丝氨酸
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性状：白色结晶性粉末。无臭，味甜。约于228℃熔化并分解。PH值9时外消 旋化。蛋白质加酸水解时损失很多。热稀碱溶液中分解。溶于水 (38g/100ml,20℃) 和甲酸;不溶于乙醇。
用途：营养增补剂，调味料。氨基酸类药。主要用于氨基酸输液，因有特殊 润湿性，也用于雪花膏、化妆品中。
丝氨酸是一种非必需氨基酸，它在脂肪和脂肪酸的新陈代谢及肌肉的生长中 发挥着作用，因为它有助于免疫血球素和抗体的产生，维持健康的免疫系统 也需要丝氨酸。丝氨酸在细胞膜的制造加工、肌肉组织和包围神经细胞的鞘 的合成中都发挥着作用。
L-丝氨酸的酶法合成及分析
班级：生物制药1311 姓名：徐洁 组别：第2组
指导老师：韦平和 彭加平
目录
L-丝氨酸的简介 酶法合成原理 操作步骤 L-丝氨酸的分析 注意事项
L-丝氨酸的简介
英文名称：L-Serine
分子式：C3H7NO3
分子量：105.09
来源：丝氨酸可以从大豆、酿酒发酵剂、乳制品、鸡蛋、鱼、乳白蛋白、豆 荚、肉、坚果、海鲜、种子、大豆、乳清和全麦获取。
hydroxymethyltransferase, SHMT, E.C.2.1.2.1), 该酶以5-磷酸毗哆醛(5-Pyridoxal phosphate, PLP)作为其辅酶。
利用动物肝脏匀浆和微生物所做的研究表明:叶酸及其大多 数衍生物如二氢叶酸、四氢叶酸、甲酞四氢叶酸等对甘氨 酸与丝氨酸的相互转换具有促进作用，其中尤以四氢叶酸 献作用最为明显，当不存在四氢叶酸等辅因子时，正、逆 反应的速度仅是存在合适浓度四氢叶酸时的千分之一 (Blakley RL, 1954; 1960)。在体外条件下，当有一定浓度 的四氢叶酸(Tetrahydrofolica cid,T HFA)存在时，SHMT也 可催化甲醛与甘氨酸可逆地合成L-Ser，在前 述 的 L一丝 氨酸发酵法生产中，以经传统育种方法得到的高产 SHMT 的菌株作为酶源。
酶法合成原理
L-丝氨酸是一个重要的药用氨基酸. 利用丝氨酸羟甲基转移酶催化甲醛 和甘氨酸,可逆地合成L-丝氨酸(图8) ,反应过程中丝氨酸羟甲基转移酶 需要PLP和四氢叶酸作为辅助因子. 最终反应液中L-丝氨酸浓度达到0. 2 mol/ L ,该法是目前最有应用前景的L-丝氨酸生产方法。
在动 、植 物体内和微生物细胞内，普遍存在着甘 氨酸和丝氨酸的互相转换。该反应的生理方向是L 一丝氨酸断裂成为甘氨酸和N5, N,o亚甲基四氢叶 酸，其中辅酶四氢叶酸作为C.基团的载体。生物 体内包含甲基基团的化合物、PI吟环等的生物合 成均利用该步反应提供的C、基团。催化该步反应 的酶是丝氨酸经甲基转移酶(serine
4、37℃空气浴摇床震荡反应30min，调起始pH7.5，加甲醛使其浓度达 IOmmol/L, pH下降至7.22wenku.baidu.com当pH上升至7.42后，加入甲醛直至至7.22,液 pH6.0,pH降反复添加甲醛，直至反应液pH不随时间变化。反应结束后， 调节反应5000r/min离心I0min，收集上清液。进行分析检测。
酶反应体系建立时，甲醛多次少量加入，防止酶 失活。
超声波细胞破碎时注意间歇时间，以工作2s间歇 3s为宜。
参考文献
陈永波,饶斌,覃兰;高效液相色谱法快速直接测定酪氨酸、苯丙氨酸和 色氨酸[J];氨基酸和生物资源;2000年01期
胡兵,龙化云,黄光斗;丙酮酸的合成研究进展[J];化工时刊;2003年09期
请批评指正！
L-丝氨酸的分析检测
1、展开剂 正丁醇：丙酮：水：氨水 （100:40:38:2） 2、显色剂 0.5g茚三酮溶于100ml丙酮中 3、样品溶液 （1）样品溶液 （2）L-丝氨酸标准溶液
分析操作步骤
注意事项
纸层析法中所用的有机溶剂如丙酮等，一般有挥 发性、并有一定毒性，使用时要注意密封层析， 避免吸入过多有害挥发物。
李省云,杨毅萍;L-丝氨酸与四氯对苯醌的荷移反应[J];光谱实验室;2004 年06期
丝氨酸羟甲基转移酶基因的功能表达及其活性鉴定 - 食品与发酵工业 2002, 28(1)
期刊论文 丝氨酸羟甲基转移酶基因(glyA)的克隆 - 广西农业生物科学 - 2003, 22(2)
期刊论文 两种菌株来源的glyA基因的克隆、表达及酶活性检测 - 氨基 酸和生物资源 - 2006, 28(1)
超声波细胞破碎仪工作原理
就是将电能通过换能器转换为声能，这种能量通 过液体介质(如水)而形成一个个密集的小气泡，这 些小气泡迅速炸裂，产生像炸弹一样的能量，从 而起到破碎细胞等物质的作用，俗称空话效应， 超声波细胞破碎仪具有破碎组织、细菌、病毒、 孢子及其他细胞结构，以及乳化、混合、脱气、 崩解、分散、清洗和提取等作用。
操作步骤
1、丝氨酸羟甲基转移酶工程菌的活化
2、工程菌的破碎
工程菌于150V超声破壁20min,10000r/min,15min,取上清液。
3、酶法合成反应体系的建立
取已破碎的菌悬液，加等体积20mmon/l PLP溶液，37℃摇床震荡温 育30min，然后向反应容器中加入100ml酶反应液（10mmol/L甘氨酸， 13.3mmol/L甲醛，0.4mmol/L磷酸吡哆醛，5mmol/L四氢叶酸， 0.1mmol/L磷酸缓冲液）。
纸层析原理
纸层析法依据极性相似相溶原理，是以滤纸纤维的结合水为固定相， 而以有机溶剂作为流动相。由于样品中各物质分配系数不同，因而扩 散速度不同，从而达到分离的目的。
试样经层析后可用比移值（Rf）表示各组成成分的位置（比移值=原 点中心至色谱斑点中心的距离与原点中心至流动相前沿的距离之比） ，由于影响比移值的因素较多，因此一般采用在相同实验条件下对照 物质对比以确定其异同。作为单体鉴别时，试样所显主色谱斑点的颜 色（或荧光）与供置，应与对照（标准）样所显主色的谱斑点或供试 品-对照品（1∶1）混合所显的主色谱斑点相同。作为质量指标（纯度 ）检查时，可取一定量的试样，经展开后，按各单体的规定，检视其 所显杂质色谱斑点的个数或呈色（或荧光）的强度。作为含量测定时 ，可将色谱斑点剪下洗脱后，再用适宜的方法测定，也可用色谱扫描 仪测定。
用途：营养增补剂，调味料。氨基酸类药。主要用于氨基酸输液，因有特殊 润湿性，也用于雪花膏、化妆品中。
丝氨酸是一种非必需氨基酸，它在脂肪和脂肪酸的新陈代谢及肌肉的生长中 发挥着作用，因为它有助于免疫血球素和抗体的产生，维持健康的免疫系统 也需要丝氨酸。丝氨酸在细胞膜的制造加工、肌肉组织和包围神经细胞的鞘 的合成中都发挥着作用。
L-丝氨酸的酶法合成及分析
班级：生物制药1311 姓名：徐洁 组别：第2组
指导老师：韦平和 彭加平
目录
L-丝氨酸的简介 酶法合成原理 操作步骤 L-丝氨酸的分析 注意事项
L-丝氨酸的简介
英文名称：L-Serine
分子式：C3H7NO3
分子量：105.09
来源：丝氨酸可以从大豆、酿酒发酵剂、乳制品、鸡蛋、鱼、乳白蛋白、豆 荚、肉、坚果、海鲜、种子、大豆、乳清和全麦获取。
hydroxymethyltransferase, SHMT, E.C.2.1.2.1), 该酶以5-磷酸毗哆醛(5-Pyridoxal phosphate, PLP)作为其辅酶。
利用动物肝脏匀浆和微生物所做的研究表明:叶酸及其大多 数衍生物如二氢叶酸、四氢叶酸、甲酞四氢叶酸等对甘氨 酸与丝氨酸的相互转换具有促进作用，其中尤以四氢叶酸 献作用最为明显，当不存在四氢叶酸等辅因子时，正、逆 反应的速度仅是存在合适浓度四氢叶酸时的千分之一 (Blakley RL, 1954; 1960)。在体外条件下，当有一定浓度 的四氢叶酸(Tetrahydrofolica cid,T HFA)存在时，SHMT也 可催化甲醛与甘氨酸可逆地合成L-Ser，在前 述 的 L一丝 氨酸发酵法生产中，以经传统育种方法得到的高产 SHMT 的菌株作为酶源。
酶法合成原理
L-丝氨酸是一个重要的药用氨基酸. 利用丝氨酸羟甲基转移酶催化甲醛 和甘氨酸,可逆地合成L-丝氨酸(图8) ,反应过程中丝氨酸羟甲基转移酶 需要PLP和四氢叶酸作为辅助因子. 最终反应液中L-丝氨酸浓度达到0. 2 mol/ L ,该法是目前最有应用前景的L-丝氨酸生产方法。
在动 、植 物体内和微生物细胞内，普遍存在着甘 氨酸和丝氨酸的互相转换。该反应的生理方向是L 一丝氨酸断裂成为甘氨酸和N5, N,o亚甲基四氢叶 酸，其中辅酶四氢叶酸作为C.基团的载体。生物 体内包含甲基基团的化合物、PI吟环等的生物合 成均利用该步反应提供的C、基团。催化该步反应 的酶是丝氨酸经甲基转移酶(serine
4、37℃空气浴摇床震荡反应30min，调起始pH7.5，加甲醛使其浓度达 IOmmol/L, pH下降至7.22wenku.baidu.com当pH上升至7.42后，加入甲醛直至至7.22,液 pH6.0,pH降反复添加甲醛，直至反应液pH不随时间变化。反应结束后， 调节反应5000r/min离心I0min，收集上清液。进行分析检测。
酶反应体系建立时，甲醛多次少量加入，防止酶 失活。
超声波细胞破碎时注意间歇时间，以工作2s间歇 3s为宜。
参考文献
陈永波,饶斌,覃兰;高效液相色谱法快速直接测定酪氨酸、苯丙氨酸和 色氨酸[J];氨基酸和生物资源;2000年01期
胡兵,龙化云,黄光斗;丙酮酸的合成研究进展[J];化工时刊;2003年09期
请批评指正！
L-丝氨酸的分析检测
1、展开剂 正丁醇：丙酮：水：氨水 （100:40:38:2） 2、显色剂 0.5g茚三酮溶于100ml丙酮中 3、样品溶液 （1）样品溶液 （2）L-丝氨酸标准溶液
分析操作步骤
注意事项
纸层析法中所用的有机溶剂如丙酮等，一般有挥 发性、并有一定毒性，使用时要注意密封层析， 避免吸入过多有害挥发物。
李省云,杨毅萍;L-丝氨酸与四氯对苯醌的荷移反应[J];光谱实验室;2004 年06期
丝氨酸羟甲基转移酶基因的功能表达及其活性鉴定 - 食品与发酵工业 2002, 28(1)
期刊论文 丝氨酸羟甲基转移酶基因(glyA)的克隆 - 广西农业生物科学 - 2003, 22(2)
期刊论文 两种菌株来源的glyA基因的克隆、表达及酶活性检测 - 氨基 酸和生物资源 - 2006, 28(1)
超声波细胞破碎仪工作原理
就是将电能通过换能器转换为声能，这种能量通 过液体介质(如水)而形成一个个密集的小气泡，这 些小气泡迅速炸裂，产生像炸弹一样的能量，从 而起到破碎细胞等物质的作用，俗称空话效应， 超声波细胞破碎仪具有破碎组织、细菌、病毒、 孢子及其他细胞结构，以及乳化、混合、脱气、 崩解、分散、清洗和提取等作用。
操作步骤
1、丝氨酸羟甲基转移酶工程菌的活化
2、工程菌的破碎
工程菌于150V超声破壁20min,10000r/min,15min,取上清液。
3、酶法合成反应体系的建立
取已破碎的菌悬液，加等体积20mmon/l PLP溶液，37℃摇床震荡温 育30min，然后向反应容器中加入100ml酶反应液（10mmol/L甘氨酸， 13.3mmol/L甲醛，0.4mmol/L磷酸吡哆醛，5mmol/L四氢叶酸， 0.1mmol/L磷酸缓冲液）。
纸层析原理
纸层析法依据极性相似相溶原理，是以滤纸纤维的结合水为固定相， 而以有机溶剂作为流动相。由于样品中各物质分配系数不同，因而扩 散速度不同，从而达到分离的目的。
试样经层析后可用比移值（Rf）表示各组成成分的位置（比移值=原 点中心至色谱斑点中心的距离与原点中心至流动相前沿的距离之比） ，由于影响比移值的因素较多，因此一般采用在相同实验条件下对照 物质对比以确定其异同。作为单体鉴别时，试样所显主色谱斑点的颜 色（或荧光）与供置，应与对照（标准）样所显主色的谱斑点或供试 品-对照品（1∶1）混合所显的主色谱斑点相同。作为质量指标（纯度 ）检查时，可取一定量的试样，经展开后，按各单体的规定，检视其 所显杂质色谱斑点的个数或呈色（或荧光）的强度。作为含量测定时 ，可将色谱斑点剪下洗脱后，再用适宜的方法测定，也可用色谱扫描 仪测定。