫外可见分光光度检测器和差示折光检测器开始，已经发展了诸如能够实时定性和定量的二极管阵列紫外可见分光光度检测器，能够快速扫描和光谱分辨率更高的色散型紫外可见分光光度检测器以及适用于生物化学的电化学检测器等。
各种联用检测手段如与质谱联用的热喷雾和粒子束接口等已日趋成熟，与傅里叶变换红外光谱和拉曼光谱的联用技术亦在发展中。
各种检测器的灵敏度、线性范围、稳定性和重现性等主要指标日益提高。
许多新的检测手段已为科技工作者所熟悉和使用。
目前比较引人注目和发展较快的为手性化合物的直接检测和通用型质量检测技术。
分离原理在互不相溶的两相——流动相和固定相的体系中，当两相作相对运动时，第三组分（即溶质或吸附质）连续不断地在两相之间进行分配，这种分配过程即为色谱过程。
由于流动相、固定相以及溶质混合物性质的不同，在色谱过程中溶质混合物中的各组分表现出不同的色谱行为，从而使各组分彼此相互分离，这就是色谱分析法的实质。
也就是说，当一种不与被分析物质发生化学反应的被称为载气的永久性气体（例如H2、N2、He、 Ar 、CO2等）携带样品中各组分通过装有固定相的色谱柱时，由于试样分子与固定相分子间发生吸附、溶解、结合或离子交换，使试样分子随载气在两相之间反复多次分配，使那些分配系数只有微小差别的组分发生很大的分离效果，从而使不同组分得到完全分离，例如一个试样中含A、B二个组分，已知B组分在固定相中的分配系数大于A，即K B > K A，如图1-1所示。
当样品进入色谱柱时，组分A、B以一条混合谱带出现，由于组分B在固定相中的溶解能力比A大，因此组分A的移动速度大于B，经过多次反复分配后，分配系数较小的组分A首先被带出色谱柱，而分配系数较大的组分B则迟被带出色谱柱，于是样品中各组分达到分离的目的。
设法将流出色谱柱某组分的浓度变化用电压、电流信号记录下来，便可逐一进行定性和定量分析。
一, 高效液相色谱法的特点目前经典LC主要用于制备,若用于分析则采用脱机或非连续检测。
经典LC填料缺陷,通常是填料粒度大、范围宽、不规则、不易填充均匀、扩散和传质阻力大,谱带展宽加大。
它存在致命弱点:速度慢、效率低和灵敏度低。
HPLC填料(高效固定相)颗粒细,直径范围窄,能承受高压。
达到传质阻力小,分离效率高。
早期HPLC的固定相用涂渍的方法制备,液膜厚度df大,这和GC一样,会大大降低色谱柱的柱效。
现代HPLC填料大多采用键合固定相,其固定相膜很薄,因而大大提高了柱效。
高效固定相会带来什么新问题呢？使用高效填料带来两个新问题:一是柱流动阻力大大增大,因此需要采用高压泵输液；二是表面能很大,要采用专业的装柱技术。
高效液相色谱法是在气相色谱和经典液相色谱的基础上发展起来的。
现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。
不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率和实现了自动化操作。
高效液相色谱的原理与经典液相色谱相同,但是它采用了高效色谱柱,高压输液泵和高灵敏度检测器。
因此，高效液相色谱的分离效率,分析速度和灵敏度大大提高。
定量准确,达到可与GC相媲美的分离分析性能。
特别是结合计算机技术,HPLC已成为高度自动化和智能化的现代分析仪器。
经典的液相色谱法,流动相在常压下输送,所用的固定相柱效低,分析周期长,例如柱长170㎝,柱内径0.9㎝,流动相速度30㎝3/h,约需20多小时才能分离出20种氨氨基酸；而用高效液相色谱法,只需1小时之内就完成。
而现代液相色谱法引用了气相色谱的理论,流动相改为高压输送,色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料(几微米至几十微米)填充而成,均匀规则的固定相、传质阻力小、分离效率高。
柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或100几十万)，同时柱后连有高灵敏度的检测器,使分析灵敏度比经典色谱有较大提高。
例如用紫外检测器最小检测限可达到10-9g，而荧光检测器则可达到10-11g。
虽然气相色谱法是一种很好的分离、分析方法，它具有分析速度快,分离效能好和灵敏度高等优点。
但是气相色谱仅能分析在操作温度下能汽化而不分解的物质。
据估计,在已知化合物中能直接进行气相色谱分析的化合物约占15%,加上制成衍生物的化合物,也不过20%左右。
由于大量有机物,离子型化合物易受热分解或失活物质不能用GC分析,因此需要发展HPLC。
对于高沸点化合物；难挥发及热不稳定的化合物,离子型化合物及高聚物等,很难用气相色谱法分析。
为解决这个问题,70年代初发展了高效液相色谱。
二高效液相色谱法与气相色谱法比较HPLC的保留值等色谱分析有关术语以及分配系数、分配比、塔板高度、分离度、选择性等方面均与气相色谱相一致；高效液相色谱所用基本理论：塔板理论与速率理论也与气相色谱一致。
因液相色谱以液体代替气相色谱中的气体作流动相，则速率方程H=A+B/u + Cu式中：纵向扩散项(分子扩散项)B/u对板高的影响与气相色谱不同，由于液相色谱中组分分子在流动相中的扩散系数仅为气相色谱中的万分之一，因此纵向扩散项对板高的影响可以忽略不计于是影响液相色谱的主要因素是传质项Cu。
气相色谱(GC)的流动相流速u增大时，板高H显著增大(即柱效显著降低)，而液相色谱(LC)的流速增大时。
板高增大不显著(即柱效降低不显著)。
这说明高效液相色谱也有很高的分离效能HPLC可分离分析高极性，高分子量和离子型的各种物质。
柱效很高每米可达3万块以上，一般用20 -- 25cm长的柱子，由于固定相的不断改进，最短的只有3cm ，理论板数可达3000—4000，能满足一般分析的需要，而且具有很高的分析速度柱子短，对压力要求就低过去高压，现在追求高精度，高稳定性，一般在室温下操作，样品不需预处理操作方便，容易掌握。
液相色谱与气相色谱有一定差别，主要有以下几方面：(一) 应用范围不同液相色谱非常适合分子量较大，难气化；不易挥发或对热敏感的物质，离子型化合物及高聚物的分离分析，大约占有机物的70～80%。
(二) 流动相不同气相色谱的流动相载气是色谱惰性的永久性气体，不参与分配平衡过程,与样品分子无亲和作用，样品分子只与固定相相互作用。
而在液相色谱中流动相是各种低沸点有机溶剂及水溶液。
也参与样品分子相互作用，因此液相色谱流动相的作用比气相色谱大，气相色谱的载气仅数种，其性质差别也不大，对分离效果影响也不大。
而液相色谱的流动相种类多，性质差别也大，对分离效果影响显著。
因对于LC来说，流动相的选择很重要，为提高选择性增加了一个因素。
液相色谱也可选用不同比例的两种或两种以上的液体作流动相,增大分离的选择性。
(三) 液相色谱分离类型多：如离子交换色谱和排阻色谱；液相色谱能完成难度较高的分离工作.就其分离机理的不同，高效液相色谱可分为液-固吸附色谱；液-液分配色谱；离子交换色谱和凝胶渗透色谱等多种类型。
液—固色谱的色谱柱内填充固体吸附剂，由于不同组分具有不同的吸附能力。
因此，流动相带着被测组分经过色谱柱时，各组分被分开液—液色谱的流动相和固定相都是液体。
作为固定相的液体涂在惰性担体上，流动相与固定液不互溶，当带有被测组分的流动相进入色谱柱时，组分在两相间很快达分配平衡，由于各组分在两相间分配系数不同而彼此分离。
以非极性溶液作流动相,极性物质作固定相的液—液色谱叫正相色谱；极性溶液作流动相，非极性物质作固定相的液—液色谱叫反相色谱。
离子交换色谱的色谱柱内填充离子交换树脂，依靠样品离子交换能力的差别实现分离。
而凝胶色谱是按试样中分子大小的不同来进行分离的。
在上述四类色谱中，应用最广泛的是液—液色谱。
液相色谱作为分析时选择余地大，而气相色谱达不到。
(四) 气相色谱一般都在较高的温度下进行分离分析，而液相色谱通常在室温条件下操作。
(五) 柱外效应：由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此,溶质在液相中的传质速率慢HPLC的柱外效应就显得特别重要；而在气相色谱中，柱外区域扩张可以忽略不计。
(六) 制备：液相色谱不仅可用于分离分析，还可用于制备纯样品.液相色谱的馏分比气相色谱易于收集。
回收样品也比较容易，而且回收是定量的，适合于大量制备样品。
便于为红外，核磁等方法确定化合物结构提供纯样品。
(七) 检测器等：液相色谱尚缺乏高灵敏度，通用型的检测器，液相色谱柱子昂贵；要消耗大量溶剂；液相色谱仪器比较复杂；操作严格；价格也较气相色谱仪昂贵；主是因为采用了高压泵在实际应用中，这两种色谱技术是互相补充的。
高效液相色谱仪简介高效液相色谱仪包括以下主要部件：贮液罐→在线脱气装置→高压输液泵→进样装置→色谱柱→检测器→记录仪和数据处理装置。
1贮液罐贮液罐的材料应耐腐蚀，可为玻璃，不锈钢，氟塑料或特种塑料聚醚醚酮。
溶剂约为0.5一2.0L。
贮液罐放置位置要高于泵体，以便保持一定输液静压差。
使用过程贮液罐应密闭，以防溶剂蒸发引起流动相组成的变化，还可以防止空气中02，CO2重新溶解于已脱气的流动相。
所有溶剂在放入贮液罐之前必须经过0.45pm滤膜过滤，除去溶剂中的机械杂质，以防输液管道或进样阀产生阻塞现象。
2在线脱气装置流动相在使用前必须进行脱气，以除去其中溶解的气体，防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡。
气泡的存在会增加基线噪音，严重时会造成分析灵敏度下降，而无法进行分析。
在线脱气装置把真空脱气装置串接到贮液系统中，并结合膜过滤器，实现了流动相在进入输液泵前的连续真空脱气。
3高压输液泵对高压输液泵的要求是：1.泵体材料能耐化学腐蚀；2.能在连续高压下操作；3输出流量范围宽、输出流量稳定、重复性高。
高压输液泵可分为恒流泵和恒压泵；目前在高效液相色谱中应用最广泛的也是最重要的输液泵是往复泵，往复泵属于恒流泵。
往复泵的优点是:1．可在高压下连续以恒定的流量输液；2.此泵的液缸容积很小只有几十至几百μl，其柱塞尺寸小易于密闭。
柱塞、单向阀和阀座造价低廉，更换溶剂方便，特别适用梯度洗脱。
4进样装置进样分为手动进样和自动进样两种。
手动进样使用的最多的是6通阀进样装置。
先将进样阀置于“取样“位置，用特制的平头注射器将样品注入定量环中，再将进样阀至于“进样“位置，流动相将样品携带进入色谱柱。
此种进样重现性好，能耐20Mpa的高压。
自动进样器是由计算机自动控制定量阀，按照预先编制注射样品的操作程序工作。
取样、进样、复位、样品管路清洗和样品盘的转动，全部按照预定程序自动进行，一次可以进行几十个甚至上百个样品的分析。
自动进样器的样品量可连续调节，进样重复性高，适合做大量样品分析，节省人力，可实现自动化操作。