生化实验报告1课件资料

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[课件]临床生化检验PPT

[课件]临床生化检验PPT
(8)其他可能伴有糖尿病的遗传综合征
线粒体糖尿病
1997年美国糖尿病学会(ADA)将本病列为β细胞遗传缺陷 性糖尿病。属于母系遗传,也可散发,人群中发病率为0.5%~ 1.5%,发病年龄多在30~40岁,最常见的是非胰岛素依赖型糖 尿病。 患者无肥胖、无酮症倾向,多数患者在病程中需要胰岛素治 疗,常伴有轻度至中度的神经性耳聋。 目前至少已发现20余种线粒体的基因突变与发病有关,这些 基因的突变导致胰腺β细胞内能量产生不足,引起胰岛素分泌障 碍而致糖尿病的发生。
传性代谢缺陷或酮性低血糖引起,且往往由于禁食或发热性疾病
而进一步降低。
2.成人空腹低血糖症
可能由于肝脏葡萄糖的生成速率下降或机体对葡萄糖的利用增加所致。 一般而言,血浆葡萄糖浓度低于3.0mmol/L(55mg/dl)时,开始出现低血 糖有关症状,血糖浓度低于2.8mmol/L(50mg/dl)时,会发生脑功能损害。
(7)遗传因素在发病中起重要作用,特别与HLA某些基
因型关联很强
特发性1型糖尿病
显著特点是具有1型糖尿病的表现,但没有明显
的自身免疫反应的证据,也没有HLA基因型的相关
特点。
2. 2型糖尿病
特点:
(1)典型病例常见40岁以上肥胖的中老年成人,偶见于幼儿
(2)起病较慢 (3)血浆胰岛素含量绝对值不降低,但糖剌激后呈延迟释放 (4)ICA等自身抗体呈阴性 (5)初发患者单用口服降糖药一般可以控制血糖 (6)发生酮症酸中毒的比例不如1型糖尿病 (7)有遗传倾向,但与HLA基因型无关
酮体
丙酮酸及乳酸 尿微量白蛋白
临床实验室检测血糖以及血糖调节物、 糖化蛋白以及并发症相关的其他代谢产物
பைடு நூலகம்酸中毒。
糖尿病乳酸酸中毒昏迷(lactic acidosis diabetic coma)

《生化实验》课件

《生化实验》课件

实验流程
1
实验准备
清洗仪器、准备试剂和标本,确保实验顺利进行。
2
实验操作
按照操作步骤进行样本处理、反应和测量。
3
数据记录
准确记录实验数据,便于后续分析和结果展示。
实验方案的制定
目标设定
定义实验目标和预期结果,指导实验方案的制定。
调整量
确保实验中只有一个变量改变,其他条件保持恒定。
《生化实验》PPT课件
探索生化实验的奥秘,了解其应用领域和实验室安全知识。学习实验流程、 制定实验方案和数据分析,解答常见问题。
生化实验简介
1 关键性实验技术
学习DNA测序、蛋白质表达、酶活性等生化 实验技术。
2 学术研究工具
了解生化实验在药物研发、基因工程和医学 诊断等方面的应用。
生化实验的应用
实验改进
提出改进实验方案的建议,优 化实验设计和操作。
数据分析和结果展示
统计分析
使用统计方法对实验数据进行分 析,发现规律和趋势。
图表展示
使用图表和图形呈现实验结果, 直观清晰地展示研究发现。
实验报告
撰写详细的实验报告,包括实验 目的、方法、结果和结论。
常见问题解答
实验失败
分析失败原因,如实验条件、 操作技巧和实验材料等。
结果解释
解释实验结果,讨论研究意义 和可能的应用。
医药研究
开发新药物、研究药物代谢和 毒性,为治疗疾病提供科学依 据。
基因工程
编辑基因序列、合成重组蛋白, 促进生命科学研究的进展。
食品安全
检测食品中的有害物质,确保 食品安全和卫生。
实验室安全
1 个人防护措施
佩戴实验室服装、手套和护目镜,避免与实验物质接触。

【2024版】生化检验基础知识-PPT课件

【2024版】生化检验基础知识-PPT课件

2. 血液标本的采集
生化检验用的血液标本可来自于静脉、 动脉或毛细血管。静脉血是最常用的标本, 静脉穿刺是最常用的采血方法。毛细血管采 血主要用于儿童,血气分析多使用动脉血。
(1) 采血前准备
为了使实验室结果有效地用于临床,实验室 应了解在收集标本前和收集标本时,所有会 影响实验室的非患者内在疾病因素。采取各 种措施,提出对患者采集标本前以及采集时 的要求,称之为患者准备。
(2) 注意事项 收集尿液标本的容器必须清洁干燥, 最
好是一次性使用的容器。若容器反复使用, 则须用洗涤液和自来水清洗, 再用蒸馏水冲 洗。尿标本要防止混入月经血、阴道分泌物、 精液、前列腺液、粪便等异物。尿标本收集 后应 12 时内送检,以免细菌作用和化学成分 分解。若不能及时检验(如收集 24 小时尿 液),将标本置冰箱保存,若加入防腐剂, 保存效果更佳。
对不是因操作不当引起的溶血、脂血或胆红 素血,应在检验报告上注明,供医生参考。
尿液、脑脊液和胸腹水等标本常需离心,取 上清液进行分析
Байду номын сангаас
分离后的标本若不能及时检测或需保留以备 复查时,一般应放于4℃冰箱,某些检测项 目的标本存放于-20℃冰箱更稳定。标本存 放时需加塞,以免水分挥发而使标本浓缩。
3.尿液标本的采集
尿液标本的采集 (1) 采集方法 尿液标本有随机新鲜尿、定时尿及 24 小时尿, 根据检查项目选择标本的采集类型。定量生化分析 多收集 24 小时尿液, 24 小时尿标本采集方法如 下:
嘱病人在早晨 8 时排尿弃去,以后每次排尿均 收集于一大容器内,至次日早晨 8 时最后一次尿亦 收集于容器内。测量并记录 24 小时尿液总量,然 后混匀尿液,取适量尿液送检。
通常用量为0.5 ~1.0ml 浓盐酸/100 ml 尿液,适用于24 小时尿儿茶酚胺、秀草 扁桃酸(V M A)、17 -羟皮质类固醇和 17 -酮类固醇等定量测定。

生化检验PPT课件

生化检验PPT课件
中毒、肾后性因素引起的排尿障碍、库欣综合征等 • 减低主要见于严重的呕吐、腹泻、消化液大量丢失、
糖尿病性昏迷、肺炎、肠梗阻、幽门梗阻爱迪生病等
35
• 血清钙 • 增高:主要见于摄入过多、原发性甲亢、原发
性甲状旁腺功能亢进、转移性骨癌、多发性骨 髓瘤、肾上腺功能不全、急性肾性肾功能不全 等 • 减低:摄入和吸收不足、甲减、甲亢术后、恶 性肿瘤骨转移、佝偻病、软骨病、急慢性肾衰 竭、肾病综合征、肾小管性酸中毒等
• 生理性低血糖:饥饿和剧烈运动。病理性低血糖 1 胰岛素B细胞增生或瘤等。2 对抗胰岛素的激素分泌 不足,如垂体前叶机能减退肾上腺皮质机能减退和 甲状腺机能减退等。3 严重肝病患者。
17
葡萄糖耐量试验OGTT 适应证:1、空腹血糖水平在临界值(6-7mmol/L)而 又疑糖尿病患者;2、空腹或餐后血糖浓度正常,但有 发展为糖尿病可能的人群;3、以前耐量实验异常的危 险人群;4、妊娠性糖尿病的诊断;5、临床上出现肾 病、神经性病变和视网膜病而又无法做出合理性解释 者;6、作为流行病学研究的手段。
6
AST谷草转氨酶 在心肌细胞内含量较多,当心肌梗塞时,血清 中活力增高,在发病后6-12小时之内显著增高, 在48小时达高峰,3-5天恢复正常。也来源于肝 细胞,各种肝病可引起血清的升高,有时可达 1200IU/L,中毒性肝炎还可更高。
7
• ALP碱性磷酸酶 1 肝胆疾病:阻塞性黄疸 急性或慢性黄疸性肝 炎肝癌等。 2 骨骼疾病:由于骨的损伤或疾病使成骨细胞内 所含高浓度的ALP释放入血液中,引起ALP活力 增高。
18
• 0.5-1小时在7.78-8.89之间,2小时恢复正常 • (实验前三天受试者每日食物中含糖量不低于150g,且正常活动。

临床生化检查PPT课件

临床生化检查PPT课件

元素 1、增高:FBG > 7.0mmol/L---高血糖症
心肌 标志
生理性↑:餐后1/2~1h, 摄糖过多 病理性↑:糖尿病,内分泌疾病,应激性
高血糖,药物影响,其他。
甲功 检查
2、降低:FBG < 2.8mmol/L---低血糖症
生理性↓:饥饿,长期剧烈运动,妊娠期 病理性↓:胰岛素过多,缺乏抗胰岛素激素
血脂
体恒定供能来源,存在于β脂蛋白和
检查
乳糜微粒中,血中TG直接参与CHO及
无机 元素
CE形成,是动脉粥样硬化的危险因素 【参考值】 ≤1.7mmol/L
心肌 【临床意义】 标志 1.升高:冠心病、原发性高脂血症、肥胖症等
甲功 检查
2.降低:甲亢、严重肝病、肾上腺皮质功能 降低、低(无)β脂蛋白血症等。
无机 【参考值】 <5.2mmol/L
元素 【临床意义】
心肌 标志
1.增高:动脉粥样硬化、高脂血症、胆道梗阻、 肾病综合征、糖尿病、甲减等
甲功 2.降低:严重肝病(肝黄,门脉性肝硬化) 、贫
检查 血、营养不良、甲亢、恶性肿瘤。
Chapter7 临床常用生化检查
血糖 (二)血清甘油三脂测定
代谢 【原理】 TG由肠道摄取入血,肝脏也合成。机
检查 温开水中,5min内服完并计时,于30min,1h,2h,
3h抽静脉血1ml,每次抽血后留尿标本送检。
血糖 代谢 血脂 检查 无机 元素 心肌 标志 甲功 检查
(二)口服葡萄糖耐量试验(OGTT) 葡萄糖耐量曲线
Chapter7 临床常用生化检查
血糖 (二)口服葡萄糖耐量试验 代谢 【临床意义】
无机 ④妊娠期,复摄甲糖正亢常后,肝,病为血时耐糖出糖浓现现度糖象急尿。剧者升;高,短时

生化实验期末蚕豆病设计性实验报告课件

生化实验期末蚕豆病设计性实验报告课件
蚕豆病是由于红细胞中缺乏葡萄 糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)所 致,导致红细胞抗氧化能力降低 ,易于发生氧化应激反应。
氧化应激
在蚕豆病患者体内,由于缺乏G6-PD,红细胞无法有效应对氧化 应激,导致红细胞膜损伤和溶血 。
蚕豆病的病理生理
溶血性贫血
由于红细胞膜损伤和溶血,蚕豆病患 者会出现溶血性贫血的症状,如黄疸 、贫血、肝脾肿大等。
我们采用了生化实验方法,通过测定蚕豆 病患者和健康人群的G6PD酶活性,对比分 析两组数据,得出结论。
实验结果
数据分析
实验结果表明,蚕豆病患者的G6PD酶活性 显著低于健康人群,这与预期结果一致。
我们对实验数据进行了统计分析,得出了 具有统计学意义的结论。
实验中遇到的问题及解决方案
问题1
部分实验数据出现异常值。
验结果的实用性和应用前景。
结论总结
总结实验结果,得出明确的结论, 指出实验的局限性和不足之处,提 出改进和完善的建议。
结果应用展望
探讨实验结果在实践中的应用前景 和价值,为相关领域的研究和实践 提供参考和借鉴。
05
CATALOGUE
实验总结与展望
实验总结
实验目的
实验方法
通过本次实验,我们成功地验证了蚕豆病 与G6PD酶活性之间的关系,并探讨了可能 的致病机制。
生化实验期末蚕豆 病设计性实验报告 课件
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果分析 • 实验总结与展望
01
CATALOGUE
实验目的
掌握蚕豆病的发病机制
01
了解蚕豆病的基因突变机制,掌 握其与氧化应激的关系。
02
理解蚕豆病发病过程中的酶缺陷 及其对代谢的影响。

检验科讲课生化ppt课件

检验科讲课生化ppt课件
28
血脂的检测
胆固醇(TC) 甘油三脂(TG) 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c) 低密度脂蛋白胆固醇(LDL -c) 载脂蛋白ApoA I 载脂蛋白ApoB 100 脂蛋白(a) LP (a)
29
多谢大家
30
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27
血糖及糖尿病诊断标准
糖尿病的诊断标准: 1.空腹血浆葡萄糖测定》7.0mmol/L。 2.任意时间血浆葡萄糖测定》11.1 mmol/L 3.口服葡萄糖耐量实验(OGTT)》11.1 mmol/L 正常人空腹血浆葡萄糖浓度的参考范围: 3.89~6.11 mmol/L 。若空腹大于8 .0mmol/L,且有 临床症状可诊断为糖尿病,若小于6.0 mmol/L, 则可排除糖尿病,若在6.0~7.0之间应再做检查
12
胆红素代谢的检验
胆红素来源绝大部分来自衰老死亡的红细胞,当肝细 胞损伤、胆管阻塞、红细胞破坏增加或寿命缩短时, 胆红素代谢发生异常,临床出现黄疸。 血清胆红素分为结合与非结合胆红素,二者合称总胆 红素。TBIL=DBIL+IBIL TBIL:<34为隐性黄疸, <170为轻度黄疸, <340为中度 黄疸,>340为高度黄疸,完全阻塞性黄疸为340~510; 不完全阻塞者为170~265,肝细胞性黄疸17~200;溶 血性黄疸<85
13
三种黄疸的胆红素变化比较
正常人 溶血性黄疸
DBIL 0~6.8 轻度增高
肝细胞性黄疸 中度增高
阻塞性黄疸 明显增高
IBIL 1.7~10.2 明显增高
中度增高
轻度增高
DBIL/TBIL >35% <20%

生化检测的临床意义及报告单解读 ppt课件

生化检测的临床意义及报告单解读  ppt课件

肝硬化的生物化学诊断
ALB ↓ ,球蛋白 ↑ , A/G ↓ 或倒置,血清 TBIL 不同程度 ↑ , TBA↑ , ALT轻 至中度升高;肝细胞坏死严重时 AST<ALT,PT延长,且VitK不能加以 纠正,MAO往往↑。 HA、LN、Ⅲ型胶原前肽、Ⅳ型胶原。
酒精性肝炎
AST、ALT升高,AST/ALT常大于2,ALP↑为2-4倍,rGT显著升高。 高尿酸、高乳酸、高甘油三酯、低血糖。
血钠测定
参考值: 血清钠 临床意义 : 1.血清钠降低 :①摄取不足;②胃肠道失钠; ③肾失钠:A、肾 小管病变;B、反复使用利尿剂;C、肾上腺皮质功能减退;④ 皮肤失钠;⑤大量浆膜腔积液引流,可引起体内缺钠 ; ⑥酸中毒 时,钠从细胞外液转移到细胞内液。⑦细胞外液稀释:水钠潴 留。 135~145mmol/L
BACK
常见肝脏病检测指标变化特点
急性肝损伤:转氨酶显著升高。
ALT<300U/L, AST<200U/L,常超过参考上 限的8倍以上。蛋白代谢变化不大。胆红素 升高以结合胆红素升高为主。PT监测预后。
慢性肝损伤:<6个月肝细胞发生持续性的
损伤。转氨酶轻度升高。常在参考上限的4 倍以下。ALT<AST。慢性酒精性肝炎, AST<ALT.
运输维生素A
胆红素代谢紊乱的检查
溶血性黄疸
梗阻性黄疸
肝细胞性黄疸
正常人及常见黄疸的胆红素代谢特点
血 CB/ST B 0~6.8 1.7~10.2 0.2~0. 正常 4 <0.5 梗阻性 +++ 轻度+ 血CB 血UCB 尿 尿胆原
胆红素
( -) +++ 0.84~4.2 减 少 或 缺如 +++ 正 常 或 轻度+

实验室检查生化PPT课件

实验室检查生化PPT课件

结合胆红素由胆道排入肠腔,被细菌还原成 尿胆原。 一部分尿胆原被肠粘膜吸收进入体内被肝细 胞摄取,其中一部分进入血循环从肾脏排出。 残留肠腔的尿胆原氧化后,以粪胆素排出 因此,当胆红素生成过多或肝细胞的摄取、 结合、转运、排泄等过程发生障碍,可导致 血中胆红素升高。
1.血清胆红素测定
包括总胆红素(STB),结合胆红素(CB) 和非结合胆红素(UCB)。
参考值: 总胆红素(STB) 1.7-17.1umol/L 结合胆红素(CB) 0-6.8umol/L 非结合胆红素(UCB)1.7-10.2umol/L
临床意义:
(1)根据总胆红素判断有无黄疸及黄疸的程度
STB 17.1—34.2 mol/L 隐性黄疸
34.2—171 mol/L 轻度黄疸
171—342mol/L 中度黄疸
实验室检查之
生化检验
第一节 肝功能检查
一.反映蛋白质代谢功能
1.总蛋白(TP) 60-80 g/L,是血清中所含各种蛋白
的总称,包括白蛋白和球蛋白,。
2.白蛋白(ALB) 40-50 g/L,为血液中的主要蛋白
质由肝脏合成,白蛋白主要维持血浆渗透 压,代谢物质转运,供能作用。
3.球蛋白(GLO) 20-30 g/L,为血清中总蛋白减去
(4) 结合胆红素还有助于早期发现处于隐 性黄疸肝胆疾病。
2.尿胆红素和尿胆原测定
非结合胆红素为脂溶性非极性物质,不能 透过肾小球滤过膜,溶血性黄疸尿胆红素 为阴性;
结合胆红素是水溶性极性物质,可以通过 肾小球滤过膜从尿中排出,肝细胞性和梗 阻性黄疸尿胆红素为阳性。
尿胆原在溶血性黄疸和肝细胞性黄疸时浓 度升高。
白蛋白以外的蛋白质(TP-A=G),主要为免疫 球蛋白和补体,与机体的免疫状态有关。

生化检验实验室基本知识PPT医学课件

生化检验实验室基本知识PPT医学课件

三、生化检验项目
(二)急诊生化检验项目
急诊项目:指对临床危急、重症病人的诊断、 抢救和治疗有重要指导意义的检验项目。一 般要求从“标本采取”到“检验报告”发出 控制在2h内。如血气分析、肾功、电解质、 心功等
急 诊 项 目
危 急 值
常 规 项 目
检验项目
三、生化检验项目
(三)特殊项目 指标本采集技术高,或标本数量少,或含有
转动后,方可打开离心机盖,取出样品
(二)电解质分析仪
溶液中被测离子接触电极时 ,在离子选择电极基质的含 水层内发生离子迁移,迁移 离子的电荷改变存在电势, 使膜面间的电位发生变化, 在测量电极与参比电极间产 生一个电位差,测量电位差 大小可求得待测离子浓度
(三)血气分析仪
血气分析仪不仅能在几分钟 内检测出病人血液中的氧气、 二氧化碳等气体的含量和血 液酸碱度及相关指标的变化, 还能快速反映血液中钾、钠、 钙的含量,为危重病人抢救 中快速、准确的检测提供了 有利的保障。
2.饮食因素: 下降:Alb、铁、钾、总胆
3.药物因素: 4.溶血因素: 5.储存因素:
受饮食影响的项目
项目:GLU、TG、ALP、血酯、丙酮酸、乳酸、 BUN、UA、转氨酶等
原则:空腹6-12h后采血
受药物影响的项目
药物影响检验结果途径: 1.药物本身对检验方法的影响 2.药物代谢产物对检验方法的影响 3.药物对代谢器官功能的影响 原则:检验受某种药物影响的项目之前3天,
固定相具有离子交换性能。主要用于分离氨基酸、多肽、蛋 白质、核酸、同工酶等
高效液相层 分离能力强、测定灵敏度高、可室温下进行。主要用于分离
析法
蛋白质、核酸、氨基酸等
操作简单、快速、分离效率高,但必须针对某一分离对象, 亲和层析法 制备专一配基和寻求层析的稳定条件,应用范围受到限制。

实验报告示范 生化实验PPT技术文档

实验报告示范 生化实验PPT技术文档
其它实验步骤:DNA 切胶回收通过对核酸特异性吸附的树脂进行离心过 滤纯化;DNA 连接在 15°含 ATP 溶液里面,DNA 连接酶将两个酶切的 DNA 片段进行连接;质粒转化采用 CaCl2 方法进行。
2
【实验方法与步骤】: 2.1.1 菌株和质粒
大肠杆菌 JM109,BL21(DE3)为本实验室构建保存;pMD18-T、pMD19-T 载体 购于 TaKaRa 公司,表达载体 pET-DsbA 为本实验室构建保存。
2、质粒酶切:限制性内切酶能够识别短的 DNA 序列并在识别序列内或旁 侧特异性切割双链 DNA。对环状 DNA 有多少切口,就能产生多少个酶解片 段,因此鉴定酶切后的片段在电泳凝胶中的区带数,就可以推断酶切口的数 目,从片段的迁移率可以大致判断酶切片段大小的差别。如本次试验使用的 限制性内切酶为 BamHI 酶,识别的序列分别为 G↓GATCC(↓表示切割部位)。
6、6His-tag 融合蛋白的纯化:在外源基因表达载体相对应表达蛋白的 N 端或者 C 端添加 6 个组氨酸(即 6His-tag)实现融合表达。。金属鏊合层析, 又称固定化金属离子亲和层析(Immobilized metal ion affinity chromatography, IMAC)。该法将通过亚氨基二乙酸(IDA)等将金属离子 Ni2+鏊合在琼脂糖凝 胶上形成的一种亲和层析介质,利用 6His-tag 与金属离子 Ni2+能够发生特殊 的相互作用而较特异地吸附带有 6His-tag,吸附的 6His-tag 融合蛋白可以 用高浓度的咪唑竞争性洗脱下来,从而实现目标蛋白即带 6His-tag 的融合蛋 白与杂蛋白的分离。
深圳大学实验报告
课程名称:
分子医学综合实验 I

生化检验课件.ppt

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敏感的指标,其血清水平与冠心病发病率呈负相 关。急性心肌梗塞时,Apo-A 1 水平降低。Ⅱ 型糖尿病Apo-A 1 值常偏低,其心血管并发症 的发生率增高。脑血管病变,肾病综合征、肝衰 竭以及Apo-A 1 缺乏症时Apo-A 1 水平也降低。
二)载脂蛋白 B测定
[参考值] ELISA法:男为1.01±0.21g/L;女 为1.07±0.23g/L
血钾症,高于5.5mmol/L为高血钾症。
2、低血钾症见于: (1)摄取不足: (2)丢失过多: (3)葡萄糖与胰岛素同时使用,周期性麻痹
和碱中毒等,钾过多转入细胞内。
3、高血钾症见于: (1)摄入过多; (2)排泄困难; (3)细胞内钾大量释出; (4)细胞外液因失水或休克而浓缩,使血钾
[临床意义] 血清Apo-B水平升高与动脉粥样硬化、 冠心病发病呈正相关,Apo-B的上升较LDL-C和 CHO的上升对冠心病风险度的预测更有意义,此 外,家族性高胆固醇血症、对胰岛素有抵抗的Ⅱ 型糖尿病、胆汁淤积、肾病综合征和妊娠时, Apo-B也升高,Apo-B降低见于低β-脂蛋白血症、 Apo-B缺乏症、肝硬化。
[临床表现]
1、增高 见于动脉粥样硬化性心脏病、原发性高脂血症、 肥胖症、阻塞性黄疸、糖尿病、肾病综合征等。
2、降低 见于甲状腺功能减退、肾上腺功能减退及严重 肝衰竭。
二、血清脂蛋白检测
一 ) 脂蛋白电泳测定
[参考值]
电泳法:乳糜微粒( CM)为阴性,HDL为30%~40%, LDL为50%~60%,VLDL为13%~25%。
旁腺功能亢进症
(3)服用VitD过多 (4)骨病 (5)某些肿瘤:肾癌,肺癌,急性白血病等 (6)长期制动引起骨脱钙

第三节 生化试验.ppt

第三节 生化试验.ppt
3、结果观察与记录
呈现红色,为阳性,记+
若无红色出现,为阴性,记-
(四) 氰化钾试验
1.原理 氰化钾是细菌呼吸酶系统的抑制剂,
可与呼吸酶作用使酶失去活性,抑制细菌 的生长,但有的细菌在一定浓度的氰化钾 存在时仍能生长,以此鉴别细菌.
2、试验方法
取培养20~24h的营养肉汤培养液或菌 落1环,接种至对照培养基及氰化钾培养基 内,立即以橡胶塞塞紧,36±1 ℃培养24~ 48h,观察结果。
无菌苔生长,培养基斜面仍为绿色者, 为阴性,记-
(二) 丙二酸盐利用试验
1.原理: 某些细菌可以利用培养基中的丙二酸盐作为唯
一碳源,丙二酸盐被分解成碳酸钠,使培养基变为 碱性,培养基由草绿色变成蓝色,为阳性,以此鉴 别细菌。 2、试验方法
取待检菌新鲜纯培养物,接种于丙二酸钠培养 基上,于36±1 ℃培养48h,观察结果。 3、结果观察与记录 培养基由草绿色变成蓝色,为阳性,记+; 培养基无颜色变化,为阴性,记-
基中加入少量α-萘酚或肌酸,可加速此反应)
V-P试验葡萄糖源自丙酮酸脱酸乙酰甲基甲醇
V-P试剂
二乙酰
培养基变红
3、结果观察与记录 (1)发酵管出现红色者,为阳性,
记V-P + (2)发酵管为黄色或铜绿色者,为阴性,
记 V-P -
(三)甲基红试验(MR)
1、原理 细菌分解葡萄糖产生丙酮酸后,由于代谢的途径 不同,有的细菌(如大肠杆菌)可使丙酮酸转化 生成甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等大量酸性产物, 使培养基PH值下降至pH4.5以下,使甲基红指示 剂变红色,为甲基红试验阳性 ;有的细菌(产气 肠杆菌)使丙酮酸脱羧后形成醇、醛、酮等中性 产物,培养液pH>5.4,甲基红指示剂呈桔黄色, 为甲基红试验阴性。
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生物化学实验报告
姓名:王泽鑫
学号: 3130060024
专业年级: 2013级中药学
组别:第三实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称氨基酸的薄层层析
实验日期2014-12-6 实验地点第三实验室
合作者谢俊伟指导老师冀开元
评分91 教师签名冀开元批改日期2015/1/12
一、实验目的
•掌握薄层层析法的一般原理。

•掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。

•掌握如何根据移动速率(R f值)来鉴定被分离的物质(即氨基酸混合液)。

二、实验原理
1.薄层层析法是色谱分析技术的一种。

硅胶吸附薄层层析是使用层析用硅胶作为吸附剂,它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基(-Si-OH),这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附. 2.氨基酸与茚三酮的显色反应
茚三酮水化后生成水化茚三酮,它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨及醛,与此同时,还原茚三酮又与氨及茚三酮缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。

3.混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率—R f值来表示。

值。

层析中,物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为R
f 由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的,故移动速率(R f值)也是恒定的,因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。

三、材料与方法:以流程图示意
材料:①层析板、尺子、铅笔、烧杯、玻棒、量筒、吹风机、毛细管、层析缸、药匙、烘箱
②甘氨酸溶液、丙氨酸溶液、精氨酸溶液、混合氨基酸溶液、0.5%羟甲基纤维
素钠、硅胶、展开-显色剂
方法:
四、结果与讨论:①结果:实验数据、现象、图谱;②讨论:以结果为基础的逻辑推论,并得出结论。

①结果:
实验数据(单位cm):
样品斑点-原点溶剂前缘-原点 Rf值
Arg 2.70 5.30 0.509
Gly 1.50 5.30 0.283
Ala 2.30 5.30 0.434
混合液 1.50、2.40、2.80 5.30 0.283、0.452、0.528实验现象:
1.制备层析板,如图1:
2.点样如图2:
图1 3.层析如图3:
图3
4.显色如图4:
②讨论:
根据各显色点Rf值比较,可得下表:
显色点 Rf值对应氨基酸
丙氨酸0.509
精氨酸0.283
甘氨酸0.434
混合点1 0.283 精氨酸
混合点2 0.452 甘氨酸
混合点3 0.528 丙氨酸
在实验结果中,混合液出现三个显色点,分别对应精氨酸、甘氨酸、丙氨酸。

实验数据
可以看出混合液中三种氨基酸Rf值不等于实验测定值,其原因有:
①实验制备的层析板涂布不均匀,表面粘合剂有凹凸,导致层析时展开—显色剂在层析板展开不均匀,一定程度上影响实验数据的测定,造成实验误差;
②层析时间不足,展开不充分,可能导致结果有所偏差;
③实验过程存在认为误差,如距离测定取中心点有偏差、测量时尺子与层析板底边不垂直等造成实验误差,导致结果存在不一致性。

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