甲钴胺片含量测定方法学研究

甲钴胺片的含量测定检测方法研究

徐丽平徐慧娟杭州康恩贝制药有限公司

摘要目的：建立甲钴胺片含量测定方法，为甲钴胺片质量标准相关检测项目提供检测方法和实验依据。方法：样品碾细，以流动相溶解，制备供试品溶液；色谱分析条件：色谱柱为Diamonsil 5u C18，250×4.6mm；流动相：乙腈-0.03mol/L 磷酸二氢钠（磷酸调pH为3.5）（19:81）；流速1.0ml/min；检测波长：342nm。结果：甲钴胺线性关系良好，平均回收率100.7%。结论：本法测定结果准确，可用于甲钴胺的含量测定。

关键词：甲钴胺，高效液相色谱法

甲钴胺片活性成分甲钴胺，主要用于治疗周围神经病。由于甲钴胺对光敏感，故需包衣，包衣材料成分复杂，干扰大，现有的紫外分光光度法重现性差。本实验采用HPLC法测定甲钴胺的含量，结果准确，复现性好。

1 仪器及试药

高效液相色谱仪：安捷伦1100，VWD检测器，？？工作站；电子天平：？2100；超声波清洗器。

甲钴胺对照品，浙江省药品检验所标定，批号：？，含量：？；乙腈为色谱纯，磷酸二氢钠为分析纯；甲钴胺片为本公司生产，规格0.5mg。

2 色谱条件

色谱柱：Diamonsil 5u C18（250×4.6mm）；流动相：乙腈-0.03mol/L磷酸二氢钠（磷酸调pH为3.5）（19:81）；流速1.0ml/min；检测波长：342nm；柱温：常温；进样量：20μl。理论塔板数按甲钴胺峰计算不低于2000，甲钴胺与相邻杂质峰的分离度应符合要求。

3溶液的制备

3.1对照品溶液

3.2供试品溶液

3.3空白溶液

4系统适用性试验

取处方量的空白辅料，照含量测定法进行测定，空白辅料不干扰测定，结果见附图2-1（图谱：c:\HPCHEM\1\DATA\JGAFFX\00009）

5线性考察

精密称取甲钴胺对照品（050602，含量98.2%，水分8.31%）11.33mg，置于200ml容量瓶中，加含量测定项下的流动相溶解并定容至刻度，摇匀，得贮备液（相当于甲钴胺浓度为51.01μg/ml），再精密量取储备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml分别置于10ml容量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，照2.2项色谱条件，精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算回归方程，结果见表2-1，图2-1。

表2-1 溶出度测定标准曲线各浓度点峰面积

甲钴胺浓度

5.10 10.20 15.30 20.41 30.61 40.81 51.01

（μg/ml）

峰面积A 80.45 163.34 247.05 327.20 493.25 664.50

825.70

图2-1 含量测定测定标准曲线

回归方程：y=16.268x－2.8548，R2＝1.0000

由上述结果表明，甲钴胺在流动相中，在5.10～51.01μg/ml浓度范围内，峰面积与浓度成良好线性关系。

6精密度试验

取含量测定项下的供试品溶液，连续进样测定6次，结果见表2-3。

峰面积（A）221.4 221 221.5 221.6 221.8 222.2 X（A）221.6

SD（%）0.40

RSD（%）0.18

7重复性试验

取本品同一批号样品精密称取6份，照含量测定项下的方法进行测定，结果见表2-4。

序号 1 2 3 4 5 6 含量（%）98.16 98.25 98.13 98.31 98.46 98.60 X（%）98.32

SD（%）0.18

RSD（%）0.18

8稳定性试验

精密量取上述同一份供试品溶液20μl，分别在0，2，4，6，12，h测定面积，甲钴胺的RSD为？？，杂质峰面积与初始峰面积相比，差异比较大，？？

9回收率测定

精密称取甲钴胺（20071204，含量99.48%，水分11.1%）113.3mg，置50ml 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液；取处方量的辅料，按处方量主药的80％、100％、120％三个不同梯度分别加入储备液（约相当于甲钴胺16、20、24μg），照本品含量测定项下的方法测定计算回收率，每个梯度做三份，结果见表2-2。由表可知，含量测定方法回收率良好。

表2-2 含量测定回收率试验

浓度梯度加入量

（mg）

测得量

（mg）

回收率

（％）

平均回收

率（％）

RSD

（％）

80％1 1.60 1.61 100.69

100.52

0.36

2 1.60 1.61 100.44

3 1.60 1.61 100.44

100％ 1 2.00 2.01 100.18100.57

2 2.00 2.02 100.68

3 2.00 2.02 100.84

120％1 2.40 2.44 101.49

101.01

2 2.40 2.42 100.76

3 2.40 2.42 100.80

10样品测定

避光操作。取本品20片，精密称定，研细，混匀，精密称取适量（约相当于甲钴胺2.0mg），置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取甲钴胺对照品20mg（按干燥品计），精密称定，置100ml量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为对照品溶液，同法测定，计算，即得。三批样品的测定结果及与原标准测定结果见2-5。

表2-5 三批样品含量测定结果

批号20071001 20071101 20080901

拟修订标准检测标示含量

（%）

102.8 100.4 98.7

原标准检测标示含量（%）128.8 134.6 115.1（去衣

97.2）

11讨论参考文献