5种医用益生菌产品的微生物数量和种属分析
7种临床用口服益生菌制剂的活菌数量测定与分析
作者简介 :姚迪翡 ,女 ,药师 3 通讯作者 :徐翔 ,男 ,副主任药师 Tel: (0571) 87784540 E2mail: xytxu@126. com
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Chin JMAP, 2007 August, Vol. 24 No. 4 中国现代应用药学杂志 2007年 8月第 24卷第 4期
[ 4 ] MANEGOLD C, ZATLOUKAL P, KREJCY K, et a l. Gemcit2 abine in non2small2cell lung cancer [ J ]. Invest New D rugs, 2000, 18 ( 1) : 29.
[ 5 ] BRETTI S, MANZIN E, LODDO C, et al. Gemcitabine p lus cis2 p latin in the treatment of patients with advanced non2small2cell lung cancer: a phase Ⅱ study [ J ]. Anticancer Res, 2002, 22 ( 5) : 3039.
仪 (美国 BD 公司 ) , V ITEL - AM S全自动微生物鉴定仪和 (30～300个菌落 /皿为佳 ) 。
V ITEK2全自动微生物鉴定仪 (法国 B iomerieux公司 ) , AP I
根据 3个平皿菌落总数按下列公式计算活菌数 :活菌数
鉴定板条 (法国 B iomerieux公司 ) 。
羊血浆购自浙江大学医学院动物中心 。
统进行分析鉴定 。此方法可将细菌鉴定到种 。
1. 3 仪器
1. 4. 3 菌落计数 将平板置菌落计数器上或从平板的背面
生化培养箱 LRH - 250A 型 (广东省医疗器械厂 ) ,厌氧 直接以肉眼用标记笔点计 ,以透视光衬以暗色背景 ,仔细观
几种常用益生菌简介
几种常用益生菌简介1、两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum）形态及培养特征：菌体外形呈高度变化的棒状，分叉、弯曲、不规则状。
在固体培养基上厌氧培养时菌落成圆形，微凸起，具有乳白色、不透明光滑粘液性表面。
革兰氏阳性，但随发酵时间变化可能出现异常；要求有机氮作氮源，最适生长温度36-38℃，≤20℃或≥45℃不生长；最适pH6-7，pH≤5.5生长缓慢或不生长。
培养基：TPY培养基或GAM 培养基或BS培养基应用范围：酸奶、乳酸菌饮料、奶酪、肉制品发酵、火腿香肠发酵、蔬菜发酵、大豆乳发酵、绿豆乳发酵、果汁发酵、谷物发酵、薯类发酵、酿酒；生产含益生菌奶粉、各类食品、各类饮品、各类乳制品、保健品、制成胶囊、压成片剂、粉状冲剂等。
动物、家畜、家禽、鱼饲料添加剂，用于猪、牛、鸡饮用水等，代替抗生素，减少药物在体内的残留量。
生物学功能：保持肠道微生态平衡，改善胃肠功能，润肠通便，使肠道处于健康状态。
2、青春双歧杆菌（Bifidobacterium adolescentis）形态及培养特征：呈短弯曲棒状，有时双歧棒状。
菌落光滑、凸圆、边缘完整、乳白色、闪光并具有柔软的质地，厌氧，在有氧的的斜面上不生长，但对氧的敏感性因菌种不同而异。
最适生长温度35-37℃，≤20℃或≥46.5℃不生长；培养基：TPY培养基或GAM 培养基或BS培养基应用范围：酸奶、乳酸菌饮料、奶酪、大豆乳发酵、绿豆乳发酵、果汁发酵、；生产含益生菌奶粉、各类食品、各类饮品、各类乳制品、保健品、制成胶囊、压成片剂、粉状冲剂等。
动物、家畜、家禽、鱼饲料添加剂，用于猪、牛、鸡饮用水等，代替抗生素，减少药物在体内的残留量。
生物学功能：保持肠道微生态平衡，改善胃肠功能，润肠通便，使肠道处于健康状态。
3、长双歧杆菌（Bifidobacterium.longum）形态及培养特征：呈长、弯曲、棒状或球棒状，革兰氏染色性质可变，菌落隆起、光滑或起伏状，直径2-5mm,发光或粘液外表。
益生菌检验的检测方法
益生菌检验的检测方法益生菌的检验方法通常包括培养法、PCR法、酶联免疫吸附法（ELISA）、质谱法等。
以下是关于益生菌检验的50条方法及详细描述：1. 培养法：益生菌可以通过在富含营养物质的琼脂培养基中进行培养，观察生长情况和菌落形态来进行定性和定量分析。
2. PCR法：通过聚合酶链式反应（PCR）对DNA进行扩增，然后使用特定基因序列的引物进行检测，可以快速准确地检测益生菌。
3. 酶联免疫吸附法（ELISA）：利用益生菌表面的特定蛋白质进行ELISA检测，可以快速检测益生菌的存在和浓度。
4. 质谱法：利用质谱仪对益生菌进行分析，可以确定其分子量和结构，也可以用于鉴定益生菌的种属。
5. 荧光定量PCR法：利用特定的引物和荧光探针对益生菌的DNA进行扩增和检测，可以实现对益生菌的高灵敏度和定量测定。
6. 基因芯片技术：使用特定的基因芯片对益生菌进行检测，可以实现对多种益生菌的同时检测和鉴定。
7. 流式细胞术：利用流式细胞仪对益生菌进行流式细胞术分析，可以实现高通量的益生菌检测和鉴定。
8. 微生物电极法：利用微生物电极对益生菌进行电化学检测，可以实现对益生菌的迅速检测和定量分析。
9. 蛋白质质谱法：通过蛋白质质谱技术对益生菌进行蛋白质组学分析，可以揭示益生菌的代谢途径和功能。
10. 生物传感器技术：利用生物传感器对益生菌进行检测，可以实现对益生菌的实时监测和分析。
11. 纳米生物传感器技术：使用纳米技术和生物传感器对益生菌进行检测，可以实现对益生菌的高灵敏度和快速检测。
12. 毛细管电泳技术：利用毛细管电泳对益生菌进行检测，可以实现对益生菌的分离和鉴定。
13. 核磁共振技术：利用核磁共振技术对益生菌进行分析，可以揭示益生菌的结构和代谢情况。
14. 高效液相色谱技术：利用高效液相色谱技术对益生菌进行检测，可以实现对益生菌的成分和浓度的分析。
15. 荧光显微镜技术：利用荧光显微镜对益生菌进行观察和检测，可以实现对益生菌的生长和形态的分析。
益生菌等级划分-概述说明以及解释
益生菌等级划分-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述随着人们对健康意识的提高，益生菌作为一种有益于人体健康的微生物开始受到更多关注。
益生菌具有调节肠道菌群、增强免疫力、促进营养吸收等多种功能，因此被广泛应用于食品、保健品以及医学领域。
然而，市面上的益生菌产品琳琅满目，其品质和效果参差不齐，对于消费者来说，如何判断益生菌产品的质量和等级成为一个迫切的问题。
为了解决这一问题，益生菌等级划分应运而生。
益生菌等级划分是根据益生菌产品在质量和效果上的不同，将其分为不同等级，并制定相应的标准进行评定和认证。
这样一来，消费者就可以根据产品的等级进行选择，从而更加准确地得到适合自己需求的益生菌产品。
本文将从益生菌的定义和作用、益生菌的分类、益生菌等级划分的背景以及益生菌等级划分的标准等方面进行探讨。
通过对益生菌等级划分的深入了解，我们能够更好地了解益生菌产品的质量和效果，为消费者提供科学、合理的选择指南。
同时，本文也将对益生菌等级划分的意义、应用和展望进行探讨，以期为益生菌行业的发展和消费者的健康提供借鉴和启示。
在接下来的章节中，我们将从不同角度全面分析益生菌等级划分的相关问题，希望能够为读者提供一份全面、系统的信息，以促进益生菌行业的良性发展，并引领消费者正确选择和使用益生菌产品。
1.2文章结构文章结构本文主要分为引言、正文和结论三个部分。
下面将对每个部分的内容进行详细说明。
引言部分主要介绍了本文所讨论的主题，即益生菌等级划分的问题。
在引言的概述中，将简要介绍益生菌的定义和作用，为读者提供相关背景知识。
文章结构部分将在此处进行介绍，以帮助读者快速了解本文的构成。
正文部分是本文的重点，将详细探讨益生菌等级划分的相关内容。
首先，在益生菌的定义和作用一节中，将详细介绍益生菌的概念、特点以及其在人体健康中的作用。
接下来，在益生菌的分类一节中，将对益生菌进行分类，介绍不同种类和菌株的特点和功能。
在益生菌等级划分的背景一节中，将分析导致益生菌等级划分需求的原因和背景，为读者了解这一问题的发展提供相关背景资料。
可用于保健食品的益生菌菌种名单
附件：可用于保健食品的益生菌菌种名单（卫法监发〔2001〕84号）发布日期：2010-07-20 来源：卫生部浏览次数：505【发布单位】卫生部【发布文号】卫法监发〔2001〕84号【发布日期】 2001-03-23【生效日期】 2001-03-23【效力】【备注】两岐双岐杆菌 Bifidobacterium bifidum婴儿双岐杆菌 B. infantis长双岐杆菌 B. longum短双岐杆菌 B. breve青春双岐杆菌 B. adolescentis保加利亚乳杆菌 Lactobacillus. bulgaricus嗜酸乳杆菌 L. acidophilus干酪乳杆菌干酪亚种 L. Casei subsp. casei嗜热链球菌 Streptococcus thermophilus卫生部关于印发真菌类和益生菌类保健食品评审规定的通知中华人民共和国卫生部2004-06-04 16:19:00卫法监发〔2001〕84号各省、自治区、直辖市卫生厅局，中国预防医学科学院：为规范保健食品审批，现印发《真菌类保健食品评审规定》、《益生菌类保健食品评审规定》。
请遵照执行。
附件：1、真菌类保健食品评审规定2、可用于保健食品的真菌菌种名单3、真菌菌种检定单位名单4、益生菌类保健食品评审规定5、可用于保健食品的益生菌菌种名单6、益生菌菌种检定单位名单二○○一年三月二十三日附件1：真菌类保健食品评审规定第一章总则第一条为规范真菌类保健食品评审工作，确保真菌类保健食品的食用安全，根据《中华人民共和国食品卫生法》、《保健食品管理办法》的有关规定，制定本规定。
第二条真菌类保健食品系指利用可食大型真菌和小型丝状真菌的子实体或菌丝体生产的具有特定功能的产品。
真菌类保健食品必须安全可靠,即食用安全，无毒无害，生产用菌种的生物学、遗传学、功效学特性明确和稳定。
第三条除长期袭用的可食真菌的子实体及其菌丝体外，可用于保健食品的真菌菌种名单由卫生部公布。
益生菌检验的检测方法
益生菌检验的检测方法益生菌的检验是非常重要的，可以通过多种方法进行检测。
以下是50种关于益生菌检验的检测方法，并对每种方法进行详细描述：1. 大肠杆菌计数法：采用琼脂平板法或膜过滤法，通过菌落计数的方法对益生菌进行检测。
该方法主要适用于大肠杆菌等益生菌的检测。
2. PCR法：通过聚合酶链式反应（PCR）检测益生菌的DNA序列，从而确认益生菌的存在和数量。
3. 荧光定量PCR法：利用荧光探针和PCR技术，对益生菌进行快速、准确的检测和定量。
4. 酶联免疫吸附法（ELISA）：利用特异性的抗体和酶标记技术，对益生菌进行免疫学检测。
5. 生物传感器法：利用生物传感器对益生菌的生理特性进行监测和检测。
6. 过氧化氢测定法：通过测定样品中过氧化氢的含量，间接检测益生菌的存在和活性。
7. 气相色谱法：通过气相色谱仪对益生菌代谢产物进行分析，以确定益生菌的种类和数量。
8. 超高效液相色谱法（UPLC）：利用超高效液相色谱技术对益生菌中的活性成分进行定量分析。
9. 电化学方法：利用电化学传感器对益生菌的代谢产物进行检测，实现对益生菌活性的快速监测。
10. 微流控技术：结合微流控芯片和检测设备，对益生菌进行高通量、高灵敏度的检测。
11. 潜热法：通过测定益生菌样品的潜热变化，间接确定其生长和代谢活性。
12. 毛细管电泳法：利用毛细管电泳技术对益生菌进行成分分析和检测。
13. 红外光谱法：通过红外光谱技术对益生菌样品进行特征光谱分析，从而确定其种类和数量。
14. 质谱法：利用质谱仪对益生菌样品进行分子质量分析，确定其成分和结构。
15. 拉曼光谱法：通过拉曼光谱技术对益生菌进行非破坏性的快速检测和鉴定。
16. 磁性生物纳米颗粒法：利用磁性生物纳米颗粒对益生菌进行富集和检测。
17. 液相色谱质谱联用法（LC-MS）：结合液相色谱和质谱技术对益生菌进行成分分析和定量检测。
18. 微波辐射法：利用微波辐射技术对益生菌样品进行快速灭菌和检测。
益生菌知识介绍-PPT
益生菌有许多令人惊奇的功效，但这些不同的功效高度依赖于“菌株的特定性”。也就是说，通过大量和长期的临床研究证实了某个特定的益生菌株具有某种明确的功能，但并不意味着其他同种益生菌的不同菌株也必定有同样或相似的功能。比如，丹尼斯克HOWARUä优质益生菌系列，经过多年科学研究和临床证实，证明其中某些特种菌株的特定配合，对于缓解某些健康问题，如肠道综合症、过敏、呼吸道感染等有着预防和缓解的功效，但并不能说明任何其他的同类菌株也有同样的功效
生活中的益生菌
益生菌从何获取？ 市面上的益生菌产品包括含益生菌的酸奶、酸奶酪、酸豆奶以及口服液、片剂、胶囊、粉末剂等。最方便的当算是饮品类。
01
益生菌如何保存？ 益生菌产品必须低温冷藏保存。这样才能最大限度地保持其中活性益生菌的数量。一般保质期在1个月内，冷藏温度控制在2~10℃左右。建议放入冰箱保鲜层，避免在温度太高或者直射光下保存，这样会引起里面活菌过度发酵，口味变酸，效果受影响。
益生菌从何获取？ 市面上的益生菌产品包括含益生菌的酸奶、酸奶酪、酸豆奶以及口服液、片剂、胶囊、粉末剂等。最方便的当算是饮品类。
益生菌如何保存？ 益生菌产品必须低温冷藏保存。这样才能最大限度地保持其中活性益生菌的数量。一般保质期在1个月内，冷藏温度控制在2~10℃左右。建议放入冰箱保鲜层，避免在温度太高或者直射光下保存，这样会引起里面活菌过度发酵，口味变酸，效果受影响。
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嗜酸乳杆菌
保加利亚乳杆菌
干酪乳杆菌
发酵乳杆菌
胚芽乳杆菌
短乳杆菌
纤维二糖乳杆菌
乳酸乳杆菌
乳酸杆菌
链球菌有：
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粪链球菌
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益生菌中乳酸菌概况及检测技术的研究进展
益生菌中乳酸菌概况及检测技术的研究进展周莉; 平洋; 谭静; 张亚勋; 罗蓓蓓【期刊名称】《《中国调味品》》【年(卷),期】2019(044)010【总页数】5页(P190-194)【关键词】益生菌; 乳酸菌; 检测技术; 研究进展【作者】周莉; 平洋; 谭静; 张亚勋; 罗蓓蓓【作者单位】河南省商业科学研究所有限责任公司郑州 450002【正文语种】中文【中图分类】TS201.571 益生菌概述益生菌(probiotics)的概念最早源于希腊语，意为“对生命有益”。
2001年，联合国粮农组织和世界卫生组织将益生菌定义为“当活性微生物足量且给予宿主健康益处”。
但是由于“健康益处”这一概念太过于模糊，世界卫生组织将其进一步补充为“对主体的益处必须实现，并且被证明超过安慰补偿剂的范围”[1]。
益生菌是指通过改善人类肠道菌群进而改善人体健康状况的一类活菌，但不是所有的有益菌都称得上是益生菌，要想成为益生菌需符合以下条件：能够耐受胃液、胆汁的腐蚀；在肠内是存活状态且能增殖；能够改善肠内菌群；保证安全性；活菌状态且含一定菌数；经济实惠且容易处理[2]。
益生菌不仅具有改善食品风味，延长食品保质期，提高食品营养价值的功能，而且其还具有调节胃肠道菌群正常和维持人体肠道卫生平衡的功能[3]。
益生菌在益生菌饮品、益生菌制剂和膳食添加剂中应用广泛，如益生菌饮料乳制品和益生菌胶囊等。
1.1 益生菌中乳酸菌概述对于益生菌的研究，越来越多的学者将各种食品与益生菌结合起来，将益生菌添加到不同食物中进行研究[4，5]。
在所有益生菌中, 目前研究得最深入、最受重视的一类当属乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB), 乳酸菌是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的统称。
它是一种有利于机体健康的微生物，革兰氏阳性杆菌或球菌,获得能量的方式是发酵碳水化合物,从而产生乳酸。
它不仅能够调节肠道菌群平衡,并产生抑菌代谢产物，抑制腐败菌的生长。
《益生菌介绍》课件
益生菌能够调节免疫反应，减少过敏反应和自身免疫性疾病的发生 。
促进免疫系统的成熟
益生菌能够促进免疫系统的成熟和发育，有助于预防感染和疾病。
03
益生菌的摄取与补充
益生菌食品摄取
酸奶、乳酸菌饮料
01
含有活性益生菌，可直接摄取。
发酵乳制品
02
如酸菜、腌菜等，在发酵过程中益生菌得到增殖，适量食用对
对肠道健康的影响
维护肠道菌群平衡
促进肠道上皮细胞生长
益生菌能够抑制有害菌的生长，维护 肠道菌群的平衡。
益生菌能够促进肠道上皮细胞的生长 和修复，提高肠道屏障功能。
减少肠道炎症
益生菌能够减轻肠道炎症，缓解肠道 不适。
对免疫系统的提升
增强免疫细胞的活性
益生菌能够刺激免疫细胞的活性，提高身体对病原体的抵抗力。
《益生菌介绍》ppt课件
contents
目录Biblioteka • 益生菌简介 • 益生菌的作用 • 益生菌的摄取与补充 • 益生菌与健康生活 • 益生菌研究与发展
01
益生菌简介
益生菌定义
益生菌是一种对人体有益的微 生物，通常存在于食物和补充 剂中。
益生菌通过改善肠道微生物平 衡、增强免疫系统等方式，对 人体的健康产生积极的影响。
THANKS
感谢观看
虽然益生菌对肠道健康有益，但 过量摄取可能导致肠道菌群失衡
，影响健康。
注意保存方式
益生菌补充剂需存放在阴凉干燥处 ，避免阳光直射和高温。
选择正规品牌
购买益生菌补充剂时，应选择正规 品牌和渠道，确保产品质量和安全 。
04
益生菌与健康生活
益生菌与饮食习惯
益生菌有助于维持肠 道菌群平衡，促进消 化吸收，提高营养物 质利用率。
益生菌菌种分类
益生菌菌种分类
益生菌是指对人体有益的活性微生物，主要存在于人体肠道和生殖系统内。
它们可以帮助维护人体的微生态平衡，促进健康。
益生菌的种类繁多，常见的菌种分类主要包括以下几类：
1. 乳杆菌类：这是一类常见的益生菌，包括嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、拉曼乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌等。
这些菌种在发酵过程中可以产生乳酸等有益物质，有助于维护肠道健康。
2. 双歧杆菌类：双歧杆菌是另一类重要的益生菌，包括长双歧杆菌、短双歧杆菌、卵形双歧杆菌、嗜热双歧杆菌、动物双歧杆菌、两歧双歧杆菌等。
它们可以促进肠道蠕动，帮助消化，同时也有助于提高人体免疫力。
3. 革兰氏阳性球菌：这类益生菌包括粪链球菌、乳球菌、中介链球菌等。
它们可以在肠道内与其他微生物协同作用，维护肠道微生态平衡。
此外，还有一些酵母菌和酶也可以被归类为益生菌。
这些菌种在人体内发挥着各自独特的作用，共同维护着人体的健康。
请注意，虽然益生菌对人体有益，但并非所有益生菌都适合每个人。
在选择益生菌产品时，建议根据自己的身体状况和需求，选择适合自己的菌种和剂量。
同时，也要注意产品的质量和安全性，确保摄入的益生菌是安全有效的。
常见益生菌耐药性研究进展
江苏农业学报(ＪｉａｎｇｓｕＪ.ｏｆＡｇｒ.Ｓｃｉ.)ꎬ２０２２ꎬ３８(６):１７２２￣１７２８ｈｔｔｐ://ｊｓｎｙｘｂ.ｊａａｓ.ａｃ.ｃｎ吉㊀星ꎬ李㊀俊ꎬ王㊀冉ꎬ等.常见益生菌耐药性研究进展[Ｊ].江苏农业学报ꎬ２０２２ꎬ３８(６):１７２２￣１７２８.ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１０００￣４４４０.２０２２.０６.０３２常见益生菌耐药性研究进展吉㊀星ꎬ㊀李㊀俊ꎬ㊀王㊀冉ꎬ㊀何㊀涛(江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所/省部共建国家重点实验室培育基地 江苏省食品质量安全重点实验室ꎬ江苏南京２１００１４)收稿日期:２０２２￣０５￣１６基金项目:江苏省自然科学基金项目(ＢＫ２０２２０７４６㊁ＢＫ２０２０００５６)ꎻ江苏省农业科技自主创新基金项目[ＣＸ(２２)３００３]作者简介:吉㊀星(１９９３－)ꎬ男ꎬ河南驻马店人ꎬ博士ꎬ助理研究员ꎬ主要从事人畜共患微生物耐药和致病机制研究ꎮ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｊｉｘｉｎｇ＠ｊａａｓ.ａｃ.ｃｎ通讯作者:何㊀涛ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｖｅｔｈｅｔａｏ＠１６３.ｃｏｍ㊀㊀摘要:㊀益生菌被定义为一种活的微生物ꎬ当摄入足够的量时ꎬ可在营养㊁新陈代谢和免疫功能等方面为宿主带来健康益处ꎮ益生菌目前被广泛应用在食品加工ꎬ医疗保健和畜禽养殖业ꎬ且市场正在扩大ꎮ益生菌的广泛使用可能带来新的风险ꎬ如成为耐药基因储存库并参与耐药基因的转移和扩散ꎮ基于公共卫生和食品安全的要求ꎬ本文对常用益生菌的种类㊁耐药表型测试方法㊁耐药特征及耐药基因转移情况进行了综述ꎬ为未来益生菌的安全规范管理和使用提供理论依据ꎮ关键词:㊀益生菌ꎻ耐药性ꎻ耐药基因转移中图分类号:㊀Ｑ９３９.９㊀㊀㊀文献标识码:㊀Ａ㊀㊀㊀文章编号:㊀１０００￣４４４０(２０２２)０６￣１７２２￣０７ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｃｏｍｍｏｎｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓＪＩＸｉｎｇꎬ㊀ＬＩＪｕｎꎬ㊀ＷＡＮＧＲａｎꎬ㊀ＨＥＴａｏ(ＪｉａｎｇｓｕＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＦｏｏｄＱｕａｌｉｔｙａｎｄＳａｆｅｔｙ￣ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙＣｕｌｔｉｖａｔｉｏｎＢａｓｅｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ/ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｏｄＳａｆｅｔｙａｎｄＮｕｔｒｉｔｉｏｎꎬＪｉａｎｇｓｕＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＮａｎｊｉｎｇ２１００１４ꎬＣｈｉｎａ)㊀㊀Ａｂｓｔｒａｃｔ:㊀Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓａｒｅｄｅｆｉｎｅｄａｓｌｉｖｉｎｇｍｉｃｒｏ￣ｏｒｇａｎｉｓｍｓｔｈａｔｃａｎｂｒｉｎｇｈｅａｌｔｈｂｅｎｅｆｉｔｓｔｏｔｈｅｈｏｓｔｉｎｔｅｒｍｓｏｆｎｕｔｒｉ￣ｔｉｏｎꎬｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｉｍｍｕｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎｗｈｅｎｉｎｇｅｓｔｅｄｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ.Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓａｒｅｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｆｏｏｄｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇꎬｈｅａｌｔｈｃａｒｅａｎｄｌｉｖｅｓｔｏｃｋｂｒｅｅｄｉｎｇꎬａｎｄｔｈｅｍａｒｋｅｔｉｓｅｘｐａｎｄｉｎｇ.Ｔｈｅｗｉｄｅｓｐｒｅａｄｕｓｅｏｆｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｍａｙｂｒｉｎｇｎｅｗｒｉｓｋｓꎬｓｕｃｈａｓｂｅｃｏｍｉｎｇａｒｅｓｅｒｖｏｉｒｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓａｎｄｐａｒｔｉｃｉｐａｔｉｎｇｉｎｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｒａｎｄｄｉｆｆｕｓｉｏｎｏｆｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓ.Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓｏｆｐｕｂｌｉｃｈｅａｌｔｈａｎｄｆｏｏｄｓａｆｅｔｙꎬｔｈｉｓｐａｐｅｒｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈｅｔｙｐｅｓꎬｄｒｕｇ￣ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｅｓｔｍｅｔｈｏｄｓꎬｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓꎬａｎｄｄｒｕｇ￣ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒｏｆｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓꎬｓｏａｓｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｓａｆｅａｎｄｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄｍａｎａｇｅｍｅｎｔａｎｄｕｓｅｏｆｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｉｎｔｈｅｆｕｔｕｒｅ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:㊀ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓꎻａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅꎻｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒ㊀㊀益生菌是一种具有活性的微生物ꎬ当摄入适当的量时ꎬ可对人体产生有益的效果[１]ꎮ目前已有大量的益生菌资源被挖掘ꎬ如乳杆菌ꎬ芽孢杆菌ꎬ双歧杆菌和肠球菌等ꎮ益生菌通常应用在奶㊁肉等食品发酵㊁日常饮食补充或配合抗生素给药治疗等[２]ꎮ还有一些研究结果证明益生菌对一些慢性疾病具有治疗或预防作用ꎬ如肥胖㊁糖尿病㊁心血管疾病和慢性肠炎等[３]ꎮ除此之外ꎬ随着世界各国对养殖及饲料产业 减抗㊁禁抗和替抗 的政策要求ꎬ益生菌作为热门的抗生素替代产品ꎬ也越来越多地出现在饲料添加剂中ꎮ２２７１尽管传统上常用的益生菌被证实对人类无害ꎬ但从监管角度来看ꎬ并非所有的益生菌都可以被称为 公认安全 状态(ＧｅｎｅｒａｌｌｙＲｅｃｏｇｎｉｚｅｄＡｓＳａｆｅꎬＧＲＡＳ)ꎮ近年来ꎬ由于抗生素的过度使用及超级耐药病原菌的出现ꎬ越来越多的人担心细菌耐药性将对全球公共健康产生威胁ꎮ益生菌作为在自然环境和人体内大量存在的常驻菌群ꎬ可能成为潜在的耐药基因储存库ꎬ并存在传播和扩散耐药基因的风险[４]ꎮ在全球关注公共卫生和食品安全的背景下ꎬ益生菌的耐药性及其耐药基因转移性的研究具有重要的科学意义ꎮ本综述旨在归纳和讨论从发酵食品㊁益生菌产品中分离的常见益生菌对抗生素的耐药情况和耐药基因转移风险ꎬ以期对益生菌的安全规范管理和使用提供理论依据ꎮ１㊀中国允许使用的益生菌种属中国通常以菌种名单列表和行政许可公告的形式发布允许使用的益生菌菌种ꎮ目前ꎬ国家卫生健康委员会发布了«可用于食品的菌种名单»㊁«可用于婴幼儿食品的菌种名单»和«可用于保健食品的益生菌菌种名单»ꎬ规定了人类使用的益生菌主要为双歧杆菌和乳杆菌ꎮ此外ꎬ农业农村部还针对养殖业使用的微生物菌种发布了«饲料添加剂品种目录»ꎬ其中除常见的乳杆菌和双歧杆菌外ꎬ还包括肠球菌和芽孢杆菌等ꎮ乳杆菌最早在２０世纪初由ＥｌｉｅＭｅｔｃｈｎｉｋｏｆｆ于保加利亚发酵乳中分离ꎬ并由此提出了最早的 益生菌 概念[５]ꎮ乳杆菌为厚壁菌门厌氧或兼性厌氧的革兰氏阳性杆菌ꎬ不产生孢子ꎬ主要包括嗜酸乳杆菌㊁干酪乳杆菌㊁鼠李糖乳杆菌㊁植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌等ꎮ双歧杆菌最早于１９００年健康婴儿粪便中分离ꎬ为放线菌门严格厌氧的革兰氏阳性杆菌ꎬ不产孢子ꎬ主要包括长双歧杆菌㊁两歧双歧杆菌㊁动物双歧杆菌㊁青春双歧杆菌和婴儿双歧杆菌等[６]ꎮ芽孢杆菌也是最常见的益生菌之一ꎬ已被广泛使用了６０多年ꎮ芽孢杆菌为厚壁菌门需氧革兰氏阳性杆菌ꎬ可产芽孢ꎬ主要包括枯草芽孢杆菌㊁解淀粉芽孢杆菌㊁凝结芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌等[７]ꎮ肠球菌为厚壁菌门需氧或兼性厌氧革兰氏阳性菌ꎬ不产芽孢ꎬ主要包括粪肠球菌和屎肠球菌等[８]ꎮ２㊀益生菌的药物敏感性评价标准和方法根据各国益生菌使用基本准则和微生物耐药性防控的要求ꎬ益生菌在使用前需要进行抗菌药物敏感性试验ꎬ但药敏试验结果会受测试菌属㊁培养基组成㊁培养条件及培养时间的影响ꎮ目前关于益生菌的抗生素敏感性评价尚未有统一的标准ꎮ根据益生菌菌种不同ꎬ常参考美国临床实验室标准协会(ＣＬＳＩ)㊁欧洲食品安全局(ＥＦＳＡ)和国际标准化组织/国际乳制品联合会(ＩＳＯ/ＩＤＦ)推荐的微量肉汤稀释法或琼脂稀释法进行抗菌药物敏感性测试ꎮ例如ꎬ对于乳杆菌属益生菌的抗菌药物最小抑菌浓度(ＭＩＣ)测试可结合ＣＬＳＩＭ４５㊁ＩＳＯ/ＩＤＦ￣１０９３２标准和ＥＦＳＡ发布的«细菌对人类和兽医重要抗菌药物的敏感性评估指南»进行ꎻ双歧杆菌属益生菌可参考ＣＬＳＩＭ１１和ＩＳＯ/ＩＤＦ￣１０９３２等标准ꎮ除了以上这些参考标准和方法ꎬ也可使用纸片扩散法和抗生素浓度梯度法(Ｅ￣ｔｅｓｔ法)对益生菌进行药物敏感性测试ꎮ有报道称纸片扩散法和Ｅ￣ｔｅｓｔ法得到的嗜酸乳杆菌ＭＩＣ结果与标准的微量肉汤稀释法结果具有一致性[９]ꎮ尽管这些方法都可以得到有效的益生菌药敏数据ꎬ但实验室内不同批次相同种属的细菌应使用同一种方法ꎬ才能保证数据的可重复性和可比较性ꎮ３㊀常见益生菌的耐药性与很多致病菌一样ꎬ益生菌也会表现出对多种抗菌药物的耐药性(表１)ꎬ包括固有耐药性和获得性耐药性两种类型ꎮ固有耐药性主要是益生菌染色体基因编码的ꎬ例如ＤＮＡ位点的自发突变㊁药物外排泵的存在㊁抗生素降解酶的分泌和细胞外膜结构药物靶点的缺乏等[１０]ꎮ而获得性耐药性是指细菌通过接合㊁转化和转导等方式获得外源的基因片段而获得耐药性ꎬ这些耐药基因通常位于可移动元件上ꎬ如质粒㊁整合子㊁转座子和噬菌体等[１１]ꎮ一般来讲ꎬ益生菌的固有耐药性不具有水平转移扩散风险ꎬ而获得性耐药性具有转移到其他致病菌的风险ꎬ应引起高度重视ꎮ３.１㊀益生菌的固有耐药性３.１.１㊀乳杆菌㊀大多数乳杆菌对头孢菌素㊁氨基糖苷类药物㊁磺胺类药物和硝基咪唑类药物具有天然耐药性ꎬ这可能和细胞壁的低渗透性和某些基因的自发突变有关ꎬ其具体机制有待进一步阐明[１１￣１２]ꎮ有结果表明乳杆菌中染色体基因的突变会产生抗生素抗性ꎬ如鼠李糖乳杆菌菌株２３ＳｒＲＮＡ基因中的单一位点突变降低了红霉素对核糖体的亲和力ꎬ赋３２７１吉㊀星等:常见益生菌耐药性研究进展予了其对大环内酯类药物的抗性[１３]ꎮ值得注意的是ꎬ几乎所有的乳杆菌对万古霉素具有天然耐药性ꎬ这可能是由于乳杆菌的肽聚糖Ｄ￣丙氨酸残基被Ｄ￣乳酸或Ｄ￣丝氨酸取代ꎬ从而阻止了万古霉素和乳杆菌的结合ꎬ维持了细胞壁的正常合成[１４]ꎮ３.１.２㊀肠球菌㊀部分肠球菌对β￣内酰胺类药物具有一定程度的天然耐药性ꎬ是由于这些肠球菌表达的青霉素结合蛋白ＰＢＰ(如屎肠球菌编码的ＰＢＰ５和粪肠球菌编码的ＰＢＰ４)与β￣内酰胺类抗生素结合能力较弱ꎬ从而使药物不能作用于肠球菌细胞壁[１５]ꎮ此外ꎬ粪肠球菌对氨基糖苷类药物也具有一定的固有耐药性ꎬ这可能是位于染色体的保守基因ａａｃ(６ᶄ)￣Ｉｉ编码的氨基糖苷６ᶄ￣Ｎ￣乙酰转移酶和ｅｆｍＭ基因编码的甲基转移酶导致核糖体靶位变化有关[１６￣１７]ꎮ同时ꎬ肠球菌的固有耐药性也和一些ＡＴＰ结合盒超家族外排泵有关ꎬ如ｌｓａ基因可介导粪肠球菌或屎肠球菌对大环内酯类￣林可霉素￣链阳性菌素类抗生素(ＭＬＳ)的抗性[１８]ꎮ此外ꎬ肠球菌还具有从环境中直接吸收叶酸的能力ꎬ这导致甲氧苄啶￣磺胺甲噁唑不能竞争抑制细菌的四氢叶酸合成途径而产生了固有抗性[１９]ꎮ３.１.３㊀双歧杆菌㊀双歧杆菌对莫匹罗星具有天然抗性ꎬ其机制是一种特殊的异亮氨酰￣ｔＲＮＡ合成酶基因(ｉｌｅＳ)的表达导致了莫匹罗星的竞争抑制作用丧失ꎬ从而恢复了细菌的蛋白质合成能力[２０]ꎮ此外ꎬ大多数双歧杆菌对氨基糖苷类药物不敏感ꎬ其原因是由于其缺乏细胞色素介导的药物转运功能[２１]ꎮ还有部分短双歧杆菌中编码核糖体亚单位蛋白Ｓ１２的ｒｐｓＬ基因突变可导致其对链霉素的高水平抗性[２２]ꎮ３.１.４㊀芽孢杆菌㊀芽孢杆菌对大多数的抗生素是敏感的ꎬ其固有耐药性研究较少ꎮ目前有相关报道称ｂｃｒＡ编码的ＡＢＣ转运蛋白可介导地衣芽孢杆菌㊁枯草芽孢杆菌等对杆菌肽的固有抗性[２３]ꎮ此外ꎬ位于染色体的ｅｒｍ(Ｄ)和ｅｒｍ(Ｋ)基因可介导副地衣芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌对大环内酯㊁林可酰胺和链阳菌素￣Ｂ类抗生素的耐药性[２４￣２５]ꎮ３.２ 益生菌的获得性耐药性特征３.２.１㊀乳杆菌㊀乳杆菌最常见的获得性耐药基因为四环素类耐药基因ꎮ迄今为止ꎬ已在罗伊氏乳杆菌㊁鼠李糖乳杆菌和发酵乳杆菌等多种乳杆菌中检测到位于质粒或转座子上的四环素类抗性基因ꎬ包括编码核糖体保护蛋白的基因ｔｅｔ(Ｗ)㊁ｔｅｔ(Ｍ)㊁ｔｅｔ(Ｓ)㊁ｔｅｔ(Ｏ)和ｔｅｔ(Ｚ)和外排泵编码基因ｔｅｔ(Ｋ)和ｔｅｔ(Ｌ)[２６￣２７]ꎮ此外ꎬ乳杆菌属益生菌还可携带其他常用药物的耐药基因ꎬ如ｃａｔ基因可介导嗜酸乳杆菌㊁德氏乳杆菌等对氯霉素的耐药性[２８]ꎬｅｒｍ(Ａ)㊁ｅｒｍ(Ｂ)和ｅｒｍ(Ｃ)基因可介导多种乳杆菌对红霉素等大环内酯类药物的耐药性[２９]ꎬｌｎｕ(Ａ)基因可介导罗伊氏乳杆菌对林可酰胺类药物抗性[３０]ꎬａａｃ(６ᶄ)￣ａｐｈ(２ᵡ)㊁ａｎｔ(６)和ａｐｈ(３ᶄ)￣ＩＩＩａ可介导植物乳杆菌对氨基糖苷类抗生素的抗性[３１]ꎮ值得注意的是ꎬ除了植物乳杆菌中常见的ｂｌａＺ基因ꎬ少数乳杆菌还携带β￣内酰胺抗性相关基因ｂｌａＴＥＭ和碳青霉烯类耐药基因ｂｌａＯＸＡ￣４８[３２￣３４]ꎮ３.２.２㊀肠球菌㊀肠球菌也具备获得多种外源性耐药基因的能力ꎬ如从奶制品中分离的屎肠球菌或粪肠球菌被检测出多种抗性基因ꎬ如四环素耐药基因ｔｅｔ(Ｋ)㊁ｔｅｔ(Ｌ)㊁ｔｅｔ(Ｍ)和ｔｅｔ(Ｓ)ꎬ氯霉素耐药基因ｃａｔꎬ氨基糖苷类耐药基因ａａｄＥ㊁ａｐｈ(３ᶄ)￣ＩＩＩａ和ａｎｔ(６ᶄ)￣Ｉａꎬ红霉素抗性基因ｅｒｍ(Ｂ)[３５￣３６]ꎮ以上耐药基因通常是由质粒和转座子介导转移的ꎬ例如Ｉｎｃ１８质粒㊁ｐＡＭβ１质粒㊁Ｔｎ９１７和Ｔｎ９１６等[３７]ꎮ粪肠球菌还可获得ＡＢＣ转运蛋白基因ｌｓａ(Ｅ)从而对林可酰胺㊁截短侧耳素和链阳菌素Ａ类药物产生联合耐药性[３８]ꎮ除了常见的药物外ꎬ少数屎肠球菌因对一线药物产生耐药性而备受关注ꎬ如Ｔｎ３家族转座子携带的ｖａｎＡꎬｖａｎＢꎬｖａｎＣ和ｖａｎＭ可编码Ｄ￣乳酸取代细胞壁五肽前体中的末端Ｄ￣丙氨酸而介导肠球菌的万古霉素抗性[３９]ꎮ质粒携带的ｏｐｔｒＡ㊁ｐｏｘｔＡ和ｃｆｒ基因可通过编码ＡＴＰ结合盒超家族外排泵或改变细菌２３ＳｒＲＮＡ的方式介导肠球菌对利奈唑胺等恶唑烷酮类药物的抗性[４０]ꎮ３.２.３㊀双歧杆菌㊀有关双歧杆菌所携带耐药基因的报道相对较少ꎬ主要为四环素类和大环内酯类耐药基因ꎮ在嗜热双歧杆菌和动物双歧杆菌中位于转座子Ｔｎ５４３２上的编码核糖体保护蛋白的基因ｅｒｍ(Ｘ)可介导其对大环内酯类药物的耐受性[４１]ꎮｔｅｔ(Ｗ)㊁ｔｅｔ(Ｍ)和ｔｅｔ(Ｏ)等四环素耐药基因也在长双歧杆菌㊁短双歧杆菌㊁动物双歧杆菌和噬热双歧杆菌等双歧杆菌中检测到ꎬ其中以ｔｅｔ(Ｗ)最为普遍[４２￣４３]ꎮ也有报道称ꎬ尽管双歧杆菌中的ｔｅｔ(Ｗ)基因整合在染色体中ꎬ但该基因的侧翼通常是转座酶靶序列或转座酶编码序列ꎬ在适当的条件下可能发４２７１江苏农业学报㊀２０２２年第３８卷第６期生转移[４３￣４４]ꎮ３.２.４㊀芽孢杆菌㊀目前ꎬ芽孢杆菌中报道的耐药基因主要位于可移动元件上ꎬ例如枯草芽孢杆菌ｐＩＭ１３质粒携带了大环内酯类抗性基因ｅｒｍ(Ｃ)[４５]㊁四环素类耐药基因ｔｅｔ(Ｌ)和接合转座子Ｔｎ５３９７中的ｔｅｔ(Ｍ)基因[４６￣４７]ꎮ克劳氏芽孢杆菌中发现了对氨基糖苷类㊁大环内酯类㊁β￣内酰胺类和氯霉素具有抗性的基因[４８]ꎮ值得注意的是ꎬ在一些新型芽孢杆菌中还存在氯霉素抗性基因ｆｅｘＡ和口恶唑烷酮㊁林可酰胺㊁截短侧耳素耐药基因ｃｆｒꎬ但这一现象较为罕见[４９]ꎮ表１㊀益生菌菌种中鉴定的耐药基因及其相关特征Ｔａｂｌｅ１㊀Ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｉｎｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｔｒａｉｎｓａｎｄｔｈｅｉｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ菌种㊀耐药类别㊀耐药基因㊀㊀㊀㊀㊀㊀耐药机制㊀㊀㊀㊀位置㊀㊀㊀参考文献乳杆菌β内酰胺类ｂｌａＺ㊁ｂｌａＯＸＡ㊁ｂｌａＴＥＭ抗生素水解转座子㊁染色体[３２]~[３４]氯霉素ｃａｔ抗生素乙酰化染色体[２８]大环内酯类ｌｎｕ(Ａ)酶修饰质粒[３０]氨基糖苷类ａａｃ(６ᶄ)￣ａｐｈ(２ᵡ)㊁ａｎｔ(６)㊁ａｐｈ(３ᶄ)￣ＩＩＩａ酶修饰转座子[３１]大环内酯类ｅｒｍ(Ａ)㊁ｅｒｍ(Ｂ)㊁ｅｒｍ(Ｃ)核糖体甲基化质粒㊁转座子㊁染色体[２９]ə四环素ｔｅｔ(Ｗ)㊁ｔｅｔ(Ｍ)㊁ｔｅｔ(Ｓ)㊁ｔｅｔ(Ｏ)㊁ｔｅｔ(Ｋ)㊁ｔｅｔ(Ｌ)核糖体保护蛋白/外排泵质粒㊁转座子㊁染色体[２６]㊁[２７]双歧杆菌ＭＬＳ类ｅｒｍ(Ｘ)核糖体甲基化转座子[４１]四环素ｔｅｔ(Ｗ)㊁ｔｅｔ(Ｍ)㊁ｔｅｔ(Ｏ)㊁ｔｅｔ(Ｌ)核糖体保护蛋白/外排泵转座子㊁质粒[４２]㊁[４３]芽孢杆菌氨基糖苷类ａａｄＤ２抗生素腺苷酸染色体[４８]大环内酯类ｅｒｍ３４㊁ｅｒｍ(Ｃ)核糖体保护蛋白染色体㊁质粒[４５]㊁[４８]β内酰胺类ｂｌａ抗生素水解染色体[４８]氯霉素ｃａｔ㊁ｆｅｘＡ抗生素乙酰化作用染色体㊁质粒[４８]㊁[４９]四环素ｔｅｔ(Ｌ)㊁ｔｅｔ(Ｍ)核糖体保护蛋白/外排泵转座子㊁质粒[４６]㊁[４７]口恶唑烷酮ｃｆｒ核糖体甲基化转座子[４９]肠球菌四环素ｔｅｔ(Ｓ)㊁ｔｅｔ(Ｍ)㊁ｔｅｔ(Ｋ)㊁ｔｅｔ(Ｌ)核糖体保护蛋白质粒㊁转座子[３５]㊁[３６]氨基糖苷类ａａｄＥ㊁ａｐｈ(３ᶄ)￣ＩＩＩａ㊁ａｎｔ(６ᶄ)￣Ｉａ酶修饰染色体㊁转座子[３５]㊁[３６]大环内酯类ｅｒｍ(Ｂ)核糖体甲基化酶转座子[３５]㊁[３６]ＭＬＳ类ｌｓａ(Ｅ)ＡＢＣ转运蛋白染色体[３８]糖肽类ｖａｎＡ㊁ｖａｎＢ㊁ｖａｎＣ㊁ｖａｎＭ替代细胞壁合成转座子[３９]口恶唑烷酮类ｏｐｔｒＡ㊁ｐｏｘｔＡ㊁ｃｆｒ核糖体甲基㊁ＡＢＣ转运蛋白质粒㊁转座子[４０]４㊀益生菌耐药基因的可转移性益生菌大多数是革兰氏阳性菌ꎬ外源性的耐药基因主要通过接合性质粒㊁转座子和整合性接合元件等获得或传播到其他共生细菌中ꎮ目前益生菌中耐药基因转移报道较多的为四环素和大环内酯类耐药基因ꎬ例如发酵乳杆菌㊁唾液乳杆菌携带的ｅｒｍ(Ｂ)和植物乳杆菌㊁短乳杆菌携带的ｔｅｔ(Ｍ)可在体外条件下以０.２９ˑ１０－５ＣＦＵ至１.３９ˑ１０－５ＣＦＵ(供体菌)的频率水平转移至粪肠球菌中[５０]ꎮ唾液乳杆菌和罗伊氏乳杆菌携带的ｅｒｍ(Ｂ)㊁ｔｅｔ(Ｍ)㊁ｔｅｔ(Ｗ)和ｔｅｔ(Ｌ)基因不仅可在体外转移至粪肠球菌中ꎬ也可在体内环境下转移至其他肠道共生菌中ꎬ转移频率为２ˑ１０－３ＣＦＵ(供体菌)左右[５１]ꎮ除此之外ꎬ植物乳杆菌携带的ｔｅｔ(Ｍ)和ｅｒｍ(Ｂ)阳性质粒也可在体外和动物体内环境转移到乳酸乳球菌和粪肠球菌中[５２￣５４]ꎮ除乳杆菌外ꎬ芽孢杆菌和双歧杆菌的四环素耐药基因也具有可转移性ꎮ如Ｔｎ９１６家族介导的ｔｅｔ(Ｍ)基因和质粒携带的ｔｅｔ(Ｋ)基因可通过接合转移的方式在芽孢杆菌㊁大肠杆菌㊁肠球菌和金黄色葡萄球菌中转移[５５￣５６]ꎮ双歧杆菌和粪肠球菌的ｔｅｔ(Ｍ)５２７１吉㊀星等:常见益生菌耐药性研究进展基因的遗传规律高度一致ꎬ表明相互间曾发生了水平基因转移[４２]ꎮ在体外条件下ꎬｔｅｔ(Ｗ)基因及上游区域的转座酶基因ꎬ可低频率地在长双歧杆菌和青春期双歧杆菌之间转移[５７]ꎮ值得注意的是ꎬ除四环素和大环内酯类耐药基因外ꎬ万古霉素耐药基因ｖａｎＡ可在肠球菌不同菌种间转移ꎬ并可向嗜酸乳杆菌转移[５８￣５９]ꎮ以上研究结果表明肠球菌不仅可与本菌属其他菌种也可与其他共生细菌进行耐药基因的交换ꎬ因此在益生菌的耐药基因转移过程中扮演重要角色(图１)ꎮ图１㊀耐药基因在益生菌及致病菌间的水平转移Ｆｉｇ.１㊀Ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌｔｒａｎｓｆｅｒｏｆｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｂｅｔｗｅｅｎｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓａｎｄｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉａ５㊀结论与建议总体来说ꎬ益生菌产品作为人体内细菌的补充ꎬ可能成为耐药基因的储库ꎬ同时具有传播耐药基因的风险ꎮ益生菌中的耐药基因像一把 双刃剑 ꎬ在提高益生菌抵抗不良环境能力的同时ꎬ还可能通过水平转移的方式传播到共生菌和其他病原菌中ꎬ从而引起严重的健康问题ꎮ中国人用和畜禽养殖用益生菌行业正在快速扩张[６０￣６２]ꎬ但目前仍缺乏完善的益生菌产品安全使用管理规范ꎬ特别是对于益生菌的耐药性问题尚未形成完善有效的评价标准ꎮ在未来的益生菌生产和使用中ꎬ亟需制定完善益生菌产品中使用菌种的安全性评估体系ꎬ严格做好益生菌产品中菌种的质量控制ꎬ同时需要对益生菌的耐药基因和可移动元件进行全面检测ꎬ从分子水平上评估益生菌耐药基因的转移风险ꎬ并采取适当的措施防止益生菌耐药基因在使用过程中通过日常饮食㊁临床治疗以及畜禽养殖等过程的转移和扩散ꎬ严格管控携带可移动耐药基因和具有传播风险的益生菌菌株ꎮ参考文献:[１]㊀ＡＲＡＹＡＭꎬＭＯＲＥＬＬＩＬꎬＲＥＩＤＧꎬｅｔａｌ.Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓｆｏｒｔｈｅｅｖａｌ￣ｕａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｉｎｆｏｏｄ.ＦｏｏｄＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＮａｔｉｏｎｓａｎｄＷｏｒｌｄＨｅａｌｔｈＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎＷｏｒｋｉｎｇＧｒｏｕｐＲｅ￣ｐｏｒｔ[Ｒ].ＬｏｎｄｏｎＯｎｔａｒｉｏꎬＣａｎａｄａꎬ２００２:１￣１１. [２]㊀ＡＺＡＤＭＡＫꎬＳＡＲＫＥＲＭꎬＬＩＴꎬｅｔａｌ.Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｐｅｃｉｅｓｉｎｔｈｅｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｇｕｔｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ:Ａｎｏｖｅｒｖｉｅｗ[Ｊ].ＢｉｏＭｅｄＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌꎬ２０１８ꎬ２０１８:９４７８６３０.[３]㊀ＭＯＲＯＶＩＣＷꎬＢＵＤＩＮＯＦＦＣＲ.Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ:Ａｎｅｗｆｒｏｎｔｉｅｒｉｎｐｒｏｂｉｏｔｉｃｒｅｓｅａｒｃｈ[Ｊ].ＴｒｅｎｄｓｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２０２１ꎬ２９(２):１１７￣１２６.[４]㊀ＧＵＥＩＭＯＮＤＥＭꎬＳÁＮＣＨＥＺＢꎬＧＤＥＬＯＳＲＥＹＥＳ￣ＧＡＶＩＬÁＮＣꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｐｒｏｂｉｏｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ[Ｊ].ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２０１３ꎬ４:２０２.[５]㊀ＭＡＣＫＯＷＩＡＫＰＡ.Ｒｅｃｙｃｌｉｎｇｍｅｔｃｈｎｉｋｏｆｆ:Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓꎬｔｈｅｉｎｔｅｓ￣ｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅａｎｄｔｈｅｑｕｅｓｔｆｏｒｌｏｎｇｌｉｆｅ[Ｊ].ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈꎬ２０１３ꎬ１:５２.[６]㊀ＴＵＲＲＯＮＩＦꎬＤＵＲＡＮＴＩＳꎬＭＩＬＡＮＩＣꎬｅｔａｌ.Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｉｆｉｄｕｍ:Ａｋｅｙｍｅｍｂｅｒｏｆｔｈｅｅａｒｌｙｈｕｍａｎｇｕｔｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ[Ｊ].Ｍｉ￣ｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓꎬ２０１９ꎬ７(１１):５４４.[７]㊀ＥＺＥＷＳＫＡ￣ＦＲＡＣＫＯＷＩＡＫＪꎬＳＥＲＯＣＺＹＮＳＫＡＫꎬＢＡＮＡＳＺＣＺＹＫＪꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｐｒｏｍｉｓｅｓａｎｄｒｉｓｋｓｏｆｐｒｏｂｉｏｔｉｃＢａｃｉｌｌｕｓｓｐｅｃｉｅｓ[Ｊ].ＡｃｔａＢｉｏｃｈｉｍｉｃａＰｏｌｏｎｉｃａꎬ２０１８ꎬ６５(４):５０９￣５１９. [８]㊀ＢＥＮＢＲＡÏＥＫＯꎬＳＭＡＯＵＩＳ.Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ:Ｂｅｔｗｅｅｎｅｍｅｒｇｉｎｇｐａｔｈｏ￣ｇｅｎｓａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｌｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ[Ｊ].ＢｉｏＭｅｄＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌꎬ２０１９ꎬ２０１９:５９３８２１０.[９]㊀ＭＡＹＲＨＯＦＥＲＳꎬＤＯＭＩＧＫＪꎬＭＡＩＲＣꎬｅｔａｌ.ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｂｒｏｔｈｍｉｃｒｏｄｉｌｕｔｉｏｎꎬＥｔｅｓｔꎬａｎｄａｇａｒｄｉｓｋｄｉｆｆｕｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒａｎｔｉ￣ｍｉｃｒｏｂｉａｌｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｔｅｓｔｉｎｇｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓｇｒｏｕｐｍｅｍｂｅｒｓ[Ｊ].ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２００８ꎬ７４(１２):３７４５￣３７４８.[１０]ＭＵＮＩＴＡＪＭꎬＡＲＩＡＳＣＡ.Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ[Ｊ].ＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＳｐｅｃｔｒｕｍꎬ２０１６ꎬ４(２):１￣２４.[１１]ＢＬＡＩＲＪＭＡꎬＷＥＢＢＥＲＭＡꎬＢＡＹＬＡＹＡＪꎬｅｔａｌ.Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ[Ｊ].ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＭｉｃｒｏｂｉｏｌ￣ｏｇｙꎬ２０１５ꎬ１３(１):４２￣５１.[１２]ＡＭＭＯＲＭＳꎬＦＬÓＲＥＺＡＢꎬＭＡＹＯＢ.Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｎｏｎ￣ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃａｌｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａａｎｄＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ[Ｊ].ＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２００７ꎬ２４(６):５５９￣５７０.[１３]ＦＬÓＲＥＺＡꎬＬＡＤＥＲＯＶꎬＡＬＶＡＲＥＺ￣ＭＡＲＴÍＮＰꎬｅｔａｌ.Ａｃ￣ｑｕｉｒｅｄｍａｃｒｏｌｉｄｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｔｈｅｈｕｍａｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｓｔｒａｉｎＬａｃｔｏｂａ￣ｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓＥ４１ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈａｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｍｕｔａｔｉｏｎｉｎ２３ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＡｇｅｎｔｓꎬ２００７ꎬ３０(４):３４１￣３４４.[１４]ＤＥＬＣＯＵＲＪꎬＦＥＲＡＩＮＴꎬＤＥＧＨＯＲＡＩＮＭꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅ￣ｓｉｓａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙｏｆｔｈｅｃｅｌｌ￣ｗａｌｌｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａ[Ｊ].Ａｎ￣６２７１江苏农业学报㊀２０２２年第３８卷第６期ｔｏｎｉｅｖａｎＬｅｅｕｗｅｎｈｏｅｋꎬ１９９９ꎬ７６:１５９￣１８４.[１５]ＦＯＮＴＡＮＡＲꎬＡＬＤＥＧＨＥＲＩＭꎬＬＩＧＯＺＺＩＭꎬｅｔａｌ.Ｏｖｅｒｐｒｏｄｕｃ￣ｔｉｏｎｏｆａｌｏｗ￣ａｆｆｉｎｉｔｙｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ￣ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｈｉｇｈ￣ｌｅｖｅｌａｍ￣ｐｉｃｉｌｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃｉｕｍ[Ｊ].ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＡ￣ｇｅｎｔｓａｎｄＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙꎬ１９９４ꎬ３８:１９８０￣１９８３.[１６]ＣＯＳＴＡＹꎬＧＡＬＩＭＡＮＤＭꎬＬＥＣＬＥＲＣＱＲꎬｅｔａｌ.Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ￣ｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌａａｃ(６ᶄ)￣ＩｉｇｅｎｅｓｐｅｃｉｆｉｃｆｏｒＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃｉｕｍ[Ｊ].ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＡｇｅｎｔｓａｎｄＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙꎬ１９９３ꎬ３７(９):１８９６￣１９０３.[１７]ＧＡＬＩＭＡＮＤＭꎬＳＣＨＭＩＴＴＥꎬＰＡＮＶＥＲＴＭꎬｅｔａｌ.Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃｒｅ￣ｓｉｓｔａｎｃｅｔｏａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓｉｎＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃｉｕｍｉｓｃｏｎｆｅｒｒｅｄｂｙｔｈｅ１６ＳｒＲＮＡｍ５Ｃ１４０４￣ｓｐｅｃｉｆｉｃｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＥｆｍＭ[Ｊ].ＲＮＡꎬ２０１１ꎬ１７(２):２５１￣２６２.[１８]ＳＩＮＧＨＫＶꎬＷＥＩＮＳＴＯＣＫＧＭꎬＭＵＲＲＡＹＢＥ.ＡｎＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓＡＢＣｈｏｍｏｌｏｇｕｅ(Ｌｓａ)ｉｓｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｔｈｉｓｓｐｅｃｉｅｓｔｏｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎａｎｄｑｕｉｎｕｐｒｉｓｔｉｎ￣ｄａｌｆｏｐｒｉｓｔｉｎ[Ｊ].Ａｎｔｉｍｉ￣ｃｒｏｂｉａｌＡｇｅｎｔｓａｎｄＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙꎬ２００２ꎬ４６(６):１８４５￣１８５０. [１９]ＺＥＲＶＯＳＭＪꎬＳＣＨＡＢＥＲＧＤＲ.Ｒｅｖｅｒｓａｌｏｆｔｈｅｉｎｖｉｔｒｏｓｕｓｃｅｐｔｉ￣ｂｉｌｉｔｙｏｆＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉｔｏｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ￣ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅｂｙｆｏｌｉｎｉｃａｃｉｄ[Ｊ].ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＡｇｅｎｔｓａｎｄＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙꎬ１９８５ꎬ２８(３):４４６￣４４８.[２０]ＳＥＲＡＦＩＮＩＦꎬＢＯＴＴＡＣＩＮＩＦꎬＶＩＡＰＰＩＡＮＩＡꎬｅｔａｌ.ＩｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｍｕｐｉｒｏｃｉｎｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｉｎＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ[Ｊ].ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２０１１ꎬ７７(９):３１４１￣３１４６.[２１]ＭＡＹＲＨＯＦＥＲＳꎬＭＡＩＲＣꎬＫＮＥＩＦＥＬＷꎬｅｔａｌ.ＳｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｏｆＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａｏｆａｎｉｍａｌｏｒｉｇｉｎｔｏｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｇｅｎｔｓ[Ｊ].ＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅꎬ２０１１ꎬ２０１１:９８９５２０. [２２]ＫＩＷＡＫＩＭꎬＳＡＴＯＴ.ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｏｆＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉ￣ｕｍｂｒｅｖｅｓｔｒａｉｎｓａｎｄｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｐｒｏｂｉｏｔｉｃＢ.ＢｒｅｖｅｓｔｒａｉｎＹａｋｕｌｔ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２００９ꎬ１３４(３):２１１￣２１５.[２３]ＡＤＩＭＰＯＮＧＤＢꎬＳＯＲＥＮＳＥＮＫＩꎬＴＨＯＲＳＥＮＬꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉｍｉ￣ｃｒｏｂｉａｌｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｏｆＢａｃｉｌｌｕｓｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｐｒｉｍａｒｙｓｔａｒｔ￣ｅｒｓｆｏｒＡｆｒｉｃａｎｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｂｒｅａｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂａｃｉｔｒａｃｉｎｏｐｅｒｏｎａｎｄｂａｃｉｔｒａｃｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ[Ｊ].ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２０１２ꎬ７８(２２):７９０３￣７９１４. [２４]ＫＷＡＫＪＨꎬＣＨＯＩＥＣꎬＷＥＩＳＢＬＵＭＢ.Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｔｔｅｎｕａ￣ｔｉｏｎｃｏｎｔｒｏｌｏｆｅｒｍＫꎬａｍａｃｒｏｌｉｄｅ￣ｌｉｎｃｏｓａｍｉｄｅ￣ｓｔｒｅｐｔｏｇｒａｍｉｎＢｒｅ￣ｓｉｓｔａｎｃｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｆｒｏｍＢａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙꎬ１９９１ꎬ１７３(１５):４７２５￣４７３５.[２５]ＡＧＥＲＳＯＹꎬＢＪＥＲＲＥＫꎬＢＲＯＣＫＭＡＮＮＥꎬｅｔａｌ.Ｐｕｔａｔｉｖｅａｎｔｉ￣ｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｐｒｅｓｅｎｔｉｎｅｘｔａｎｔＢａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓａｎｄＢａｃｉｌｌｕｓｐａｒａｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓｓｔｒａｉｎｓａｒｅｐｒｏｂａｂｌｙｉｎｔｒｉｎｓｉｃａｎｄｐａｒｔｏｆｔｈｅａｎｃｉｅｎｔｒｅｓｉｓｔｏｍｅ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１９ꎬ１４(１):ｅ２１０３６３. [２６]ＧＵＯＨꎬＰＡＮＬꎬＬＩＬꎬｅｔａｌ.Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔ￣ａｎｃｅｇｅｎｅｓｆｒｏｍＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｄａｉｒｙｐｒｏｄ￣ｕｃｔｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅꎬ２０１７ꎬ８２(３):７２４￣７３０. [２７]ＧＥＶＥＲＳＤꎬＨＵＹＳＧꎬＳＷＩＮＧＳＪ.Ｉｎｖｉｔｒｏｃｏｎｊｕｇａｌｔｒａｎｓｆｅｒｏｆｔｅｔ￣ｒａｃｙｃｌｉｎｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｆｒｏｍＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｉｓｏｌａｔｅｓｔｏｏｔｈｅｒＧｒａｍ￣ｐｏｓｉ￣ｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａ[Ｊ].ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓꎬ２００３ꎬ２２５(１):１２５￣１３０.[２８]ＣＡＭＰＥＤＥＬＬＩＩꎬＭＡＴＨＵＲＨꎬＳＡＬＶＥＴＴＩＥꎬｅｔａｌ.Ｇｅｎｕｓ￣ｗｉｄｅａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｐ[Ｊ].Ａｐ￣ｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２０１９ꎬ８５(１):ｅ０１７３８￣１８. [２９]ＣＯＬＡＵＴＴＩＡꎬＡＲＮＯＬＤＩＭꎬＣＯＭＩＧꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔ￣ａｎｃｅａｎｄｖｉｒｕｌｅｎｃｅｆａｃｔｏｒｓｉｎｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ:Ｓｏｍｅｔｈｉｎｇｔｏｃａｒｅｆｕｌｌｙｃｏｎｓｉｄｅｒ[Ｊ].ＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２０２２ꎬ１０３:１０３９３４. [３０]ＫＡＳＴＮＥＲＳꎬＰＥＲＲＥＴＥＮＶꎬＢＬＥＵＬＥＲＨꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｕｓ￣ｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｐａｔｔｅｒｎｓａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｏｆｓｔａｒｔｅｒｃｕｌｔｕｒｅｓａｎｄｐｒｏ￣ｂｉｏｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｕｓｅｄｉｎｆｏｏｄ[Ｊ].ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌ￣ｏｇｙꎬ２００６ꎬ２９(２):１４５￣１５５.[３１]ＪＡＩＭＥＥＧꎬＨＡＬＡＭＩＰＭ.ＨｉｇｈｌｅｖｅｌａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓꎬＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓａｎｄＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｅｃｉｅｓｆｒｏｍｆａｒｍａｎｉｍａｌｓａｎｄｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｍｅａｔｐｒｏｄｕｃｔｓ[Ｊ].ＡｎｎａｌｓｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏ￣ｇｙꎬ２０１６ꎬ６６(１):１０１￣１１０.[３２]ＡＮＩＳＩＭＯＶＡＥＡꎬＹＡＲＵＬＬＩＮＡＤＲ.ＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｓｔｒａｉｎｓ[Ｊ].ＣｕｒｒｅｎｔＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２０１９ꎬ７６(１２):１４０７￣１４１６.[３３]ＨＡＺＩＲＯＬＡＮＧꎬＧÜＮＤＯＧ㊅ＤＵＡꎬＮＩＧＩＺＳꎬｅｔａｌ.ＰｒｅｓｅｎｃｅｏｆＯＸＡ￣４８ｇｅｎｅｉｎａｃｌｉｎｉｃａｌｉｓｏｌａｔｅｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓ[Ｊ].ＦｏｏｄｂｏｒｎｅＰａｔｈｏｇｅｎｓａｎｄＤｉｓｅａｓｅꎬ２０１９ꎬ１６(１２):８４０￣８４３. [３４]ＡＱＵＩＬＡＮＴＩＬꎬＧＡＲＯＦＡＬＯＣꎬＯＳＩＭＡＮＩＡꎬｅｔａｌ.Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ￣ｒｅｓｉｓｔａｎｔｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍｐｏｕｌｔｒｙａｎｄｓｗｉｎｅｍｅａｔｐｒｏｄｕｃｔｓ.[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｏｏｄＰｒｏｔｅｃ￣ｔｉｏｎꎬ２００７ꎬ７０(３):５５７￣５６５.[３５]ＤＡＰＫＥＶＩＣＩＵＳＭＤＬＥꎬＳＧＡＲＤＩＯＬＩＢꎬＣÂＭＡＲＡＳＰＡꎬｅｔａｌ.ＣｕｒｒｅｎｔｔｒｅｎｄｓｏｆＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉｉｎｄａｉｒｙｐｒｏｄｕｃｔｓ:Ａｃｏｍｐｒｅｈｅｎ￣ｓｉｖｅｒｅｖｉｅｗｏｆｔｈｅｉｒｍｕｌｔｉｐｌｅｒｏｌｅｓ[Ｊ].Ｆｏｏｄｓꎬ２０２１ꎬ１０(４):８２１. [３６]ＭＩＬＬＥＲＷＲꎬＭＵＮＩＴＡＪＭꎬＡＲＩＡＳＣＡ.Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｎｔｉｂｉ￣ｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ[Ｊ].ＥｘｐｅｒｔＲｅｖｉｅｗｏｆＡｎｔｉ￣ｉｎｆｅｃｔｉｖｅＴｈｅｒａｐｙꎬ２０１４ꎬ１２(１０):１２２１￣１２３６.[３７]ＰＡＬＭＥＲＫＬꎬＫＯＳＶＮꎬＧＩＬＭＯＲＥＭＳ.Ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌｇｅｎｅｔｒａｎｓ￣ｆｅｒａｎｄｔｈｅｇｅｎｏｍｉｃｓｏｆｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃａｌａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ[Ｊ].Ｃｕｒ￣ｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２０１０ꎬ１３(５):６３２￣６３９. [３８]ＷＥＮＤＬＡＮＤＴＳꎬＬＯＺＡＮＯＣꎬＫＡＤＬＥＣＫꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｅｎｔｅｒｏｃｏｃ￣ｃａｌＡＢＣｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｇｅｎｅｌｓａ(Ｅ)ｃｏｎｆｅｒｓｃｏｍｂｉｎｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｌｉｎｃｏｓａｍｉｄｅｓꎬｐｌｅｕｒｏｍｕｔｉｌｉｎｓａｎｄｓｔｒｅｐｔｏｇｒａｍｉｎａａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｉｎｍｅ￣ｔｈｉｃｉｌｌｉｎ￣ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅａｎｄｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ￣ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ[Ｊ].ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙꎬ２０１３ꎬ６８(２):４７３￣４７５.[３９]ＭＩＬＬＥＲＷＲꎬＭＵＲＲＡＹＢＥꎬＲＩＣＥＬＢꎬｅｔａｌ.ＲｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎＶａｎｃｏｍｙｃｉｎ￣ＲｅｓｉｓｔａｎｔＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ[Ｊ].ＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＤｉｓｅａｓｅＣｌｉｎｉｃｓｏｆＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａꎬ２０２０ꎬ３４(４):７５１￣７７１.[４０]ＬＩＵＢꎬＹＵＡＮＸꎬＨＥＤꎬｅｔａｌ.Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｔｈｅｏｘａｚｏ￣ｌｉｄｉｎｏｎｅｄｒｕｇｌｉｎｅｚｏｌｉｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ[Ｊ].ＥｕｒｏｐｅａｎＲｅｖｉｅｗｆｏｒＭｅｄｉ￣ｃａｌａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓꎬ２０２０ꎬ２４(１８):９２７４￣９２８１. [４１]ＶＡＮＨＯＥＫＡＨＡＭꎬＭＡＹＲＨＯＦＥＲＳꎬＤＯＭＩＧＫＪꎬｅｔａｌ.Ｒｅ￣ｓｉｓｔａｎｃｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｅｒｍ(Ｘ)ｉｓｂｏｒｎｅｂｙｔｒａｎｓｐｏｓｏｎＴｎ５４３２ｉｎＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍａｎｄＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｎｉｍａｌｉｓｓｕｂｓｐ.７２７１吉㊀星等:常见益生菌耐药性研究进展Ｌａｃｔｉｓ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＡｇｅｎｔｓꎬ２００８ꎬ３１(６):５４４￣５４８.[４２]ＡＩＲＥＳＪꎬＤＯＵＣＥＴ￣ＰＯＰＵＬＡＩＲＥＦꎬＢＵＴＥＬＭＪ.Ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｔｅｔ(Ｗ)ꎬｔｅｔ(Ｍ)ꎬａｎｄｔｅｔ(Ｏ)ｇｅｎｅｓｏｆＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｉｓｏｌａｔｅｓｆｒｏｍｈｕｍａｎｓ[Ｊ].ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎ￣ｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２００７ꎬ７３(８):２７５１￣２７５４.[４３]ＧＵＥＩＭＯＮＤＥＭꎬＦＬÓＲＥＺＡＢꎬＶＡＮＨＯＥＫＡＨＡＭꎬｅｔａｌ.ＧｅｎｅｔｉｃｂａｓｉｓｏｆｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｎｉｍａｌｉｓｓｕｂｓｐ.Ｌａｃｔｉｓ[Ｊ].ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２０１０ꎬ７６(１０):３３６４￣３３６９.[４４]ＡＭＭＯＲＭＳꎬＦＬÓＲＥＺＡＢꎬＡＬＶＡＲＥＺ￣ＭＡＲＴÍＮＰꎬｅｔａｌ.Ａ￣ｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｅｔ(Ｗ)ｇｅｎｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｆｌａｎｋｉｎｇｓｅｑｕｅｎｃｅｓｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐｅｃｉｅｓ[Ｊ].ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙꎬ２００８ꎬ６２(４):６８８￣６９３. [４５]ＭＯＮＯＤＭꎬＤＥＮＯＹＡＣꎬＤＵＢＮＡＵＤ.ＳｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｐＩＭ１３ꎬａｍａｃｒｏｌｉｄｅ￣ｌｉｎｃｏｓａｍｉｄｅ￣ｓｔｒｅｐｔｏｇｒａｍｉｎＢｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐｌａｓｍｉｄｆｒｏｍＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙꎬ１９８６ꎬ１６７(１):１３８￣１４７.[４６]ＰＨＥＬＡＮＲＷꎬＣＬＡＲＫＥＣꎬＭＯＲＲＩＳＳＥＹＪＰꎬｅｔａｌ.Ｔｅｔｒａｃｙ￣ｃｌｉｎｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ￣ｅｎｃｏｄｉｎｇｐｌａｓｍｉｄｆｒｏｍＢａｃｉｌｌｕｓｓｐ.ＳｔｒａｉｎꎬｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｍａｒｉｎｅｓｐｏｎｇｅＨａｌｉｃｌｏｎａｓｉｍｕｌａｎｓ[Ｊ].ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉ￣ｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２０１１ꎬ７７(１):３２７￣３２９.[４７]ＲＯＢＥＲＴＳＡＰꎬＰＲＡＴＴＥＮＪꎬＷＩＬＳＯＮＭꎬｅｔａｌ.ＴｒａｎｓｆｅｒｏｆａｃｏｎｊｕｇａｔｉｖｅｔｒａｎｓｐｏｓｏｎꎬＴｎ５３９７ｉｎａｍｏｄｅｌｏｒａｌｂｉｏｆｉｌｍ[Ｊ].ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓꎬ１９９９ꎬ１７７(１):６３￣６６.[４８]ＭＩＮＧＭＯＮＧＫＯＬＣＨＡＩＳꎬＰＡＮＢＡＮＧＲＥＤＷ.Ｂａｃｉｌｌｕｓｐｒｏｂｉｏｔ￣ｉｃｓ:Ａｎａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｔｏａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｆｏｒｌｉｖｅｓｔｏｃｋｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ[Ｊ].Ｊｏｕｒ￣ｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２０１８ꎬ１２４(６):１３３４￣１３４６. [４９]ＤＡＩＬꎬＷＵＣꎬＷＡＮＧＭꎬｅｔａｌ.Ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆｔｈｅｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅ￣ｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｃｆｒａｎｄｔｈｅｐｈｅｎｉｃｏｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｆｅｘＡｉｎａＢａｃｉｌｌｕｓｓｔｒａｉｎｆｒｏｍｓｗｉｎｅｆｅｃｅｓ[Ｊ].ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＡｇｅｎｔｓａｎｄＣｈｅｍｏｔｈｅｒａ￣ｐｙꎬ２０１０ꎬ５４(９):３９５３￣３９５５.[５０]ＮＡＷＡＺＭꎬＷＡＮＧＪꎬＺＨＯＵＡꎬｅｔａｌ.Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓｆｅｒｏｆａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍｆｅｒｍｅｎ￣ｔｅｄｆｏｏｄｐｒｏｄｕｃｔｓ[Ｊ].ＣｕｒｒｅｎｔＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２０１１ꎬ６２(３):１０８１￣１０８９.[５１]ＴＨＵＭＵＳＣＲꎬＨＡＬＡＭＩＰＭ.Ｃｏｎｊｕｇａｌｔｒａｎｓｆｅｒｏｆｅｒｍ(Ｂ)ａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｅｔｅｔｇｅｎｅｓｆｒｏｍＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｐ.ｔｏｂａｃｔｅｒｉａｌｐａｔｈｏｇｅｎｓｉｎａｎｉｍａｌｇｕｔꎬｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｄｕｒｉｎｇｆｏｏｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ[Ｊ].ＦｏｏｄＲｅ￣ｓｅａｒｃｈＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌꎬ２０１９ꎬ１１６:１０６６￣１０７５.[５２]ＴＯＯＭＥＹＮꎬＢＯＬＴＯＮＤꎬＦＡＮＮＩＮＧＳ.Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓ￣ｆｅｒａｂｉｌｉｔｙｏｆａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｆｒｏｍｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｉｓｏ￣ｌａｔｅｄｆｒｏｍＩｒｉｓｈｐｏｒｋａｎｄｂｅｅｆａｂａｔｔｏｉｒｓ[Ｊ].ＲｅｓｅａｒｃｈｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏ￣ｇｙꎬ２０１０ꎬ１６１(２):１２７￣１３５.[５３]ＪＡＣＯＢＳＥＮＬꎬＷＩＬＣＫＳＡꎬＨＡＭＭＥＲＫꎬｅｔａｌ.Ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌｔｒａｎｓ￣ｆｅｒｏｆｔｅｔ(Ｍ)ａｎｄｅｒｍ(Ｂ)ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐｌａｓｍｉｄｓｆｒｏｍｆｏｏｄｓｔｒａｉｎｓｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍｔｏＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓＪＨ２￣２ｉｎｔｈｅｇａｓ￣ｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｒａｃｔｏｆｇｎｏｔｏｂｉｏｔｉｃｒａｔｓ[Ｊ].ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＥｃｏｌ￣ｏｇｙꎬ２００７ꎬ５９(１):１５８￣１６６.[５４]ＧＥＶＥＲＳＤꎬＨＵＹＳＧꎬＳＷＩＮＧＳＪ.Ｉｎｖｉｔｒｏｃｏｎｊｕｇａｌｔｒａｎｓｆｅｒｏｆｔｅｔ￣ｒａｃｙｃｌｉｎｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｆｒｏｍＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｉｓｏｌａｔｅｓｔｏｏｔｈｅｒＧｒａｍ￣ｐｏｓｉ￣ｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａ[Ｊ].ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓꎬ２００３ꎬ２２５(１):１２５￣１３０.[５５]ＨＵＹＳＧꎬＤᶄＨＡＥＮＥＫꎬＣＯＬＬＡＲＤＪꎬｅｔａｌ.Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅａｎｄｍｏ￣ｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｉ￣ｓｏｌａｔｅｓｆｒｏｍｆｏｏｄ[Ｊ].ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２００４ꎬ７０(３):１５５５￣１５６２.[５６]ＤＡＩＭꎬＬＵＪꎬＷＡＮＧＹꎬｅｔａｌ.ＩｎｖｉｔｒｏｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｔｒａｎｓｆｅｒｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｃｈｌｏｒｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅｉｎＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２０１２ꎬ５０(５):８０７￣８１２.[５７]ＫＡＺＩＭＩＥＲＣＺＡＫＫＡꎬＦＬＩＮＴＨＪꎬＳＣＯＴＴＫＰ.Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅａ￣ｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｅｑｕｅｎｃｅｓｆｌａｎｋｉｎｇｔｅｔ(Ｗ)ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｉｎｍｕｌｔｉｐｌｅｓｐｅｃｉｅｓｏｆｇｕｔｂａｃｔｅｒｉａ[Ｊ].ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＡｇｅｎｔｓａｎｄＣｈｅｍｏｔｈｅｒａ￣ｐｙꎬ２００６ꎬ５０(８):２６３２￣２６３９.[５８]ＭＡＴＥＲＤＤＧꎬＬＡＮＧＥＬＬＡＰꎬＣＯＲＴＨＩＥＲＧꎬｅｔａｌ.ＡｐｒｏｂｉｏｔｉｃＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｓｔｒａｉｎｃａｎａｃｑｕｉｒｅｖａｎｃｏｍｙｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｄｕｒｉｎｇｄｉ￣ｇｅｓｔｉｖｅｔｒａｎｓｉｔｉｎｍｉｃｅ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ２００８ꎬ１４:１２３￣１２７.[５９]ＢＯＵＲＧＥＯＩＳ￣ＮＩＣＯＬＡＯＳＮꎬＭＯＵＢＡＲＥＣＫＣꎬＭＡＮＧＥＮＥＹＮꎬｅｔａｌ.ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆｖａｎＡｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒｆｒｏｍＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃｉｕｍｔｏＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓａｎｄｔｏＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃｉｕｍｉｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎｅｏｆｍｉｃｅ[Ｊ].ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓꎬ２００６ꎬ２５４(１):２７￣３３.[６０]刘韶娜ꎬ郭㊀飞ꎬ张㊀斌ꎬ等.复合益生菌对超早期断奶杜藏乳仔猪肠道微生物群落结构的影响[Ｊ].南方农业学报ꎬ２０２１ꎬ５２(３):５４７￣５５８.[６１]崔㊀莉ꎬ李㊀莹ꎬ冯㊀进ꎬ等.热激联合牛蒡抗热保护剂对益生菌奶粉中益生菌喷雾干燥活性的影响[Ｊ].江苏农业科学ꎬ２０２１ꎬ４９(１０):１６６￣１６９.[６２]申远航ꎬ黄晓灵ꎬ高利伟ꎬ等.益生菌对断奶仔猪小肠形态影响的Ｍｅｔａ分析[Ｊ].南方农业学报ꎬ２０２０ꎬ５１(１０):２５４６￣２５５６.(责任编辑:石春林)８２７１江苏农业学报㊀２０２２年第３８卷第６期。
益生菌活菌数量标准
益生菌活菌数量标准
益生菌是指能够在人体内产生益处的微生物，常见的益生菌包括乳酸菌、双歧杆菌等。
益生菌的数量是衡量其功效的重要指标之一，不同种类的益生菌对其数量的需求也有所不同。
目前，国际上尚未制定统一的益生菌活菌数量标准，各国和地区的标准也存在差异。
一般来说，益生菌的活菌数量需要达到一定的水平才能发挥其益生作用，具体的数量标准取决于益生菌的种类、用途、剂型等因素。
例如，乳酸菌是常见的益生菌之一，其活菌数量通常需要达到每克含有10亿-100亿CFU（菌落形成单位）的水平。
而双歧杆菌则需要达到每克含有10亿-100亿CFU的水平。
总之，益生菌活菌数量的标准是一个复杂的问题，需要考虑到多种因素，包括益生菌的种类、用途、剂型等。
在选择和使用益生菌产品时，应该根据产品说明和相关标准来确定其活菌数量，并遵循医生或专业人士的建议。
益生菌产品活菌数要求标准
益生菌产品活菌数要求标准
益生菌产品的活菌数要求标准是根据不同的国家和地区的法规和标准进行确定的。
一般来说，活菌数是指每克或每毫升产品中所含的活菌数量。
在中国，益生菌产品的活菌数要求按照《食品安全国家标准食品微生物学检验》(GB 4789.2-2016) 进行评估。
根据该标准，不同类型的益生菌产品有不同的活菌数要求，例如：乳酸菌制品的要求为每克大于等于10^6CFU (菌落形成单位)，其他类型的益生菌产品可能有不同的要求。
除了中国的标准外，其他国家和地区也有各自的益生菌产品活菌数要求标准。
例如，欧洲联盟对于益生菌产品的活菌数的最低要求是每克大于等于10^7CFU。
而在** ，益生菌产品一般被视为膳食补充剂，在该国没有具体的法定活菌数要求。
因此，具体的益生菌产品活菌数要求标准应根据所在国家或地区的法规和标准来确定。
建议消费者在购买益生菌产品时，注意查看产品包装上的标示，并根据自身的需求及相关专业建议进行选择。
益生菌ppt课件
布拉氏酵母菌是一种非致病性酵母菌，主要分布在肠道和口腔中。它们
可以维持肠道和口腔的健康，抵御有害菌的入侵。此外，布拉氏酵母菌
还可以提高免疫力，对抗一些疾病。
02
益生菌的作用
维护肠道健康
益生菌可以抑Biblioteka 有害菌的生长， 从而保持肠道内的生态平衡，改
善肠道问题如便秘和腹泻等。
益生菌可以促进肠道蠕动，增强 肠道吸收功能，有利于营养物质
益生菌相关产业的广阔发展空间
随着益生菌研究和应用的深入，相关产业也将不断扩大和发展。例如， 益生菌检测试纸、益生菌原料提取物、益生菌制剂等产品的生产和销售 都将得到进一步的发展。
益生菌也将成为农业和食品加工领域的一个重要组成部分。例如，一些 新的研究发现，一些益生菌可以促进植物的生长和发育，未来可能在一
胆固醇
益生菌有助于降低胆固醇 、改善心血管疾病等作用 。
如何选择和食用益生菌的注意事项
根据需求选择适合自己的益生菌种类：例如，经常出现便秘问题的人可以选择乳酸菌等益生 菌种类。
注意益生菌的活性：只有活性的益生菌才能发挥其作用，因此在选择益生菌时要注意其保存 方式和有效期。
按说明书上的建议食用量来食用益生菌：过量食用可能会引起不适。
益生菌研究和应用的深入
益生菌的功能将得到更深入的研究和 探索。未来可能还会有更多新的益生 菌种类被发现，并证明它们对人体的 益处。
益生菌产品的制备技术和保存方式也 将得到进一步的改进和提高，以确保 益生菌的活性和稳定性。
益生菌将在更多领域发挥作用，如帮 助改善肥胖、糖尿病等代谢性疾病。 此外，益生菌还可以用于预防和治疗 各种感染性疾病。
益生菌的未来发展趋势和前景
随着人们对健康的重视程度不断提高， 益生菌作为一种重要的健康食品，其市
微生态制剂
4、增强机体的免疫功能
微生态制剂中的有益菌是良好的免疫激活剂。
大量研究表明乳酸菌可诱导机体产生TNF-a、白
细胞介素等细胞因子，通过淋巴循环活化全身的
免疫防御系统，增强机体抑制癌细胞增殖的能力。
酵母菌细胞壁含有酵母多糖，其主要活性成分为 葡萄朊、甘露聚糖、明角质，研究证明这些酵母 细胞壁成分可提高动物的免疫力，增进健康。
3、微生物夺氧说
一些需氧的微生物特别是芽孢杆菌能消耗肠道内
氧气，造成局部厌氧环境，有利于厌氧微生物生 长，从而使失调菌群恢复正常。
当饲用微生物添加剂中某菌种以孢子状态进入畜 禽消化道后迅速生长繁殖，消耗肠内氧气，使局
部氧分子浓度下降，从而恢复肠内微生物之间的
微生态平衡，达到防病治病、促生长之目的。
微生态制剂的出现
从20世纪70年代开始，微生物学者转向进行微生 态制剂的研究和实际应用。
逐步在理论上探明了常见动物体内（特别是消化 道内）的正常菌群的种类、数量及其功能。 在应用方面，研制成功了多种微生态制剂，并在 生产实践当中进行了较广泛的开发应用，产生了 显著的经济、生态和社会效益。
微生态制剂的出现
微生态制剂
从帝赛发现双岐杆菌说起
1890年帝赛在一位儿童医院的教授指导下，开展了“对 婴幼儿消化不良病因的研究”，经过10年的研究，终于从 母乳喂养婴儿的正常大便内发现了双歧杆菌。
在巴斯德研究所工作的帝赛发表了学术论文“肠道菌群— —乳幼儿的正常与病态”，文中指出，母乳喂养儿粪便有 一种杆菌，呈革兰氏阳性的多形态。母乳喂养儿体内的双 歧杆菌占优势，这种细菌难以在空气中存活，呈字母Y或 V那样分叉，故命名为双歧杆菌。帝赛发现无论哪种喂养 方式的婴儿，当他们腹泻时，这种分叉的杆菌就会减少或 消失。
我国批准的益生菌菌种名单
5
德氏乳杆菌乳亚种
Lactobacillus ctis
6
发酵乳杆菌
Lactobacillus fermentium
7
格氏乳杆菌
Lactobacillus gasseri
鼠李糖乳杆菌
Lactobacillus rhamnosus
14
唾液乳杆菌
Lactobacillus salivarius
15
清酒乳杆菌【1】
Lactobacillus sakei
16
弯曲乳杆菌【2】
Lactobacillus curvatus
第三类
链球菌属
Streptococcus
1
嗜热链球菌
Streptococcus thermophilus
Bifidobacterium adolescentis
第二类
乳杆菌属
Lactobacillus
德氏乳杆菌保加利亚种
Lactobacillus bulgaricussubsp.bulgaricus
2
嗜酸乳杆菌
Lactobacillus acidophilus
3
干酪乳杆菌干酪亚种
Lactobacillus caseisubsp.casei
乳杆菌属
Lactobacillus
*嗜酸乳杆菌NCFM
Lactobacillus acidophilusNCFM
鼠李糖乳杆菌LGG或HN001
Lactobacillus rhamnosusLGG or HN001
发酵乳杆菌CECT5716【1】
微生态制剂的种类
微生态制剂的种类微生态制剂的种类微生态制剂是利用正常微生物或促进微生物生长的物质制成的活菌制剂。
也就是说，一切能促进正常微生物群生长繁殖的及抑制致病菌生长繁殖的制剂。
根据现在微生态制剂的产品特点可以分为两种，一种是单一型微生态制剂，另一种为复合型微生态制剂。
单一型微生态制剂是以单独菌种为主要成分，发挥其生理活性，这类菌株包括乳酸杆菌、酵母菌、芽孢杆菌等。
由于单独菌株作用的独特性，不能完全适合动物体内的复杂变化，复合型微生态制剂在市场中受到广泛关注。
复合型微生态制剂又以成分不同分为复合菌微生态制剂和合生态微生态制剂—合生元。
复合菌微生态制剂可以是两种及两种以上相同种属或不同种属菌株组成，以EM菌露为例，其包括菌株繁多，有光合细菌、乳酸菌、放线菌、酵母菌、发酵型丝状菌等5科10属80多种好氧性和厌氧性微生物组成的多种有益的优良微生物菌群，可应用于保健、水产、养殖、种植甚至环保等方面。
这些微生物组合在一个统一体中互相促进，共同组成一个复杂而稳定的具有多元功能的微生物生态系统。
合生元是由益生菌和益生元组成。
益生元是通过选择性的刺激一种或少数种菌落中的细菌的生长与活性而对寄主产生有益的影响从而改善寄主健康的不可被消化的食品成分，如各种寡糖类物质或称低聚糖。
常见的有乳果糖、蔗糖低聚糖、棉子低聚糖、异麦芽低聚糖、玉米低聚糖、大豆低聚糖和酵母细胞壁等。
这些糖类不能被动物自身及其肠道内的致病菌所消化和吸收，只能为肠道有益菌群如双歧杆菌和乳杆菌等特异性利用，因此可以促进有益菌的生长繁殖，间接地抑制有害菌的生长，从而达到调整肠道正常菌群的目的。
2006年农业部公布的658号公告，明确说明我国允许使用的微生物添加剂包括16种，这些有益微生物分别是地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母、沼泽红假单胞菌、保加利亚乳杆菌。
肠道益生菌分离鉴定及应用研究
肠道益生菌分离鉴定及应用研究一、引言肠道微生物群落对人体健康的重要性日益受到关注，其中益生菌在维持肠道平衡、促进营养吸收和增强免疫功能等方面发挥着关键作用。
肠道益生菌的分离鉴定及应用研究成为了当前微生物学和医学领域的热门课题。
二、肠道益生菌的分离方法（一）样本采集要分离肠道益生菌，首先需要从健康个体的粪便样本中获取。
在采集过程中，需要确保样本的新鲜度和无污染，通常使用无菌容器进行收集。
（二）选择性培养利用特定的培养基来培养肠道微生物。
例如，一些益生菌如双歧杆菌和乳酸菌在特定的营养条件和环境下能够生长，而其他杂菌则受到抑制。
（三）稀释涂布法将样本进行一系列稀释，然后将稀释液均匀涂布在培养基上，以获得单个菌落。
（一）形态学鉴定观察菌落的形态、大小、颜色和边缘特征，以及菌体的形态、大小和排列方式等。
（二）生理生化鉴定检测微生物的代谢产物、酶活性、对不同物质的利用能力等生理生化特性。
（三）分子生物学鉴定通过 PCR 技术扩增特定的基因片段，如 16S rRNA 基因，然后进行测序和比对分析，以确定其种属。
四、常见的肠道益生菌及其功能（一）双歧杆菌能改善肠道微生态平衡，抑制有害菌生长，增强免疫力，还参与维生素的合成和营养物质的吸收。
（二）乳酸菌产生乳酸降低肠道 pH 值，抑制病原菌生长，促进钙、铁等矿物质的吸收。
（三）芽孢杆菌具有较强的抗逆性，能够调节肠道菌群结构，提高机体抗氧化能力。
（一）食品工业广泛应用于酸奶、奶酪、发酵乳等乳制品，以及饮料、保健品等产品中，为消费者提供营养和健康益处。
（二）医药领域用于治疗肠道疾病，如腹泻、便秘、炎症性肠病等。
还可作为辅助治疗手段，增强药物的疗效，减轻药物的副作用。
（三）畜牧业添加到动物饲料中，提高动物的生长性能、免疫力和饲料利用率，减少疾病的发生。
六、肠道益生菌应用的挑战与展望（一）挑战1、益生菌的存活和定植能力在经过胃肠道的复杂环境后，益生菌的存活数量和在肠道内的定植能力是影响其效果的关键因素。
益生菌活菌量国际标准
益生菌活菌量国际标准
摘要：
一、益生菌的定义和作用
二、国际上关于益生菌活菌量的标准
三、我国的相关标准和规定
四、活菌量与益生菌效果的关系
五、如何选择适合自己的益生菌产品
正文：
益生菌是一种对人体有益的微生物，广泛存在于人体肠道、口腔等处，对人体健康起着重要的调节作用。
益生菌的活菌量是衡量益生菌产品效果的重要指标。
在国际上，益生菌活菌量的标准主要由世界卫生组织和食品法典委员会制定。
例如，欧洲食品安全局（EFSA）规定，益生菌产品中的活菌数应至少含有10^6 CFU/g或10^9 CFU/mL。
此外，美国食品和药物管理局（FDA）也要求益生菌产品中的活菌数至少含有10^6 CFU/g。
在我国，关于益生菌活菌量的标准主要参考了国际上的规定。
例如，我国的标准GB10765-2010《食品安全国家标准婴儿配方食品》和GB10767-2010《食品安全国家标准较大婴儿和幼儿配方食品》等，都对益生菌的活菌量进行了规定。
此外，我国还制定了《益生菌类保健食品评审规定》，对益生菌保健食品的活菌量进行了详细的规定。
活菌量并非越高越好。
每个人的身体状况不同，适合的活菌量也不同。
研
究表明，活菌量过高可能会导致一些人不适应，甚至出现慢性腹泻等症状。
因此，在选择益生菌产品时，应根据自己的身体状况选择合适的活菌量。
总之，益生菌的活菌量是衡量其效果的重要指标，但并非越多越好。
在选择益生菌产品时，应根据自己的身体状况和需求，选择符合国际和国内标准的益生菌产品。
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5 种医用益生菌产品的微生物数量和种属分析
但国蓉 * ,袁 静 ,唐 欢 ,魏 泓 # (第三军医大学基础部动物学教研室 ,重庆市 400038)
中图分类号 R95
文献标识码 A
文章编号 1001- 0408 (2006) 07 - 0530 - 03
摘 要 目的 :比较市售 5 种医用益生菌产品的活菌数量 、种属与产品标签是否一致 。方法:采用选择平板菌落计数法检测产品的 活菌数量 ,利用 16S rDNA 序列分析 、鉴定分离菌株的种属 。结果 :5 种产品共 25 批的活菌数含量只有 1 批低于标签标注的数量 。 分离的 10 株菌中有 3 株种属与标签标注的不一致 。结论 :考察的 5 种产品中 ,菌株种属与标签标注存在差异 ,但产品的活菌数量与 标签标注基本一致 。 关键词 益生菌产品 ;标签 ;微生物 ;数量 ;种属
BL AS T 工具将测定的序列与 Gen Bank 中的序列进行同源性 分析 ,并从中选出相似性最高的 3 个序列 ,再在 Gen Bank 中找 到乳杆菌属的嗜酸乳杆菌 (L 1acidop hilus) 、干酪乳杆菌 (L 1 casei) 、德氏乳杆菌亚种保加利亚 (L 1delbrueckii subsp 1bulgaricus) 、詹氏乳杆菌 (L 1jensenii) 、植物乳杆菌 (L 1plantarum) 、 鼠李糖乳杆菌 (L 1rhamno sus) 6 个种和双歧杆菌属的青春双歧 杆菌 (B1adolescentis) 、动物双歧杆菌 (B1animalis) 、两歧双歧 杆菌 (B1bifidum) 、短双歧杆菌 (B1breve) 、婴儿双歧杆菌 (B1 infantis) 、长双歧杆菌 (B1lo ngum) 6 个种的 16S rDNA 序列 。 应用 Clustal X118 、P H YL IP 和 Tree View 等软件 ,根据邻位相 连法 (Neighbo r - joining met ho d , NJ ) 构建系统发生树 。先用 Clustal X118 软件将分离株的序列与 Gen Bank 中找到的 16S rDNA 序列进行排序 , 依次利用 P H YL IP 软件包中的 SEQ2 BOO T 、DNAD IS T 、N E I GHBO R 和 CON SEN SE 等软件分析 构建出一致的引导进化树 ( St rict co nsensus boot st rap t ree) 。
表 1 5 种医用益生菌产品标签上标注的菌的种属和数量
Ta b 1 Genera and numbers of stra ins of 5 probiot ic
products f or medic inal purposes spec if ied on ta gs
产品
益生菌种属
A
长双歧杆菌
嗜酸乳杆菌
P TC - 150 型 PCR 仪 (美国 MJ R ESEA RCH 公司提供) ; 水平电泳仪 (江苏海门市麒麟医用仪器厂提供) ; Bio - Rad Gel Docห้องสมุดไป่ตู้000 型凝胶成相系统 (美国 Bio - Rad 公司提供) ; YQ X 1 型厌氧培养手套箱 、SPX - 250B 型生化培养箱 (上海跃进医
ABSTRACT OBJ EC T IV E : To co mpare w het her t he numbers and species of st rains of 5 p ro biotic p ro duct s fo r medical p ur2 po ses sold in t he market are in line wit h t ho se stated o n t he labels 1M E T HODS : Viable co unt of p ro biotic p ro duct s was per2 fo rmed by selective plating co unt met ho d and species of t he isolated st rains were anal yzed and identified using 16S rDNA se2 quencing1R ESUL TS : Regarding viable co unt , o nly o ne of t he total 25 batches of samples in 5 p ro duct s was lower t han t hat stated o n t he label 1As fo r species ,of t he 10 isolated st rains ,3 failed to be in co nsistent wit h t hat stated o n t he label 1CON CL US ION S : Fo r t he 5 p ro duct s investigated ,inco nfo rmit y was noted bet ween st rain species and t hat stated o n t he labels ,however , t he same viable co unt s are noted bet ween t he p ro duct s and t hat stated o n t he labels1 KEY WO RDS Pro biotic p ro duct s ;L abel ;Microo rganism ;N umbers ;Species
11514 DNA 序列测定 : 用纯化 PCR 产物做模板和 PCR 引 物做测序引物 ,在 DNA 自动测序仪上测序 。测定的 DNA 序列 以双链碱基互补的结果为准 。
116 菌株 16S rD NA 序列同源性分析及进化树的构建 将测定序列上传至 Gen Bank 数据库获登陆序列号 , 用
1 材料与方法
111 供试药品 5 种医用益生菌产品 (A 、B 、C 、D 、E) 各 5 个批次购自重庆
各大医院及药店 。根据产品标签说明 , 产品 A 、B 、E 于 4 ℃保 存 ,C 、D 于阴凉干燥处保存 。产品在购买后 1mo 内完成计数检 测及菌株分离 。每种产品标签上标注的益生菌种属和数量详见 表 1。 112 培养基
Numbers and Spec ies of Microorgan isms of 5 Probiotic Products f or Medic inal Pur poses DAN Guo ro ng , YUAN J ing , TAN G Huan , W E I Ho n g (Dep t 1of Animal Science , Colle ge of Basic Medicine , The Third Militar y Medical U niversit y ,Cho ngqing 400038 ,China)
M RS 培养基和肠球菌选择培养基 (CM0377) , 均购自英 国 Oxoid 公司 ;营养琼脂培养基购自北京奥博星生物技术责任 有限公司 ; 酸性 M RS 培养基 : 将 M RS 培养基用稀盐酸 ( HCl)
* 硕士研究生 。研究方向 :应用微生物 。电话 : 023 - 68753882 # 通讯作者 : 教授 。研究方向 : 生物资源的开发与应用 。电话 : 023 - 68752051 。E - mail :weiho ng @mail 1t mmu1co m1cn
益生菌制剂是可以改善宿主肠道微生态平衡且含生理性 活菌的微生物制剂 [1 ] , 其在治疗乳糖不耐症 、菌群失调 、肠炎 、 腹泻等方面均有疗效 。但近年来的国外研究发现 , 市售的有些 益生菌制剂的微生物种类和数量与产品标签上标注的种类和 数量不符 [2 ～5 ]。临床试验证实 , 只有摄入足够数量的益生菌才 能发挥作用 ;同样 ,菌种是益生菌制剂质量的直接保证 ,对于上 述问题国内目前还未见相关报道 。在本文中 , 笔者利用 16S rDNA 序列分析来鉴定市售的 5 种医用益生菌产品分离菌株 , 并检测了每种产品多批次的活菌数含量 , 对其进行了统计学分 析 ,这在国内尚属首次报道 。
调 p H 值至 514 ±011 ; M 17 培养基 : 将 D IFCO 公司提供的 M 17 基础培养基添加 5 ‰的蔗糖 ; BSM 培养基 [6 ] : 于 M RS 培 养基中添加 0105 %的盐酸半胱氨酸 (北京化学试剂公司提供) 高压灭菌 , 待培养基冷至 48 ℃左右 (倾倒平板之前) 加入莫匹 罗星水溶液使其终浓度为 50μg/ ml 。其中 , 莫匹罗星水溶液是 由百多邦软膏内容物以无菌蒸馏水稀释至 1mg/ ml , 充分溶解 后 ,过滤灭菌而得 。 113 仪器
粪肠球菌
B
青春双歧杆菌
C
地衣芽胞杆菌
D
枯草芽胞杆菌
屎肠球菌
E
嗜热链球菌
保加利亚乳杆菌
长双歧杆菌
数量
≥1 ×107 CFU / 粒 ≥1 ×107 CFU / 粒 ≥1 ×107 CFU / 粒 5 ×107 CFU / 粒 215 ×108 CFU / 粒 115 ×107 CFU / 袋 1135 ×108 CFU / 袋 ≥5 ×105 CFU / 片 ≥5 ×105 CFU / 片 ≥5 ×105 CFU / 片
2 试验结果
211 益生菌产品的选择计数 在检测的 25 个批次中有 24 个批次 (96 %) 达到产品标签
标注的活菌数量 。各产品计数的具体结果详见表 2 。
·530 · China Phar macy 2006 Vol . 17 No . 7
中国药房 2006 年第 17 卷第 7 期
疗器械厂提供) ; T GL 16 台式高速冷冻离心机 (中国科学院武 汉科学仪器厂提供) 。 114 样品的稀释计数
每种产品在无菌条件下取约 1g , 加入稀释液 (生理盐水溶 液) 9ml 中 , 充分混匀 , 10 倍系列稀释 , 取最后 3 种稀释度溶液 各 100μl 滴入选择性培养基平皿上 , 重复 2 次 , 并用 L 形棒涂 布均匀 ,置于适宜条件下培养 ,数日后观察平皿菌落生长情况 , 取菌落数大于 15 小于 300 的平皿进行计数 。根据 3 个平皿菌 落总数按下列公式计算活菌数 : 活菌数 (CFU / 粒) = (3 个平 皿菌落数之和/ 3) ×(10/ 粒数) ×稀释度 115 菌株 16S rD NA 序列测定 11511 基因组 DNA 提取 :按文献 [7 ]提供的方法进行 。 11512 聚合酶链式反应 ( PCR) 扩增 : 以提取的细菌基因组 DNA 为模板 PCR 扩增 16S rDNA 。所用细菌通用引物 27f (5’A GA GT T T GA TCC T GG C TC A G - 3’) 和 1 492r (5’ GGT TAC C T T GT T AC G AC T T - 3’) [8 ] ,由上海英骏生物 公司合成 。PCR 反应体系 (50μl) :10 ×PCR 缓冲液 5μl ,脱氧核 苷三磷酸 (dN TP) (215μmol/ L ) 4μl , 27f 和 1 492r 引物 (20μmol/ L ) 各 1μl , Taq 酶 (215 IU /μl) 1μl ,模板 DNA 1μl ,去离 子水 27μl 。PCR 反应条件 :94 ℃变性 5min ;循环 30 次 :94 ℃变 性 30s , 55 ℃退火 30s , 72 ℃延伸 2min ; 再 72 ℃延伸 5min , 于 4 ℃保存 。 11513 PCR 扩增产物纯化 : 扩增产物在 1 %琼脂糖凝胶 (含 015μg/ ml 溴乙啶) 上电泳 , 按公司提供的操作手册用 DNA 回 收试剂盒从凝胶上回收纯化目的片段 。