第二章 药物分析工作的基本程序

第二章药物分析工作的基本程序第一节药品检验工作的一般程序一般原则药物分析工作者应具备：高度的责任感严谨的科学作风求实和一丝不苟的工作态度熟练、正确的操作技能工作程序药品检验的基本程序是：取样→外观性状观察→鉴别→检查→含量测定→写出检验报告书1．取样取样的原则：均匀，合理。

即要从大量的样品中取出能代表样本整体质量的少量样品进行分析。

这样，取样时就要考虑到取样的科学性、真实性、代表性。

固体原料药：当X ≤3时，每件取样；当X ≤300 时,按n+ 1当X > 300时,按n/2 + 1片剂、胶囊剂（非均匀制剂）：每批至少10~20 片注射剂（均匀制剂）：一般3~5支（测定３次）2．外观性状观察药物的性状是药品质量重要表征之一。

如药品的颜色、臭味等因此，对药品外观性状的观察不仅具有鉴别意义，也在一定程度上反映药品的纯度及疗效。

3．鉴别鉴别是利用药物的分子结构所表现的特殊的化学行为（如进行化学反应、测定药物的理化常数等）或光谱、色谱特征，来判断药品的真伪。

（1）化学鉴别法①干法将供试品加适当试剂在规定的温度下进行实验,观测所发生的特异现象.例1 钠的焰色实验铂丝用盐酸湿润后,蘸取供试品,在无色火焰中燃烧,使火焰显出特殊的颜色.例2 适当温度下加热供试品,生成特殊气味的气体.②湿法将供试品和试剂在适当的溶剂中,于一定条件下进行反应,发生易于观测的化学变化.a.呈色反应鉴别法* 三氯化铁呈色反应：酚羟基* 异羟肟酸铁呈色反应：芳酸及酯，酰胺* 茚三酮呈色反应：脂肪氨基* 重氮化-偶合呈色反应：芳伯氨基* 氧化还原呈色反应：b.沉淀生成反应鉴别法* 与金属离子的沉淀反应* 与碘化铋钾的沉淀反应* 其它沉淀反应c.荧光反应鉴别法* 药物本身在可见光下发射荧光* 药物溶液+硫酸* 药物溶液+溴* 药物溶液+间苯二酚* 药物经其它反应后发射荧光d.气体生成反应鉴别法* 大多数伯胺（铵）类药物、酰脲类以及某些酰胺类药物,可经强碱处理后加热产生氨气.* 化学结构含硫药物,可经强酸处理后加热产生硫化氢气体.* 含碘有机药物经直火加热可生成紫色碘蒸气.* 含醋酸酯和乙酰胺类药物经硫酸水解后,加乙醇可产生醋酸乙酯的香味.(2)光谱鉴别法①紫外光谱鉴别法a测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长。

b规定一定浓度供试品在最大吸收波长处的吸收度。

c规定吸收波长和吸收系数法。

d规定吸收波长和吸收度比值法。

e经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。

②红外光谱法中国药典与BP：采用标准图谱对照法USP：采用对照品法(3)色谱谱鉴别法a高效液相色谱法(HPLC)供试品和对照品色谱峰保留时间一致.b气相色谱法(GC)同HPLC要求c 薄层色谱法(TLC)对照品比较法供试品斑点与对照品的R f 值和颜色应一致生物学法利用微生物或实验动物进行鉴别的方法鉴别方法选择原则：①方法有一定专属性、灵敏性,且便于推广。

②化学法和仪器法相结合,每种药品一般选用2—4种方法进行鉴别试验,相互取长补短。

③尽可能采用药典中收载的方法。

在鉴别时，对某一药品不能以一个鉴别试验作为判断的唯一根据，同时要考虑其它有关项目的试验结果，全面考察，才能得出结论。

例如，维生素C 的鉴别维生素C 分子中具有2个手性C 原子，所以具有旋光性，所以可以通过测定旋光度来进行鉴别。

ml /g 1.0−→−水样品（精密称定） 依法测定旋光度药典中规定：维生素C 的比旋度应为+20.5︒~+21.5︒LC100][t D α=α [α] ：比旋度α ：测得的旋光度t ：测定时的温度D ：钠光谱的D 线（波长nm ）L ：测定管长（dm ） OC OH H CH 2OHO OH OHC ：每100ml 溶液中含有溶质的g 数另外，维生素C 的熔点为190~192︒C 。

也可以通过测定熔点进行鉴别。

以上是根据测定物理常数进行鉴别，另外，在维生素C 的分子中具有烯二醇的结构，这个结构具有很强的还原性，可以和一些氧化剂作用。

如① ml 10(0.2g)−→−水样品└→↓−−−−−←)Ag (TSAgNO ml 53黑色 ② ml 10(0.2g)−→−水样品└→试液颜色消失二氯靛酚钠−−−−−−→−TS5ml这里二氯靛酚钠是一种颜料，在酸性条件下它的氧化型是玫瑰红色，还原型是无色的4．检查检查是判断药品的纯度是否符合限量规定的要求。

药品在生产或贮存过程中往往会引入杂质，所存在的杂质不能超过一定的限量。

检查就是通过试验来判断药品中存在的杂质是不是超过规定的限量。

如阿斯匹林中游离水杨酸的检查 COOHOCOCH 3OH COOH阿斯匹林 水杨酸药典中规定，阿斯匹林中的游离水杨酸不得超过0.1%。

即1g 阿斯匹林的样品中游离水杨酸的量不应超过1mg 。

%1.0%100mg1000mg 1=⨯ 5．含量测定含量测定是检测药物中有效成分的含量是否符合规定的含量标准。

药物是在鉴别、检查合格的基础上，进行含量测定。

判断一个药物的质量是否符合要求，必须全面衡量。

药品的鉴别、检查、含量测定等各项的检查结果都应该符合规定，才能为合格药品。

如果其中有任何一项不符合规定，则也认为该药为不合格产品。

6．检验记录与报告(1)原始记录记录完整、无缺页损脚；内容必须真实、简明、具体；宜用钢笔或特种圆珠笔书写字迹清晰、色调一致,不得涂抹（写错时,划上单线或双线，再在旁边改正重写,并签名或盖章） (2) 检验报告内容a 供试品的名称、批号、规格、数量、来源；取样方法、取样日期；外观性状、包装情况.b 检验目的、项目、方法与依据、检验结果.c 结论及处理意见；d 检验者签名盖章、复核者签名盖章样品预处理方法样品种类：含卤素元素（F 、Cl 、Br 、I ）含金属元素（Ca 、Fe 、Hg 、Zn 、Sn 、Bi ）含As 、P 、S 等元素生物样本含卤素元素：含金属元素：二、含卤素或金属药物的前处理方法根据卤素或金属在分子中结合牢固程度不同而异.不经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法 1 卤素与脂肪链的碳原子相连结合不牢固 2 卤素与芳环相连结合牢固 1 含金属有机药物:金属离子不直接与碳原子相连.为有机酸及酚的金属盐或配位化合物,金属原子结合不牢固,在溶液中可直接离解出金属离子. 2 有机金属药物:金属离子直接与碳原子以共价键相连.结合状态比较牢固,在溶液中不能直接离解出金属离子.直接测定法 经水解后测定法 经氧化还原后测定法湿法破坏法干法破坏法氧瓶燃烧法1．不经有机破坏的分析方法（1）直接测定法①金属离子不直接与碳原子相连例如：乳酸钙0.3g+水100ml 放冷+NaOH 15mlEDTA滴定钙紫红素指示剂②适用于C-M (金属原子直接与碳原子相连）键结合不牢固的有机金属药物,在水溶液中可以电离.例如：富马酸亚铁溶于热硫酸，同时分解释放出亚铁离子，可选用铈量法进行测定.（2）经水解后测定法适用卤素原子与碳原子结合不牢固药物.如卤素与脂肪碳链相连①直接回流后测定法将含卤素的有机药物溶于适当溶剂（如乙醇）中,加氢氧化钠溶液或硝酸银溶液后,加热回流使其水解,将有机结合的卤素,经水解作用转变为无机的卤素离子,然后选用间接银量法进行测定. 例如：三氯叔丁醇CCl3—C(CH3 ) 2— OH+ NaOH(CH3 ) 2 CO+NaCl + HCOONa NaCl + AgNO3 AgCl↓+NaNO3AgNO3 + NH4SCN AgSCN¯+NH4NO3例如：六氯对二甲苯（Hexachloro-p-xylene）经加热回流完全后,可用硫氰酸铵标准溶液直接滴定剩余的硝酸银,以求得含量.用硫酸水解后测定法硬脂酸镁与定量硫酸共沸、水解生成硬脂酸和硫酸镁,剩余的酸以氢氧化钠滴定.Mg(C 17H 35COO)2 +H 2SO 4 MgSO 4 + 2 C 17HCOOH H 2SO 4 + NaOH Na 2SO 4 + H 2O （3） 经氧化还原后测定法① 碱性还原后测定卤素结合于芳环上,由于分子碘的结合较牢固,需在碱性溶液中加还原剂（如锌粉）,加热回流,使碳-碘键断裂,形成无机碘化物后测定. 泛影酸+3NaI+2CH 3COONa+3Na 2ZnO 2+3H 2O NaI+AgNO 3 AgI +NaNO 3曙红钠为吸附指示剂 黄色 玫瑰红色 ② 酸性还原后测定在醋酸酸性条件下加还原剂锌粉,加热回流,使碳-碘键断裂,形成无机碘化物后用银量法测定.如：碘番酸含量测定③利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量含锑药物游离Sb 5+具有氧化性，在酸性下氧化KI 析出I 2，可用CCl 3Cl 3C + 6AgNO 3+6H 2O →加热回流C(OH)3(HO)3C COOHI NHCOCH 3ICH 3COHN I −−→−NaOH →加热回流COONa2H 2NNa2S2O3滴定2．经有机破坏的分析方法湿法破坏法①硝酸-高氯酸法：破坏力强，不适于含氮杂环②硝酸-硫酸法：适于大多数有机物质破坏③硫酸-硫酸盐法：常用于含砷、锑有机药物（2）干法破坏——适用于含氮杂环.不适于汞、砷的测定.将有机物灼烧灰化.常加无水碳酸钠或轻质氧化镁（3）氧瓶燃烧法将有机药物放入充满氧气的密闭烧瓶中进行燃烧,并将燃烧所产生的欲测物质（气态）吸收于适当吸收液中,然后根据欲测物质的性质,采用适当分析方法进行鉴别、检查或含量测定①特点a快速分解有机药物的简单方法.b不需复杂设备,能使有机结合中的待测元素定量地分解成无机离子状态.c适用于含卤素及硫、磷、硒等药物的鉴别、检查和含量测定,特别适用于微量样品的测定.②仪器装置硬质玻璃碘瓶: 容量随样品量而定, 500ml、1000ml.含氟化合物用石英制或聚氯乙烯制的燃烧瓶,因样品燃烧后,产生HF,对玻璃有腐蚀作用,与玻璃中的硼生成氟化硼,BF 3在水中不能完全解离,而使测定结果偏低.瓶塞底部熔封一根铂丝,铂丝下端做成螺旋状,长度约为瓶身的2/3.铂丝作用: a 固定样品.b 催化－使样品分解完全③操作④注意事项a 充氧气要充分使样品燃烧完全,一般急速通氧气1~2分钟,燃烧完全时没有黑色炭化物.b 吸收完全一般振摇30’,燃烧瓶看不到烟雾.Cl －、F －白色烟雾; Br －棕色烟雾; I －紫色烟雾c 防爆样品燃烧时,温度很高,燃烧瓶内压力很大,有爆炸的可能性,必须采取防护措施.防护措施: 戴防护眼镜;瓶外包湿毛巾实例- 碘苯酯的含量测定 溴-醋酸的作用：将碘化物全部转为碘酸盐适宜方法测定吸收液吸收于燃烧产物燃烧样品⇒−−−→−−−−→−/Pt O 2C (CH 2)8COOC 2H 5CH 3I 0.02mol/L Na 2S 2O 3 KI甲酸的作用：除去过量的溴生物样品的处理1．生物样品的种类生物样本：生物体的任何脏器、组织、体液均可作为生物样本. 常用样本:血液（血浆、血清或全血）、尿液、唾液、毛发（1）血液（blood ）因血液中药物浓度可以较好地体现药物浓度和治疗作用之间的关系，是最为常用的生物样品—分为全血、血浆和血清 ①血样的采集—一般用注射器直接采集静脉血，每次1~5ml ；动物实验时，采血量不宜超过动物总血量的十分之一②血样的制备测定血中药物的浓度，通常是指测定血浆或血清中的药物浓度，尤其是血浆，并非指全血a 血浆的制备采集的静脉血液置含有抗凝剂的试管中，混合后，以2500~3000r/min 离心5~10min 使与血球分离，所得淡黄色上清液即为血浆（ plasma ）b 血清的制备采集的静脉血液置试管中，于37℃或室温放置30min ~1h 。