分子病理学原理和实践
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k-ras基因被激活最常见的方式是点突变,多发生在 N端第12,13和61密码子,其中又以第12密码子突变 最常见,为GGT突变成GAT或GTT
20－50％结直肠癌发生K-ras基因突变
第12和13密码子突变占90％，第61密码子 占5％
k-ras突变的临床意义
K-ras基因突变型患者不能从抗EGFR治疗中获益， 反而增加不良反应危险和治疗费用
IGH/CCND1 BCL6 C-MYC MALT1
~ 95% 辅助诊断套细胞淋巴瘤
~40% ~100%
辅助诊断弥漫性大B细胞淋巴 瘤
辅助诊断伯基特淋巴瘤
10%-20% 辅助诊断MALT淋巴瘤
API2/MALT1 ~40%
指导抗HP治疗
ALK
60%-80% 评估预后
IGH/BCL2融合基因检测辅助诊断滤泡性淋巴瘤（FL）
开发分子和遗传学方法用于人类肿瘤诊断和分类
The design and validation of predictive biomarkers for treatment response and disease progression
设计和确认生物标志物用于疾病进展和疗效的预测
The susceptibility of individuals of different genetic constitution to develop cancer
分子病理学原理和实践
Principles and Practice of Molecular Pathology
一、分子病理学诊断的定义
The development of molecular and genetic approaches to the diagnosis and classification of human tumours
胃癌 <2.0
>2.0
HER2:CEP17 乳腺癌 <1.8 1.8-2.2 >2.2
FISH检查淋巴瘤基因重排和其他应用
淋巴瘤FISH检测试剂盒
淋巴瘤类型 探针名称
B细胞淋巴瘤 GLP ICH
滤泡性淋巴瘤
GLP IGH/ GLP BCL2
套细胞淋巴瘤
弥漫性大B细 胞淋巴瘤
GLP IGH/ GLP CCND1
基 本 原 理
组织切片脱蜡
酶消化
杂交过夜
FISH检查实验流程图
荧光显微镜观察
DAPI染细胞核
清洗
乳腺癌和胃癌HER2 FISH检查
荧 光 原 位
杂 交 探 针
制 备
典型的乳腺癌HER2 FISH结果
结果判断
•
Ratio= Her2信号总数/CEP17信号总数
无扩增
意义不明 （Equivocal） 扩增
不同遗传背景个体对于肿瘤发生的敏感性
二、常用分子病理学诊断方法
PCR 聚合酶链反应 FISH 荧光原位杂交 Microarray 基因芯片
PCR发明者获得诺贝尔化学奖
三、PCR(结合DNA测序)技术在 分子病理诊断中的应用
基因突变检查
EGFR k-ras c-kit
B-raf PIK3CA PDGFRA
甲磺酸伊马替尼（格列卫）最初是用来治疗慢性 髓性白血病，最近才用来治疗c-kit异常表达的GIST
在突变的患者中，相对于第9号外显子突变和野生型， 第11号外显子突变患者疗效最佳
第9号外显子突变患者一线治疗应用800比400md/d 明显延长中位无进展生存期
k-ras 基因检测及其临床应用
k-ras基因突变
c-kit和PDGFRA突变检测
在胃肠间质瘤诊断和治疗中的意义
c-kit 基因第11、9、13和17外显子存在突变 突变使其在无配体结合的情况下，蛋白仍然保持活性
大多数GIST（65－85％）的基因突变发生在 c-kit的第11或9外显子
PDGFRA基因第12和18外显子存在突变
C-kit突变与临床治疗
EGFR基因突变与肺癌的靶向治疗
什么是EGFR基因及其突变？
表皮生长因子受体 erbB1 HER1
肺癌患者为什么要进行EGFR基因突变检测？
西妥昔单抗（爱必妥）
易瑞沙（吉非替尼） 特罗凯（厄罗替尼）
非小细胞肺癌中药敏相关的EGFR突变
耐药
EGFR－突变检查及其临床意义
易瑞沙和特罗凯是治疗非小细胞肺癌的重要靶向药物 EGFR基因突变主要集中在酪氨酸激酶区，18，19，21 外显子。19外显子约占45％，21外显子约占40％ 突变可以增强肿瘤细胞对酪氨酸激酶抑制剂的敏感性 EGFR突变检查可以作为靶向治疗的有效预测指标
GLP BCL6
伯基特淋巴瘤 GLP C-MYC
粘膜相关淋巴 组织淋巴瘤
间变性大细胞 淋巴瘤
GLP MALT1 GLP API2/ GLP MALT1
GLP ALK
涉及基因
IGH IGH/BCL2
发生率 临床意义 鉴别B细胞恶性淋巴瘤和淋巴
5Biblioteka Baidu%-85% 组织良性增生性病变 ﹥90% 辅助诊断滤泡性淋巴瘤
IGH/BCL2基因FISH检测
双色双融合易位探针(IGH/BCL2）
IgH基因 Bcl-2基因
14（灰）号和18号（黑）染色 体
杂交
Bcl2
IgH
IGH/BCL2探 针
融合 基因扩增
双色融合易位探针( IGH/BCL2）
正 常
基因拷贝数增加
荧光原位杂交(FISH)技术的简介： 发展历史、原理和实验操作程序
FISH检查在肿瘤靶向治疗中的应用： 乳腺癌（Her2）、肺癌（EGFR、ALK）
FISH检查在病理诊断中的应用： 宫颈癌、膀胱癌、淋巴瘤、前列腺癌等
FISH检查在其他方面的应用： 流产、遗传病等
基本原理
碱基互补配对原则，同源的DNA-DNA，DNA-RNA, RNA-RNA两条单链在一定条件下能结合成双链。 用放射性或非放射性物质标记一条链作为探针， 与组织切片或细胞内待测核酸（RNA或DNA）片 段进行杂交，通过放射自显影或其他方法显示 目的基因存在和定位。
只有k-ras基因野生型患者才能接受EGFR抑制剂 （如西妥昔单抗和帕尼单抗）治疗
但并不是所有k-ras基因野生型对靶向治疗都有效
石蜡组织中基因突变检测流程
小结
分子病理学检查在某些肿瘤靶向治疗 和诊断中具有重要价值
基于PCR的多种生物学技术和方法用于 突变检测，各有利弊，需要合理选择
四、FISH 荧光原位杂交技术及其应用
20－50％结直肠癌发生K-ras基因突变
第12和13密码子突变占90％，第61密码子 占5％
k-ras突变的临床意义
K-ras基因突变型患者不能从抗EGFR治疗中获益， 反而增加不良反应危险和治疗费用
IGH/CCND1 BCL6 C-MYC MALT1
~ 95% 辅助诊断套细胞淋巴瘤
~40% ~100%
辅助诊断弥漫性大B细胞淋巴 瘤
辅助诊断伯基特淋巴瘤
10%-20% 辅助诊断MALT淋巴瘤
API2/MALT1 ~40%
指导抗HP治疗
ALK
60%-80% 评估预后
IGH/BCL2融合基因检测辅助诊断滤泡性淋巴瘤（FL）
开发分子和遗传学方法用于人类肿瘤诊断和分类
The design and validation of predictive biomarkers for treatment response and disease progression
设计和确认生物标志物用于疾病进展和疗效的预测
The susceptibility of individuals of different genetic constitution to develop cancer
分子病理学原理和实践
Principles and Practice of Molecular Pathology
一、分子病理学诊断的定义
The development of molecular and genetic approaches to the diagnosis and classification of human tumours
胃癌 <2.0
>2.0
HER2:CEP17 乳腺癌 <1.8 1.8-2.2 >2.2
FISH检查淋巴瘤基因重排和其他应用
淋巴瘤FISH检测试剂盒
淋巴瘤类型 探针名称
B细胞淋巴瘤 GLP ICH
滤泡性淋巴瘤
GLP IGH/ GLP BCL2
套细胞淋巴瘤
弥漫性大B细 胞淋巴瘤
GLP IGH/ GLP CCND1
基 本 原 理
组织切片脱蜡
酶消化
杂交过夜
FISH检查实验流程图
荧光显微镜观察
DAPI染细胞核
清洗
乳腺癌和胃癌HER2 FISH检查
荧 光 原 位
杂 交 探 针
制 备
典型的乳腺癌HER2 FISH结果
结果判断
•
Ratio= Her2信号总数/CEP17信号总数
无扩增
意义不明 （Equivocal） 扩增
不同遗传背景个体对于肿瘤发生的敏感性
二、常用分子病理学诊断方法
PCR 聚合酶链反应 FISH 荧光原位杂交 Microarray 基因芯片
PCR发明者获得诺贝尔化学奖
三、PCR(结合DNA测序)技术在 分子病理诊断中的应用
基因突变检查
EGFR k-ras c-kit
B-raf PIK3CA PDGFRA
甲磺酸伊马替尼（格列卫）最初是用来治疗慢性 髓性白血病，最近才用来治疗c-kit异常表达的GIST
在突变的患者中，相对于第9号外显子突变和野生型， 第11号外显子突变患者疗效最佳
第9号外显子突变患者一线治疗应用800比400md/d 明显延长中位无进展生存期
k-ras 基因检测及其临床应用
k-ras基因突变
c-kit和PDGFRA突变检测
在胃肠间质瘤诊断和治疗中的意义
c-kit 基因第11、9、13和17外显子存在突变 突变使其在无配体结合的情况下，蛋白仍然保持活性
大多数GIST（65－85％）的基因突变发生在 c-kit的第11或9外显子
PDGFRA基因第12和18外显子存在突变
C-kit突变与临床治疗
EGFR基因突变与肺癌的靶向治疗
什么是EGFR基因及其突变？
表皮生长因子受体 erbB1 HER1
肺癌患者为什么要进行EGFR基因突变检测？
西妥昔单抗（爱必妥）
易瑞沙（吉非替尼） 特罗凯（厄罗替尼）
非小细胞肺癌中药敏相关的EGFR突变
耐药
EGFR－突变检查及其临床意义
易瑞沙和特罗凯是治疗非小细胞肺癌的重要靶向药物 EGFR基因突变主要集中在酪氨酸激酶区，18，19，21 外显子。19外显子约占45％，21外显子约占40％ 突变可以增强肿瘤细胞对酪氨酸激酶抑制剂的敏感性 EGFR突变检查可以作为靶向治疗的有效预测指标
GLP BCL6
伯基特淋巴瘤 GLP C-MYC
粘膜相关淋巴 组织淋巴瘤
间变性大细胞 淋巴瘤
GLP MALT1 GLP API2/ GLP MALT1
GLP ALK
涉及基因
IGH IGH/BCL2
发生率 临床意义 鉴别B细胞恶性淋巴瘤和淋巴
5Biblioteka Baidu%-85% 组织良性增生性病变 ﹥90% 辅助诊断滤泡性淋巴瘤
IGH/BCL2基因FISH检测
双色双融合易位探针(IGH/BCL2）
IgH基因 Bcl-2基因
14（灰）号和18号（黑）染色 体
杂交
Bcl2
IgH
IGH/BCL2探 针
融合 基因扩增
双色融合易位探针( IGH/BCL2）
正 常
基因拷贝数增加
荧光原位杂交(FISH)技术的简介： 发展历史、原理和实验操作程序
FISH检查在肿瘤靶向治疗中的应用： 乳腺癌（Her2）、肺癌（EGFR、ALK）
FISH检查在病理诊断中的应用： 宫颈癌、膀胱癌、淋巴瘤、前列腺癌等
FISH检查在其他方面的应用： 流产、遗传病等
基本原理
碱基互补配对原则，同源的DNA-DNA，DNA-RNA, RNA-RNA两条单链在一定条件下能结合成双链。 用放射性或非放射性物质标记一条链作为探针， 与组织切片或细胞内待测核酸（RNA或DNA）片 段进行杂交，通过放射自显影或其他方法显示 目的基因存在和定位。
只有k-ras基因野生型患者才能接受EGFR抑制剂 （如西妥昔单抗和帕尼单抗）治疗
但并不是所有k-ras基因野生型对靶向治疗都有效
石蜡组织中基因突变检测流程
小结
分子病理学检查在某些肿瘤靶向治疗 和诊断中具有重要价值
基于PCR的多种生物学技术和方法用于 突变检测，各有利弊，需要合理选择
四、FISH 荧光原位杂交技术及其应用