非发酵菌群的分类鉴定
非发酵菌及检验
氧化酶（+） 触酶（+） 不分解任何糖 动力、吲哚、 甲基红、VP 、DNA酶（-） 6.5%NaCL肉汤不生长
+ 二、微生物检验
+ 1.标本采集 + 2.方法与鉴定
+ 临床意义
人和动物黏膜上的正常菌群，也引起社 区和医内感染。本菌是呼吸道感染的主要 致病菌。大多菌株对青霉素、四环素、氨 基糖苷类敏感。
+ 1.标本采集 + 2.方法及鉴定
+ 临床意义
条件致病菌 医院感染常见菌 对广谱抗生素有耐药性，红霉素、克 林霉素、复方磺胺敏感。
鉴定试验
肠杆菌科
非发酵菌
弧菌科
氧化酶
葡萄糖氧化/ 发酵（O/F） 鞭毛
－
F
＋
O／－
＋
F
周鞭毛
单、丛、周
单、丛
+ 脑膜败血性黄杆菌 + 芳香黄杆菌 + 短黄杆菌
+ 水生黄杆菌
+ 嗜糖黄杆菌 + 嗜醇黄杆菌
+ 嗜温黄杆菌
+ F.yabuuchiae
+ 定义：氧化酶阳性、产黄色素、无动力、
吲哚阳性或阴性的非发酵革兰阴性菌。
+ 一、生物学性状 + 1.形态与染色 革兰阴性杆菌 菌体细长
两端略膨大 无动力 无芽胞
发 氧 产
+ 《伯杰系统细菌学手册》（1984）分类法
+ + + + + +
按rRNA和DNA同源性，分5个RNA Ⅰ 铜绿假单胞菌 Ⅱ 洋葱假单胞菌 鼻疽假单胞菌 Ⅲ 食醋假单胞菌 Ⅳ 微小假单胞菌 Ⅴ 嗜麦芽假单胞菌 腐败假单胞菌
非发酵菌特征及鉴定思路课件
微生物质谱分析
利用质谱技术对微生物细胞壁进行分 析，获取菌株的分子量信息，进行鉴 定。
03
非发酵菌的鉴定步骤
菌落形态观察
观察菌落大小、形状、边缘、表面和透明度
非发酵菌的菌落形态多样，大小、形状、边缘、表面和透明度等特征有助于初步 鉴别。
观察菌落颜色
非发酵菌的菌落颜色多样，包括白色、黄色、橙色、红色等，不同颜色可能代表 不同的菌种。
确的分类和鉴定。
分类依据
根据基因序列相似性、进化关系 等因素，将非发酵菌分为不同的 分类单元，如属、种、亚种等。
分类标准
根据国际微生物分类学界的共识 和标准，结合形态学、生理生化 特征和分子生物学数据，确定非
发酵菌的分类地位。
系统发育分析
方法
通过构建系统发育树，分析非发酵菌在进化过程 中的位置和亲缘关系。
数据来源
利用多基因序列分析、宏基因组学等方法，获取 非发酵菌的系统发育数据。
树形结构
根据系统发育数据，绘制出非发酵菌的系统发育 树，明确各菌种之间的亲缘关系和进化路径。
05
非发酵菌的致病性与临床意义
非发酵菌的感染途径与症状
感染途径
非发酵菌主要通过呼吸道、皮肤或接 触等途径感染人体。
症状表现
非发酵菌感染的症状多样，常见的有 发热、咳嗽、咳痰、呼吸困难等，严 重时可导致败血症、感染性休克等。
生化试验
通过测定菌株对不同碳源、 氮源的利用以及在特定环 境下的生长情况，了解菌 株的生理生化特性。
血清学试验
利用特异性抗体与抗原的 结合反应，对菌株进行特 异性鉴定。
分子生物学鉴定方法
16S rRNA基因测序
通过对菌株16S rRNA基因的测序，进行系统发育学分析，确定菌 株在分类学上的位置。
非发酵菌群的分类鉴定
• 该菌的生长特性、营养要求、及其它生物 学性状与铜绿假单胞菌极为相似，所不同 的是氧化酶阴性，这是与假单胞菌属相区 别的重要特性；此外，该菌一端具有3根以 上丛鞭毛，运动活泼，可与氧化酶阴性的 不动杆菌属和副百日咳鲍特氏菌相鉴别。
3、鼻疽（类鼻疽）伯克霍尔德菌
• 鼻疽伯克霍尔德菌（Burkholderia mallei） 和类鼻疽伯克霍尔德菌（ Burkholderia pseudomallei）是鼻疽与类鼻疽的病原菌， 属假单胞菌属rRNA同源群的第二群；2000 年被NCCLS/CLSI（National Committee
脑膜炎败血黄杆菌在血琼脂平板和营养琼脂平板上的菌落特征（37℃，18—24h）
• 黄杆菌属目前共分为8个种和4个未命名 的生物群。它们分别是：
• 脑膜炎败血黄杆菌、芳香黄杆菌、短小黄 杆菌、水田黄杆菌、嗜醇黄杆菌、嗜糖黄 杆菌、嗜温黄杆菌、薮内黄杆菌及黄杆菌 Ⅱb、Ⅱe、Ⅱh、Ⅱi群。其中脑膜炎败血 黄杆菌、芳香黄杆菌、短小黄杆菌和黄杆 菌Ⅱb群可引起人类疾病。
支气管腐败 鲍特氏菌
+ — + +
+ +
鲍特氏菌属
鞭毛染色
脂、巧克力色血琼脂及兔血琼脂上均不能生长。
副百日咳鲍特氏菌和支气管腐败鲍特氏菌营养 要求不高，在上述培养基上均能生长。
• 3、该菌属细菌不分解糖类。其它生化反应见 下表。
鉴别要点
鞭毛 动力 37℃
18—24℃ 尿素酶 硝酸盐还原 氧化酶
百日咳 鲍特氏菌
— — — — —
+
副百日咳 鲍特氏菌
—
— — + — —
铜绿假单胞菌镜下形态和在血平板上的菌落特征
铜绿假单胞菌在普通琼脂培养基上的菌落特征
非发酵菌 微生物学检验
非发酵G-杆菌(nonfermentative G- Bacilli)1. 非发酵菌是一群需氧、无芽孢、不利用糖或仅能氧化分解糖类是做为能量来源的G-杆菌。
（1）通常所讲的非发酵菌指在KIA中24小时内表面能够生长，在底部不生长的需氧G-杆菌。
（2）非发酵菌与其它苛养或非糖发酵的G-杆菌之间的界限只是传统意义上的，并不是根据明确的遗传或表型特点来划分。
（3）多为条件致病菌，近年来日益增多，尤其是医院感染。
2. 分类与命名：主要的非发酵G-杆菌属被分成6个科：（1）假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群①rRNAⅠ群/假单胞菌属；②rRNAⅡ群/伯克霍尔德菌属；③rRNAⅢ群/丛毛单胞菌属、食酸菌属；④rRNAⅣ群/短波毛单胞菌属；⑤rRNAⅤ群/窄食单胞菌属；⑥其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等（2）产碱杆菌科：产碱杆菌属；（3）黄杆菌科：华丽杆菌属（4）莫拉菌科：不动杆菌属、莫拉菌属；（5）甲基球菌科；（6）根瘤菌科3. 非发酵菌的基本鉴定要求（1）缺少糖发酵的证据，通常是在KIA或TSI培养基中无酸产生，斜面和底部均呈红色。
（2）氧化酶+（不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、唐菖蒲伯克菌、浅黄华丽单胞菌、栖稻黄素单胞菌-），但并非所有氧化酶+的G-杆菌都是非发酵菌。
（3）麦康凯上生长很差或不生长。
（4）动力：多为+，但多为专性需氧，故半固体培养基中不明显，宜用直接动力观察或染色法。
4. 重要的鉴定试验（1）葡萄糖利用（O/F试验）：O/F培养基:蛋白胨和糖类的比例为1:5而不同于发酵菌的1:2。
（2）氧化酶试验：（3）动力：半固体培养基:应只穿刺培养基顶部4mm，在培养4-6小时后首次观察结果,24和48小时后再次观察结果。
更准确的方法是湿片法和鞭毛染色。
（4）色素形成：非发酵菌可形成多种色素，有助于菌种的鉴定。
（5）硝酸盐还原/产气：将硝酸盐还原成亚硝酸盐，进而释放氮的生化过程。
（6）吲哚试验：需用含色氨酸丰富的培养基，产吲哚黄杆菌、脑膜败血黄杆菌、食酸丛毛单胞菌等+。
非发酵菌群的分类鉴定
假单胞菌属 产碱杆菌属 无色杆菌属 土壤杆菌属 端毛菌 假单胞菌属 鞭毛染色 周毛菌 产碱杆菌属，无色杆菌属，土壤杆菌属 O/F O型 无色杆菌属，土壤杆菌属 还原硝酸盐后产气 + — 土壤杆菌属 无色杆菌属 — 产碱杆菌属
第四节、非发酵菌群的属内鉴别
一、假单胞菌属和 寡氧单胞菌属
假单胞菌属属假单胞菌科，该属为严格的专性需 氧的革兰氏阴性杆菌，具有一端鞭毛，无荚膜、 无芽孢。该菌属在自然界中分布广泛，营养要求 不高，氧化酶试验均为阳性，是假单胞菌科的代 表菌属。
氧化酶阴性菌群
不动杆菌属，寡氧单胞菌属，付百日咳鲍特氏菌 动力 + 寡氧单胞菌属 （嗜麦芽寡氧单胞菌） — 不动杆菌属，付百日咳鲍特氏菌 在鲍—金二氏培养基上产 棕色素 麦康凯上生长 — + 不动杆菌属
+ —
付百日咳鲍特氏菌
）、氧化酶阳性菌群的 鉴别
氧化酶阳性菌群
假单胞菌属，产碱杆菌属，黄杆菌属， 支气管败血鲍特氏菌，金氏杆菌属，无色杆菌属， 莫拉氏菌属，艾肯氏菌属，土壤杆菌属。 触酶 + 假单胞菌属，产碱杆菌属，黄杆菌属， 支气管败血鲍特氏菌，无色杆菌属， 莫拉氏菌属，土壤杆菌属 动力 37℃ 18—24 ℃ — + 支气管败血 鲍特氏菌 + + 假单胞菌属 产碱杆菌属 无色杆菌属 土壤杆菌属 + 黄杆菌属 黄色素 — 莫拉氏菌属 — — 黄杆菌属 莫拉氏菌属 弱 F 金氏杆菌属 — 金氏杆菌属， 艾肯氏菌属 O/F — 艾肯氏菌属
绿棕红无 部分黄色 — 黄 —/棕 — — — — — —
+（周毛） O 型
+（周毛） O 型
非发酵菌群 氧化酶 + 假单胞菌属，产碱杆菌属，黄杆菌属， 支气管败血鲍特氏菌，金氏杆菌属， 无色杆菌属，莫拉氏菌属，艾肯氏菌属， 土壤杆菌属。 — 不动杆菌属 寡氧单胞菌属 付百日咳鲍特氏菌
非发酵菌的鉴定程序
非发酵菌的鉴定程序1 概述非发酵菌是是指一群不能利用葡萄糖或仅能以氧化形式利用葡萄糖的革兰阴性杆菌。
大多为机会致病菌。
其中假单胞菌属的铜绿假单胞菌在肺部感染中十分重要。
近年来此类细菌从住院病人的痰、尿、血液、体液标本中的分离率日渐增高，已成为引起院内感染的重要致病菌。
2 分类：主要包括假单胞菌属、从毛单胞菌属、伯克霍尔德菌属、窄食单胞菌属、产碱杆菌属、不动杆菌属、金黄杆菌属、莫拉菌属、土壤杆菌属、无色杆菌属和食酸菌属。
非发酵菌初步分属，见表2-1.表2-1非发酵菌初步分属生化反应O-F葡萄糖氧化酶触酶尿素鞭毛动力其他特性假单胞菌属O/- +/- + +/- 极生+不动杆菌属O/- - + - 无-无色杆菌属O + + +/- 周生+ 不产生3-酮基乳糖盐酸土壤杆菌属O + + + 周生+ 产生3-酮基乳糖盐酸产碱杆菌属- + + - 周生+黄杆菌属(F) + + +/- 无- 产黄色素莫拉杆菌属- + + - 无- 对营养要求高金黄杆菌属(F) + - - 无-艾肯菌属- + - - 无- 菌落小、陷入琼脂注：+，90%以上菌株阳性；-，90%以上菌株阴性；O，为氧化反应；F，为弱发酵反应3 临床常见致病菌3.1铜绿假单胞菌3.1.1培养及形态特征：镜下菌体细长，且长短不一，优势呈球杆状或丝状，成对或短链状排列。
该菌为专性需氧菌，培养菌落特征上为多样化：在血琼脂平板上形成扁平、湿润、有金属光泽、蓝绿色、浅绿色、灰白色、β溶血（少数不溶血）的菌落，多数菌落边缘呈毛玻璃状，有生姜味；可长生绿脓素和荧光素两种色素，可形成5种不同的菌落特征：经典型、大肠杆菌型、粗糙型、黏液型、侏儒型。
在伊红-美蓝平板上呈粉红色菌落。
3.1.2生化特征：氧化酶阳性，TSI为K/A，分解葡萄糖、不分解乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖；动力、枸橼酸盐、精氨酸双水解酶和硝酸盐还原试验阳性；S、ESC试验阴性。
LYS、IND、ORN、URE、H23.1.3鉴定步骤培养菌落涂片→分纯→氧化酶试验→选择非发酵板用TDR-200B仪器进行鉴定和药敏试验→菌种鉴定率＞85%可报告。
非发酵菌及检验
3、检先增菌，再转 种血平板和麦康凯平板分离；脓汁、分泌物、 尿可直接种于上述培养基分离培养。
（3）鉴定：根据菌落特征、色素、 生姜气味、菌体形态、氧化酶试验等 作出鉴定。对无色素的菌株应与其他 假单胞菌鉴别。
铜绿假单胞菌的检验程序：
血液 体液
脑脊液、胸腹水、脓汁、痰、尿液 粪便
分离培养 血、麦康凯
增 菌 营养肉汤
直接涂片染色
分离培养 SS、麦康凯
初步鉴定 菌落特征，色 素 菌体形态、氧化酶
最后鉴定
生化反应
分型：血清学
噬菌体
铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别
试 验 铜绿假 单胞菌 ＋ 荧光假 单胞菌 ＋ 恶臭假 单胞菌 ＋ 斯氏假 单胞菌 ＋ 嗜麦芽 假单胞 ＿ 鼻疽假 单胞菌 ＋/＿ 类鼻疽 假单胞 ＋
挑选可疑菌落
最后鉴定 生化反应
初步鉴定 KIA：底层、斜面不变 硝酸盐还原、氧化酶、 动力
不动杆菌属主要菌种生化反应特征
醋酸钙不 动杆菌 鲍曼不 动杆菌 溶血不 动杆菌 琼氏不 动杆菌 约翰逊 不动杆菌 洛菲不 动杆菌
葡萄糖氧化
木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶
＋
＿ ＋ ＋
＋
＋ ＋ ＋
+/_
+/_ ＿ ＋
琼氏不动杆菌
约翰逊不动杆菌
一、生物学性状
形态与染色 革兰阴性球杆菌，常成双排列， 不易退色，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。 培养特性 专性需养，营养要求不高。
最适温度35℃ ，鲍曼不动杆菌42℃可生长。 血平板上 圆形凸起、2~3 mm ，光滑、边 缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状（溶 血不动杆菌可形成 β -溶血环）； 不产生色素。 麦康凯平板 形成粉红色菌落。
微生物学检验非发酵菌及检验
铜绿假单胞菌 不动杆菌属 产碱杆菌属 莫拉菌属 黄杆菌属 金氏杆菌属 土壤杆菌属等
非发酵菌主要特点
氧化酶：＋；不动杆菌属除外 O/F试验：O/－ 动力试验：多数有鞭毛，但半固体动力 试验不明显，常采用镜检或鞭毛染色
葡萄糖氧化发酵试验（O/F）
O/F培养基 （半固体高层）
O/F：O
革兰阴性杆菌 氧化酶＋ O/F： － 硝酸盐还原－；亚硝酸盐还原＋ KIA：底层斜面不变色 注意与不动杆菌鉴别
不动杆菌属－－主要特征
现已命名6个生物种，代表菌为醋酸钙不 动杆菌 革兰阴性球杆菌，成双排列，无鞭毛， 动力阴性 专性需氧，营养要求不高，普通平板、 Mac平板上可生长 氧化酶－；O/F：O／－；硝酸盐还原－ 临床标本分离率仅次于铜绿假单胞菌 检验程序
指示剂：溴麝香草酚蓝 培养基pH：
O/F：F
葡萄糖氧化发酵试验（O/F） O/OF：/F：O F O/F：－
肠道杆菌、非发酵菌、弧菌科鉴别
鉴定试验 肠杆菌科 非发酵菌 弧菌科
氧化酶
－
＋
＋
葡萄糖氧化/ 发酵（O/F）
鞭毛
F 周鞭毛
O／－
F
单、丛、周 单、丛
假单胞菌属
假单胞菌科细菌根据rRNA-DNA同源性 分为5群，其中Ⅰ群属于假单胞菌属，共 7种细菌，代表菌种为铜绿假单胞菌。 多为条件致病菌，是医院感染的主要病 原菌
假单胞菌属共同点
革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单或 丛鞭毛 专性需氧 营养要求不高 氧化酶：＋ O/F：O Mac生长：＋ 产生水溶性色素
铜绿假单胞菌－－形态染色
革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单 或丛鞭毛
铜绿假单胞菌－－培养特性
专性需氧、营养要求不高 最适温度35℃，42 ℃ 生长，4℃不生长 产生荧光素和蓝绿色水溶性的绿脓素， 培养物呈蓝绿色。 培养物有生姜气味
非发酵菌的培养与鉴定
铜绿假单胞菌在血平板上的菌落形态
铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)
3.粗糙型：菌落呈纽扣状，表面 粗糙或菌落中央隆起边缘扁平。
铜绿假单胞菌在血平板和巧克力平板上的菌落形态
铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)
4.粘液型：菌落光滑，隆起，呈黏液 状，嵌入培养基中，不易挑起，似肺炎克 雷伯菌菌落，但菌落呈无色半透明。
结果判读：出现红色为 阳性，不变色为阴性。
氧化酶阳性
非发酵菌生化鉴定反应共选“套餐”
各生化管阴阳性结果的判读
斜面产碱，底层不变 H2S阴性K/K，H2S-
斜面产酸，底层产酸 斜面产碱，气体阴性，
产气， H2S阴性（A/A, H2S阳性（K/A,气体
气体+，H2S-）
+，H2S+）
动力实验 左管阳性，右管阴性
嗜血杆菌鉴定实验：“卫星现象”
原理：嗜血杆菌生长需要Ⅴ因子和（或）Ⅹ因子，血平 板中红细胞本身含这两种因子，Ⅹ因子溶血后可直接 释放，Ⅴ因子会被溶血时释放的NAD酶水解，而金 黄色葡萄球菌等在生长中能产生Ⅴ因子，因此，将这 两种细菌共培养时，释放或产生的因子可以促进嗜血 杆菌的生长，从而出现靠近金黄色葡萄球菌周围环绕 较大的嗜血杆菌菌落。该现象称之为卫星现象。
非发酵菌和嗜血杆菌的培养和鉴定
苏州大学附属第二医院 微生物室 周惠琴
非发酵菌和嗜血杆菌的培养和鉴定
1 实验目的 2 实验内容 3 操作步骤 4 结果观察
一.实验目的
1.掌握常见非发酵菌的菌落特点、染色形 态及生化反应鉴定实验。
2.掌握嗜血杆菌属的菌落特点及鉴定实验。
二.实验内容
非发酵菌的鉴定
非发酵菌的鉴定定义：非发酵菌（nonfermenters）指一群需氧或兼性厌氧、不发酵糖类，能在普通培养基上生长的革兰阴性杆菌。
主要存在外界环境中，种类繁多，多为条件致病菌或医院内感染菌。
关于临床标本中NFB的意义，在混合培养物中见到时，必须考虑到患者的情况和标本来源。
一般来说，以纯培养方式分离自正常无菌部位的NFB，一定要鉴定到种并进行抗生素敏感性试验。
目前CLSI中，K-B法除了假单胞菌属、不动杆菌属、嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌有抗生素敏感性实验的判断标准外，其他非发酵菌没有K-B法的标准。
一、鉴定原则：1．血、无菌部位（脑脊液、胸水等），特殊病人，少见菌可用API-20NE或VIKET TWO-GN 卡鉴定。
2．其它部位如呼吸道标本、临床常见的非发酵，根据菌落形态、生化反应、抗生素耐药谱等综合分析手工法鉴定即可。
二、非发酵性菌基本分类：假单胞菌属Pseudomonas spp.（20多个临床上重要菌种中，铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌等最常见。
）不动杆菌属Acinetoacter spp.（最常分离的种鲍曼不动杆菌、鲁氏不动杆菌、溶血不动杆菌等）窄食单胞菌Stenotrophomonas spp.（嗜麦芽窄食单胞菌、非洲嗜麦芽窄食单胞菌）伯克霍尔德菌Burkholderia spp.（洋葱伯克霍尔德菌、唐菖蒲伯克霍尔德菌、类鼻疽伯克霍尔德菌等）鞘氨醇单胞菌属Sphingomonas spp.（少动鞘氨醇杆菌）无色杆菌属Achromobacter spp.（木糖氧化无色杆菌）希瓦氏菌属Shewanella spp. （腐败希瓦氏菌海藻希瓦氏菌）产硷菌属Alcaligenes spp.黄杆菌属Flavoacterium spp.莫拉菌属Moraxella spp.罗尔斯通菌属 Ralstonia spp.食酸菌属Acidovorax spp.丛毛单胞菌属Comamonas spp.甲基杆菌属Methylobacterium spp.等还有一些未定名的菌群三、辨认非发酵菌的基本要点1. 分离培养基上的菌落有以下情况初步考虑非发酵菌的存在a.培养基上生长较差或中国蓝上不生长的阴性菌。
实验：非发酵菌的鉴定
＋/－ ＋
嗜麦芽窄食单胞菌
氧化酶 动力 明胶 42ﾟC 42ﾟ 七叶苷 赖氨酸 – + + +/+/+ +
方法： 方法：
1.形态观察； 1.形态观察； 2.菌落观察； 2.菌落观察； 3.生化反应。 3.生化反应。
常见非发酵菌的鉴定依据 1.铜绿假单胞菌： 1.铜绿假单胞菌：
单端鞭毛（三根以下） 单端鞭毛（三根以下） 动 力 氧化分解（O-F培养基） 培养基） 氧化分解（ 葡萄糖 乳糖、蔗糖 乳糖、 木 糖 氧化酶 赖氨酸脱羧酶 精氨酸双水解酶 鸟氨酸脱羧酶 H2S产生 在42℃ 生长 42℃ ＋ － ＋/－ ＋ － ＋ － － ＋ 98 0 85 100 0 99 0 0 100 ＋ ＋ 97 97
不动杆菌属主要菌种间的鉴别
醋酸钙 葡萄糖氧化 木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶 鸟氨酸脱羧酶 枸椽酸盐利用 明胶液化 生长温度: 37℃ 生长温度: 37℃ 41℃ 41℃ 42℃ 42℃ + － ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ － － 鲍曼 + ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ 溶血 琼氏 约翰逊 洛菲 － － ＋ －/＋ － － － － － － － ＋ － － － － ＋ － － +/－ － +/－ +/－ － +/－ － ＋ － ＋ ＋ ＋ － － ＋ ＋ － － ＋ ＋ －
实酵菌的形态、染色特性、生 1.掌握常见非发酵菌的形态、染色特性、生 化反应及鉴定依据； 2.熟悉常见的几种非发酵菌的鉴定程序及鉴 2.熟悉常见的几种非发酵菌的鉴定程序及鉴 别方法。
器材和试剂
1.菌种：假单胞菌属细菌、不动杆菌属细菌 1.菌种：假单胞菌属细菌、不动杆菌属细菌 和窄食单胞菌属细菌； 2.鉴定试验：葡萄糖OF管，枸椽酸盐琼脂， 2.鉴定试验：葡萄糖OF管，枸椽酸盐琼脂， 尿素，鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸，明胶、 七叶苷，DNA酶，硝酸盐，木糖，乳糖， 七叶苷，DNA酶，硝酸盐，木糖，乳糖， 蔗糖。
每日一菌之非发酵菌及检验
每日一菌之非发酵菌及检验一、概述非发酵菌主要是指一群①不发酵或不分解糖类的②革兰阴性③无芽胞④需氧杆菌。
目前，非发酵菌包括13个属。
主要有假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。
这些细菌大多为条件致病菌。
对于非发酵菌的鉴定，必须首先进行种属间的鉴别，然后进行种间的鉴定。
一般实验室只需用几项试验，如氧化酶、O-F试验、动力及鞭毛、菌落色素、硝酸盐还原试验以及在麦康凯琼脂上的生长情况等即可对90%～95%分离的菌株作出初步鉴定。
1.培养温度：多数非发酵菌适宜生存于自然界，培养温度以30℃为宜。
有的更适宜生长于室温（18℃～22℃）。
故常规标本应先培养于35℃～37℃，再培养于30℃或室温。
2.动力与鞭毛：在非发酵菌的鉴定中，细菌是否具有鞭毛及鞭毛的特点有重要的诊断意义。
由于非发酵菌大部分为专性需氧菌，在半固体培养基上观察动力不明显，因细菌在琼脂表面生长，底层穿刺生长不良或不生长，故观察非发酵菌的动力以30℃或室温12～24h培养物悬滴法为准。
有时需借助鞭毛染色予以鉴定。
3.氧化酶试验：该试验是鉴定非发酵菌的重要试验，非发酵菌中除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。
4.氧化-发酵（O-F）试验：本试验是确定非发酵菌与发酵菌以及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。
非发酵菌对葡萄糖的代谢特点是氧化型产生微量酸。
在氧化-发酵（O-F）试验中，应为开管产酸，闭管不变。
5.在麦康凯琼脂上生长情况：如假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。
非发酵菌几种主要菌属的基本特征见表5-25-1。
表5-25-1 非发醇菌主要菌属的基本特征二、假单胞菌属假单胞菌属为一大组革兰阴性杆菌，大量存在于水、土壤和空气中。
在人类感染的非发酵菌中，假单胞菌属约占70%～80%，主要为铜绿假单胞菌（约55%～65%）。
其次为嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。
非发酵菌微生物学检验
⾮发酵菌微⽣物学检验⾮发酵G-杆菌(nonfermentative G- Bacilli)1. ⾮发酵菌是⼀群需氧、⽆芽孢、不利⽤糖或仅能氧化分解糖类是做为能量来源的G-杆菌。
（1）通常所讲的⾮发酵菌指在KIA中24⼩时内表⾯能够⽣长，在底部不⽣长的需氧G-杆菌。
（2）⾮发酵菌与其它苛养或⾮糖发酵的G-杆菌之间的界限只是传统意义上的，并不是根据明确的遗传或表型特点来划分。
（3）多为条件致病菌，近年来⽇益增多，尤其是医院感染。
2. 分类与命名：主要的⾮发酵G-杆菌属被分成6个科：（1）假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群①rRNAⅠ群/假单胞菌属；②rRNAⅡ群/伯克霍尔德菌属；③rRNAⅢ群/丛⽑单胞菌属、⾷酸菌属；④rRNAⅣ群/短波⽑单胞菌属；⑤rRNAⅤ群/窄⾷单胞菌属；⑥其它：鞘氨醇单胞菌属、希⽡菌属等（2）产碱杆菌科：产碱杆菌属；（3）黄杆菌科：华丽杆菌属（4）莫拉菌科：不动杆菌属、莫拉菌属；（5）甲基球菌科；（6）根瘤菌科3. ⾮发酵菌的基本鉴定要求（1）缺少糖发酵的证据，通常是在KIA或TSI培养基中⽆酸产⽣，斜⾯和底部均呈红⾊。
（2）氧化酶+（不动杆菌、嗜麦芽窄⾷单胞菌、唐菖蒲伯克菌、浅黄华丽单胞菌、栖稻黄素单胞菌-），但并⾮所有氧化酶+的G-杆菌都是⾮发酵菌。
（3）麦康凯上⽣长很差或不⽣长。
（4）动⼒：多为+，但多为专性需氧，故半固体培养基中不明显，宜⽤直接动⼒观察或染⾊法。
4. 重要的鉴定试验（1）葡萄糖利⽤（O/F试验）：O/F培养基:蛋⽩胨和糖类的⽐例为1:5⽽不同于发酵菌的1:2。
（2）氧化酶试验：（3）动⼒：半固体培养基:应只穿刺培养基顶部4mm，在培养4-6⼩时后⾸次观察结果,24和48⼩时后再次观察结果。
更准确的⽅法是湿⽚法和鞭⽑染⾊。
（4）⾊素形成：⾮发酵菌可形成多种⾊素，有助于菌种的鉴定。
（5）硝酸盐还原/产⽓：将硝酸盐还原成亚硝酸盐，进⽽释放氮的⽣化过程。
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产碱杆菌属
莫拉氏菌属
无色杆菌属
土壤杆菌属
黄色素
.
+
13
—
黄杆菌属
莫拉氏菌属
假单胞菌属 产碱杆菌属
无色杆菌属 土壤杆菌属
鞭毛染色
端毛菌
周毛菌
假单胞菌属
产碱杆菌属，无色杆菌属，土壤杆菌属
O型
O/F —
无色杆菌属，土壤杆菌属
还原硝酸盐后产气
+
—
产碱杆菌属
土壤杆菌属
无色杆菌属
.
14
第四节、非发酵菌群的属内鉴别
支气管败血鲍特氏菌，金氏杆菌属，无色杆菌属，
莫拉氏菌属，艾肯氏菌属，土壤杆菌属。
触酶
+
—
假单胞菌属，产碱杆菌属，黄杆菌属，
金氏杆菌属，
支气管败血鲍特氏菌，无色杆菌属，
艾肯氏菌属
莫拉氏菌属，土壤杆菌属
O/F
动力
弱F
—
37℃
18—24 ℃
金氏杆菌属
艾肯氏菌属
—
+
—
+
+
—
支气管败血 假单胞菌属
黄杆菌属
鲍特氏菌
.
20
铜绿假单胞菌鉴别要点：
（1）、铜绿假单胞菌在普通琼脂培养基上能 产生水溶性绿色素，使整个培养基变为绿色。
（2）、在血平板上经35—37℃，18—24h培 养可表现为：菌落灰绿色、半透明、大而扁 平、表面湿润、边缘不齐；有金属光泽；有 生姜样芳香气味；菌落周围有宽大的兰绿色 透明溶血环。
.
5
因此在临床上真正能分离出来且 有临床意义的非发酵菌群有：
假单胞菌属、寡氧单胞菌属、产碱杆菌属、黄杆菌属、 鲍特氏菌属（百日咳鲍特氏菌除外）、金氏杆菌属、不 动杆菌属、无色杆菌属、莫拉氏菌属、艾肯氏菌属、土 壤杆菌属。
.
6
第二节 非发酵菌群的初步识别
特性 形态染色 鞭毛及位置 氧化酶 O/F 试验
氧化酶阴性菌群
不动杆菌属，寡氧单胞菌属，付百日咳鲍特氏菌
动力
+
—
寡氧单胞菌属 （嗜麦芽寡氧单胞菌）
+ —
不动杆菌属，付百日咳鲍特氏菌 在鲍—金二氏培养基上产 棕色素 麦康凯上生长 —
+
付百日咳鲍特氏菌
不动杆菌属
.
12
（二）、氧化酶阳性菌群的 属间鉴别
氧化酶阳性菌群
假单胞菌属，产碱杆菌属，黄杆菌属，
肠杆菌科 杆状
周毛或无 — F
弧菌科 弧形或逗点状
端毛 + F
非发酵菌 球杆状 周毛、端毛或无
+/— O/—
巴斯德氏菌科 球杆状 无鞭毛 + F
.
7
.
8
第三节、 非发酵菌群的属间鉴别
菌属
假单胞菌属 寡氧单胞菌属 产碱杆菌属 黄杆菌属 鲍特氏菌属 金氏杆菌属 不动杆菌属 无色杆菌属 莫拉氏菌属 艾肯氏菌属 土壤杆菌属
.
3
但在临床上用一般方法不能够分 离出来的细菌有：
鲍特氏菌属（百日咳鲍特氏菌）：初次分离对营养 要求较高，在血琼脂平板和巧克力琼脂平板上均不 能生长，必须在含有血液、甘油、马铃薯以及活性 炭的包-金（Bordet-Gengou,B-G）二氏培养基上才能 生长。故用一般的培养基不可能将其分离出来。
麦康凯培 养基上生 长 生长 生长 生长 不易或— — 不定 生长 生长 抑制或— — 生长
.
9
.
10
非发酵菌群 氧化酶
+
假单胞菌属，产碱杆菌属，黄杆菌属， 支气管败血鲍特氏菌，金氏杆菌属， 无色杆菌属，莫拉氏菌属，艾肯氏菌属， 土壤杆菌属。
.
11
—
不动杆菌属 寡氧单胞菌属 付百日咳鲍特氏菌
（一）、氧化酶阴性菌群的 属间鉴别
.
15
一、假单胞菌属和 寡氧单胞菌属
假单胞菌属属假单胞菌科，该属为严格的专性需氧 的革兰氏阴性杆菌，具有一端鞭毛，无荚膜、无芽 孢。该菌属在自然界中分布广泛，营养要求不高， 氧化酶试验均为阳性，是假单胞菌科的代表菌属。
.
16
假单胞菌科由假单胞菌属及其亲缘关系密切的菌属（以 前大部分属于假单胞菌属）组成。用于假单胞菌科分类 的方案有两个：
其一：根据细菌的表型特征分为七个主要的组，即：产 荧光组、斯氏族、产碱组、食酸组、类鼻疽组、敏捷— 德氏组、缺陷组。
.
17
其二：根据rRNA—DNA同源性将假单胞菌科分为 5个rRNA同源群，即：
rRNA同源群Ⅰ—包括铜绿假单胞菌等12个种； rRNA同源群Ⅱ—包括伯克霍尔德菌属等7个种； rRNA同源群Ⅲ—包括食酸丛毛单胞菌等7个种； rRNA同源群Ⅳ—微小假单胞菌等8个种； rRNA同源群Ⅴ—寡氧单胞菌等64个种。
此外，还有4个种属于rRNA同源群未知的假单胞 菌。
.
18
上述分类中，不管采用哪种分类，临床上常见的只 有两个种，即假单胞菌属的铜绿假单胞菌和寡氧单 胞菌属的嗜麦芽寡氧单胞菌。
.
19
1、假单胞菌属
该菌属的代表种为铜绿假单胞菌。该菌早在1872年 由施罗顿（Schroeten）首先命名，因其在代谢过程 中能产生水溶性兰绿色色素，在感染部位能形成兰 绿色脓液，故称绿脓杆菌。该菌除分布在水源、土 壤、空气中外，亦存在于正常人的皮肤、呼吸道、 肠道中，是非发酵菌群中最常见的条件致病菌。
非发酵菌大多是条件致病菌，可引起各种感染， 尤其是医源性感染，近年来各国发病率逐年上升， 已成为当前医院管理中的一个重要问题。
.
2
非发酵菌的种类很多，包括十几个菌属、几十个种，有 些还有生物型、亚型等。但与医学关系密切的、具有临 床意义的有：假单胞菌属、寡氧单胞菌属、产碱杆菌属、 黄杆菌属、鲍特氏菌属、金氏杆菌属、不动杆菌属、无 色杆菌属、莫拉氏菌属、艾肯氏菌属、土壤杆菌属、军 团菌属。
非发酵一节 非发酵菌概述
非发酵菌（Nonfermenters）是指一大类不能以 发酵方式（或不能以明显发酵方式）分解葡萄糖 的革兰氏阴性无芽孢的需氧或兼性厌氧杆菌。它 们在分类学上分别隶属于不同的科、属，但生理 生化特性又很相似，故在临床微生物学检验中， 常把它们当作同一类菌群来对待。
氧化酶
+ — + + +/— + — + + + +
触酶
+ + + + + — + + + — +
动 力 O/F 试验 色 素
+（端毛） O 型/—
+（端毛） O 型/—
+（周毛） —
—
O 型/弱 F
—/+（周毛 —
—
弱/F
—
O 型/—
+（周毛） O 型
—
—
—
—
+（周毛） O 型
绿棕红无 部分黄色 — 黄 —/棕 — — — — — —
.
4
军团菌属营养要求苛刻，普通培养基、血平板和巧克力平板均 不生长；生长过程中需要多种微量元素如：铁、钙、镁、锰、 锌、钼等作为酶的协同因子；同时需要甲硫氨酸、半胱氨酸等 特殊氨基酸才能生长。目前公认的最适宜培养基是缓冲活性炭 酵母浸出液，加上铁、L-半胱氨酸和α-酮戊二酸组成的BCYEa （buffered charcoal – yeast extract agar）培养基。