实验五 细菌的分离、接种和培养

实验五：细菌的分离、接种和培养

一、实验目的：

熟悉从环境（土壤、水体、活性污泥等）中分离培养细菌的方法，掌握以下几种细菌纯培养过程中所涉及的各种技能：

（1）倒平板；

（2）细菌纯种分离：稀释平板分离法和平板划线法；

（3）接种技术：斜面接种技术、稀释平板涂布法等；

（4）无菌操作技术。

并了解不同的微生物在固体培养基中的生长特征。

二、实验原理

在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。

为了获得某种微生物的纯培养。一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。

三、实验试剂与器材

1.牛肉膏蛋白胨培养基；

2.试管、三角烧瓶、培养皿；

3.接种环，土样，酒精灯等。

四、操作步骤

1.每组配牛肉膏蛋白胨培养基200 mL，放在三角瓶中，加热溶解后取5 mL加至试管中，

每人做一支试管。其配方如下: 牛肉膏3 g、蛋白胨l0g、NaCl 5 g、琼脂15—20 g、水1000 mL、pH 7.4—7.6

2.每组包10个培养皿，待灭菌。

3.将试管、空的培养皿、剩余的培养基以及10 mL蒸馏水放入高压灭菌锅灭菌于121 o C

下20 min。

4.倒平板：在无菌操作台上，将加热融化的牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，并标明培养基的

名称。

5.在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口径2-3厘米的

位置。

6.待培养皿和试管中的培养基冷却凝固后，点燃酒精灯。

7.接种。

取接种环：右手拿接种环(如握钢笔一样)、在火焰上将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部分，均用火烧过灭菌。

环冷却：将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触边壁，使其冷却。

取菌种：待环冷却后轻轻沾取经稀释10倍的土壤悬液-环，然后将接种环移出菌种管，注意不要使环的部分碰到管壁，取出后不可使环通过火焰。

接种：在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环在平板上划线。划线的方法很多，但无论哪种方法划线，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使形成单个菌落。常用的划线方法有下列二种：

(1)用接种环以无菌操作挑取土壤悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线

3-4条，再转动培养皿约70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次

划线部分作第二次平行划线，再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线

和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线(图A)。划线完毕后，盖上皿盖，倒

置于37℃温室中培养。

(2)将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线(图B)。划线完毕后，盖上皿盖，

倒置温室培养。

环灭菌将接种环烧红灭菌。

5.培养1周后观察。

四、注意事项:实验操作过程中无菌操作。

五、思考题

1. 简述无菌操作过程中的注意点。