仪器分析-高效液相色谱法

二、进样系统
六 通 阀
六通阀可保证样品进样量准确，因此可以直接采用 标准曲线法进行定量分析。
六通阀
自动进样器
三、分离系统
包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。
➢ 外壳材质：多为内壁抛光的 不锈钢
➢ 内径：1~5mm ➢ 长度：30mm~300mm（比GC短
的多，why？） ➢ 填料：3~10 μm ，5 μm常用
流动相和固定相均为液体。 原理：分配系数不同（与液液萃取相同）
➢ 固定相：由载体和固定液组成 ➢ 流动相：为避免固定液流失，流动相对固定相的溶解度尽可
能小。 如何防止固定液流失？
方法一: 抑制柱
在分析柱之前，加一根与分析柱有相同固定液的预 处理柱：
流动相预先通过预处理柱，以便使流动相预先被 固定液饱和，而使分析柱的固定液不受损失
❖ 高效液相色谱与经典液相色谱 高压泵、高效固定相、高灵敏检测器 特点： 高速、高效、高灵敏、高自动化
❖ 高效液ຫໍສະໝຸດ Baidu色谱与气相色谱 GC只能分离低沸点、高温稳定物质（占有机物20％） GC的流动相对组分没有亲和力 GC一般需在高温下进行
高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 记录系统
高效液相色谱仪
固定相分类
❖ 刚性固体以二氧化硅为基质，可承受 7.0108~1.0109Pa的高压。在表面键合各种官能团， 可扩大应用范围，它是目前最广泛使用的一种固定相。
❖ 硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱。由聚苯乙烯 与二乙烯苯基交联而成，可承受压力上限为3.5108Pa。
四、检测器
检测器是液相色谱仪的关键部件之一。要求： ➢ 灵敏度高 ➢ 重复性好 ➢ 线性范围宽 ➢ 死体积小 ➢ 对温度和流量的变化不敏感等
4、电导检测器：离子色谱法
Shodex CD-200电导检测器
5、附属系统
它包括脱气、梯度淋洗、恒温、自动进样、馏分 收集以及数据处理等装置。其中梯度淋洗装置是高压 液相色谱仪中尤为重要的附属装置。
高效液相色谱根据分离机理不同，可分为以下几 种类型： ▪ 液液分配色谱法 ▪ 液—固吸附色谱法 ▪ 离子交换色谱法 ▪ 尺寸排阻色谱法 ▪ 亲和色谱法
❖ 非极性物质为固定相，而极性溶剂为流动相的液液色谱 称为反相分配色谱，非极性化合物。
流出顺序如何？ 改变流动相性质对分离过程有和影响？
▪ 正相分配色谱以极性物质作为固定相，故极性大的组 分与固定相的作用力强（分配系数越大），保留时间 长。
▪ 反相分配色谱以非极性物质作为固定相，故极弱的组 分与固定相的作用力强，保留时间长。
类似气相色谱中的程序升温。
液固色谱法是根据各组分在固定相上的吸附能力的 差异进行分离，故也称为液固吸附色谱。
1、液固色谱法固定相 极性：硅胶、氧化铝、氧化镁、硅酸镁、分子筛及 聚酰胺 非极性：活性炭。
2、液-固吸附色谱流动相 选择基本原则是 极性大的试样用极性较强的流动相， 极性小的则用低极性流动相。
紫外检测器（分析型）UV501
2、荧光检测器： 灵敏度高，适用范围有限。
Jasco 821-FP Intelligent Spectrofluorometer 高效液相色谱荧光检测器
3、示差折光率检测器
几乎所有物质都有各自不同的折射率，因此差示 折光检测器是一种通用型检测器。灵敏度可达107g·cm-3。主要缺点是对温度变化敏感，并且不能用 于梯度淋洗。
二价离子的顺序为： Ba2+＞Pb2+＞Sr2+＞Ca2+ ＞Cd2+＞Cu2+，Zn2+ ＞ Mg2+
对于季铵型强碱阴离子交换树指，各阴离子的选择性顺 序为： ClO4-＞I-＞HSO4-＞SCN-＞NO2-＞Br-＞CN-＞Cl-＞ BrO3- ＞ OH- ＞ HCO3- ＞ H2PO4- ＞ IO3- ＞ CH3COO － ＞F-
➢ 溶质性检测器 对被分离组分的物理或物理化学特性有响应。 (紫外、荧光、电化学检测器)
➢ 总体检测器 对试样和洗脱液总的物理和化学性质响应。 (示差折光检测器)
1、紫外检测器： 应用最广泛
池体积: 1～10μL 光程常: 2～10 mm 窗 口: 石英 波长: 固定波长 254 或280nm
可调波长
排阻色谱法也称空间排阻色谱或凝胶渗透色谱法，是 一种根据试样分子的尺寸进行分离的色谱技术。体积大 的分子不能渗透到凝胶的空穴中，较早流出色谱柱。按 分子量从大到小的顺序流出。 特点： （1）保留时间是分子尺寸的函数，有可能提供分子结构的
缺点：麻烦 不能采用梯度洗脱技术
方法二: 化学键合固定相
通过化学反应把各种不同的有机基团键合到硅胶 （载体）表面的游离羟基上，代替机械涂渍的液体固 定相。
还可大大改善了固定相的功能。 将固定液以Si-O-R键合在SiO2载体表面
❖ 以极性物质作为固定相，非极性溶剂作流动相的液液色 谱，称为正相分配色谱，适合于分离极性化合物；
以反相分配色谱为例： 反相色谱通常用于弱极性组分的分离，当流动相的
极性变弱时，组分与固定相的极性变弱（分配比变小）， 保留时间减小。
流动相 极性变弱
固定相 流动相
固定相 流动相
在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂， 按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相 的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，提高分 离效果，缩短分析时间。
1. 溶剂贮存器: 玻璃、不锈钢或氟塑料。 2. 高压输液泵: 将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连
续不断地送入液路系统。
Waters 515高压输液泵
（1）合适的极性和良好的选择性。 （2）溶剂与检测器匹配。 （3）高纯度 （4）化学稳定性好 （5）低粘度（粘度适中）
常用的流动相有：水、甲醇、乙腈、四氢呋喃等 使用前通常需要超声脱气。
离子交换色谱以离子交换树脂为固定相，树脂上具有 固定离子基团及可交换的离子基团。
根据组分离子对树脂亲合力不同而得到分离。
阳离子交换： R—SO3-H++M+
阴离子交换： R—NR3 + Cl-+X-
R—SO3-M ++H+ R—NR3+X-+Cl-
一般形式： R—A＋B
R—B＋A
对按以于下典顺型序的：磺酸型阳离子交换树脂，一价离子的KB/A值 Cs+＞Rb+＞K+＞NH4+＞Na+＞H+＞Li+