血细胞的计数

血细胞的计数

【目的要求】

学习红细胞、白细胞计数的方法。

【基本原理】

血液中血细胞数的计算是使用血细胞计数板。而且要用适当的溶液将血液稀释后，放入计数板的计数室内，在显微镜下计算一定容积血液稀释液中的血细胞个数，再将所得结果换算为1mm3 血液中的血细胞个数。

【动物与器材】

兔、血细胞计数板、血红蛋白吸管、1ml 和5ml 吸管、表面皿、显微镜、刺血针、酒精棉球、红细胞稀释液、白细胞稀释液、95%酒精、乙醚、1%氨水。

【方法与步骤】

1．采血及稀释用1ml 吸管吸取0.38ml 白细胞稀释液放入表面皿内备用，另用5ml 吸管吸取3.98ml 红细胞稀释液放入表面皿内备用。用酒精棉球消毒兔的耳缘静脉采血部位，用刺血针刺破血管，让血液自然流出，擦去第一滴血，待流出第二滴血时，用血红蛋白吸血管吸血至刻度20mm3 处，将血液吹入盛有白细胞稀释液的表面皿内，吸上清液冲洗沾在管壁上的血液。立即将吸管洗净和干燥备用。再用同样方法吸取血液至刻度20mm3处，并将血液吹入盛有红细胞稀释液的表面皿内，轻轻摇匀。2．血细胞计数板的结构计数板是一块特制的长方形厚玻璃板，板面的中部有4 条直槽，内侧两槽中间有一条横槽把中部隔成二长方形的平台（图3-3）。此平台比整个玻璃板的平面低0.1mm，当放上盖玻片后，平台与盖玻片之间距离（即高度）为0.1mm。平台中心部分各以3mm 长，3mm 宽精确划分为9 个大方格，称为计数室（图3-4），每个大方格面积为1mm3，体积为0.1mm3。四角的大方格，又各分为16 个中方格，适用于白细胞计数。中央的大方格则由双线划分为25 个中方格，每个中方格面积为0.04mm3，体积为0.004mm3。每个中方格又各分成16 个小方格，适用于红细胞计数。稀释后的血液滴入计数室前将表面皿摇振1-2min。将盖玻片放在计数板正中，用小吸管吸取摇匀的稀释血液，将一小滴血液滴在盖玻片边缘的玻片上，使稀释血液借毛细管现象而自动流入计数室内。如滴入过多，溢出并流入两侧深槽内，使盖玻片浮起，体积改变，会影响计数结果，需用滤纸片把多余的溶液吸出，以深槽内没有溶液为宜。如滴入溶液过少，经多次充液，易造成气泡，应洗净计数室，干燥后重做。红细胞和白细胞的计数，各使用一计数室。

3．计数血液稀释液滴入计数室后，须静置2-3min，然后在低倍显微镜下计数。计数白细胞时，数四角4 个大方格的白细胞总数；计数红细胞时，数中央大方格的四角的4 个中方格和中央的一个中方格（共5 个中方格）的红细胞总数。计数时应循一定的路径，对横跨刻度上的血细胞，依照“数上不数下，数左不数右”的原则进行计数（图3-5）。计数白细胞时，如发现各大格的白细胞数目相差8 个以上；计数红细胞时，如各中方格的红细胞数目相差20 个以上，表示血细胞分布不均匀，必须把稀释液摇匀后重新计数。

4．计算

白细胞数：将4 个大方格内数得白细胞总数乘以50，即得每mm3 血内的白细胞总数，因为：

(1)稀释液0.38ml 加入血20mm3（1ml=1cm3=1000mm3，故20mm3=0.02ml），使血液稀

释20 倍，换算成未稀释血时应乘以20。

(2)计数四角上4 个大方格内的白细胞总数，其容积为1×1×0.1×4=0.4mm3。换成每mm3 时应乘以2.5。这样把4 个大方格内数得的白细胞总数乘以50（即20×2.5=50）即为每mm3 血内的白细胞总数。红细胞数：将中央大方格中的5 个中方格内数得的红细胞总数乘以10，000，即得每mm3 血内红细胞总数。因为：

(1)稀释液3.98ml 加入血20mm3（即0.02ml），使血液稀释200 倍，换算成未稀释血要乘以200。

(2)在计数室内只计数0.02mm3（即1 个中方格的容积为0.2×0.2×0.1=0.004mm3，5个中方格的容积为0.004×5=0.02mm3），换算成每mm3 时应乘以50。这样把5 个中方格内数得的红细胞总数乘以10，000（即200×50=10，000）即得每mm3 血液内的红细胞总数。

【思考题】

小结在操作过程中，哪些因素可能影响计数的准确性？

【附】

一、仪器清洁法

1．吸管洗涤法弃去吸管内的血液稀释液，然后重复吸入并吹出蒸馏水数次，再吸入与吹出95%酒精一次，以洗去管内水分。最后吸入与吹出乙醚一次。注意：这些步骤都不应用口吹吸，而用泵抽吸。如吸管内存有血凝块，可置于1%氨水中浸泡，待血块溶解脱落后再用流水清洗，并按上述步骤洗涤。

2．计数板及盖玻片洗涤法计数完毕，应立即用清水冲洗、晾干，然后用擦镜纸擦干净。

二、血细胞稀释液配制法

1．白细胞稀释液

冰醋酸（破坏红细胞） 1.5ml

1%龙胆紫（染白细胞核，便于计数） 1ml

蒸馏水加至100ml

2．红细胞稀释液

NaCl（维持渗透压） 0.5g

Na2SO4（使溶液比重增加，红细胞均匀分布不易下沉） 2.5g

HgCl2（固定红细胞并防腐） 0.25g

蒸馏水加至100ml

三、红、白细胞计数专用吸管

这种吸管用于吸取血液并加以稀释，共有两支（图3-6），分别用于红细胞和白细胞计数。在吸管的毛细管部分，两支均有0.5 和1 两个刻度。在膨大部分上端，两支吸管的刻度不同，用于红细胞计数者为101，用于白细胞计数者为11。刻度表示吸管各段的容积比例。在使用红细胞计数吸管时，如先吸取血液至刻度0.5，再吸稀释液至101，则血液被稀释200 倍。在使用白细胞计数吸管时，如吸取血液至0.5，再吸取稀释液至11，则稀释20 倍。如吸取血液至1，则稀释倍数减半。吸管的膨大部分内有一粒小玻璃砂，供稀释血液时搅拌之用。