实验五 细菌的分离、接种和培养
实验五 微生物的分离、接种及培养法
实验五微生物的分离、接种及培养法一目的要求1.掌握倒平板的方法、划线分离法、稀释平板分离法和菌落（活菌）计数法。
2.熟练掌握微生物的接种技术，学会微生物的一般培养方法和无菌操作技术。
二实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的分离方法有： 1) 平板划线分离法；2）稀释平板分离法。
在食品发酵工业中，通过微生物的分离、纯化，选育优良的微生物菌种，以提高产品的质量和产量；在食品卫生管理方面，需要进行微生物检测，必须将微生物单一分离出来，加以鉴别和研究。
土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
微生物的分离和接种是微生物学中重要的技术之一，需要严格的无菌操作，否则使得微生物实验毫无意义。
三实验材料1.菌种：葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母菌、毛霉、曲霉、青霉等含菌样品。
2.培养基：肉汤蛋白胨培养基（斜面、平板）、肉汤蛋白胨液体培养基、蔡氏琼脂培养基（斜面、平板）。
3.土壤（自带）或其他物品；无菌水，无菌培养基，无菌吸管，无菌三角瓶等。
四实验内容与步骤（一）微生物的分离技术1. 平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，以获得单个菌落，从而达到分离的目的。
具体方法如下：倒制平板→制备含菌样品稀释液→划线→倒置适温培养→观察记录（1)倒制平板：将固体培养基熔化→冷却至 50-55℃→注入培养皿内 15ml（无菌操作）→旋匀→静置凝固→即成平板→在皿盖边贴标。
（2)含菌样液制备：样品少许（1-10g），加入盛有无菌水的试管内，摇匀，制成菌悬液即可，能直接划线的样品（如体液、黏液、污水等），可省去这操作。
（3)划线：左手持平板，接种环经灼烧灭菌后，以无菌操作取样，迅速将接种环伸入培养皿，轻轻划线（切勿把平板表面划破）。
然后将培养皿倒置放入恒温培养箱37℃，培养24-48 小时，观察平板上出现的现象，注意菌落的形状，并做记录。
细菌的分离培养与纯培养实验报告
细菌的分离培养与纯培养实验报告一、实验目的本实验旨在掌握细菌的分离培养方法，了解纯培养的原理及方法，以及熟悉细菌培养基的制备和使用。
二、实验原理1. 细菌分离培养方法细菌分离培养是指将混合菌落中的单一细菌分离出来，使其在无竞争的环境中独立生长。
常用的方法有均匀涂布法、斜坡涂布法和点式涂布法。
2. 纯培养原理及方法纯培养是指将混合菌落中同一种细菌分离出来并进行单独培养。
常用的方法有挑选法和稀释法。
3. 细菌培养基制备与使用细菌培养基是供给微生物生长发育所需营养物质和条件的一种人工环境。
根据不同需求可制备不同类型的细菌培养基，如寒偏好性、厭氧性、选择性、差异性等。
常用的细菌培养基有普通营养琼脂平板、LB 平板等。
三、实验步骤1. 细菌分离培养（1）取一支无菌的铂丝，将其消毒并冷却。
（2）取一份混合菌落，将铂丝在其表面轻轻刮几下，使细菌附着在铂丝上。
（3）将铂丝均匀涂布于琼脂平板上。
（4）重复以上步骤，涂布多个琼脂平板。
（5）将琼脂平板放置于恒温箱中，在适宜的温度下培养。
2. 纯培养（1）取一份混合菌落，在显微镜下观察并挑选出同一种细菌。
（2）取一支无菌的铂丝，在混合菌落表面轻轻刮几下，使细菌附着在铂丝上。
（3）将铂丝均匀涂布于琼脂平板上，并进行单独培养。
3. 细菌培养基制备与使用（1）按照需要制备不同类型的细菌培养基，并进行消毒灭菌处理。
（2）将需要进行分离或纯化的混合菌落均匀涂布于培养基上，进行培养。
四、实验结果1. 细菌分离培养经过适当时间的培养后，可看到琼脂平板上出现单一的细菌菌落。
2. 纯培养经过适当时间的培养后，可看到琼脂平板上只有挑选出的同一种细菌菌落。
3. 细菌培养基制备与使用制备好的细菌培养基可用于分离、纯化和大量繁殖特定细菌。
五、实验注意事项1. 实验器材需消毒并严格无菌操作。
2. 均匀涂布法需注意铂丝在琼脂平板上均匀涂布。
3. 液体培养基需注意摇晃均匀以使细菌均匀分布。
4. 实验结束后要彻底清洗和消毒实验器材和工作台面。
(优选)实验五培养基的使用特点和微生物接种方法
2. 富集培养
富集培养是微生物学家最强有力的技术手段之一。营养和生 理条件的几乎无穷尽的组合形式可应用于从自然界选择出特 定微生物的需要。
常用的选择培养基
S.S琼脂（沙门氏菌、志贺氏菌分离用培养基）
组成成分：乳糖、胆盐、柠檬酸铁、柠檬酸纳、煌绿、 中性红、硫代硫酸钠等，强选择性抑制大肠杆菌，分 离沙门菌 煌绿、胆盐、柠檬酸纳抑制非肠道菌 大肠杆菌分解乳糖而产酸，使胆盐析出，菌落中 心浑浊呈深红色，柠檬酸铁可使产生硫化氢的菌 落呈黑色 硫代硫酸钠缓和胆盐对沙门氏菌的有害作用，中 和煌绿、中性红的毒性，使大肠杆菌的红色菌落 更加鲜艳
三糖铁琼脂或克氏双糖铁
三糖铁琼脂含有乳糖、蔗糖、和葡萄糖，蔗糖：区别普
通变形杆菌（＋）、沙门氏菌（-）
克氏双糖铁成分 蛋白胨； 牛肉膏 ； 酵母膏 ；乳糖 ；
葡萄糖； 氯化钠 ； 柠檬酸铁铵 ；硫代硫酸钠 ； 琼脂 ； 酚红为指示剂，黄色为产酸，红色为产碱
观察克氏双糖接种后斜面、底层产酸、产气、产H2S的情 况，通常大肠杆菌斜面不产酸、底层产酸产气、不产H2S
今天的实验
菌种：大肠杆菌、沙门菌、青霉 采用无菌操作进行移植 学会分区划线 所有平皿和试管必须有标记 18－24小时（真菌下周观察）观察试验结
果，描述固体培养和液体培养的细菌培养 特征
步骤
两个人为一组，一个接种大肠杆菌，一个 接种沙门菌
LB液体移植 普通琼脂：分区划线 麦康凯：分区划线 半固体：穿刺 克氏双糖：先穿刺后接种斜面
三、选择培养分离
1. 利用选择平板进行直接分离
高温下培养：分离嗜热细菌； 培养基中不含N：分离固氮菌； 培养基加抗生素：分离抗性菌；
待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制
实验五 高氏一号合成培养基的制备、土壤中放线菌的分离
实验五 高氏一号合成培养基的制备、土壤中放线菌的分离实验目的：掌握配制合成培养基的一般方法。
掌握稀释倒平板法从土壤中分离放线菌的基本原理和基本操作技术。
实验材料：药品：可溶性淀粉、KNO3、NaCl、K2HPO4•3H2O、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、琼脂。
其他：高压蒸汽灭菌锅、扭力天平、药匙、烧杯、量筒、玻璃棒、三角瓶、试管、牛皮纸、硫酸纸、线绳、无菌培养皿、铁锹、小铲、酒精棉球、镊子、玻璃铅笔。
实验原理：高氏一号合成培养基是培养放线菌的培养基。
这种培养基是采用化学成分完全了解的纯试剂配制而成的培养基，高氏一号培养基：碳源为可溶性淀粉、氮源为KNO3 、NaCl 、K2HPO4•3H2O 、MgSO4•7H2O 作为无机盐，FeSO4•7H2O作为微生物的微量元素，提供铁离子等组成。
放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中，其数量仅次于细菌，一般在中性偏碱性、有机质丰富、通气性好的土壤中含量较多。
由于土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物，就必须把它们从这些混杂的微生物群体中分离出来，从而获得某一菌株的纯培养。
分离放线菌常用稀释倒平板法。
根据放线菌的营养、酸碱度等条件要求，常选用合成培养基或有机氮培养基。
如果培养基成分改变，或土壤预先处理（120℃热处理1h），或加入某种抑制剂（如加数滴10%酚等），都可以使细菌，霉菌出现的数量大大减少，从而淘汰了其它杂菌。
再通过稀释法，使放线菌在固体培养基上形成单独菌落，并可得到纯菌株。
实验内容：1.高氏一号合成培养基的制备先将可溶性淀粉称好，在小烧杯内用50~100ml水调成糊状，再在另一容器内加入900~950ml热水，将小烧杯内淀粉倒入混匀。
再分别称取其它药品，并加热搅拌使之溶解后，调pH至7.2~7.4，分装，0.1Mpa（15lb/in2）15~30min高压蒸汽灭菌。
2.土壤中放线菌的分离（1）取9套无菌平皿，在皿底贴上标签，注明土壤稀释液的稀释度（10-3、10-4、10-5）、组别、姓名、操作日期等。
培养微生物五个步骤
培养微生物五个步骤培养微生物是微生物学研究中非常重要的一环，通过培养可以获得大量的微生物，从而进行各种实验和研究。
下面将介绍培养微生物的五个步骤。
第一步：选择培养基培养基是培养微生物的基础，选择合适的培养基对于微生物的生长和繁殖至关重要。
培养基可以分为固体培养基和液体培养基两种形式。
固体培养基通常是用琼脂糖制成的，而液体培养基则是溶解在适当的溶液中。
在选择培养基时需要考虑微生物的类型和所需的生长条件，例如温度、pH值等。
第二步：准备培养基准备培养基时需要按照一定的比例混合各种成分，并加热至溶解。
然后将培养基分装到培养皿或试管中，并进行高温高压灭菌，以杀死其中的微生物和孢子。
灭菌后，将培养基冷却至适宜的温度，使其凝固（固体培养基）或保持液态状态（液体培养基）。
第三步：接种微生物接种微生物是将待培养的微生物转移到培养基中的过程。
接种时需要用无菌的工具（如匀菌针或无菌吸管）取少量微生物液体或菌落，均匀涂抹在培养基表面（固体培养基）或加入培养基中（液体培养基）。
接种后需要注意避免交叉污染，以保证培养的纯度。
第四步：培养微生物培养微生物的过程中需要提供适宜的生长条件，如适宜的温度、湿度和氧气含量。
对于不同的微生物，这些条件可能有所不同。
在培养过程中，需要定期观察和记录微生物的生长情况，如菌落的形状、颜色和大小等。
培养时间的长短也取决于微生物的生长速度。
第五步：分离纯种在培养微生物的过程中，可能存在多种微生物混合生长的情况。
为了得到纯种微生物，需要进行分离。
常用的分离方法有传代分离法、挑选分离法和稀释分离法等。
通过这些方法，可以将不同的微生物分离出来，得到纯种菌株。
总结起来，培养微生物的五个步骤分别是选择培养基、准备培养基、接种微生物、培养微生物和分离纯种。
通过这些步骤，可以获得大量的微生物，为微生物学研究提供了基础条件。
在进行微生物培养时，需要注意无菌操作，以避免外来的污染。
此外，培养条件的选择要根据微生物的需求进行调整，以促进微生物的生长和繁殖。
实验五真菌的分离培养及形态观察
实验五真菌的分离培养及形态观察真菌分离培养应考虑所分离真菌的特性，配制合适的培养基，选择所需的气体环境。
同时, 由于真菌分离材料常污染有大量细菌，所以可在培养基中加入抗菌素并在分离培养过程中严格执行无菌操作。
目的要求1．掌握真菌分离培养方法。
2．认识真菌菌落的特征，比较与细菌菌落有何不同。
3．了解真菌载片培养法。
4．掌握观察真菌的基本方法，并观察其形态特征。
操作步骤—、真菌的分离培养方法（－）平板划线分离法1．取适合真菌的琼脂培养基融化，冷至45℃，注入无菌平皿中，每皿15～20ml，制成平板待用。
2．取要分离的材料（如田土、混杂的或污染的真菌培养物、真菌）少许，投入盛无菌水的试管内，振摇，使分离菌悬浮于水中。
3．将接种环经火焰灭菌并冷却后，蘸取上述菌悬浮液，进行平板划线(同细菌的划线法)。
4．划线完毕，置温箱中培养2～5d，待长出菌落后，钓取可疑单个菌落先作制片检查，若只有一种所需要的真菌生长，即可进行钓菌纯培养。
如有杂菌可从单个菌落中钓少许菌制成悬液，再作划线分离培养，有时需反复多次，才得纯种。
另外，也可在放大镜的观察下，用无菌镊子夹取一段待分离的真菌菌丝，直接放在平板上作分离培养，可获得该种真菌的纯培养。
（二）稀释分离法1．取盛有无菌水的试管5支（每管9ml），分别标记1、2、3、4、5号。
取样品（如田土等）1g，投入1号管内，振摇，使悬浮均匀。
2．用1ml灭菌吸管，按无菌操作法，从1号管中吸取1ml悬浮液注入2号管中，并摇匀；同样由2号管取1ml至3号管，依此类推，直至5号管。
注意每稀释一管应更换一支灭菌吸管。
3．用2支无菌吸管分别由4号、5号试管中各取1ml悬液，并分别注入2个灭菌培养皿中，再加入融化后冷至45℃的琼脂培养基约15ml，轻轻在桌面上摇转，静置，使冷凝成平板。
然后倒置温箱中培养，2～5d后，从中挑选单个菌落，并移植于斜面上。
二．真菌培养性状观察（一）真菌在固体培养基上的生长表现1 .酵母菌菌落：酵母菌在固体培养基上多呈油脂状或蜡脂状，表面光滑、湿润、黏稠，有的表面呈粉粒状、粗糙或皱褶。
细菌的分离培养与移植实验报告
实验五细菌的分离培养与移植[实验目的]1、掌握细菌分离培养及移植的基本要领和方法。
[实验原理]在细菌学诊断中，分离培养是不可缺少的一环。
分离培养的目的主要是在含多种细菌的病料或培养物中挑选出某种细菌。
在分离培养时应注意：选择适合于所分离细菌生长的培养基、培养温度、气体条件等。
同时应严格按无菌操作程序进行实验，并做好标记。
[实验材料]菌种：大肠杆菌斜面、大肠杆菌与金黄色葡萄球菌等。
器械：剪刀、记号笔(以上小组共用)。
培养基：普通肉汤和普通琼脂斜面、普通琼脂平板、酒精灯、接种环。
[实验内容]1、细菌的分离平板划线接种法通过在平板上划线，将混杂的细菌在琼脂平板表面充分的分散开，使单个细菌能固定在一点上生长繁殖，形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。
若需从平板上获取纯种，则挑取一个单个菌落作纯培养。
可用做分离纯种细菌。
操作方法（三区划线法）：a、右手拿接种环，烧灼冷却后，勾取菌种。
b、左手抓握琼脂平板（让皿盖留于桌上），在酒精灯火焰左前上方，使平板面向火焰，以免空中杂菌落入，右手将已沾菌的接种环在琼脂表面密集而不重叠的来回划线，面积约占整个平板的1/5-1/6，此为第一区。
划线时接种环与琼脂呈30-40度角轻轻接触，利用腕力滑动，切忌划破琼脂。
c、接种环上多余的细菌可烧灼（每划完一个区域是否需要烧灼灭菌视标本中含菌量多少而定），待冷后，在划线末端重复2-3根线后，再划下一区域（约占1/4面积），此为第二区。
d、第二区划完后可不烧灼接种环，用同样方法划第三区，划满整个平皿。
e、划线完毕，将平板扣入皿盖并作好标记，置37℃温箱孵育18-24小时观察琼脂表面菌落分布情况，注意是否分离出单个菌落，并记录菌落特征（如大小、形状、透明度、色素等）。
平板分区划线法培养后菌落分布情况平板划线培养的方法甚多，可按各人的习惯选择应用，其目的都是达到使被检材料适当的稀释，以求获得独立单在的菌落，防止发育成菌苔，以致不易鉴别其菌落性状。
实验五 产淀粉酶细菌的分离(一)培养基的制备及常用器皿的准备
综合性实验
实验五 产淀粉酶细菌的分离（一） 培养基的制备及常用器皿的准备
河南工业大学微生物学实验室
一、实验目的及要求
1、学会培养基的制备和常用器皿的准 备方法 2、学会高压蒸汽灭菌及干热灭菌方法
二、实 验 原理
将样品制成菌悬液，80℃ 水
浴处理10分钟。
选择
将菌悬液适当稀释后，在淀粉 平板上进行涂布分离培养；加 入碘液显色后，挑取透明圈直 径较大的菌落。
鉴别
电热鼓风干燥箱（干热灭菌用）
五、 作 业 题
1、高压蒸汽灭菌和干热灭菌各适用于哪 些物品？ 2、两种灭菌技术应注意哪些关键操作？ 3、培养皿等干热灭菌前包扎的目的？
4、培养皿桶1个。
5、1-2ml刻度吸管2支。 6、洗耳球1个、玻璃棒1支。 7、搪瓷量杯1个。 8、量筒1个。
纱布、棉花、棉绳、培养基、天平等在最后一排实验台
四、实验方法和步骤
1、营养琼脂培养基的配制 称量1.2克可溶性淀粉。加少量水加热溶化， 然后加入6.8克营养琼脂，加水至150毫升，煮 沸后倒入250ml容量的三角瓶中，加棉塞灭菌。
四、实验方法和步骤
2、无菌水的制备（稀释用）
取 9ml 蒸馏水于试管（ 18×180mm）中，塞 棉塞，报纸包扎后湿热灭菌。 取 90ml 蒸馏水于 250ml 三角瓶中，塞棉塞， 报纸包扎后湿热灭菌。
手提小型高压蒸汽灭菌
立式高压蒸汽灭菌
实验五 菌种组织分离法
实验五菌种组织分离法
目前食用菌主要栽培种类如平菇、香菇、草菇等生产上多采用组织分法制备菌种。
一、目的：
了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤，制备出栽培用菌种。
二、实验器材：
1、平菇或香菇等子实体。
2、接种箱、解剖剪、解剖刀、镊子、试管斜面、75%酒精、酒精棉球、无菌水、培养皿、紫外线灯、或硫磺。
三、实验方法：
1、菌种的选择：在出菇场要选择肉厚肥大、鲜嫩，出菇早、菇形整齐、菌柄短且无病害的做种。
2、将种菇表面用清水冲洗干净，放在接种箱（或无菌室内）进行表面消毒。
用镊子将种菇放在培养皿内，用另一反镊子夹75%酒精棉球（或0.1%升汞棉球）对种菇进行表面消毒，然后移入另一培养皿内再用无菌水反复洗涤三次，洗净残留的消毒剂。
3、用解剖刀或鲜剖剪蘸酒精进行火焰消毒，冷却后把自己消毒的种菇纵切开，然后用菌盖笔菌柄交界处，切取长宽的0.3-0.5厘米的菌肉组织块，用接种针移到斜面培养基上，置24℃恒温箱中培养。
4、每天检查试管斜面菌落生长情况，如从分离的菌肉组织块上长出正常的白色菌丝，即分离成功，及时将生长出来的菌丝转移新的试管斜面。
若在组织块附近或其他地方出现其他颜色杂菌生长应予以淘汰。
四、作业：
叙述组织分离的方法步骤，体会和注意事项，观察记载斜面菌落生长速度和成功率。
细菌的人工培养实验步骤
细菌的人工培养实验步骤细菌的人工培养实验步骤细菌的人工培养是微生物学研究中非常重要的实验方法，可以用于分离、鉴定和纯化细菌。
下面将详细介绍细菌的人工培养实验步骤。
一、准备实验室设备和材料1. 培养基：根据不同的研究目的选择合适的培养基，如营养琼脂、大肠杆菌选择性琼脂、血琼脂等。
2. 细菌液：从保存在冰箱或冷冻库中的细菌液中取出所需的细菌，并进行预处理。
3. 实验室设备：无菌操作台、离心机、移液器、显微镜等。
4. 无菌操作器具：无菌培养皿、试管、移液器等。
二、制备固体培养基1. 称取所需量的琼脂和其他成分，加入适量的去离子水中溶解。
2. 调整pH值，通常为7.0-7.4。
3. 加热消毒：将琼脂溶液装入无菌试管或烧杯中，用高压灭菌器或自制压力锅进行高温高压灭菌。
4. 倒制琼脂：将琼脂溶液倒入无菌培养皿中，使其均匀分布在培养皿底部。
5. 固化琼脂：将培养皿放置在平板上，待琼脂凝固后即可使用。
三、制备液体培养基1. 称取所需量的营养成分和其他添加剂，加入适量的去离子水中溶解。
2. 调整pH值，通常为7.0-7.4。
3. 加热消毒：将液体培养基装入无菌试管或烧杯中，用高压灭菌器或自制压力锅进行高温高压灭菌。
四、细菌的预处理1. 从冷冻库或冰箱中取出细菌液，并进行预处理。
通常采用离心法将细菌沉淀下来，并用生理盐水洗涤2-3次，以去除残留培养基和代谢产物等。
2. 用显微镜观察细胞形态和数量，并调整浓度至合适的范围。
五、接种细菌1. 无菌操作台上进行无菌操作，将细菌液用移液器均匀地滴在琼脂培养皿表面上。
2. 用火柴头或无菌环将细菌液均匀地涂抹在琼脂表面上。
3. 将培养皿倒置放置于恒温箱中，通常为37℃，并注意标记好培养皿的信息。
4. 观察培养皿中细菌的生长情况，并记录下来。
六、细菌的分离和鉴定1. 根据实验设计和研究目的，选择不同的方法对细菌进行分离和鉴定，如生化试验、药敏试验等。
2. 根据实验结果对细菌进行鉴定，并记录下相关信息。
食品微生物实验-微生物分离
（3）涂布 用一支新的无菌吸头，分别由各
浓度样品稀释液中各吸取0.1mL，分 别放入培养基平板上，用无菌玻璃涂 棒涂匀。每个浓度做2个平板。
3.培养 将培养基平板倒置于37℃温箱中培
养24h～48h，观察菌落特征 4.制备纯培养
将培养后所需要的单个菌落分别钓 出，划线于平板上，37℃培养48h检查 菌落是否单纯，也可以用显微镜检查是 否是纯的细菌
4.纯分：钓取单个菌落
制备纯培养物
1.采样
（１）无菌采集样品 （２）要有针对性
２分离 （１）平Leabharlann 划线分离法（2）释液倾注平皿
称取样1.0g， 放入盛99mＬ无菌水并 带有玻璃珠的三角瓶中，振荡使样品均匀 分散成为悬液（10-2）。用1mＬ的无菌吸 头从中吸取0.5ml样品悬液，注入分装有 4.5ml无菌水的试管中，吹吸3次，振荡均 匀（10-3）。同样方法，配置成稀释度为 10-4，10-5，10-6的样品溶液，各样取１mL 加在平皿中，倾注培养基．
实验五 细菌分离技术
一、实验目的
1. 掌握微生物的分离与接种技术 2. 学会用平板划线法分离微生物
二、注意事项： 1、要提前了解有关微生物的特性 2、做好准备工作（培养基、标准 菌株及其他材料的准备） 3、无菌操作：
无菌操作转接培养物
三、实验原理： 从样品中分离纯化细菌 样品中混杂着大量的细菌，从里面分离，
得到只含有这一种细菌的纯培养 纯培养(Pure culture)： 微生物学中将在实验室条件下从一个细胞
或一种细胞群繁殖得到的后代称为纯培养
四、实验器材 样品;分离培养基; 培养箱，摇床0.9% ，接种环， 记号笔，酒精灯，试管架，
无菌生理盐水等。
五、实验步骤
细菌培养步骤
细菌培养步骤一、消毒准备在进行细菌培养之前，首先需要进行消毒准备工作，以确保工作环境的无菌状态。
包括：1. 清洗培养器具：使用洗涤剂和热水彻底清洗培养皿、试管、移液器等培养器具，然后用蒸馏水冲洗干净。
2. 消毒培养器具：将清洗干净的培养器具放入高压锅中，加入适量的蒸馏水，进行高压灭菌，通常为121摄氏度、15分钟。
3. 准备培养基：根据所需的培养基种类和配方，准备好培养基溶液，并进行高压灭菌。
4. 准备试验台：在试验台上铺上无菌的工作垫，并消毒试验台表面。
二、接种细菌1. 选择菌株：根据研究目的选择需要培养的细菌菌株，可以是已有的保存菌株或新鲜分离的细菌。
2. 悬浮细菌：取一小部分细菌菌落，用无菌的移液管吸取适量的无菌生理盐水，将细菌悬浮于生理盐水中，使其均匀分散。
3. 稀释细菌：将悬浮的细菌溶液进行一系列的稀释，以获得合适的细菌浓度。
通常使用10倍稀释法，即每次取1毫升的细菌溶液，加入9毫升的无菌生理盐水进行混匀，得到10倍稀释液。
4. 接种培养基：取适量的稀释液，用无菌的移液器滴入培养皿或试管中的培养基上，轻轻摇晃培养皿或试管，使细菌均匀分布。
三、培养条件控制1. 温度控制：根据所培养的细菌种类，选择合适的培养温度，通常在常温、37摄氏度或其他适宜温度下进行培养。
2. 氧气供应：根据细菌的需氧性，选择适当的培养条件。
需氧菌需要充足的氧气供应，而厌氧菌则需要在无氧条件下进行培养。
3. pH值调节：根据不同的细菌种类和培养基的要求，调节培养基的pH值，通常在7.2-7.4之间。
4. 湿度控制：保持适当的培养基湿度，可以通过加入适量的水分或在培养器中放置湿度调节剂来实现。
四、培养观察与记录1. 观察生长情况：在培养的过程中，定期观察细菌的生长情况，包括细菌菌落的形态、颜色、大小等，以及培养基的变化。
2. 记录观察结果：及时记录观察到的细菌生长情况，包括培养时间、菌落特征、培养基的pH值等相关信息。
实训五 细菌的分离培养
4、固体平板四区划线
5、标记
6、37℃
24h培养
四、结果记录、分析
（1）液体培养基三种生长情况 （2）半固体培养基两种生长现象 （3）斜面应出现菌苔 （4）四区划线
观察第四区为菌落还是菌苔。
五、 课后小结：
本节课为动手能力练习，为日后微生物检验
的基本技能操作，希望大家能够100％认真着 实掌握。
实验五种的方法和用途； 2、掌握四区划线的结果－菌苔和菌落区别。
二、内容
1、液体培养基接种； 2、半固体培养基接种； 3、斜面培养基接种； 4、固体平板接种。
三、操作步骤
1、液体培 养基接种
2、半固体培养基接种
3、斜面接种
(完整word版)微生物菌种的分离纯化、培养、鉴定及保藏实验
实验微生物菌种的分离纯化、培养、鉴定及保藏一、实验目的和要求1。
了解微生物的分离纯化方法。
2.学习检测水中大肠菌群的方法。
3。
学习微生物的保藏及鉴定方法。
4。
熟悉革兰氏染二、实验原理多管发酵法多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管.乳糖能起选择作用,因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气.1.初发酵试验水样接种于发酵管内，37℃下培养,24小时内小套管中有气体形成,并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群,为阳性结果。
48小时后仍不产气的为阴性结果。
2。
平板分离初发酵管24至48小时内产酸产气的均需在复红亚硫酸钠琼脂（远藤氏培养基）或伊红美蓝琼脂，平板上划线分离菌落。
3.复发酵试验以上大肠菌群阳性菌落,经涂片染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，通过此试验再进一步证实。
原理与初发酵试验相同，经24小时培养产酸产气的，最后确定为大肠菌群阳性结果。
三、实验器材及试剂1。
水样污水样本2、培养基及试剂：二甲苯、苯酚、琼脂粉、香柏油、乳糖胆盐液体培养基、伊红美蓝琼脂（EMB）、营养琼脂培养基、革兰氏一液、革兰氏二液、革兰氏三液、革兰氏四液。
3、器材及耗材：双目显微镜、恒温培养箱、恒温干燥箱、洁净工作台、紫外线灯管、紫外线灭菌手推车、接种环、试管、酒精灯、滤纸、擦镜纸、载玻片、打火机、棉花、滴瓶、长塑料篓、纱布、吸耳球、产气管、培养皿、移液管等四、实验方法及步骤1。
第一天实验前的准备1）配制3支乳糖胆盐液体培养基，每支10mL,并加入产气管.配置营养琼脂培养基，灌装进2支试管中，配置200mL伊红美兰培养基150mL,于121℃高温高压灭菌20分钟，后放进恒温干燥箱。
2）包扎5套培养皿，包扎6根1mL、1根10mL移液管和3支滴管。
于121℃高压灭菌锅中灭菌20分钟。
3）称取一定量的液体石蜡,约为锥形瓶的三分之一。
于121℃高温高压灭菌20分钟。
微生物学实验
微生物学实验
实验一 细菌的形态和结构观察
观察细菌的菌落特征 掌握简单染色法和细菌涂片方法 在油镜下观察细菌个体的形态特征
【一】实验目的
【二】实验的差不多 原理 形态观察要紧包括群体的形态和个体的形态观察。
细菌的差不多形态要紧分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，近年 还发现星状和四方形细菌等。细菌形态受培养时间、培养基成 分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。
【四】实验步骤
思
对各种来源的样品进行对比，如平板菌落数和菌落类型等？ 饭前为何要洗手？ 如何防止培养物的污染与防止细菌的扩散方面？
考
题
实验四 培养基的配制与灭菌
1.熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 2.掌握培养基和无菌水的制备方法。
3.掌握高压蒸气灭菌技术。
【一】实验目的
【二】实验的差不多
3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。
当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节
器，以免压碎玻片或损伤镜面。
4.观察
时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的适应，以免眼睛
疲劳，同时能够在左眼观察时，右眼注视绘图。
实验五 微生物的接种、分离与培养技术
合不紧密，用接种针容易挑起
，多数表面较光滑、湿润、较
粘稠，易挑取，质地均匀，色
泽多样。
细菌菌落特征：剖面图
细菌菌落特征：常见的平面正面图
吸管或吸嘴；如果只取少量而且勿需定量也可用接种
环，视实验目的而定
三、实验器材与试剂
菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆
菌等营养琼脂斜面
Hale Waihona Puke 培养基：肉汤营养琼脂斜面、肉汤营养液体
培养基
仪器和其它用品：接种环、酒精灯、无
菌玻璃吸管等
图1 接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀
实验五
微生物的接种、分离
与培养技术
一、目的要求
熟练掌握从固体培养基和液体培养基中转
接微生物的无菌操作技术 明确无菌操作的重要性
二、基本原理
高温对微生物具有致死效应，因此在微生物的转
接过程中，一般在火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接 种环，以达到灭菌的目的，但一定要保证其冷却后方 可进行转接，以免烫死微生物。 如果是转接液体培养物，则用预先已灭菌的玻璃
四、操作步骤
火焰旁打开培养物试管帽 火焰旁挑菌落
火焰旁接种
空白组 静置培养
斜面接种时的无菌操作
(1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞
斜面接种法及接种后菌落生长示意图
接种后菌落生长示意图菌苔(lawn)
细菌菌落的特征
一般都较小，菌落与培养基结
环境微生物学-实验四(五) 细菌的纯培养、分离
实验四（五）环境中微生物分离与培养一、实验目的1、掌握从环境（土壤、水体、活性污泥、垃圾堆肥等）中分离培养细菌的方法，获得若干种细菌纯种培养技能。
2、掌握几种接种技术。
3、了解菌种的保藏方法。
二、实验仪器和材料恒温箱、涂布器、细铁丝、接种环、酒精灯、吸耳球、棉花、记号笔；无菌培养皿（直径90毫米）、无菌移液管（1毫升和10毫升）；肉汤蛋白胨培养基、高氏１号培养基、马铃薯培养基；活性污泥或土壤10克、无菌水90毫升、9毫升无菌水（试管中）；酵母、大肠杆菌。
三、细菌纯种分离的操作方法细菌纯种分离的方法有两种：稀释平板法和平板划线法。
（一）稀释平板分离的方法1、取样用无菌锥形瓶到现场取一定数量的活性污泥或土壤，迅速带回实验室。
2、稀释水样将1瓶90毫升和5管9毫升的无菌水排列好，按10-1、10-2、10-3、10- 4、10-5、10-6依次编号。
在无菌操作条件下，将样品（10克）置于第一瓶90毫升无菌水中，用手摇10分钟，将颗粒状样品打散，即为10-1浓度的菌液。
用1毫升无菌移液管吸取1毫升10-1浓度的菌液于一管9毫微升无菌水中，同样方法，依次稀释到10-6。
每次稀释时，需用不同的无菌移液管，或将同一移液管用无菌水洗三次。
3、平板的制作取10套无菌培养皿编号，10-4、10-5、10-6各3个，另1个为空气对照。
取1支1毫升无菌移液管从浓度小的10-6菌液开始，以10-6、10-5、10-4为序分别吸取0.5毫升菌液于相应编号的培养皿内（注：每次吸取前，用移液管在菌液中吹泡使菌液充分混匀），加热熔化培养基，当培养基冷至45℃左右时，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拿培养皿，以中指、无名指和小指托住皿底，拇指和食指夹住皿盖，靠近火焰，将皿盖掀开，倒入培养基后将培养皿平放在桌上，顺时针和逆时针来回转动培养皿，使培养基和菌液充分混匀，冷凝后即成平板，倒置于30℃恒温箱中培养48小时，然后观察结果。
取对照无菌培养皿，打开皿盖10分钟后盖上皿盖，倒置30℃恒温箱中培养48小时后，观察结果。
细菌分型实验报告
细菌分型实验报告实验名称：细菌分型实验实验目的：通过细菌分型实验，了解和比较不同菌株的遗传差异，为进一步研究和应用提供基础数据。
实验材料和设备：1. 培养基：含有营养物质的琼脂培养基。
2. 细菌液：采集自不同环境或来源的细菌样品。
3. 培养皿：用于孵育和培养细菌的平底玻璃或塑料培养皿。
4. 注射器：用于取样和转移细菌液。
5. 火焰灯或酒精灯：用于杀灭细菌的消毒作用。
实验步骤：1. 准备工作：将琼脂培养基熔化后，待冷却至40-45摄氏度时，加入适量的细菌液，轻轻摇匀后倒入培养皿中。
2. 接种细菌：使用火焰灯或酒精灯对注射器进行消毒，然后取适量的细菌液，将注射器插入培养皿中，挤压注射器活塞，将细菌液滴入培养皿上。
3. 培养孵育：将已接种的培养皿倒置放在恒温箱中，以适宜的温度和湿度进行培养孵育，一般为37摄氏度，孵育24-48小时。
4. 观察结果：观察培养皿上的菌落形态和颜色等特征，按照菌落的形状、颜色、大小、透明度、边缘等特征进行分类和记录。
实验结果与讨论：根据实验数据，我们可以得到各个细菌菌株的菌落特征数据。
通过比较不同菌株的菌落特征，我们可以得出它们之间的遗传差异。
例如，某些菌株的菌落边缘比较光滑，颜色比较深等，而另一些菌株的菌落边缘则比较粗糙，颜色较浅等。
这些差异表明了不同菌株之间的遗传基因差异。
细菌分型实验是研究细菌遗传多样性和系统发育关系的重要手段。
通过分析菌株的遗传差异，可以了解和比较不同细菌的特性和功能，为研究细菌的分类、发育和应用提供有力支持。
此外，本实验还可以通过进一步的分析，确定不同菌株之间的遗传关系。
例如，可以采取分子生物学方法，如16S rRNA基因测序等，对菌株进行基因组学分析，从而进一步了解菌株的遗传多样性和系统发育关系。
细菌分型实验具有简单、快速、经济的优势，可以应用于医学、环境、农业等领域的研究和实践。
例如，在医学领域，通过细菌分型实验可以判断病原菌的种类和抗药性，为临床治疗提供指导；在环境领域，可以通过分析环境中的细菌群落结构和多样性，评估生态系统的健康状况和微生物降解能力。
实验五微生物的分离、培养
学会使用微生物分离、培养的实验技术
选择适当的培养基
根据目标微生物的特性和生长需求，选择适宜的培 养基配方和制备方法。
无菌操作技术
在实验过程中，严格遵守无菌操作原则，防止外来 杂菌污染。
微生物接种与培养
掌握微生物的接种方法，包括划线法、涂布法、倾 注法等，并控制适当的培养温度和湿度。
了解微生物在自然界中的分布和作用
采集方法
根据微生物生长环境的不 同，采用适当的采集方法， 如挖掘、过滤、无菌操作 等。
样品保存
采集后的样品应立即进行 保存，以保持微生物的活 性，常用的保存方法有低 温、干燥、真空等。
微生物的分离
样品处理
将采集的样品进行预处理， 如破碎、研磨、离心等， 使微生物从样品中分离出 来。
培养基选择
根据分离的微生物种类和 实验目的，选择适宜的培 养基，以满足微生物生长 的需求。
实验设计不够严谨
本实验在对照设置方面存在不足，未设置空白对照组以排除非特异性污染的影响。在未来的实验中，应完善实验设计 ，增加对照组以增强实验说服力。
实验结果分析不全面
在实验结果分析中，我只关注了微生物的形态和生长情况，未对微生物的生理生化特性进行深入研究。 建议在后续实验中增加相关分析，以更全面地了解微生物的特性。
培养结果分析
根据观察结果，对微生物的生长情 况进行分析，得出相应的结论。
04
实验结果与分析
微生物的形态观察
总结词
通过显微镜观察，记录微生物的形态特征，如形状、大小、颜色、运动性等。
详细描述
在实验中，我们观察到了多种微生物的形态特征。例如，细菌呈球形、杆形或螺旋形，大小通常在0.5-5微米之 间；霉菌呈丝状或网状结构，有分枝和无分枝，大小因菌种而异；原生动物通常比细菌大，形态多样，如变形虫、 草履虫等。对未来实验的展望Fra bibliotek1 2
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实验五：细菌的分离、接种和培养
一、实验目的：
熟悉从环境（土壤、水体、活性污泥等）中分离培养细菌的方法，掌握以下几种细菌纯培养过程中所涉及的各种技能：
（1）倒平板；
（2）细菌纯种分离：稀释平板分离法和平板划线法；
（3）接种技术：斜面接种技术、稀释平板涂布法等；
（4）无菌操作技术。
并了解不同的微生物在固体培养基中的生长特征。
二、实验原理
在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。
为了获得某种微生物的纯培养。
一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。
三、实验试剂与器材
1.牛肉膏蛋白胨培养基；
2.试管、三角烧瓶、培养皿；
3.接种环，土样，酒精灯等。
四、操作步骤
1.每组配牛肉膏蛋白胨培养基200 mL，放在三角瓶中，加热溶解后取5 mL加至试管中，
每人做一支试管。
其配方如下: 牛肉膏3 g、蛋白胨l0g、NaCl 5 g、琼脂15—20 g、水1000 mL、pH 7.4—7.6
2.每组包10个培养皿，待灭菌。
3.将试管、空的培养皿、剩余的培养基以及10 mL蒸馏水放入高压灭菌锅灭菌于121 o C
下20 min。
4.倒平板：在无菌操作台上，将加热融化的牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，并标明培养基的
名称。
5.在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。
贴在距试管口径2-3厘米的
位置。
6.待培养皿和试管中的培养基冷却凝固后，点燃酒精灯。
7.接种。
取接种环：右手拿接种环(如握钢笔一样)、在火焰上将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部分，均用火烧过灭菌。
环冷却：将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触边壁，使其冷却。
取菌种：待环冷却后轻轻沾取经稀释10倍的土壤悬液-环，然后将接种环移出菌种管，注意不要使环的部分碰到管壁，取出后不可使环通过火焰。
接种：在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环在平板上划线。
划线的方法很多，但无论哪种方法划线，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使形成单个菌落。
常用的划线方法有下列二种：
(1)用接种环以无菌操作挑取土壤悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线
3-4条，再转动培养皿约70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次
划线部分作第二次平行划线，再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线
和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线(图A)。
划线完毕后，盖上皿盖，倒
置于37℃温室中培养。
(2)将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线(图B)。
划线完毕后，盖上皿盖，
倒置温室培养。
环灭菌将接种环烧红灭菌。
5.培养1周后观察。
四、注意事项:实验操作过程中无菌操作。
五、思考题
1. 简述无菌操作过程中的注意点。