藏药小檗皮的醇提工艺优化研究
川黄连中小檗碱的提取及纯化工艺的研究_林叶新
黄连为毛莨科植物黄连 Coptis chinensis Franch 的干燥根 茎［1］。 小 檗 碱 为 黄 连 中 含 有 量 最 高 的 原 小檗碱型生物碱，也是最重要的活性成分之一，具 有抗炎、抗菌、抗癌，治疗糖尿病和心血管疾病， 及抑制脂肪分化等多方面药理作用［2-6］。
传统用于提取黄连小檗碱的方法有稀硫酸法、 乙醇浸提法、水提法等［7-9］，这些方法有一定的局 限性，如消耗溶剂量大、耗时长、提取率低等。因 此，为提高黄连小檗碱的提取率，一些现代化方 法，如有超声波提取法、超微振动法、亚临界水提 取法、加速 溶 剂 萃 取 法、 微 波-索 氏 工 艺 联 合 提 取 法等［10-13］也 被 采 用 于 黄 连 小 檗 碱 的 提 取 中。 尤 其 是微波辅助提取，因微波具有能促进植物细胞破 裂，提高有效成分从物料内部向提取溶剂界面的扩
2013 年 6 月 第 35 卷 第 6 期
中成药 Chinese Traditional Patent Medicine
June 2013 Vol． 35 No． 6
川黄连中小檗碱的提取及纯化工艺的研究
林叶新1 ， 夏之宁1，2* ， 陈 华2 ， 杨丰庆2 （ 1． 重庆大学生物工程学院，重庆 400030； 2． 重庆大学化学化工学院，重庆 400030）
1204
2013 年 6 月 第 35 卷 第itional Patent Medicine
June 2013 Vol． 35 No． 6
沸现象，并降低了高温破坏目标产物的可能性。通 过与传统提取工艺的对比，发现此方法提取时间 短，提取率高，优于其他提取方式。此外，本研究 还采用了 AB-8 大孔吸附树脂对黄连生物碱进行分 离纯化。通过比较小檗碱的提取率和纯化后的纯 度，得到一种快速简单有效地提取及纯化川黄连中 小檗碱的方法。 1 材料与方法 1. 1 材料 川黄连购买于重庆康济跃洪药业有限 公司。将黄连粉碎，过 50 目筛。盐酸小檗碱标准 品 （ 纯度≥ 98% ，上海源叶生物科技有限公司） 、 乙腈 （ 分析纯，上海陆都试剂化工厂） 、冰醋酸 （ 分析 纯，重 庆 川 东 化 工 有 限 公 司） 、无 水 乙 醇 （ 分析纯，重庆川东化工有限公司） 、AB-8 大孔树 脂 （ 天津市光复精细化工研究所） 。 1. 2 仪器 TCMC—204 型温控式微波化学反应器 （ 南京陵江科技开发有限责任公司） 、LC—900B 高 效液相色谱仪 （ 配 LB 900 型紫外检测器，重庆川 仪九厂） 、HW—2000 色谱工作站 （ 南京千谱软件 有限公司） 、SHZ-D （ Ⅲ） 循环水式真空泵 （ 巩义 市予华仪器有限责任公司） 、UV—2450 紫外分光 光度计 （ 日本岛津公司） 、AY120 电子天平 （ 日本 岛津公司） 1. 3 方法 1. 3. 1 色谱条件 Kromasil C18 色 谱 柱 （ 250 mm × 4. 6 mm，5 μm） 色谱柱，柱温 25 ℃ ； 流动相 为乙腈-水 （ 30 ∶ 70） 含 0. 6% 冰醋酸，体积流量 1. 0 mL / min； 检测波长 342 nm。 1. 3. 2 对照品工作曲线的测定 准确称取 2. 5 mg 盐酸小 檗 碱 标 准 品，用 色 谱 流 动 相 溶 解 成 0. 025 mg / mL 的盐酸小檗碱母液，备用。使用时，用色 谱流 动 相 逐 级 稀 释 至 所 需 的 质 量 浓 度。 用 RPHPLC 测定盐酸小檗碱的量，每个样品测定 3 次。 以盐酸小檗碱峰面积对质量浓度拟合工作曲线。 1. 3. 3 微波辅助回流法提取 准确称取川黄连药 粉 （ 3. 0 g） ，在设定条件下，采用 TCMC—204 型 温控式微波化学反应器，对黄连小檗碱进行提取。 提取工艺优化时，先通过单因素试验 （ 考察乙醇 浓度、微波回流时间、提取温度、料液比、提取次 数等因素） 选取影响黄连小檗碱提取率的因素和 水平，再进行正交试验，确定最佳提取工艺。提取 率计算公式为 （ 提取所得小檗碱的质量 /生药质 量） × 100% 。单因素初始条件为乙醇 40% ，微 波时间 10 min，温度为 70 ℃ ，料液比为 1 ∶ 20，提
小檗碱提取方法和药理活性研究进展_杨庆珍
小檗碱（ berberine） 又称黄连素，属于季铵型异 喹 啉 类 生 物 碱。 主 要 存 在 于 小 檗 科、罂 粟 科、毛 莨 科、芸香科和防己科等植物中［1］。小檗碱是黄色针 状晶体，其分子式为 C20 H18 NO4 （ 结构式如图 1） ，表
［关键词］ 小檗碱； 提取方法； 药理活性； 研究进展 ［中图分类号］ Ｒ932 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1003 － 3734（ 2015） 05 － 0519 － 08
Advance in extraction methods and pharmacological activities of berberine
519 中国新药杂志 2015 年第 24 卷第 5 期
Chinese Journal of New Drugs 2015，24（ 5）
很好的抗痢、抗传染性原虫、抗肿瘤、降血糖、调节血 脂、降血压和抗心律失常等多种药理活性［3 － 4］。其 显著的抗心力衰竭、抗心律失常、降低胆固醇、抗血 管平滑肌增殖、改善胰岛素抵抗、抗血小板等在心血 管系统 和 神 经 系 统 疾 病 方 面 的 应 用 日 益 受 到 重 视［5］。另外，小 檗 碱 在 农 业 中 抑 菌 杀 虫、在 畜 牧 业 中抗病增 产 的 作 用，也 使 在 农 牧 应 用 中 备 受 关 注。 本文以近年来国内外发表的文献为依据，对小檗碱 的提取方法和药理活性研究进展进行了综述，提出 了当前研究存在的问题，并对小檗碱的研究方向和 应用前景做出了展望。
酶法提取法 超临界 CO2 萃取法
黑果小檗果实的色素提取与纯化工艺
黑果小檗果实的色素提取与纯化工艺黑果小檗（Berberis vulgaris L.）是一种常见的草本植物，其果实含有丰富的色素成分，具有一定的药用和食用价值。
色素的提取与纯化工艺是利用不同的物理和化学方法将目标色素分离和纯化的过程。
本文将介绍黑果小檗果实色素提取与纯化的工艺流程。
黑果小檗果实收获后需经过洗净、切碎等预处理工序，以提高色素的释放率和提取效果。
然后，将预处理后的黑果小檗果实与适量的溶剂（如乙醇、甲醇等）充分混合，进行浸提。
浸提可以采用常温浸提或热浸提的方法，常温浸提时间一般为24-48小时，热浸提温度一般在65-80℃之间，时间为1-2小时。
在浸提过程中，可适当加入酸性或碱性溶液，以调节浸提液的pH值，促进色素的溶解和释放。
浸提完成后，将浸提液通过过滤或离心分离得到澄清的提取液。
接下来，采用进一步提纯技术将提取液中的杂质和非目标物质去除，得到纯化的色素。
常用的提纯技术包括溶剂萃取、凝胶渗透层析、高效液相色谱等。
其中溶剂萃取是最常用的方法，可通过选择合适的溶剂和不同的操作条件，将色素从提取液中分离出来。
凝胶渗透层析和高效液相色谱则可以进一步分离和纯化色素，得到更纯净的色素成分。
将纯化后的色素通过浓缩和干燥等工艺，得到色素的最终产品。
浓缩可以采用真空浓缩或低温浓缩的方法，将溶液中的水分去除，提高色素的浓度。
干燥则可以采用喷雾干燥、真空干燥、冷冻干燥等方法，将浓缩后的溶液转化为固体或粉末状的色素产品。
需要注意的是，色素的提取和纯化过程中，应注意操作的卫生和安全，选择适当的溶剂和提纯技术，以确保色素成分的稳定性和品质。
还可以通过对工艺参数的优化和改良，进一步提高色素的提取率和纯化效果。
黑果小檗果实色素的提取与纯化工艺可以包括预处理、浸提、分离、提纯和干燥等步骤。
这些工艺步骤的选择和操作条件的控制，可以根据具体的实际情况和需求进行调整和改进，以获得高品质的纯化色素产品。
关于小檗碱提取工艺分析论文
关于小檗碱提取工艺分析论文关于小檗碱提取工艺分析论文【摘要】小檗碱作为临床上常用的药材成分应用广泛，为提高小檗碱的提取得率，近年来对小檗碱提取的工艺研究很多。
该文主要综述了近些年来对小檗碱提取工艺的研究进展。
【关键词】小檗碱提取工艺黄连黄柏三颗针正交实验小檗碱又称黄连素，广泛分布在植物界，大约有4个科10个属植物都已发现有小檗碱存在。
小檗碱是黄色针状晶体，表现为季铵型、醇型3种互变异构体，其中以季铵碱型最稳定。
小檗碱能缓慢溶解于冷水（1∶20）或冷乙醇（1∶100），在热水或热乙醇中溶解度比较大，难溶于丙醇、氯仿或苯，盐类的溶解度都比较小，硫酸盐在水中的溶解度约为1∶30，盐酸盐微溶于冷水。
小檗碱可从三颗针、黄连、黄柏等植物中提取。
由于黄连生长缓慢，价格较高，黄柏来源也较少，现我国主要应用三颗针作为提取原料。
小檗碱是临床上一种常用的广谱抗菌药，主要用于菌痢、胃肠炎、痈肿等细菌性感染。
现代研究证明小檗碱有抗肿瘤、抗心率失常、降压、降血糖等作用，在临床上有越来越广泛的应用，需求量日益增加。
为提高小檗碱提取效率，近些年来对小檗碱提取工艺的研究很多，本文对这一方面作一综述。
1酸水法提取小檗碱酸水法是目前工业生产提取小檗碱常用的方法。
从三颗针中提取小檗碱,常用多倍量的0.3%硫酸水溶液浸泡24h，滤液用石灰乳调pH 值至12，过滤，滤液用盐酸调pH值到2～3,再加入6%左右的精制食盐,使食盐完全溶解,放置过夜,抽滤得盐酸小檗碱粗品［1］。
或用0.5%的硫酸水溶液冷浸提取,酸水液用石灰乳调pH值到7左右,滤液浓缩用盐酸调pH值到2～3，再加入6%左右的精制食盐,使食盐完全溶解,过滤，沉淀溶于热水，加石灰乳调pH值到8.5～9趁热过滤,滤液再用盐酸调pH值到2～3，放冷过滤得盐酸小檗碱粗品［2］。
廖志新等［3］以产于青海等地的三颗针为原料，采用正交实验法，对酸水法提取盐酸小檗碱的生产工艺进行研究，找出了最佳的提取工艺。
中药小檗碱的提取与纯化工艺研究
中药小檗碱的提取与纯化工艺研究中药是一种源远流长的传统医学，在中国几千年的医学发展历程中，中药一直扮演着重要的角色，而小檗碱作为一种常用中草药的主要有效成分之一，被广泛应用于中药领域，特别是在治疗炎症和肝胆疾病方面，其功效被广泛认可。
小檗碱的化学结构与药理活性已经有了很详细的研究，而小檗碱的提取与纯化技术也是当前研究的热点之一。
本文将围绕小檗碱的提取与纯化工艺展开深入的探讨。
一、小檗碱的提取方法小檗碱的提取方法主要有煎煮提取法、超声波提取法、微生物法等多种，其中煎煮提取法是目前广泛应用的一种方法。
煎煮提取法是从小檗树干、叶子中提取小檗碱的一种方法，具体操作步骤如下：1.将干燥的小檗树干、叶子粉碎成小颗粒。
2.将粉碎后的小檗树干、叶子装入提取器中。
3.倒入足够的水，与植物原料的比例是1:10。
4.开始加热，加热时间一般为1-2小时，煎煮温度控制在100℃左右。
5.将提取液过滤，并将提取液中的小檗碱进行测定。
尽管煎煮提取法对于小檗碱的提取有较好的效果，但该方法有一定缺点，如提取时间过长，提取率低，会导致部分有效成分的流失等问题。
因此，研究人员不断尝试寻找更加高效、优质的提取方法。
二、小檗碱的纯化方法小檗碱的纯化方法主要分为溶剂沉淀、柱层析、高效液相色谱等方法，其中，溶剂沉淀法是用最为广泛的一种方法。
溶剂沉淀法是利用有机溶剂将混合物中小檗碱选择性地溶解，然后对溶液进行加热蒸发，使其缓慢冷却，在此过程中，小檗碱分子会重新排列，逐渐凝结形成晶体，从而实现对小檗碱的纯化。
溶剂沉淀法的操作步骤如下：1.将小檗碱提取液进行浓缩，获得浓缩提取液。
2.在浓缩提取液中，加入约2倍的醋酸乙酯，用过量的溶剂使得小檗碱选择性地溶解。
3.加热溶液，用一定量的醋酸盐水稍加冷却，然后加入特定的醇类溶剂，使得小檗碱动态平衡，从而排列得更加紧凑。
4.将溶液慢慢冷却，在此过程中，小檗碱分子逐渐凝结形成晶体。
5.将晶体过滤、洗净、干燥，最终获得小檗碱。
关黄柏中小檗碱提取工艺研究
关黄柏中小檗碱提取工艺研究摘要：随着中药资源及中草药制剂的和改善，博士研究者和本科学生们对中药中的活性成分如小檗碱的研究十分感兴趣。
本文介绍了关黄柏植物中小檗碱的提取工艺，该工艺包括水提取、乙醇提取、乙醇-水溶液提取和乙烯-水提取等四种提取方法，并且就每种提取方法的特点及其小檗碱提取效率进行了细致分析。
此外，本文还综合研究了不同提取条件对小檗碱提取效率的影响，并且总结出在所有提取条件下，乙烯-水提取较为理想，且可以得到较高纯度的小檗碱风产量，也是目前研究者们较为关注的提取方法之一。
关键词：关黄柏；小檗碱；提取工艺；提取效率1.言中草药是中国传统文化的重要组成部分，在中国文化史上占有重要地位。
近年来，随着中药资源及中草药制剂的发展和改善，博士研究者和本科学生们对中草药中的活性成分也有更深入的研究和了解，如具有抗癌、抗病毒、抗肿瘤、抗菌、抗腐蚀、抗脂质过氧化等作用的小檗碱，特别是被发掘的关黄柏植物中的小檗碱研究最为热门。
小檗碱是一种多糖醇类物质，主要存在于叶蜡中，含量可达20％，除了具有抗癌、抗病毒、抗肿瘤、抗菌、抗腐蚀、抗脂质过氧化等作用之外，其还能分解致癌物质，对抑制变态反应物产生和促进免疫力有益作用。
但是，小檗碱仅存在于关黄柏植物中，数量有限，因此，研究小檗碱的提取工艺十分重要。
2.料和方法本研究所用的实验材料包括针叶关黄柏（Pinus bungeana）植物提取页叶蜡，以及乙醇、石油醚、乙烯和水等四种常用提取剂。
2.2验方法本研究使用了四种提取工艺：水提取、乙醇提取、乙醇-水溶液提取和乙烯-水溶液提取，每种提取工艺都需要调整提取时间以及提取温度等参数，以便得到最佳提取效果。
2.2.1提取水提取的原理是通过水的溶胀作用，以水为提取剂，以常温作为提取温度，把小檗碱从叶蜡中差分开。
2.2.2 乙醇提取乙醇提取的原理是通过乙醇的溶解作用，以乙醇为提取剂，以室温作为提取温度，把小檗碱从叶蜡中差分开。
2.2.3 乙醇-水溶液提取乙醇-水溶液提取的原理是通过乙醇-水溶液的混合溶解作用，以乙醇-水溶液为提取剂，以室温作为提取温度，把小檗碱从叶蜡中差分开。
正交实验法优选黄连中盐酸小檗碱醇提工艺的研究
正交实验法优选黄连中盐酸小檗碱醇提工艺的研究陈程【摘要】用乙醇提取黄连中盐酸小檗碱,采用正交实验法优化工艺条件.结果表明,优选的醇提工艺条件为:50％乙醇提取3次,每次提取时间1.5h,3次加醇量分别8,6,6倍.该醇提工艺重现性和稳定性良好.【期刊名称】《应用化工》【年(卷),期】2014(043)003【总页数】3页(P483-484,487)【关键词】盐酸小檗碱;提取;乙醇;正交实验【作者】陈程【作者单位】西安医学院药学院,陕西西安710021【正文语种】中文【中图分类】TQ461;R284.2;R932黄连为毛莨科植物黄连的干燥根茎［1］。
盐酸小檗碱为黄连中含量最高的原小檗碱型生物碱，也是最重要的活性成分之一，具有抗炎、抗菌、抗癌，治疗糖尿病和心血管疾病，及抑制脂肪分化等多方面药理作用［2-3］。
盐酸小檗碱是一种季铵生物碱，其盐类在水中溶解度低，水提不能达到很好的提取效果［4］。
故本研究选用乙醇回流提取。
以盐酸小檗碱含量和干膏得率作为评价指标，采用正交实验法优选最佳醇提工艺。
1 实验部分1.1 材料与仪器黄连饮片，经西安医学院生药教研室鉴定为毛茛科植物黄连的干燥根茎;盐酸小檗碱(批号110733-200806);乙腈、甲醇均为色谱纯;水为双蒸馏水;乙醇、盐酸均为分析纯。
Waters 2695 高效液相色谱仪，Waters 2695 泵，Waters 2996 二极管阵列检测器，Empower2 色谱工作站;Fw-200 高速万能粉碎机;RE-52-05 旋转蒸发仪;梅特勒GB204 电子天平(万分之一)。
1.2 实验方法称取黄连药材9 份，每份10 g，分别按L9(34)正交表安排的方案进行提取，提取液备用。
测定并计算盐酸小檗碱含量和干膏得率。
正交实验因素水平见表1。
表1 因素水平Table 1 Factors and levelsA B C D水平乙醇浓度/% 提取时间/h 液固比/倍提取次数/次1 50 1.5 6，4，4 1 2 60 2.0 7，5，5 2 3 70 2.5 8，6，6 31.3 盐酸小檗碱HPLC 法检测1.3.1 色谱条件色谱柱为Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.05 mol/L 磷酸二氢钾溶液(50 ∶50，pH 调为4. 0)，检测波长345 nm，流速1.0 mL/min，柱温25 ℃。
黑果小檗果实的色素提取与纯化工艺
黑果小檗果实的色素提取与纯化工艺黑果小檗是一种具有药用价值的植物，其果实中含有丰富的色素成分，具有一定的抗氧化和抗肿瘤活性。
而果实中的色素提取与纯化工艺是利用化学方法将其从原料中分离出来，并通过一系列的处理步骤提高色素纯度和产量的过程。
一、色素提取工艺1. 原料处理：将新鲜的黑果小檗果实洗净、去除杂质，并切成小片。
可以根据需要选择使用酒精提取或水提取的方法。
2. 提取溶剂的选择：根据色素的溶解特性，选择合适的溶剂进行提取。
通常可以选择乙醇、丙酮、甲醇等溶剂。
3. 提取操作：将处理好的果实放入提取器中，加入适量的提取溶剂，进行浸泡提取。
提取时间一般为24小时以上，可以根据需要进行多次提取。
4. 滤液分离：将浸泡提取后的混合液进行过滤，分离得到的提取液中即含有目标色素。
5. 色素沉淀：将提取液进行浓缩，可以采用蒸馏或浓缩机进行浓缩操作，得到浓缩液。
6. 沉淀物的收集：将浓缩液进行离心或过滤操作，得到色素的沉淀，该沉淀即为目标色素。
二、色素纯化工艺1. 溶解：将色素沉淀溶解到适量的溶剂中，使其充分溶解。
2. 色素分离：采用色谱、盐溶液溶解、凝胶电泳等方法对溶解后的色素进行分离。
色谱分离是常用的方法，常见的有薄层色谱、柱层析等。
3. 分离液的收集：根据分离方法的特点，收集具有目标色素的分离液。
4. 溶剂去除：将分离液进行浓缩，去除其中的溶剂。
5. 结晶沉淀：根据溶剂的特性，进行结晶操作，得到色素的沉淀。
6. 沉淀物的洗涤：将色素沉淀物进行洗涤，去除其中的杂质。
可以使用水、酒精等溶剂进行洗涤。
7. 色素的干燥：将洗涤后的色素沉淀进行干燥，得到干燥的色素产品。
三、色素提取与纯化工艺的优化措施1. 原料选择：选择品质好、成熟度适中的原料进行提取，可以提高色素产量和纯度。
3. 提取条件的控制：调节提取时间、温度、酸度等条件，进行最佳工艺的确定。
4. 黑果小檗果实预处理：在原料切片前进行适当的预处理，如研磨、热处理等，有利于色素的提取。
小檗碱的提取和纯化
黄柏中小檗碱的提取和纯化实验目的：1.掌握小檗碱的提取工艺——石灰乳法；2.掌握小檗碱的纯化操作——柱色谱法；3.掌握小檗碱的鉴定方式——硅胶薄层色谱法；实验原理：小檗碱属于季铵碱，其游离型在水中的溶解度较大，而其盐酸盐在水中溶解度非常小。
故利用此性质，并结合盐析法，使小檗碱以沉淀形式析出，从黄柏皮中提取出小檗碱。
实验器材：1.仪器：烧杯、玻璃棒、纱布、层析柱、抽滤机、烘箱等；2.材料：黄柏皮、CaO粉末、水、NaCl、浓盐酸、95%乙醇、中性氧化铝、氯仿、甲醇等；实验内容：1.渗滤：①称取黄柏皮50 g，加适量的蒸馏水至没过黄柏皮（终体积可自行调整）；②加入质量为终体积1%调成水糊状的CaO粉末，并搅拌均匀，浸渍2 h或过夜；2.盐析：①收集渗漉液(八层纱布过滤1~2遍)；②加入渗漉液总体积20%的NaCl ，搅拌均匀，放置1-2 min；③使用抽滤机抽滤(或使用离心机代替3000 r/min,10 min)，收集沉淀；④将沉淀加少量水重悬，溶解于20倍体积的沸水中(总体积不宜超过100 ml)，趁热过滤！⑤滤液加浓盐酸调PH=1-2，静置5 min，抽滤（或离心），80℃烘干；3.柱色谱：①称取80-100 g中性氧化铝，用现配的95%乙醇调成水浆状；②装柱：柱子底端棉花要充分小，薄薄一层即可。
湿法装柱过程中避免气泡，保持柱液面水平。
装完后不断补加95%乙醇，让柱子压实至柱液面不在下降；③上样：柱液面留有少量液体（高度0.5 cm左右为宜），缓慢均匀上样，避免将柱面吹散。
照相备用；④用离心管收集黄色条带，做好标记；4.薄层色谱：①配置展开剂（氯仿：甲醇的比例可尝试9：1、8：2、7：3、6：4等）；②点样后，将硅胶薄层色谱板放到展开剂中后，待液体爬到距板前沿1-2 cm时，迅速拿出标记液面线和斑点位置，记录距离数据，照相备用；③计算比移值R f= a/b（数值=0.15-0.75之间适合）；实验要求：1.查阅文献，可采用不同分离方法：1）石灰乳法可分别使用NaOH 、Ca(OH)2、CaO粉末；2）醇提法3）超声提取法4）酸水法2.运用薄层色谱进行鉴定，可采用不同的展开剂及配比进行样品分离，通过调整展开剂极性，实现样品的良好分离，观察并比较展开效果，计算比移值。
含小檗碱类中草药总生物碱的提取工艺及其药理研究进展
*舒积成***（江西中医药大学 南昌 300004）广泛分布于多个科属植物中。
因此类生物碱具有多种药理活性，酶解、超临界萃取等，其药理作用报道有抗微生物、以期为今后对此类化合物进Coptis chinensis Franch.、芸香科黄柏Phellodendron chinense Schneid.、防已科黄藤Fibraurea recisa及小檗科三颗针Berberis wilsonae Hemsl.等植物最具代表。
因其广泛的药理作用和丰富的药用资源，对小檗碱类生物碱的关注日益增加，近年来有关其提取工艺及药理作用研究的文献不断增加。
为今后对此类化合物进行一步研究和开发利用，作者对近几年含有小檗碱类中草药总生碱的提取工艺及药理研究进行简要综述。
1 提取工艺1.1 醇提取法 因游离的生物碱及其盐均可溶于甲醇、乙醇，故可用醇回流渗漉、或浸渍法进行提取，此方法特点是对于不同存在形式的生物碱均可选用，且水溶性杂质较少，但乙醇提取物中脂溶性杂质较多。
该方法为目前实验室最为常用的提取方法之一。
应用此方法对总生物碱的提取，考虑的影响因素主要有4个：醇的种类及浓度、醇体积数、提取方式及提取时间。
根据文献报道，此方法提取工艺多以乙醇为溶媒，以10~15倍量的50%~80%醇溶液为常见浓度，多采用回流提取方式，提取时间1h 左右。
如刘鑫［2］以盐酸小檗碱含量为目标，采用正交试验设计优选黄连中盐酸小檗碱的提取工艺，以遗传算法全局优化结果，得到的最佳工艺为：13倍药材的50%乙醇，提取3次，每次1h。
高丽红等［3］采用紫外分光光度法测定黄柏提取物中总生物碱含量，对碱水提取法、乙醇提取法与酸水提取法的比较，得到黄柏总生物碱含量分别为0.93%、12.47%与0.34%，结果显示，乙醇提取黄柏总生物碱的提取率最高。
刘丽梅等［4］采用乙醇回流提取黄柏总生物碱，得到最佳提取工艺为：黄柏细丝2~3mm，10倍量75%乙醇回流提取3次，每次提取1.5h。
小檗碱提取工艺的研究
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探索新型提取方法
超临界流体萃取法
利用超临界流体的特殊性质，实现选择性萃取目标 成分。
微波辅助提取法
利用微波的加热作用，加速溶剂对目标成分的溶解 。
超声波辅助提取法
利用超声波的空化作用，破坏细胞壁，提高目标成 分的提取率。
提高提取效率的措施
增加溶剂浓度
增加溶剂浓度可以提高目标成分在溶剂中的溶 解度，从而提高提取率。
研究方法与实验设计
研究方法
采用实验研究的方法，通过对不同提取条件下的小檗碱提取率和产品质量进 行比较，筛选出最佳的提取工艺参数。
实验设计
选用不同溶剂（如水、乙醇等）、温度实验，并对其提取率和产品质量进行检 测和分析。
02
工业化生产。
05
小檗碱提取工艺的改进建 议
优化提取工艺流程
确定最佳提取溶剂
通过实验比较不同溶剂对小檗碱提取率的影响，选择最佳的提 取溶剂。
确定最佳提取温度和时间
通过实验研究温度和时间对小檗碱提取率的影响，确定最佳的提 取温度和时间。
确定最佳干燥方法
通过实验比较不同干燥方法对小檗碱提取率的影响，选择最佳的 干燥方法。
通过单因素实验考察了乙醇浓度、提取时间、温度和料液比等条件对小檗碱提取率的影响，并在此基 础上进行了正交试验，确定了最佳工艺条件。
小檗碱提取工艺的验证实验
结论：验证实验证实了优化后的小檗碱提取 工艺稳定可靠，可重复性好。
通过三批次的验证实验，证明了优化后的工 艺条件具有较好的重复性和可靠性，可用于
小檗碱提取工艺的研究
2023-10-27
目 录
• 引言 • 小檗碱提取工艺概述 • 实验材料与方法 • 实验结果与分析 • 小檗碱提取工艺的改进建议 • 结论与展望
藏药小檗皮防治糖尿病视网膜病变的研究思路探讨
藏药小檗皮防治糖尿病视网膜病变的研究思路探讨糖尿病视网膜病变是导致糖尿病患者失明的主要病因之一，早期防治是关键。
糖尿病是藏医药的特色优势病种，藏药小檗皮是藏医治疗糖尿病及眼病的重要药物之一。
该研究从藏医药对糖尿病及其视网膜病变（京尼萨库病及其眼病）的理论认识、用药经验中，发掘藏药小檗皮对糖尿病视网膜病变的用途，提出了藏药小檗皮防治糖尿病视网膜病变的研究思路。
标签：藏药；小檗皮；糖尿病视网膜病变；研究思路糖尿病视网膜病变（Diabetic Retinopathy，DR）是糖尿病（Diabetes Mellitus，DM）并发症中最严重的微血管病变之一。
世界卫生组织（www.who.int）2013 年3 月第312 号《实况报道·糖尿病》指出：“全世界逾3.47亿人患有糖尿病，糖尿病视网膜病变是失明的一种主要病因，它是视网膜小血管长期累积受损的结果，全球1%的盲症可归咎于糖尿病”。
视网膜微血管损伤是糖尿病视网膜病变典型的标志性病变[1]。
因此，减少新生血管的生成是目前治疗糖尿病视网膜病变最有效疗法。
但是，糖尿病视网膜病变的治疗较为困难，尚无一种有效的化学药物能早期预防和控制其发生、发展，这也是导致后期视功能丧失的重要原因，因此，着眼于早期有效阻断或缓解其发展进程，有助于防盲治盲、提高患者生存质量。
现报道如下。
1 藏医药理论对糖尿病视网膜病变的认识藏医药作世界传统医药宝库的重要组成部分，医学实践源远流长、特色鲜明、疗效独特。
早在公元750多年前，藏医药学就对糖尿病及其并发症的发生、发展有着深刻认识，并从饮食起居到药物治疗提出了较为完善的预防和治疗措施，糖尿病作为藏医药综合防治的特色优势病种，已被列入国家中医药管理局“十一五”重点专科（专病）建设项目。
藏医药理论对糖尿病视网膜病变没有具体的论述，但糖尿病视网膜病变等糖尿病并发症，属于藏医学的“京尼萨库”病（汉译：尿消症、糖尿病）的范畴，是由于饮食、起居等外缘因素使体内“隆”、“赤巴”和“培根”三者失去平衡[2]。
黄柏中小檗碱乙醇提取工艺优选
黄柏中小檗碱乙醇提取工艺优选
孙静;张俏;杜文娟;曹爱兰
【期刊名称】《现代中医药》
【年(卷),期】2009(0)3
【摘要】目的用正交试验法优选黄柏乙醇回流提取的最佳工艺。
方法采用高效液相色谱法,以小檗碱的提取率为评价指标,以正交试验法优选提取工艺参数。
结果影响黄柏提取工艺因数的顺序为提取次数>乙醇的浓度>提取时间>乙醇体积倍数,黄柏的最佳提取工艺为A1B2C2D2,即8倍量的55%乙醇回流提取2次,每次1.5小时。
结论提取次数、乙醇回流浓度是影响黄柏中小檗碱提取的主要因素,该工艺方法简单,适合工业化生产。
【总页数】2页(P76-77)
【关键词】黄柏;正交试验设计法;提取工艺
【作者】孙静;张俏;杜文娟;曹爱兰
【作者单位】陕西中医学院药学院;陕西省中药研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R284
【相关文献】
1.黄柏中盐酸小檗碱的闪式提取工艺研究 [J], 王玥;杜守颖;戴俊东;吴清;肖瑶;袁航;戎堃;李慧云;赵静宜
2.川黄柏中盐酸小檗碱提取新工艺的研究 [J], 赵伟杰
3.体育运动中闭合性软组织损伤的中药软膏制剂初步研究——黄柏中盐酸小檗碱的提取工艺的实验研究 [J], 张扬;
4.酸性乙醇提取黄柏中小檗碱的工艺优化 [J], 李雪红
5.正交设计优选黄柏中小檗碱的提取工艺 [J], 邢俊波;刘云
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黄柏中小檗碱的提取工艺优化及其对植物病原菌的抑制作用
Ｏｐ ｉ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｔ ａ ｔｏ ｃ ｎ ｌ ｇ ｏ ｒ ｅ ｉ ｅ ｉ ｒ ｅ ｔｍ ｚ ｔ ｆＥｘ ｒ ｃ ｉ ｎ Ｔｅ ｈ ｏ ｏ ｙ ｆ ｒ Ｂｅ ｂ ｒ ｎ ｎ Ｃｏ ｔ ｘ ｏ
ｔ ｔ ｎ，ｅ ｔ ｃｉ ｇ ｔ ｓ ｅ ｅ ａｕ ｅ ａ ｄ ｐ ｖ ｌ ｅｂ ｒ ｏ ｏ ａ ｅ ｉｎ ａ ｄ ｔ ｅ ｂ ｒ ｅ ｉ ｅ ｃ ｎ ｅ ｔ ｓｄ ｔ ｃ ｒ ｉ ａｏ ｘ ｒ ｔ ｉ ａ ｎ ｍｅ ，ｔｍｐ ｒ ｔ ｒ ｎ Ｈ ａｕ ｙ ｏ ｈ ｇ ｎ ｌ ｓ ｎ ｅ ｂ ｒ ｏ ｔｎ ｅｅ — ｔ ｄ ｇ ｈ ｎ ｗａ
黄 柏 系 芸 香 科 植 物 黄 皮 树 （ ｈｌ ｄｎ ｒｎ Ｐ ｅｏ ｅｄｏ ｌ ｃｉｅｓ Ｓ ｈ ｅ ． 或 黄 檗 （ ｈｌ ｄｎ ｒｎａ ｒ ｓ ｈｎｎｅ ｃ ｎ ｉ ） ｄ Ｐ ｅ ｏ ｅｄｏ ｍｕｅ ｅ ｌ ｎ
ｔｄ ｂ ｐｅ ｔｏ ｏｏ ｔｉ ｔ ｄ．Ｔｈ ｎ ｂ ｔｏ ｆｅ ｔｏ ｘｒ ｃ ｎ ｆｕ ｐ ｃｅ ｆｐ ａ ｔｐ ｔ ｇ ｎ ｒ － ｅ ｙ ｓ ｃｒ ｐｈ ｔ ｍｅｒｃ ｍｅｈｏ ｅ ｉ ｈｉｉｉｎ ｅｆｃ ｆｅ ｔａ ｔｏ ｏ ｒ ｓ ｅ ｉｓ ｏ ｌｎ ａｈｏ ｅ ｓ ｗｅ ｅ ｄｅ
要： 采用正交试验设计 ， 研究了 乙醇浓度 、 提取次数 、 温度和 ｐ Ｈ值 ４个 因素对黄柏 中小檗碱 提取率
的影响 ， 过分光光度 比色法 ， 通 测定小檗 碱含量 。采用 药物平 板稀 释法测定 提取液对 不 同菌 种 的抑制作 用。
结果表 明， 黄柏 中小檗碱 的最佳提取条件 为 ： ４ ￣ ， ｐ ． ７ ％乙醇溶液提取 ２次。在最 佳提取条 在 ０Ｃ下 用 Ｈ ４０的 ０
藏药小檗皮的质量标准研究
藏药小檗皮的质量标准研究为建立藏药小檗皮的质量标准，提高其质量控制水平，该研究参照《中国药典》2010年版附录相关方法，测定小檗皮药材的水分、灰分和浸出物的含量；以主要有效成分木兰花碱、药根碱、巴马汀、小檗碱为指标，分别采用薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）进行定性鉴别和含量测定研究。
结果该药材的TLC鉴别斑点清晰、分离度较好；18批药材的测定结果表明水分为8.39%～12.23%，总灰分为4.50%～9.96%，酸不溶性灰分为0.10%～0.69%，浸出物为20.62%～37.13%，药材中木兰花碱、药根碱、巴马汀、小檗碱的平均质量分数分别为5.98%，0.63%，0.30%，2.50%。
该研究所建立的方法准确可靠，可用于小檗皮药材的质量控制和质量评价。
标签：小檗皮；质量标准；木兰花碱；药根碱；巴马汀；小檗碱[Abstract]In order to establish the quality standard of Berberidis Cortex and improve its quality control level，water，total ash，acid-insoluble ash and alcohol-soluble extract were determined according to procedures recorded in the Chinese Pharmacopoeia （2010 edition）. The qualitative and quantitative analyses were performed by thin layer chromatography （TLC）and high performance liquid chromatography （HPLC）methods. The results showed that TLC identification had a good resolution with clear spots. The water content was 8.39%-12.23%；total ash was 4.50%-9.96%；acid-insoluble ash was 0.10%-0.69%，and the alcohol-soluble extraction was 20.62%-37.13%. The average contents of magnoflorine，jatrorrhizine，palmatine，and berberine in Berberidis Cortex were 5.98%，0.63%，0.30%，2.50%，respectively. It was concluded that the developed method was accurate and good in specificity，which can be used for quality control of Berberidis Cortex in the future.[Key words]Berberidis Cortex；quality standard；magnoflorine；jatrorrhizine；palmatine；berberine藏药小檗皮始载于《四部医典》，藏文译音“吉尔哇”、“杰星”、“给尔驯”等。
小檗碱提取工艺的研究
小檗碱提取工艺的研究引言小檗碱是一种常见的药用单体成分，具有抗菌、抗炎和抗肿瘤等多种药理活性。
因此，小檗碱的提取工艺研究具有重要的理论和实际意义。
本文旨在探讨小檗碱提取工艺的研究进展，包括提取方法、影响因素以及优化条件等。
1. 小檗碱的提取方法小檗碱的提取方法通常包括传统的水煎、乙醇提取、超声波辅助提取和超临界流体提取等。
1.1 水煎提取法水煎提取法是传统的小檗碱提取方法之一。
该方法将小檗皮或小檗根研磨成粉末，与水按一定比例混合后，在高温条件下煮沸一定时间。
然后通过过滤、浓缩和干燥等步骤，得到小檗碱的提取物。
1.2 乙醇提取法乙醇提取法是一种常用的小檗碱提取方法。
该方法将小檗碱的原料与乙醇按一定比例混合，然后通过浸提、超声波辅助提取或连续提取等方式，将小檗碱提取出来。
最后，利用蒸馏和浓缩等工艺步骤，得到纯净的小檗碱。
1.3 超声波辅助提取法超声波辅助提取法是一种非常有效的小檗碱提取方法。
该方法利用超声波的震荡作用，加速小檗碱与溶剂之间的质量传递过程。
通过调节超声波的频率、功率和时间等参数，可以提高小檗碱的提取效率和产率。
1.4 超临界流体提取法超临界流体提取法是一种新兴的小檗碱提取方法。
该方法利用超临界流体的特殊性质，如强溶解性、可调节的密度和温度等，将小檗碱从原料中提取出来。
超临界流体通常选用二氧化碳、乙烷或丙烷等作为溶剂。
2. 影响小檗碱提取的因素小檗碱的提取受多种因素的影响，包括原料性质、溶剂选择、提取温度和时间、提取方式等。
2.1 原料性质小檗碱的提取效果与原料的性质密切相关。
原料的研磨程度、颗粒大小和水分含量等因素都会影响提取效果。
因此，在进行小檗碱提取实验时，需要注意选择适宜的原料品质。
2.2 溶剂选择溶剂选择对小檗碱提取效果有着重要的影响。
一般来说，乙醇、丙酮和乙酸乙酯等有机溶剂具有较好的提取性能。
同时，溶剂的极性和溶剂与原料之间的相容性也是选择溶剂时需要考虑的因素。
2.3 提取温度和时间提取温度和时间是影响小檗碱提取效果的重要因素。
一种治疗儿童肠炎藏药的制备方法[发明专利]
![一种治疗儿童肠炎藏药的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/aa86c13b5022aaea988f0f18.png)
专利名称：一种治疗儿童肠炎藏药的制备方法专利类型：发明专利
发明人：久美彭措
申请号：CN201610041053.7
申请日：20160122
公开号：CN105497649A
公开日：
20160420
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种治疗儿童肠炎藏药的制备方法，是由止泻木子、小檗皮、牛黄、人工牛黄、西红花、红花、天竺黄按一定重量配比采用混合粉碎法或水提醇沉法或醇提水沉法制成活性组分制备而成，可以制备成任何一种常用内服剂型。
这种藏药具有清热解毒，消炎止痒，干黄水的功效。
用于尿道感染，皮肤病，肺炎，肝炎，胆囊炎，儿童肠炎等疾病。
申请人：久美彭措
地址：810003 青海省西宁市生物科技产业园经三路18号
国籍：CN
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黑果小檗果实的色素提取与纯化工艺
黑果小檗果实的色素提取与纯化工艺植物中的生物活性成分是重要的药物资源。
黑果小檗（Berberis aristata DC.）是一种广泛分布于中国和印度的植物，其果实富含多种生物活性成分。
其中，色素是一类具有很高应用价值的成分，如黄烷酮类、花色素类和类胡萝卜素等。
因此，本文旨在探讨黑果小檗果实色素的提取纯化工艺。
一、提取工艺1.1 原料准备采用新鲜的黑果小檗果实为原料。
将果实清洗干净，晾干至水分含量少于10%。
1.2 提取溶剂的选择不同类型的色素具有不同的极性，因此提取时应选择适合的溶剂。
以乙醇和水为例，乙醇可提取非极性色素，水可提取极性色素。
1.3 提取工艺将晾干后的果实粉碎并筛选成粒度均匀的细粉末。
将细粉末短时间置于提取溶剂中反复搅拌，过滤并浓缩后即可得到黑果小檗的色素提取物。
二、纯化工艺2.1 色素分离将色素提取物通过硅胶柱层析进行分离。
先在硅胶柱中填充100-200目的硅胶，再将提取物溶于适当的溶剂中注入硅胶柱，以此作为静态相和动态相。
逐步加入更加极性的溶剂，逐步淘洗，即可将不同极性的色素分离。
色素的纯化通常采用薄层色谱法。
将硅胶柱中分离出的色素涂于薄层色谱板上，在适当的蒸发剂条件下进行薄层展开。
通过观察板上的色素 spots 号检测，确定目标色素，并进行适量的选区。
将选区样品溶于适宜的溶剂中，过滤后即可得到纯色素。
对纯化后的色素进行理化性质、光谱性质等质量分析，以确保其质量可靠。
三、结论本文针对黑果小檗果实色素的提取和纯化工艺进行了研究。
通过实验确定，以乙醇和水为提取溶剂可以获得高质量的提取物；通过硅胶柱层析和薄层色谱法分离和纯化色素，得到了高纯度的色素。
本研究结果拓展了黑果小檗果实色素的应用领域，为该种植物的开发利用提供了一定的科学依据。
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藏药小檗皮的醇提工艺优化研究目的：优化小檗皮的醇提工艺。
方法：以小檗皮中木兰花碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱含量和浸膏量为评价指标，采用均匀设计-综合评分法考察乙醇用量、乙醇体积分数、提取时间对提取工艺的影响；采用3次均匀设计试验分别对第1次、第2次、第3次的提取工艺进行考察，分别确定3次提取试验各自的优化工艺并进行验证试验，计算转移率。
结果：最优工艺为取小檗皮粗粉加入15倍量75%乙醇，回流提取2次，每次提取120 min 。
验证试验中，小檗皮按优化工艺提取2次后木兰花碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量分别为58.96、4.82、3.07、23.29 mg/g，转移率分别为93.85%、95.02%、96.28%、94.88%（RSD分别为3.87%、2.64%、4.00%、3.91%，n=3）。
结论：优化的小檗皮乙醇回流提取工艺合理、可行，稳定性好。
ABSTRACT OBJECTIVE：To optimize extraction technology of cortex of Berberis dictyophylla by ethanol. METHODS：Using the contents of magnoflorine，jatrorrhizine hydrochloride，palmatine hydrochloride and berberine hydrochloride，the amount of extract as evaluation indexes，the effects of ethanol amount，volume fraction of ethanol and extraction time on extraction technology were investigated by uniform design method-comprehensive scoring method. The extraction methods of first time，second time and third time were investigated by 3 times of uniform design test. The optimal schemes of 3 times of extraction test were determined and validation test was conducted，and the transfer rates were calculated. RESULTS：The optimal technology was as follows as coarse powder of cortex of B. dictyophylla，15-fold 75% ethanol，extracting for 2 times，120 min each time. In validation test，the contents of magnoflorine，jatrorrhizine hydrochloride，palmatine hydrochloride and berberine hydrochloride were 58.96，4.82，3.07，23.29 mg/g after B. dictyophylla was extracted by optimization technology for 2 times. The transfer rates were 93.85%，95.02%，96.28%，94.88%，respectively （RSD=3.87%，2.64%，4.00%，3.91%，n=3）. CONCLUSIONS：The optimal ethanol reflux extraction technology of cortex of B. dictyophylla is reasonable and feasible with good stability.KEYWORDS Tibetan medicine；Cortex of Berberis dictyophylla；Ethanol extract；Uniform design method；Extraction technology小檗皮为小檗科植物刺红珠（Berberis dictyophylla Franch.）及同属多种植物茎或根的干燥内皮，为常用藏药材（藏药名：吉尔巴[1-2]）。
《晶珠本草》记载：“小檗皮，功效解毒，治瘟疫，眼病”，即可用于治疗黄水病、眼病、肾炎等疾病[3]。
小檗皮主要化学成分有小檗碱、药根碱、巴马汀、木兰花碱等生物碱类成分。
药理研究表明，生物碱类成分具有明显的降血糖作用，对糖尿病及其并发症（如糖尿病视网膜病变）等有良好的防治效果[4-5]。
針对小檗皮提取工艺，吴秦西等[6]前期开展了基于藏医传统用药方法（小檗膏）的提取工艺（水煎煮法）研究，但其以柱色谱-紫外分光光度法测定盐酸小檗碱含量并将其代表总生物碱的含量，难以反映各主要生物碱成分的提取率；另有研究[7]发现，水煎煮法制备的小檗膏中盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的提取率均低于40%，且未测定其中含量最高且具有活性作用的木兰花碱的含量。
笔者前期研究的结果表明，不同体积分数的乙醇可以明显提高小檗碱等生物碱的提取率。
为全面提取出小檗皮中的活性成分，笔者参考北美黄连提取物标准及制法（70%乙醇提取物）[8]及小檗皮质量标准中的含量测定方法[9]，以小檗皮中4个主要生物碱类有效成分含量和浸膏量为指标，采用均匀设计-综合评分法优化小檗皮的醇提工艺参数，为小檗皮现代制剂的研发提供参考。
1 材料1.1 仪器Agilent1260型高效液相色谱（HPLC）仪（美國Agilent公司，包括在线脱气机、G1322A型四元泵、G1329A型自动进样器、HT-340K型柱温箱、G1315D 型二级管阵列检测器）；KQ-50B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；CPA225D型电子天平（德国赛多利斯公司）；ULUP-I-10T型超纯水机（成都超纯科技有限公司）；W201型恒温水浴锅（上海申顺生物科技有限公司）。
1.2 药材、对照品与试剂小檗皮药材，产地西藏（批号：20141201），由西藏甘露藏药厂提供，为藏医临床使用的“白小檗”，经成都中医药大学民族医药学院赖先荣副研究员、范刚副研究员鉴定为小檗科植物刺红珠的干燥茎内皮，符合六省区藏药标准小檗皮药材项下的有关规定[2]，薄层色谱检出与盐酸小檗碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、木兰花碱对照品对应的色谱斑点。
木兰花碱对照品（四川赛因斯特生物科技有限公司，批号：MUST-14122416，纯度：99.77%）；盐酸药根碱对照品（批号：110733-201108，供含量测定用）、盐酸巴马汀对照品（批号：110732-201309，供含量测定用）、盐酸小檗碱对照品（批号：110713-201212，供含量测定用）均来源于中国食品药品检定研究院；磷酸、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果2.1 生物碱的含量测定参考文献方法[9]进行测定。
2.1.1 色谱条件色谱柱：Capcell Pak C18-MG ⅡS5（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸（B），梯度洗脱（0～10 min，14%～18%A；10～15 min，18%～23%A；15～20 min，23%～26%A；20～35 min，26%～26%A）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：270 nm；进样量：10 μL。
2.1.2 混合对照品溶液的制备分别精密称取木兰花碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱对照品13.42、10.20、11.06、10.00 mg，分别置于25、50、100、25 mL量瓶中，加入甲醇使其溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为0.537、0.204、0.110 6、0.400 mg/mL的4种对照品贮备液。
分别精密量取上述各贮备液2、0.5、0.5、1 mL，置于同一10 mL量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，制成木兰花碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱质量浓度分别为107.40、10.20、5.53、40.00 μg/mL的混合对照品溶液。
2.1.3 供试品溶液的制备精密量取“2.3”项下小檗皮提取液适量（分别取第1次、第2次和第3次提取液1、4、10 mL），置于50 mL量瓶中，加入溶剂[盐酸-70%甲醇溶液（3 ∶100，V/V）]稀释并定容，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2.1.4 系统适用性和专属性试验分别吸取供试品溶液、混合对照品溶液和溶剂各10 μL，进样，记录色谱图。
结果表明，供试品溶液中4种成分的色谱峰与相邻成分的色谱峰均可实现基线分离，其他成分对测定无干扰。
理论板数以盐酸小檗碱峰计不少于5 000，目标成分与相邻峰间的分离度均大于1.5。
色谱图见图1。
2.1.5 标准曲线的绘制分别吸取“2.1.2”项下混合对照品溶液2、4、6、8、10、12 μL，进样，记录色谱图，分别以4种成分的进样量为横坐标（x）、峰面积为纵坐标（y）进行线性回归，得4种成分木兰花碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的线性方程分别为y=2 016.9x+14.357（r=0.999 6）、y=4 207.6x-0.386 7（r=0.999 3）、y=4 448.9x-1.971 4（r=0.999 9）、y=3 909.9x-7.071 4（r=0.999 5）。
结果表明，4种成分进样量线性范围分别为0.214 8～1.288 8、0.020 4～0.122 4、0.011 1～0.066 3、0.080 0～0.480 0 μg。
2.1.6 定量限考察取“2.1.2”项下混合对照品溶液适量，倍比稀释，连续进样测定6次，记录色谱图。
当信噪比为10 ∶1时计算得定量限。
结果，木兰花碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的定量限分别为2.685、2.040、2.760、4.000 ng。
2.1.7 精密度考察分别吸取“2.1.2”项下混合对照品溶液，于同日内分别连续进样6次，记录色谱图。
结果，木兰花碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱峰面积的RSD分别为0.20%、0.68%、0.34%、0.33%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.1.8 稳定性考察精密吸取同一提取液（第1次提取的5号提取液），制备成供试品溶液后分别于室温下放置0、5、10、15、20、24 h进样，记录色谱图。