质粒的分子生物学与质粒载体
质粒的作用
质粒的作用质粒（Plasmid）是细菌及其他真核细胞的一种重要遗传物质，是一个小而圆形的DNA分子，独立于细胞核的DNA存在。
质粒具有自主复制的能力，能够在细菌或真核细胞中独立地复制和传递，起到了多种重要的生物学作用。
质粒的主要作用有以下几个方面：1. 基因的存储和传递：质粒可以携带和传递大量的外源基因，包括抗生素耐药基因、亮蓝G、绿色荧光蛋白等重要的基因。
通过将外源基因插入质粒中，可以将其导入目标细胞，实现基因的转染。
这对于基因工程、基因治疗等研究具有十分重要的意义。
2. 分子克隆：分子生物学研究中，质粒是最常用的载体。
通过质粒的复制特性，可以大量地扩增目标腺病，以满足后续实验操作的需要。
同时，质粒载体还可以通过目的基因重组、限制性内切酶消化和连接等方法实现目标基因的插入、替换和删除，为后续功能研究和基因表达提供了便利。
3. 细胞遗传工程：质粒可以在细胞内进行重组，将目标基因插入到质粒中，然后将质粒导入到目标细胞中，从而改变目标细胞的遗传特性。
例如，通过将外源基因插入质粒并导入细菌中，实现细菌的遗传改造，使其具备特殊功能，例如合成某种特殊物质、分解有毒物质等。
此外，质粒还可用于构建RNA干扰（RNAi）系统，用于基因沉默和功能分析。
4. 目标基因表达：质粒可以用于在宿主细胞中实现目标基因的表达。
通过将目标基因与适宜的启动子和调控元件连接，并将其插入到质粒中，再将质粒导入到宿主细胞内，目标基因就可以在宿主细胞内转录和翻译。
这为大规模生产重组蛋白、对基因的功能进行研究提供了有力的手段。
总之，质粒作为一种重要的遗传物质，在生物学研究和应用中具有极为广泛的应用价值。
通过质粒的存储和传递，可以实现基因的克隆、表达和改造，为疾病研究、基因治疗和农业生产等领域提供了重要的工具和平台。
质粒研究对于解析基因功能、探索生命奥秘和推动生物科技的发展具有重要的意义。
质粒载体名词解释
质粒载体名词解释
质粒载体是分子生物学中非常重要的一种实验工具。
它们制造了一种由DNA链组成的小环状结构，这种结构可以被用来储存和传输遗传物质。
这类单个元件称为“质粒”，它们是一种可以携带遗传物质的载体，以便转移到其他生物体中。
质粒载体可以在生物体内或外部制备，最常见的质粒载体类型包括重组DNA质粒、脱氧核糖核酸质粒和反转录质粒。
重组DNA质粒可以携带大量的DNA，是植物转基因的常用载体。
脱氧核糖核酸质粒和反转录质粒则可以把复杂的基因表达转换成活性的蛋白质，在细胞分裂、凋亡等过程中扮演重要角色。
质粒载体一般由三个部分组成：表达载体、质粒引物和抗性基因。
表达载体是携带转录组分子的大分子，质粒引物用来引导特定的DNA 片段，而抗性基因是防止质粒中的DNA被非特异性酶切的基因。
质粒载体的应用非常广泛，它们可以用来传输特定的DNA片段，影响基因表达，从而改变植物的外观、抵抗传染病等。
此外，质粒载体也可以用来制备特异性的抗原，用于诊断和治疗许多疾病，其中包括癌症、HIV等。
由于质粒载体的巨大潜力，现在全球科学家正在努力开发出更好的质粒载体，以帮助实现从植物转基因到药物新研发的宏伟目标。
通过不断改进分子技术，期望借助质粒载体能够研发出更多有效的药物和抗疾病的新型疫苗，从而提高人类的健康水平。
总之，质粒载体是一种重要的分子生物学实验工具，它可以携带
遗传物质并转移到其他生物体中，这样就能够产生新的基因表达，从而改变植物的外观和抵抗力。
由于质粒载体的多种功能，它已经成为实现植物转基因和新药研发的核心技术，未来仍将继续发挥重要作用。
质粒载体的知识点
质粒载体的知识点1. 什么是质粒载体？质粒载体是一种常见的DNA分子，在分子生物学研究中广泛应用。
它是一种环状的DNA分子，具有自主复制和传递的能力，能够携带外源DNA序列并在细胞内进行复制和表达。
2. 质粒载体的特点质粒载体具有以下几个特点：•自主复制能力：质粒载体可以独立于宿主细胞的染色体进行复制，从而实现外源DNA的复制。
•传递能力：质粒载体可以在细菌、酵母等微生物细胞中传递，从而实现外源DNA的表达。
•多样性：质粒载体种类繁多，可以根据实验需要选择不同的质粒载体来进行研究。
•多拷贝数：质粒载体通常具有多个拷贝数，使得外源DNA在细胞中得到高效复制和表达。
3. 质粒载体的结构质粒载体通常由以下几个部分组成：•起始子：负责启动质粒载体的复制过程。
•多个限制酶切位点：用于将外源DNA序列插入到质粒载体中。
•选择标记：帮助筛选携带质粒载体的细胞，例如抗生素抗性基因。
•表达元件：包括启动子、终止子和转录调控序列，用于控制外源DNA的表达水平。
4. 质粒载体的应用质粒载体在分子生物学研究中有广泛的应用，包括：•基因克隆：质粒载体可以用于将外源DNA序列引入到细胞中，从而克隆目标基因。
•基因表达：质粒载体可以用于外源基因的表达，从而研究其功能和调控机制。
•基因敲除：质粒载体可以用于引入RNA干扰或基因敲除工具，从而研究基因的功能。
•疫苗研究：质粒载体可以用于构建疫苗候选物，进行疫苗研究和疫苗开发。
5. 质粒载体构建的步骤质粒载体的构建通常包括以下步骤：1.选择质粒载体：根据实验需求选择合适的质粒载体，包括质粒大小、拷贝数和选择标记等因素。
2.线性化质粒载体：使用适当的限制酶切酶将质粒载体线性化，以便后续插入外源DNA序列。
3.插入外源DNA：将目标DNA序列与线性化质粒载体连接，并使用DNA连接酶进行连接反应。
4.转化宿主细胞：将质粒载体导入宿主细胞中，可以使用化学方法或电穿孔等技术实现质粒转化。
5.筛选正品系：根据质粒载体携带的选择标记进行筛选，例如使用抗生素选择培养基筛选带有抗生素抗性的细胞。
质粒分子生物学与质粒技术
图1-10 F质粒接合转移区的结构（66.6-100 kb区） 质粒接合转移区的结构（66. kb区
traA：性菌毛亚基； traA：性菌毛亚基； traS和traT：表面排斥； traS和traT：表面排斥； traY：缺口酶； traY：缺口酶； traN和traG：杂交对稳定； traN和traG：杂交对稳定； traM：转移信号； traM：转移信号； traI：DNA解旋酶 traI：DNA解旋酶； 解旋酶；
traD：驱动单链DNA转移 traJ、finO、finP： traD：驱动单链DNA转移；traJ、finO、finP：调节基因 转移；
3.2 细菌染色体的诱动
细菌的染色体与质粒的转移原点oriT序列共 细菌的染色体与质粒的转移原点oriT序列共 价连接， 染色体作为质粒DNA 的延伸部分被转 价连接 ， 染色体作为质粒 DNA的延伸部分被转 移 。 可以利用这一功能定位染色体基因 ， 以及 可以利用这一功能定位染色体基因， 获得含有染色体片段的质粒。 获得含有染色体片段的质粒。
毒力基因（22）：virA, virB1B2B3B4B5B6B7B8B9B10B11, virC1C2, 毒力基因（22）：virA, virB1B2B3B4B5B6B7B8B9B10B11, virC1C2, virD1D2D3D4, virE1E2, virG, virD1D2D3D4, virE1E2, virG, virH T-DNA基因（16）：tms1, tms2, tmr, nos, acs(2), e, 5, 6a, 6b, 21-h, DNA基因（16）：tms1, tms2, tmr, nos, acs(2), 6a, 6b, 21rolBrolB-h, 5-h, IS ORF(2), tiorf174 ORF(2), tiorf174 复制基因（3）：repA, reB, 复制基因（3）：repA, reB, repC 接合基因（20）：traCDG, traAFB, traM, traR, traI, 接合基因（20）：traCDG, traAFB, traM, traR, traI, trbBCDEJKLFGHI 其它基因（50）；未鉴定的ORF（84） 其它基因（50）；未鉴定的ORF（84） 引自：K. 引自：K. Suzuki et al. / Gene 242 (2000) 331-336 331-
现代微生物遗传学-第三章质粒课件
质粒在生物能源开发中的应用
要点一
总结词
要点二
详细描述
质粒在生物能源开发中具有重要作用，可以用于构建高效 生物燃料生产菌株。
质粒可以携带与生物燃料生产相关的基因，将其转移至微 生物中，从而构建出能够高效生产生物燃料的菌株。例如 ，可以利用质粒将油脂合成酶基因转移至酵母菌中，构建 出能够高效生产生物柴油的菌株。此外，质粒还可以用于 提高微生物对光能的利用率，从而构建出能够高效生产太 阳能的微生物。因此，质粒在生物能源开发中具有重要作 用。
详细描述
20世纪60年代，科学家们开始对质粒进行更深入的研究，探索其复制机制和遗传特性。他们发现质粒可以在细菌 细胞内独立于染色体复制，并且可以在不同细菌之间转移和遗传。这些发现为后来的基因工程和分子生物学研究 奠定了基础。
质粒的遗传学研究
总结词
质粒的遗传学研究涉及到多个方面，包括质粒的复制、转录、表达以及质粒与宿主细胞 的相互关系等。
代谢能力
质粒携带的基因可以影响细菌的 代谢能力，帮助细菌在特定环境 下生存和繁殖。
质粒与细菌的进化
基因水平转移
质粒是细菌间基因水平转移的主要载体，有 助于细菌获得新的遗传物质和进化。
协同进化
质粒上的基因与其他细菌基因协同进化，形成复杂 的基因网络，影响细菌的进化方向。
适应性进化
质粒携带的基因可以促进细菌的适应性进化 ，使其更好地适应不断变化的环境。
终止子的作用
终止子是一个特殊的DNA序列，它能够终止复制子的复 制，确保质粒的复制不会无限进行下去。
质粒的复制
复制的起始
复制的调控
质粒的复制起始于复制起始位点，该 位点通常是一个特定的DNA序列，能 够被质粒编码的复制蛋白识别并与之 结合。
质粒的分子生物学与质粒载体
质粒的分⼦⽣物学与质粒载体第三章质粒的分⼦⽣物学与质粒载体⼀、填空题1．基因⼯程中有3种主要类型的载体：——-------、------------⼀、-----------.2.由于不同构型的DNA插⼊EB的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同，SC DNA的泳动速度—----------—，OC DNA泳动速度—---------—，L DNA居中，通过凝胶电泳和EB染⾊的⽅法可将不同构型的DNA分别开来。
3.质粒的复制像染⾊体的复制⼀样，是从特定的起始点区开始的。
然⽽，质粒的复制可以是—---—向的、或是—----—向的。
在杂种质粒中，每个复制⼦的起点都可以有效地加以使⽤。
但是在正常条件下只有⼀个起点可能居⽀配地位。
并认为：当某些具有低拷贝数的严紧型质粒与松弛性质粒融合后，在正常情况下—------—的复制起点可能被苯闭。
4.就克隆⼀个基因(DNA⽚段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：—-----—、—---------—、—----------------—。
另外，⼀个理想的质粒载体必须具有低分⼦量。
5.如果两个质粒不能稳定地共存于同⼀个寄主细胞中，则属于—---------—群，这是因为它们的——————————所致。
6.质粒拷贝数是指细胞中—------------------------—。
7.复制⼦由三部分组成：(1)—-----------------—---(2)——-----------————(3)—--------------—。
8.酵母的2µm质粒有------------，可以配对形成哑铃结构。
9.⼀个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养⼀段时间后，⼀部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫----------------。
10.pBR322是⼀种改造型的质粒，它的复制⼦来源于----——，它的四环素抗性基因来⾃于—-----------—，它的氨苄青霉素抗性基因来⾃于—---------—。
质粒载体测序报告
质粒载体测序报告1. 引言质粒载体是一类广泛应用于分子生物学和基因工程研究的工具。
通过质粒载体，研究人员能够将外源基因导入到目标细胞中，实现基因的表达和功能分析。
质粒载体测序报告旨在对质粒载体进行全面的测序分析，以确定其序列信息，并评估其质量和适用性。
2. 实验流程质粒载体测序通常包括以下步骤：1.质粒提取：将质粒提取出来，通常采用离心、酚-氯仿提取或商用提取试剂盒等方法。
2.质粒纯化：通过离心、凝胶电泳等方法，将质粒与其他细胞成分分离。
3.质粒测序文库制备：将质粒线性化并连接适当的测序引物，反应后通过PCR扩增文库。
4.高通量测序：将质粒文库装入Illumina或其他测序平台中进行高通量测序。
5.数据分析：对测序数据进行质量控制、序列拼接和序列注释等分析。
3. 数据质量控制在质粒载体测序过程中，数据质量控制是必不可少的一步。
常见的数据质量控制指标包括测序错误率、Q值分布和序列长度分布等。
通过对质量较低的序列进行滤除或修剪，可以提高后续数据分析的精确性和准确性。
4. 序列拼接与注释在质粒测序后，通常需要对产生的序列进行拼接和注释以获取准确的质粒序列信息。
序列拼接主要通过比对软件如Bowtie、BLAST等将测序reads 结合在一起。
而序列注释则是通过比对测序 reads 到已知的数据库，如GenBank、NCBI等，以获得质粒中的潜在功能元件。
5. 结果和讨论通过对质粒载体测序的实验和数据分析，我们得到了以下结果：1.质粒载体序列：经过拼接和注释，我们获得了质粒载体的完整序列，长度为XXX bp。
2.质量评估：通过数据质量控制，我们对测序数据进行了过滤和修剪，确保了序列的准确性和可靠性。
3.序列注释：通过将测序 reads 比对到已知基因库，我们对质粒中的潜在功能元件进行了注释，包括启动子、终止子、转录因子结合位点等。
4.比对结果：我们将质粒序列与已知质粒库进行了比对，发现该质粒与已知质粒高度相似，符合预期。
基因工程载体--质粒
• F因子是雄性决定因子，F+细胞表面可以形 因子是雄性决定因子， 因子是雄性决定因子 成一种叫做性须（pilus）的结果，它促使 成一种叫做性须（ ） 的结果， 经性须进入F 细胞。 细胞则变为F 细胞。 F+经性须进入 -细胞。F-细胞则变为 +细胞。 F因子可以通过接合作用自我转移，也能够 因子可以通过接合作用自我转移， 因子可以通过接合作用自我转移 带动寄主染色体一道转移。 F因子的这种 带动寄主染色体一道转移。但F因子的这种 整合过程是可逆的。在一定条件下， 细 整合过程是可逆的。在一定条件下，Hfr细 胞又可重新变为F+或F-细胞。 胞又可重新变为 细胞。 • 基因工程多选用非接合型质粒，主要安全 基因工程多选用非接合型质粒， 角度考虑
大肠杆菌质粒分子的结构示意图
环形质粒分子 环形质粒分子
环形染色体DNA 环形染色体DNA
大肠杆菌细胞 抗菌素抗性基因
质粒DNA 质粒
控制质粒DNA转移的基因 控制质粒DNA转移的基因 质粒DNA
质粒主要包括几个组成部分
• • • • • 复制子（ 复制子（reilcator） ） 复制起始位点(replication origin site) 复制起始位点 多克隆位点（ 多克隆位点（Polylink）(MCS) ） 辅助序列(COS位点等 位点等) 辅助序列 位点等 选择标记(LacZ,抗性等 抗性等) 选择标记 抗性等
基 因 工 程 载体
南 京 农 业 大 学
陈 溥 言
概
述
基因工程是利用酶学方法将不同来源的 DNA或cDNA，在体外切割、修饰、连接插 或 ，在体外切割、修饰、 入到不同目的的基因工程载体中，进行扩 入到不同目的的基因工程载体中， 增和表达，研究基因结构和功能， 增和表达，研究基因结构和功能，基因和 蛋白质关系的一种分子生物学技术。 蛋白质关系的一种分子生物学技术。
构建质粒的步骤
构建质粒的步骤构建质粒是一种重要的实验技术，用于在细菌或其他生物体中携带和复制外源DNA。
下面将介绍构建质粒的步骤。
1. 选择质粒载体：首先需要选择适合的质粒载体。
质粒载体是一种环状DNA分子，可以自主复制并在宿主细胞中表达外源基因。
常用的质粒载体有pUC18、pBR322等。
选择适合的质粒载体需要考虑载体大小、复制起点、抗生素抗性基因等因素。
2. 获得外源DNA片段：外源DNA片段可以是来自其他生物体的DNA序列，也可以是人工合成的。
获得外源DNA片段的方法有PCR扩增、限制性内切酶切割等。
3. 切割质粒和外源DNA：使用限制性内切酶将质粒和外源DNA切割成互补的黏性末端。
确保切割后的DNA末端与质粒载体互补，以便进行连接。
4. 连接质粒和外源DNA：通过DNA连接酶将切割后的质粒和外源DNA连接起来，形成重组质粒。
连接时需要考虑连接缓冲液的条件和酶的适宜温度。
5. 转化宿主细胞：将重组质粒导入宿主细胞中，使其能够复制和表达外源基因。
常用的转化方法有热激转化、电击转化等。
转化后，需要在含有抗生素的培养基上筛选出含有质粒的转化子。
6. 确认质粒的构建：通过PCR扩增、限制性内切酶切割或测序等方法，确认质粒是否成功构建，并验证外源基因是否正确插入。
7. 大规模培养质粒：如果质粒构建成功，可以进行大规模培养，以获得足够的质粒量。
培养条件需要根据质粒载体的特性进行调整。
8. 提取质粒：使用质粒提取试剂盒等方法，从大规模培养的细菌中提取质粒。
提取的质粒可以用于进一步的实验研究或应用。
通过以上步骤，就可以成功构建质粒。
构建质粒是分子生物学研究中常用的技术手段，可以用于基因克隆、基因表达、基因敲除等研究中。
同时，构建质粒也是基因工程和生物工程的重要基础。
p19质粒作用
p19质粒作用P19质粒是一种常见的质粒载体，在分子生物学研究中起着重要的作用。
它具有多个特点，包括方便携带外源基因、易于复制、易于筛选和稳定传递等。
本文将重点介绍P19质粒的结构和功能，以及其在基因工程和遗传转化领域的应用。
让我们来了解一下P19质粒的结构。
P19质粒通常由DNA分子组成，具有环状结构。
它包含了多个重要的区域，例如起始子、多克隆位点、选择标记和复制起始位点等。
这些区域共同协作，使P19质粒能够在细胞中进行复制和表达。
P19质粒的功能主要体现在基因工程和遗传转化领域。
首先，P19质粒可以作为外源基因的载体，将目标基因插入到多克隆位点中。
这样一来，我们就可以通过转化技术将P19质粒引入宿主细胞中，使目标基因在细胞中得以表达。
这为我们研究基因的功能、调控机制以及产生重组蛋白等提供了便利。
P19质粒还具有易于复制和筛选的特点。
由于P19质粒在细胞中可以自主复制，我们可以通过大量复制P19质粒来扩大目标基因的拷贝数。
这对于需要大量表达目标基因的实验和应用非常重要。
同时，P19质粒通常含有选择标记，例如抗生素抗性基因。
通过引入这些选择标记，我们可以通过筛选培养基来筛选出携带目标基因的细胞，从而实现对目标基因的选择和纯化。
在基因工程和遗传转化领域，P19质粒有着广泛的应用。
首先，它可以用于基因克隆和表达。
通过将目标基因插入到P19质粒中，我们可以实现对目标基因的表达和功能研究。
其次，P19质粒还可以用于基因敲除和基因敲入。
通过引入特定的DNA片段，我们可以在细胞中实现对目标基因的删除或添加，从而研究目标基因在生物体中的作用。
此外，P19质粒还可以用于制备重组蛋白和基因治疗等领域。
P19质粒作为一种常见的质粒载体，在分子生物学研究中发挥着重要的作用。
它具有方便携带外源基因、易于复制、易于筛选和稳定传递等特点，广泛应用于基因工程和遗传转化领域。
通过对P19质粒结构和功能的了解，我们可以更好地利用它进行基因研究和应用开发。
质粒名词解释
质粒名词解释概述质粒（Plasmid）是存在于细菌与酵母等真核生物细胞内的一类环状DNA分子，具有自主复制的能力。
质粒广泛存在于自然界的细菌中，并被广泛应用于分子生物学研究、基因工程等领域。
本文将为您详细介绍质粒的定义、功能和分类。
定义质粒是存在于细胞质中的一种环状DNA分子。
与细胞核中的染色体不同，质粒并不参与细胞的有丝分裂或减数分裂过程，可以独立复制和传递给子细胞。
质粒一般具有天然存在的功能基因，例如：抗生素抗性基因、代谢途径基因等。
同时，质粒还可以承载外源DNA片段，例如：目的基因、荧光蛋白等。
质粒的复制和传递机制使得它成为基因工程和分子生物学研究中常用的实验工具。
功能质粒作为一种载体，具备多种功能：1.自主复制：质粒具有自主复制的能力，在细胞分裂时可以独立复制，并通过纺锤体传递到子细胞中。
这种自主复制的能力使得质粒可以在宿主细胞中稳定存在。
2.基因转移：质粒可以携带外源DNA片段，如目的基因，以及荧光蛋白等，通过转化作用将这些片段导入到宿主细胞中。
这种基因转移的能力使得质粒成为基因工程中的常用工具，可以用于基因的克隆、表达和转基因研究等领域。
3.抗性传递：质粒上常携带抗生素抗性基因，通过这些基因的转移，质粒可以传递抗性给宿主细胞，使其对抗生素具有抵抗能力。
这种抗性传递的能力使得质粒在抗生素筛选和抗性基因研究中发挥重要作用。
分类根据不同的特征和功能，质粒可以分为多个不同的类别：1.F质粒：F质粒是一种广泛存在于大肠杆菌中的质粒，它具有供拟南芥或其他真核生物进行基因转移的能力。
F质粒主要通过细胞接触（接触性转化）或者泵（泵浦性转化）来实现基因传递。
2.R质粒：R质粒是抗生素抗性质粒的一类，经常携带抗生素抗性基因，例如β-内酰胺类抗生素等。
R质粒可以通过水平基因转移的方式将抗生素抗性基因传递给其他细菌，从而使宿主细菌对抗生素具有抵抗能力。
3.载体质粒：载体质粒是常用于基因工程中的一类质粒。
载体质粒具备适当的启动子、选择性标记物和多个限制性内切酶切位点，可以方便地进行基因的克隆、表达和转基因操作。
质粒载体种类
质粒载体种类质粒载体是分子生物学实验中常用的工具，用于在细胞中携带外源DNA序列，并实现其在细胞内的复制和表达。
根据其结构和功能的不同，质粒载体可以分为多种类型。
本文将介绍常见的几种质粒载体及其特点。
一、表达质粒载体表达质粒载体是常用的质粒载体类型之一，用于外源基因的表达。
其中，pUC18是常用的表达质粒载体，其大小为2686bp，含有多个重要的功能元件。
例如，pUC18包含了抗生素耐受基因，如AmpR基因，使得细菌能够在含有抗生素的培养基上生长。
此外，pUC18还包含了启动子、终止子和复制起始位点等重要序列，能够实现外源基因在细菌中的高效表达。
二、克隆质粒载体克隆质粒载体是用于基因克隆的质粒载体类型。
pBluescript II KS+是常用的克隆质粒载体，其大小为2960bp。
pBluescript II KS+含有多个克隆位点，如多克隆位点（MCS），能够方便地进行DNA片段的插入和克隆。
此外，pBluescript II KS+还包含了T7和T3启动子，使得插入的DNA片段能够通过转录和转录后修饰的方式进行进一步研究。
三、RNA干扰质粒载体RNA干扰质粒载体是用于RNA干扰实验的质粒载体类型。
pSUPER是常用的RNA干扰质粒载体，其大小为3144bp。
pSUPER含有特定的siRNA序列，能够通过RNA干扰技术抑制特定基因的表达。
此外，pSUPER还包含了启动子和选择性标记基因，使得转染细胞后能够通过选择性培养基筛选出抑制特定基因表达的细胞株。
四、双杂交质粒载体双杂交质粒载体是用于蛋白质相互作用研究的质粒载体类型。
pGBKT7和pGADT7是常用的双杂交质粒载体，分别用于检测靶蛋白的DNA结合活性和激活活性。
pGBKT7和pGADT7含有启动子、选择性标记基因和多克隆位点等重要元件，能够实现蛋白质相互作用的检测和分析。
五、表面显示质粒载体表面显示质粒载体是用于细胞表面展示外源蛋白的质粒载体类型。
质粒的四大特征
质粒的四大特征引言在分子生物学研究中，质粒是一种非染色体的环状双链DNA分子，存在于细菌和酵母等生物体内。
质粒具有独立自主复制、遗传、表达和传递等功能，因此在基因工程、转基因和基因治疗等领域具有广泛的应用。
质粒具有以下四大特征，本文将对其进行全面、详细、完整且深入地探讨。
1. 自主复制能力质粒具有独立自主复制的能力，不依赖于宿主细胞的DNA复制机制。
质粒复制通常包括以下几个关键步骤：1.1 质粒起始位点质粒复制起始位点是质粒DNA复制的起点，通常由一段特定的序列组成。
质粒起始位点的序列和结构决定了质粒的复制活性和效率。
1.2 DNA复制酶DNA复制酶是质粒复制的关键酶类，包括DNA聚合酶、DNA解旋酶、DNA连接酶等。
DNA聚合酶具有合成新的DNA链的能力，解旋酶协助解开DNA的双螺旋结构，连接酶负责连接新合成的DNA片段。
1.3 保持质粒的拷贝数质粒复制过程中需要保持一定的质粒拷贝数，以保证质粒的稳定性和可靠性。
这涉及质粒复制的调控机制，包括质粒自身携带的调控序列和宿主细胞中的调控因子。
2. 遗传性质粒具有遗传性，可以在细菌群体之间传递。
质粒的遗传功能包括以下几个方面：2.1 质粒载体质粒可以作为质粒载体，携带和传递外源DNA片段。
质粒载体通常包括启动子、选择标记基因、多克隆位点等功能元件，可用于重组DNA的克隆和表达。
2.2 转化过程质粒通过转化过程，在不同细菌中进行遗传传递。
转化是指细菌从外部环境中获取质粒DNA，并将其整合入自身染色体或作为外源DNA片段保留。
2.3 部分性传递质粒可以在细菌群体之间进行部分性传递，即仅传递质粒DNA的部分内容。
这种传递方式有助于质粒DNA在细菌群体中的传播和分化。
3. 表达能力质粒具有高效的基因表达能力，被广泛用于重组蛋白生产和基因治疗等领域。
质粒的表达功能涉及以下几个关键因素：3.1 表达载体质粒可以作为表达载体，携带和表达外源基因。
表达载体通常包括启动子、编码序列、终止子和选择表达标记等功能元件，可实现外源基因的高效表达。
质粒载体的概况及构建
特性
稳定性
质粒载体可以在宿主细胞内稳 定存在，不易丢失或发生突变
。
可复制性
质粒载体可以在宿主细胞内自 主复制，扩增DNA分子。
可选择性
质粒载体通常携带抗性基因， 可以通过抗生素筛选和富集。
可修饰性
质粒载体可以通过限制性酶切 和连接等分子生物学技术进行
修饰和改造。
质粒载体的应用领域
克隆技术
质粒载体是基因克隆和DN择
天然质粒载体
01
存在于生物体内的天然质粒，具有自我复制能力，可在宿主 细胞内稳定存在。
02
天然质粒通常具有抗生素抗性基因，可作为筛选标记基因。
03
天然质粒载体的复制能力有限，拷贝数较低，且容易丢失。
人工构建的质粒载体
通过基因工程技术人工构建的质粒载体，具有特 定的复制起始位点和筛选标记基因。
转化与筛选
转化
将连接产物导入受体细胞中，常用的受体细胞有细菌、酵母、动物细胞等。
筛选
通过抗性筛选、PCR鉴定等方法对转化子进行筛选，获得阳性克隆。
04
质粒载体的改造与
优化
启动子的优化
选择合适的启动子
启动子突变
根据基因的表达需求，选择合适的启 动子，如强启动子、弱启动子等。
通过突变启动子序列，改变其转录活 性，以实现基因表达的调控。
功能元件
选择含有合适功能元件的质粒载体，如启动 子、多克隆位点等，以满足实验需求。
稳定性
选择稳定性好、不易丢失的质粒载体，以确 保目的基因在宿主细胞内的稳定表达。
03
质粒载体的构建过
程
目的基因的获取与鉴的基因。
目的基因的鉴定
通过测序、限制性酶切、PCR扩 增等手段对目的基因进行鉴定， 确保其准确性。
质粒载体_精品文档
质粒载体引言质粒载体在基因工程和分子生物学研究中被广泛应用。
它们是由人工合成的DNA片段构建而成，可用于在细胞中传递、复制和表达外源基因。
质粒载体的研究为基因治疗、基因工程和生物技术的发展提供了重要的支撑。
本文将介绍质粒载体的定义、特点、常见类型以及其在科研和应用领域中的应用。
一、质粒载体的定义和特点质粒载体是一种可自主复制的环状DNA分子，它具有许多特点使其成为优秀的基因工程工具。
首先，质粒载体具有较高的稳定性，可以在宿主细胞中长时间保存。
其次，质粒载体可以携带较大的外源DNA片段，为基因操纵提供了更大的灵活性。
此外，质粒载体还具有选择标记，方便筛选和鉴定已转化的细胞。
二、常见类型的质粒载体目前，有许多种类的质粒载体可供科研人员选择使用。
其中包括表达质粒、克隆质粒、慢病毒质粒等。
表达质粒是最常见的一种质粒载体，用于在宿主细胞中表达外源基因。
克隆质粒则是用于合成、扩增和克隆基因或DNA片段。
慢病毒质粒是一种特殊类型的质粒载体，可用于稳定地传递外源基因到宿主细胞中。
三、质粒载体在科研中的应用质粒载体在科学研究中起着重要的作用。
首先，通过将外源基因插入质粒载体中，科研人员可以进行基因的合成、修饰和复制。
其次，质粒载体也被广泛用于表达外源基因以进行蛋白质的表达和功能研究。
此外，质粒载体还可以用于构建基因库、进行基因的定向突变以及筛选重组细胞等。
四、质粒载体在应用领域中的应用除了在科研中的应用，质粒载体还在许多应用领域中发挥着重要的作用。
在农业领域，质粒载体被用于转基因作物的研发，以提高作物的产量和抗病能力。
在医学领域，质粒载体则广泛应用于基因治疗和基因疫苗的研究，用于治疗多种疾病和预防感染性疾病的发生。
此外，质粒载体还可以用于工业发酵和环境修复等领域。
结论质粒载体作为一种强大的基因工程工具，在科研和应用领域中发挥着重要的作用。
通过插入外源基因到质粒载体中，我们可以实现基因的合成、表达和修饰。
质粒载体在农业、医学、工业和环境等领域都有广泛的应用，为许多领域的研究和发展提供了重要的支持。
分子生物学实验原理
分子生物学基本技术- -第一章质粒DNA的分离、纯化和鉴定第一节概述把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。
细菌质粒是重组DNA 技术中常用的载体。
质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。
质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。
质粒的复制和转录要依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质,如离开宿主细胞则不能存活,而宿主即使没有它们也可以正常存活。
质粒的存在使宿主具有一些额外的特性,如对抗生素的抗性等。
F质粒(又称F因子或性质粒)、R质粒(抗药性因子)和Col质粒(产大肠杆菌素因子)等都是常见的天然质粒。
质粒在细胞内的复制一般有两种类型:紧密控制型(Stringent control)和松驰控制型(Relaxed control)。
前者只在细胞周期的一定阶段进行复制,当染色体不复制时,它也不能复制,通常每个细胞内只含有1个或几个质粒分子,如F因子。
后者的质粒在整个细胞周期中随时可以复制,在每个细胞中有许多拷贝,一般在20个以上,如Col E1质粒。
在使用蛋白质合成抑制剂-氯霉素时,细胞内蛋白质合成、染色体DNA复制和细胞分裂均受到抑制,紧密型质粒复制停止,而松驰型质粒继续复制,质粒拷贝数可由原来20多个扩增至10 00-3000个,此时质粒DNA占总DNA的含量可由原来的2%增加至40-50%。
利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在,当两种质粒同时导入同一细胞时,它们在复制及随后分配到子细胞的过程中彼此竞争,在一些细胞中,一种质粒占优势,而在另一些细胞中另一种质粒却占上风。
当细胞生长几代后,占少数的质粒将会丢失,因而在细胞后代中只有两种质粒的一种,这种现象称质粒的不相容性(Incompatibility)。
关于质粒知识点归纳总结
关于质粒知识点归纳总结一、概念质粒是一种圆形的DNA分子，存在于细菌、酵母等原核生物中，可以独立自主地复制和传递。
质粒可以携带一些特定的基因，比如抗性基因、毒素基因等，这些基因能够赋予细菌特定的功能，比如抗生素抗性、毒素产生等。
因此，质粒在微生物研究中有着非常重要的应用价值。
二、结构质粒主要由以下几个部分组成：1. 原始身份元件（origin of replication，ori）：质粒复制的起点，通常为一段AT丰富的DNA序列；2. 多个限制酶切位点（restriction site）：用于在质粒上进行限制酶切割；3. 选择标记基因：一般为抗性基因，可以赋予细菌耐受抗生素的能力；4. 其他外源基因：可以是需求基因或者仪器对应基因；5. 转座子：一些质粒可能携带转座子，可以使质粒进行自身复制的过程中产生各种突变。
三、分类根据质粒在细胞内的复制方式，质粒可以分为两类：1. 自主复制质粒（autonomously replicating plasmid）：这类质粒能够在细胞内独立复制，并可以自主分离到子代细胞中；2. 集成质粒（integrative plasmid）：这类质粒不会自主复制，而是被整合到宿主细胞的染色体上，依赖于宿主细胞的复制和分裂。
四、应用1. 分子生物学研究：质粒构建是分子生物学研究中最为常见的实验手段之一。
通过质粒携带外源基因的特性，可以在细菌、酵母等原核生物中进行转基因实验，进而实现对特定基因的表达、敲除或打标等功能；2. 基因工程：质粒可用于基因工程的载体，可用于将外源基因导入到宿主细胞中，实现特定蛋白质、酶的大规模生产，或者用于治疗目的；3. 基因治疗：质粒可被设计为载体，将需要治疗的基因导入目标细胞中，实现基因修复、基因敲除等治疗效果；4. 疫苗研究：质粒可用于疫苗研究领域，将病原体相关基因携带于质粒中，引起宿主的免疫反应，从而实现对疾病的预防和控制；5. 遗传毒杀：利用质粒携带的杀虫基因、抗草酸素基因等，可以实现对农业害虫或者杂草的有效控制。
蛋白质序列构建质粒的方法
蛋白质序列构建质粒的方法蛋白质序列构建质粒是一种重要的分子生物学技术，在生物工程和基因工程领域得到广泛应用。
下面我将详细介绍蛋白质序列构建质粒的方法。
质粒是一种环状双链DNA分子，常见于细菌中，并且具有自主复制能力。
质粒构建是将感兴趣的蛋白质的编码序列插入到质粒DNA中的过程。
这样构建出的质粒可以被细菌或其他真核生物细胞摄取并进行表达，使得该蛋白质在细胞中大量产生。
蛋白质序列构建质粒的方法主要包括以下几个步骤：1. 选择合适的质粒载体：质粒载体是质粒构建的基础。
根据具体需求，可以选择适合的宿主细胞和质粒类型。
常用的质粒载体有pUC、pET等。
2. 扩增目标蛋白质基因：使用PCR或其他扩增方法，将目标蛋白质基因从其来源中扩增出来。
PCR反应需要设计适当的引物，其中一个引物需包含与目标质粒载体相对应的序列。
3. 限制性内切酶切割：购买适当的限制性内切酶，根据目标蛋白质基因和质粒载体的序列设计合适的酶切位点。
将扩增的目标基因和质粒载体经过双酶切，形成互补的粘性末端。
4. 连接反应：将切割后的目标蛋白质基因和质粒载体进行连接反应。
在此步骤中，需要使用DNA连接酶将两者进行连接，并生成一个新的DNA分子。
5. 转化：将连接后的质粒DNA转移到适当的宿主细胞中。
其中，常用的宿主细胞包括大肠杆菌（E. coli）等。
转化方法有化学转化、电转化等。
6. 识别和筛选：将转化后的细菌进行培养和筛选。
在培养基中加入适当的抗生素，只有带有质粒的细菌能够在该培养基中生存，通过抗生素的筛选，可以筛选出带有目标质粒的细菌。
7. 验证和纯化：对得到的带有目标质粒的细菌进行验证和纯化。
验证可以通过PCR或测序等方法进行。
纯化则可以使用柱层析等技术进行。
总之，蛋白质序列构建质粒是一项复杂而重要的分子生物学技术。
通过适当的实验设计和操作，可以高效地构建出带有目标蛋白质编码序列的质粒，为进一步的蛋白质表达和功能研究打下基础。
载体系统
2.2 噬菌体的生命周期
（1）溶菌生长周期噬菌体（烈性噬菌体）
（2）溶源生长周期噬菌体（温和噬菌体）
（1）烈性噬菌体的生活周期
E.coli T4噬菌体的生命周期（以分钟记）
噬菌体吸附到寄主菌的细胞壁，大约在吸附的2秒钟内 就会发生噬菌体DNA的注入； t=1 寄主DNA、RNA和蛋白质的合成反应被全部关闭； t=2 第一个噬菌体mRNA开始合成； t=3 细菌DNA开始降解； t=5 噬菌体DNA合成开始启动； t=9 “晚期”噬菌体mRNA开始合成； t=12 出现完整的头部和尾部结构； t=15 出现头一个完整的噬菌体颗粒； t=22 细菌发生溶菌作用，释放出约300个左右的噬菌体时粒 t=0
5 cosmid克隆载体
cosmid（cos site-carring plasmid） 人工构建的含有λDNA的cos （cohesive-end site)位点序列和质粒 复制子的特殊类型的质粒载体。
pHC79 6.4 kb
柯斯质粒载体pHC79的形体图
由pBR322质粒DNA与λ噬菌体DNA的cos位点及其控制 包装作用的序列构成
部分柯斯质粒的基本特性
柯斯质粒载体的特点：
（1）具有λ噬菌体的特性（但因不含λ噬菌体 的全部必需基因，因此不能通过溶菌周期， 无法形成子代噬菌体颗粒）；
（2）具有质粒的特性（有质粒复制子及抗菌 素基因）； （3）具有高容量的克隆能力（本身仅5-7kb, 克隆极限可达45kb左右）；
（4）具有与同源序列质粒粒载体
其它重要的质粒载体
改造过的质粒载体非常多
能 在 体 外 转 录 克 隆 基 因 的 质 粒 载 体
1.6 质粒载体的稳定性问题
（1）不稳定性类型
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第三章质粒的分子生物学与质粒载体一、填空题1．基因工程中有3种主要类型的载体：——-------、------------一、-----------.2.由于不同构型的DNA插入EB的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同，SC DNA的泳动速度—----------—，OC DNA泳动速度—---------—，L DNA居中，通过凝胶电泳和EB染色的方法可将不同构型的DNA分别开来。
3.质粒的复制像染色体的复制一样，是从特定的起始点区开始的。
然而，质粒的复制可以是—---—向的、或是—----—向的。
在杂种质粒中，每个复制子的起点都可以有效地加以使用。
但是在正常条件下只有一个起点可能居支配地位。
并认为：当某些具有低拷贝数的严紧型质粒与松弛性质粒融合后，在正常情况下—------—的复制起点可能被苯闭。
4.就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：—-----—、—---------—、—----------------—。
另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
5.如果两个质粒不能稳定地共存于同一个寄主细胞中，则属于—---------—群，这是因为它们的——————————所致。
6.质粒拷贝数是指细胞中—------------------------—。
7.复制子由三部分组成：(1)—-----------------—---(2)——-----------————(3)—--------------—。
8.酵母的2μm质粒有------------，可以配对形成哑铃结构。
9.一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫----------------。
10.pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于----——，它的四环素抗性基因来自于—-----------—，它的氨苄青霉素抗性基因来自于—---------—。
11.质粒的消失同染色体基因的突变是不同的，前者不能恢复，后者可以通过—------—恢复该基因的性状。
12.ColEl质粒复制的起始需要三种酶，即—-----------—、一------------和一------。
13．YAC的最大容载能力是—-----------—，BAC载体的最大容载能力是—---------—。
14．pSCl01是一种---------——复制的质粒。
15．把那些没有可检测表型的质粒称为—--------------—。
16．转座子主要由下列部分组成：(1)—-----————————(2)---------------——(3)—----------------—。
17．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。
pUC系列的载体是通过——---------和——两种质粒改造而来。
它的复制子来自—----------—，Amp抗性基因则是来自—--------—。
18．在基因型的表示中，符号Ω表示—-----------—；符号△表示—--------------—。
二、判断题1．迄今发现的质粒DNA都是环状的。
2．线性质粒同环状质粒一样都不带有宿主必需的基因。
3．有a、b、c三个质粒，因为a和b能够共存于一个细胞，a和c也可共存于同一个细胞，所以b和c一定能够共存于同一个细胞。
4．插入元件(1S)也是一种转座元件，它除了有转座酶基因外，还有附加基因。
5．如果两个不同的质粒可以稳定地共存于同一个细胞中，这两种质粒则属于同一个不亲和群。
6．一个带有反向重复序列的双链DNA经变性后，复性时其单链可形成发夹环。
7．能够在不同的宿主细胞中复制的质粒叫穿梭质粒。
8．任何一种质粒都可以用氯霉素扩增的方法，增加它的拷贝数。
9．只有完整的复制子才能进行独立复制，一个失去了复制起点的复制子不能进行独立复制。
10．CsCl-EB密度梯度离心法纯化SC DNA原理是根据EB可以较多地插入到SC DNA中，因而沉降速度较快。
11．质粒ColEl同pSCl01共整合后，得到重组质粒pSCl34，具有两个复制起点，这两个起点在任何细胞中都是可以使用的。
12．pBR322可以用于黏性末端连接、平末端连接和同聚物接尾法连接，无论用哪种方法连接，都可以用同一种酶回收外源片段。
13．所谓穿梭质粒载体是能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒，所用的复制起点不同。
14．一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。
15．ColEl是惟一用作基因工程的自然质粒载体，它具有四环素抗性标记，因而很容易选择。
16．某一染色体DNA经内切酶Sal I切割后，产生了若干个具有黏性末端的DNA片段，将这些片段分别在T4 DNA连接酶的作用下自身连接成环，然后导人受体细胞，都可以进行独立地复制。
17．如果细菌的某种表型特征在UV处理下丧失后不再恢复，这种表型有可能是质粒赋予的。
18．基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。
三、选择题(单选或多选)1．线性质粒复制的引物来自于( )(a)细胞中合成的小分子RNA(b)自身末端的端粒序列(c)外加的寡聚DNA(d)自身断裂的小分子DNA2．下面关于松弛型质粒(relaxedplasmid)性质的描述中，( )是不正确的(a)质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约，因而有较多的拷贝数(b)可以在氯霉素作用下进行扩增(c)通常带有抗药性标记(d)同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子3．基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载体中只有( )被视为用作基因工程载体的天然质粒载体(a)pBR322 (b)pSCl01(c)pUBll0 (d)pUCl84．下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?( )(a)质粒(b)黏粒(c)酵母人工染色体(YAC)(d)λ噬菌体(e)cDNA表达载体5．反向重复序列：( )(a)可以回折形成发夹结构 (b)可以是某些蛋白的结合位点(c)参与转座子的转座 (d)12 1-说法都不对6．松弛型质粒： ( )(a)在寄主细胞中拷贝数较多 (b)可用氯霉素扩增(c)一般没有选择标记 (d)上述(a)、(b)两项正确7． ColEl是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒： ( )(a)是松弛复制型 (b)具有四环素抗性(c)能被氯霉素扩增 (d)能产生肠杆菌素8．同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：( )(a)OC DNA>SC DNP>LDNA (b)SC DNA>L DNA>OC DNA(c)L DNA>OC DNA>SC DNA (d)SC DNA>OC DNA>L DNA9． pBR322是一种改造型的质粒，含有两个抗性基因，其中四环素抗性基因来自：( )(a) ColEl (b)Ri质粒 (c)pSCl01 (d)pUCl810．关于质粒的相容性，下面哪一种说法不正确? ( )(a)不同相容群的质粒能够共存于同一个细胞(b)质粒可以分成若干个不相容群，但不能分成若干个相容群(c)如果a、b两种质粒不相容，说明它们的复制机制相同(d)属于同一个不相容群中的质粒，不仅复制机制相同，而且拷贝数和分子量也相同11．关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确?( )(a)在不同的宿主中具有不同的复制机制(b)在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点(c)在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶(d)在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率12．能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是( )(a)charomid (b)plasmid (c)cosmid (d)phagemid13．第一个作为重组DNA载体的质粒是( )(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl814．Ti质粒：( )(a)可从农杆菌转到植物细胞中(b)作为双链DNA被转移(c)在植物中导致肿瘤(d)介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素(e)需要细菌的vir基因帮助转移(f)在植物细胞中作为染色体外质粒四、简答题1． YAC载体具有什么样的功能性DNA序列?为什么在克隆大片段时，YAC具有优越性？2．列举质粒载体必须具备的4个基本特性。
3．什么叫穿梭载体?4．说明减少质粒和噬菌体载体上某种酶的识别位点的方法和原理。
5．虽然质粒的带动转移给质粒载体的安全性带来一定的困难，但是通过带动转移将质粒转移到特定的受体菌中也是基因工程中常用的实验技术。
请举一例说明之。
6．为什么来自HfrⅹF-的重组体几乎总是F-?7．解释为什么不同的Hfr菌株具有不同的转移起点和方向?8．怎样从一个E．coli的Hfr菌株中分离到一个F′gal+的菌株?9．你已经分离了一个新的F因子，怎样用最简便的方法知道最初的F因子的部分DNA已经被切除，并被一个外源DNA(也就是细菌DNA)所替代?10．你能用哪一种基因转移的方法确定(1)Kcoli染色体上一个新发现的基因座在其染色体上的位置；(2)一个新分离的突变在基因内的位置。
11．用加有注释的图表说明F质粒是怎样从一个P细胞转移到F细胞。
并简要说明转移复制如何不同于营养体的复制。
五、问答题1．什么是复制子(replicon)?2．什么是质粒的相容性?什么是不相容群?机制是什么?3．什么是质粒的带动转移?4．说明变性定位法和限制性内切核酸酶定位法研究质粒复制起点的原理。
5． ColEl衍生质粒拷贝数调节机理的机理是什么?6． R1质粒拷贝数受到怎样的调节控制?7．质粒如何维持在细胞中的稳定?8. 引起质粒不相容性的主要原因是什么?9．由于基因工程是人为改变遗传信息的操作，因此必须注意被操作基因的安全，进行严格的监控，质粒载体的安全性是十分重要的。
请问质粒载体的安全条件包括哪几个方面?10．请指出质粒pSCl01的一些生物学特性(包括结构和遗传)及在基因工程中的作用。
11．自然界中具备理想条件的质粒载体为数不多，即使是ColEl和pSCl01这两个自然质粒也不尽人意，通常需要进行改造，请问质粒改造包括哪些基本内容?12．质粒改造的发展过程如何?13．在质粒中如何增减酶切点?14．有人用限制性内切核酸酶EcoRl分别切割松弛型质粒ColEl和严紧型质粒pSCl01(各有一个切点)，然后重组连接形成一个杂种质粒pSCl34，请推测这种质粒有什么特性和用途。
15．现分离了4种新的大肠杆菌Hfr菌株，通过中断接合实验，针对每一菌株确定了高频转移的标记基因和它们进入F受体的时间分别为：Hfrl Hfr2 Hfr3 Hfr4man 13min mal 29 lys 16 pur 6标记基因和第一 trp 6 met 14 arg 9 trp 3次进入的时间 his 23 thr 4 mal 2 thr 31pur 3 uvr 20 his 32 lac 23gal 14(gal、lac、mal、man不能发酵半乳糖、乳糖、麦芽糖和甘露糖；arg、his、met、trp：生长需要精氨酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、嘌呤和色氨酸；uvr：紫外线敏感)。