纯化层析系统介绍

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akta层析系统参数

AKTA层析系统参数1. 介绍AKTA层析系统是一种高效且可靠的分离技术，用于生物分子的层析纯化。

层析系统参数是指在使用AKTA层析系统时需要设定的一系列参数，包括流速、洗脱梯度、柱温等。

正确设置这些参数能够保证分离效果和纯化纯度。

在本文中，我们将详细探讨AKTA层析系统参数的选择和优化，帮助您合理使用该系统并取得最佳的分离效果。

2. 流速参数流速是指液相在层析柱中的通过速率。

流速参数的选择对于分离效果和纯化纯度有很大的影响。

2.1 比线速度比线速度是流速参数的常用表示方法，其定义为单位时间内液相通过层析柱截面积的体积。

一般来说，比线速度越大，分离效果越好，但可能会降低纯化纯度。

建议在初始实验阶段采用较低的比线速度，然后根据样品的性质和分离需求逐步调整。

2.2 线速度线速度是流速参数的另一种表示方法，其定义为单位时间内液相通过层析柱的线性距离。

线速度与比线速度之间存在线性关系，可以相互转换。

3. 洗脱梯度参数洗脱梯度是指在层析过程中逐渐改变洗脱缓冲液的成分，以实现分离目标。

洗脱梯度参数的选择对分离效果和纯化纯度起着至关重要的作用。

3.1 起始缓冲液起始缓冲液是指开始层析时的溶液组成。

一般来说，起始缓冲液的性质应与待纯化物质相似，以提高分离效果。

如果待纯化物质溶解在缓冲液中，可以选择与之相同或类似的缓冲溶液。

3.2 洗脱缓冲液洗脱缓冲液是指在层析过程中使用的溶液，通过改变洗脱缓冲液的成分来实现分离目标。

选择合适的洗脱缓冲液需要考虑待纯化物质的亲和性和纯化纯度要求。

3.3 洗脱梯度洗脱梯度是指在层析过程中逐渐改变洗脱缓冲液的组成。

一般来说，采用线性梯度或者非线性梯度都可以实现分离效果。

线性梯度容易操作，但纯化纯度可能相对较低；非线性梯度可以提高纯化纯度，但操作难度较大。

根据实验要求和待纯化物质的特性选择合适的洗脱梯度。

4. 柱温参数柱温是指在层析过程中控制的柱子温度。

柱温参数的选择对于柱子的稳定性和分离效果有一定影响。

蛋白层析纯化系统安全操作及保养规程

蛋白层析纯化系统安全操作及保养规程前言蛋白质分离和纯化是一项精细的工作，对实验室人员来说需要深入了解其原理和注意安全操作。

为了确保蛋白层析纯化系统的正常运行，及确保实验人员的人身安全，本文档总结了蛋白层析纯化系统的安全操作及保养规程。

安全操作规程1. 实验前的准备工作1.1. 实验人员应着实验服，并佩戴安全眼镜、口罩、手套等防护用品。

1.2. 实验前应通风良好，确保实验室内空气质量。

1.3. 检查蛋白层析纯化系统的设备和设施是否正常运行和连通。

2. 正确操作设备2.1. 启动设备和加样前，请务必阅读设备说明书，并认真学习使用方法。

2.2. 操作前先检查试剂/缓冲液是否准备好。

确保使用的试剂标签清晰、正确、未过期。

2.3. 操作前确定好方法和顺序，避免在操作过程中出现意外情况。

3. 防止污染3.1. 操作前要保证操作台面、工作区域干净整洁，避免杂物进入操作区域。

3.2. 加样前要注意纯水或乙醇等可能存在杂质的物质都需要通过0.22um过滤器进行过滤。

3.3. 空白样品管子和未经过冲洗的采样器不允许接触到试剂。

4. 废弃物的处理4.1. 废弃物要正确分类，分别放在不同的废弃桶中。

4.2. 废液需要配制30%酸性过氧化氢，进行彻底灭菌处理。

4.3. 废料收集桶要及时清理，每周定期清洗消毒，以防止交叉污染。

保养规程1. 设备的日常保养1.1. 在使用结束后，要及时进行清洗，保持设备及附件的卫生和清洁。

1.2. 清洁前需要先关闭电源，卸下或缓慢移开所有易受损附件，避免损坏设备。

1.3. 润滑油要定期加满或更换，日常维护保养工作应按照设备说明书的相关要求进行。

2. 设备的定期保养2.1. 定期进行器械的视觉和性能检查。

2.2. 普通型纯化系统每年至少进行一次全面维护，高端型纯化系统则需要每半年全面维护一次。

3. 设备的维修3.1. 如设备出现故障，请及时联系相关厂家进行修理。

3.2. 除非特别授权，在不进行维修的情况下，不得拆卸美国 Bio-Rad 实验室纯化系统。

纯化层析系统介绍

Sepax Instruments
客户比较关注的设备方面的问题
5.收集方面：我公司生产的SCG蛋白纯化系统收集方式分为两
种：阀收集和组分收集器收集。阀收集优点是收集体积较大，可自己设定收集体积，缺点是组份收集少。组分收集器收集具有以下优点：1. 支持多种收集方式；2. 配制多种收集架，方便样品转移（96孔板收集架，15m收集架，50ml收集架等）；3. 自动、手动灵活收集；4. 可通SCG工作站控制，进行多种方式收集；5. 组份收集多，且控制方便。缺点是收集体积较少。客户可根据需要，选择合适的收集方式及收集架等。采用进口元件，保证了收集的稳定性及准确性。
Sepax Instruments
客户比较关注的设备方面的问题
7.清洗方面： SCG纯化系统中泵有自冲洗功能，防止泵头因缓
冲液导致的盐析出损伤其使用寿命，避免造成交叉污染。运行过程中更换缓冲液，无需将柱子拆掉，泵冲洗即可快速更换缓冲液以及排气泡。当实验完成后，可实现在线清洗（CIP），因管路及流通池的体积很小，整个流路的清洗方便，无卫生死角。
Sepax Instruments
模块：色谱工作站
方法编辑
Sepax Instruments
模块：色谱工作站
运行功能
1.运行过程中实时显示各种参数，如时间、体积、流速、压力、pH、UV、电导等，参数显示可调整及颜色标记等。 2.软件全程LOGBOOK记录，可随时查看仪器任意时刻的运行状态记录。 3.实时方法编缉，可在线修改各种参数，修改后可选择运行完梯度并可设置自动暂停和自动停止，方便实时修改和优化实验条件。 4.可手动快速运行模式，操作方便快捷，提高纯化方法探索的便捷性。 5.自动上样阀上样，软件可标上时间位置，并将当前运行时间重置归零，方便纯化后数据分析与整理。 6.过压报警、收集报警等保护功能，能实时保护层析柱与系统。实时自动保存数据功能，可防止意外断电导致的数据丢失。 7.SCG独有的手机、平板远程控制功能，可随时控制及观察当前的运行状态，调整方法，做到在办公区即可对实验监控，方便操作，更安全，更健康。 8.全中文操作界面，友好图形交互，操作简单、功能全面、性能稳定。 9.可对数据进行分析，验证实验方法、填料、柱子等的稳定性、可靠性。 10.收集方式的多样性，可选择阀收集或收集架收集，且收集架具有自动识别及记忆功能。 11.可设置多个方法，采用不同方法对一个或多个样品，通过不同的柱子，采用不同的缓冲液对样品进行纯化洗脱，可实现过夜无人值守等。 12.各种参数校正可通过软件控制，方便操作及管理。 13.动态混合器使得缓冲液的配比更精确；气泡传感器可检测到管路液体有无气泡，避免气泡进到柱子，对填料造成损伤；泵头的自冲洗功能避免盐析出污染泵头；更换缓冲液无需拆柱子，且较大流速可以很快完成缓冲液的更换及气泡的排出。

层析系统操作方法

层析系统操作方法
层析系统是一种高效的分离、纯化、分析化合物的方法。

其操作方法如下：
1. 样品的制备：将待分析的化合物或混合物溶解或悬浮于适当的溶剂中，以备注入样品进样口。

2. 进样：将样品注入样品进样口。

通常，进样口位于柱子的顶部或侧面，具体位置根据不同型号的层析柱而定。

3. 选择移动相：选择适当的移动相。

通常有两种移动相，一种是常规液相，另一种是气相。

4. 开始层析：开启泵，让移动相流经层析柱，分离化合物。

移动相会使得不同化合物在柱子内产生不同的扩散速度，从而分离。

5. 收集分离后的化合物：化合物随着移动相流出层析柱，通过检测器进行检测并记录。

对于需要进一步分析的化合物，可以通过收集样品进行后续的调查研究。

6. 停止层析：关闭泵，停止层析操作，清洗设备。

需要注意的是，在进行层析操作之前，需要根据不同的化合物选择不同的适宜移动相，从而实现更好的分离效果。

蛋白纯化液相层析

俄国植物学家米哈伊尔·茨维特-色谱学之父茨维特奖-色谱界大奖
1906年茨维特用碳酸钙填充竖立的玻璃管，以石油醚洗脱植物色素的提取液，植物色素在碳酸钙柱中实现分离。由于这一实验将混合的植物色素分离为不同的色带，因此他将这种方法命名色谱法。
层析法的分类
1、根据固定相基质的形式分类，层析可以分为纸层析、薄层层析、毛细管层析和柱层析。
预期使用有什么联系？
• 什么东西必须去除？ • 什么东西必须完全去除？ • 最终纯化的规模是什么？ • 如果需要扩大规模，用已选择的纯化技术将会产生什
么样的后果？
• 在经济方面的限制是什么？ • 什么样的资源和设备是可以利用的？
三步纯化策略CIPP
Capture Intermediate Purification Polishing
Chromatography，HIC ） • 反相层析（Reversed Phase Chromatography，RPC） • 亲和层析（Affinity Chromatography，AC ） • 总结
• 蛋白纯化一般需要考虑回答的问题： • 制备产品的目的是什么？ • 什么样的原材料是可以使用的和如何处理它？ • 纯度问题与材料的来源有什么样的关系，和终产品的
• 正相层析，属于分配层析，固定相极性大于流动相。 • 正相键合相层析，固定相共价键合在固定基质上的正相层析。 • 反相层析，属于分配层析，固定相极性小于流动相。 • 反相键合相层析，固定相共价键合在固定基质上的反相层析。 • 凝胶过滤层析，属于分子筛层析，流动相主要为水溶液。 • 凝胶渗透层析，属于分子筛层析，流动相主要为有机溶液。
• 每一个纯化参数的重要性是变化的，这主要取决于一个纯化步骤是否用于捕获、中度纯化或者精细纯化阶段。

柱层析分离纯化原理

柱层析分离纯化原理一、柱层析分离纯化原理概述柱层析分离纯化是一种常用的生物分子分离纯化技术，其基本原理是利用吸附剂对不同组分的吸附能力的差异，实现对混合物的分离。

在柱层析过程中，混合物溶液通过加压或重力作用，流经吸附剂填充的色谱柱。

不同组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，因此会以不同的速度在柱内移动，从而实现各组分的分离。

二、吸附剂的种类与性质1.硅胶：硅胶是一种常见的柱层析吸附剂，其表面具有极性基团，可以与非极性物质产生相互作用。

硅胶具有高比表面积、高孔隙率等特点，适用于多种生物分子的分离纯化。

2.氧化铝：氧化铝是一种具有中强碱性的吸附剂，适用于酸性物质的分离。

其表面具有较高的活性，能够与多种物质发生相互作用。

3.活性炭：活性炭是一种具有高比表面积和发达孔隙结构的吸附剂，能够吸附多种有机物质。

其表面具有较强的化学活性，可以通过与被吸附物质发生化学反应实现分离。

4.聚酰胺：聚酰胺是一种高分子吸附剂，能够通过氢键作用吸附多种物质。

其优点是选择性高、吸附能力强，适用于蛋白质、核酸等生物分子的分离纯化。

三、流动相与固定相的选择1.流动相：流动相是一种连续相，在柱层析过程中不断通过色谱柱。

选择适当的流动相有助于提高柱层析的分离效果。

常见的流动相包括有机溶剂和水溶液等。

2.固定相：固定相是色谱柱中的填料，是实现分离的关键因素。

根据被分离物质的性质选择合适的固定相，可以提高分离的选择性和效率。

四、洗脱方式及其影响因素1.洗脱方式：洗脱是指将已吸附在固定相上的组分从固定相中转移至流动相的过程。

常见的洗脱方式包括线性梯度洗脱和阶跃式洗脱等。

选择适当的洗脱方式有助于提高分离效果和纯度。

2.影响因素：洗脱方式的优劣受多种因素影响，如洗脱液的组成、流速、洗脱梯度等。

通过优化这些参数，可以提高柱层析的分离效果和纯度。

五、柱层析分离纯化的应用领域1.生物分子分离纯化：柱层析技术在生物分子分离纯化中应用广泛，如蛋白质、核酸、糖类等物质的分离纯化。

层析系统介绍

蛋白质纯化系统概况蛋白质纯化系统是我们开发的具有自主知识产权的产品，主要包括高压梯度层析泵、进样阀、多波长紫外检测器、电导、pH、温度检测器等硬件，以及用于仪器控制、方法编辑、数据及用户管理的多界面智能化计算机软件。

可进行离子交换层析、疏水作用层析、反相层析、亲和层析等不同层析模式操作，用于各类疫苗、抗体药物、酶、天然产物有效成分等的分离纯化。

Protein purification system, the product with independent enzyme and the active ingredients in natural product. intellectual property rights, is developed by ourselves. It consists of high-pressure gradient pump, sample valve, multi-wavelength UV detector, sensors (conductivity, pH and temperature) and other hardware, as well as the intelligent software for instruments control, method edit, data and user management. The system could be operated with various chromatography mode, including ion-exchange, hydrophobic interaction, affinity, reversed phase, etc., for the separation and purification of vaccine, antibody,产品优势•生物兼容性高压梯度泵•3波长同时在线紫外检测•网络化数据通讯模块•全流路参数在线显示,计算机在线操作•High pressure gradient pump with biological compatibility•Three wavelengths UV detectionsimultaneously•Networked data communication module•Parameters of the whole flow-pathdisplayed on-line•On-line operation with computer技术规格。

亲和层析纯化

亲和层析纯化亲和层析纯化是一种常用的分离和纯化生物大分子的方法，它基于目标分子与特定配体之间的亲和作用，通过选择性地捕获、洗脱和回收目标分子。

本文将从亲和层析纯化的原理、步骤和应用方面进行阐述。

一、亲和层析纯化的原理亲和层析纯化是基于生物大分子之间特异的相互作用原理进行的。

在该方法中，目标分子与具有亲和性的配体发生结合，形成稳定的复合物。

这种特异的结合使得目标分子能够在混合溶液中被选择性地捕获和富集。

亲和作用可以是多种形式，如氢键、离子键、疏水作用等。

根据目标分子和配体之间的亲和性，可以选择不同类型的亲和层析介质，例如亲和树脂、亲和膜等。

亲和层析纯化通常包括以下几个步骤：样品预处理、柱填充与平衡、样品加载、洗脱和目标分子回收。

1. 样品预处理：首先需要将样品进行预处理，如细胞破碎、蛋白质去除等，以获得目标分子的纯化样品。

2. 柱填充与平衡：将选择的亲和层析介质填充到柱子中，并通过流动缓冲液进行平衡，使介质充分湿润。

3. 样品加载：将样品加入到柱子中，目标分子与配体发生亲和结合，被捕获在柱子内。

4. 洗脱：通过改变流动缓冲液的组成、pH值或离子强度等条件，使非特异性结合的杂质分子被洗脱，而目标分子仍保持与配体的结合。

5. 目标分子回收：通过改变条件，使目标分子与配体的结合解除，从而使目标分子得以回收。

这可以通过改变pH、离子强度、温度等来实现。

三、亲和层析纯化的应用亲和层析纯化在生物技术、生物医药等领域得到了广泛应用。

1. 蛋白质纯化：亲和层析纯化可用于从复杂的混合物中纯化目标蛋白质。

例如，通过选择性地捕获具有特定亲和性的标签蛋白质，如His标签、GST标签等，实现目标蛋白质的高效纯化。

2. 抗体纯化：亲和层析纯化也被广泛用于抗体的纯化。

通过使用抗体与特定抗原之间的亲和作用，可以高效地纯化特定抗体。

3. 生物药物纯化：亲和层析纯化在生物药物制造中起着重要的作用。

通过选择性地捕获和富集目标生物药物，可以实现高纯度和高产量的生物药物生产。

9种层析分离纯化方法详解

9种层析分离纯化方法详解层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。

所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相，它或者是固体物质或者是固定于固体物质上的成分；另一是流动相，即可以流动的物质，如水和各种溶媒。

当待分离的混合物随溶媒（流动相）通过固定相时，由于各组份的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量对比）不同，而且随溶媒向前移动，各组份不断地在两相中进行再分配。

与固定相相互作用力越弱的组份，随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移动的速度快。

反之，与固定相相互作用越强的组份，向前移动速度越慢。

分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组份，从而达到将各组份分离的目的。

按层析原理可将层析分为以下9种：1、亲和层析利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力，从而达到分离的目的。

将可亲和的一对分子中的一方以共价键形式与不溶性载体相连作为固定相吸附剂，当含混合组分的样品通过此固定相时，只有和固定相分子有特异亲和力的物质，才能被固定相吸附结合，性无关组分随流动相流出。

改变流动相组分，可将结合的亲和物洗脱下来。

亲和层析中所用的载体称为基质，与基质共价连接的化合物称配基。

具有专一亲和力的生物分子对主要有：抗原与抗体，DNA与互补DNA或RNA，酶与底物、激素与受体、维生素与特异结合蛋白、糖蛋白与植物凝集素等。

亲和层析可用于纯化生物大分子、稀释液的浓缩、不稳定蛋白质的贮藏、分离核酸等。

亲和层析纯化的分离原理特点：亲和层析具有高选择性、高纯度、快速、浓缩等特点，在重组蛋白的分离中多作为第一步的粗纯，实现对绝大部分杂质蛋白的去除。

2、离子交换层析采用具有离子交换性能的物质作固定相，利用它与流动相中的离子能进行可逆交换的性质来分离离子型化合物的方法。

主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质，也可用于分离核酸、核苷酸及其他带电荷的生物分子。

不同蛋白质的等电点（pI，isoelectric point）特性，使在不同pH缓冲液条件下所带正/负净电荷不同，选择不同的离子交换柱实现分离。

AKTA蛋白纯化层析系统操作规程

AKTA蛋白纯化层析系统操作规程一、目的：为了确保蛋白纯化层析系统操作的准确性、稳定性和安全性，保证实验结果的可靠性，制定本操作规程。

二、适用范围：本操作规程适用于实验室内的AKTA蛋白纯化层析系统操作。

三、操作流程：1.准备工作：(1)预热：打开系统电源，预热至设定温度（一般为室温）。

(2)洗涤缓冲液：根据实验要求，制备所需的洗涤缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。

(3)净化缓冲液：根据实验要求，制备所需的净化缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。

(4)样品：根据实验要求，制备所需的样品。

2.系统配置：(1)连接仪器：将系统中的各个模块连接好，包括色谱柱、注射器、检测器等。

(2)配置方法参数：根据实验要求，在系统内设置合适的流速、梯度洗脱条件等相关参数。

3.样品处理：(1)样品加载：将样品注入到加载注射器中，通过样品加载阀注入到色谱柱中。

(2)洗脱：根据实验要求，设置梯度洗脱条件，将混合物中的目标蛋白纯化。

4.系统清洗：(1)注射器清洗：每次实验结束后，将注射器从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。

(2)色谱柱清洗：每次实验结束后，将色谱柱从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。

5.系统关闭：(1)关闭电源：关闭系统电源，断开电源线连接。

(2)清洗系统：将系统中的各个模块用水冲洗干净，保持干燥。

(3)整理工作台：将使用过的耗材整理归位，清理工作台。

四、操作注意事项：1.操作前应仔细阅读操作手册，了解仪器的基本原理和操作要点。

2.操作时要穿戴实验室个人防护用品，避免吸入或接触有害物质。

3.在操作过程中，要严格按照实验要求进行，避免操作失误。

4.定期检查系统的运行状态，保证系统正常工作。

5.操作完成后，要及时清洗和整理仪器，保持仪器的干净和完好。

五、风险控制与安全措施：1.使用过程中，注意避免溶液飞溅引起的伤害，避免溶剂和化学品的吸入或接触。

2.避免电源短路或其他电气故障引起的意外事故。

sdl蛋白纯化层析系统操作流程

sdl蛋白纯化层析系统操作流程
1、使用前，根据自己所要分离蛋白的性质确定所需的分离柱及缓冲液，打开计算机及仪器，但不要急于打开软件，等计算机与仪器连接再打开软件，此过程大约需要3-5分钟。

2、将纯水先抽滤脱气（使用≤0.45μm的滤膜），然后选择流路连到机器上，先洗泵，然后给机器一个流速和压力。

选择的最高压力须小于柱子所能承受的压力极限。

3、将柱子连接到仪器上，接柱子时，须等进液管中的液体出来，将柱子的一头与进液管通过接头连接，先不要拧的太紧，等液体从柱子的另一头流出，再用接头将其与出液管相连拧紧，再将进液管端拧紧，这样防止柱子中进入气泡，影响分离效果。

4、柱子接上后，换上配好的缓冲液（须抽滤脱气）用缓冲液平衡至仪器的各条基线都平后，再上样。

5、上样时，必须通过滤膜过滤（0.22μm），具体上样体积视样品浓度而定，采用不同的上样环上样。

6、仪器使用完毕，切记要用纯水清洗泵和柱子，洗柱直至各条基线都平为止，防止盐和粒子结晶于泵和柱子使机器报废。

若长期不用，再用20%的乙醇清洗系统和柱子,防止泵和柱子生长微生物（这一步非常重要）。

7、仪器的PH计每隔一段时间（一个月）须校准一次。

紫外流动池也需定期清洗（三个月）。

蛋白纯化层析系统操作规程

蛋白纯化层析系统操作规程一、实验前准备1.确认所需操作的蛋白样品、层析柱类型和材料的完整性和准备情况。

2.检查实验设备和仪器是否正常工作，如层析仪、洗脱缓冲液储备罐、洗脱梯度系统等。

3.预先准备所需的实验试剂和缓冲液，确保其浓度和pH值符合实验要求。

二、层析柱装填和平衡1.将所需的层析柱装填到层析系统中，确保柱床填充均匀且无明显空隙。

2.选择适当的洗脱缓冲液和梯度溶液，根据目标蛋白的特性调整pH值和盐浓度。

3.设置洗脱缓冲液的流量和梯度溶液的梯度程序。

三、样品准备和负载1.根据实验要求，选择适当的样品预处理方法，如离心、过滤、冻干等。

2.根据目标蛋白的亲和特性和pH效果，调整样品pH值并添加必要的盐。

3.将样品加入到层析柱中，确保样品均匀覆盖柱床，并避免气泡。

四、洗脱和收集1.开始运行层析仪，以洗脱缓冲液的流量洗脱样品。

2.监控样品的吸收曲线，调整洗脱缓冲液的pH值和盐浓度，以实现目标蛋白的洗脱。

3.相关实验过程中，及时收集和保存洗脱图峰的分馏物，便于后续分析。

五、柱的再平衡和清洗1.在洗脱完毕后，用适当的缓冲液进行柱的再平衡，以去除残留的洗脱缓冲液和杂质。

2.清洗柱子时，确保缓冲液的流量和浓度符合实验要求，并充分冲洗层析柱。

六、实验后清洗和消毒1.关闭层析仪和其他设备，清除样品和实验废液。

2.将使用过的层析柱经过清洗和消毒处理，准备下一次实验使用。

3.清洗操作台面和其他实验器材，确保实验环境清洁。

七、实验记录和数据分析1.记录重要的实验操作、观察和结果，包括样品负载量、洗脱曲线等。

2.对实验数据进行统计和分析，计算目标蛋白的纯化效率和纯度。

3.分析实验结果，并做出合理解释。

以上是蛋白纯化层析系统操作规程的一般步骤和要点，实验人员在进行实验前，应详细了解实验的要求和步骤，并根据实际情况进行相应的调整和优化。

此外，在实验过程中，要注意安全操作，遵守实验室规章制度，确保实验的顺利进行。

AKTApure层析系统

UNICORN 6 控制软件可以快速简单地创建方法和开始运行。
也可以使用选配的样品泵或系统泵直接把样品上样到层析柱上。
UNICORN 6 无需编程技巧，因为层析方法的建立由简单的紫外检测器
拖拽操作就可以完成。此外，这个软件是模块化的，可以增加一些如 Column Logbook 和 Design of Experiments(DoE) 功能用于方法开发。用于远程访问系统和或创建方法或评估结果的许可选项可提供更大的便利。
0.3 MPa
图 3. 使用 ÄKTA pure 和紫外检测器 U9-M 对蛋白质凝胶过滤（GF）进行多波长检测（214、280 和 340 nm 波长）。使用的层析柱为 Superdex ™ 200 10/300 GL。在层析图上观察到的峰分别是 1）铁蛋白（分子量 440 000），2）醛缩酶（158 000），3）伴清蛋白（75 000），4）卵清蛋白（44 000）， 5）碳酸酐酶（29 000），6）核糖核酸酶 A（13 700）和 7）抑肽酶（6 500）。
生的连续和准确的流速能够进行可重现的线性或梯度洗脱。系统泵的操作压力最高可达 20MPa，可提供的最大流速为 25 ml/min（装柱时可达到 50 ml/min）。系统压力检测器连接到系统泵上，连续测量系统压力，并能够自动调整流速以避免达到任何设定的压力上限。
利用多波长检测可以用于检测污染物，特别是标记蛋白，或在 280 nm 没有吸收值的目标分子。为了证明这一点，在 214、280 和 340 nm 波长下监测分子量测定标准品。在 214 nm 的检测揭示所有蛋白的肽键，而且对于浓度以及目标蛋白在 280 nm 的消光系数都很低时也可能是有用的。铁蛋白
用于层析柱保护的系统压力表、混合器、进样阀和紫外检进样阀允许使用毛细管环或 Superloop ™的各种上样技术。测器。ÄKTA pure 具有广泛的可选模块，可以产生大量的可在各种不同进样技术之间变化时，新型的阀门设计无需更

蛋白层析系统

蛋白层析系统
蛋白层析系统是一种常用的蛋白质分离和纯化技术。

它基于蛋白质在化学或物理条件下的差异而实现分离纯化的目的。

蛋白质层析系统通常包含以下几个主要组成部分：
1. 高效层析柱：蛋白质样品通过柱状填料进行分离。

填料通常是多孔性固体材料，如海洛因、DEAE、Octyl-Sepharose等。

填料的选择和操作条件是根据目标蛋白质的性质和纯化要求来确定的。

2. 缓冲液系统：用于保持适宜的pH值和离子强度，以确保蛋白质在层析柱中具有最佳的亲和性和分离度。

缓冲液系统通常包括运行缓冲液、平衡缓冲液和洗脱缓冲液，其配方也需要根据具体需要进行调整。

3. 层析设备：用于控制流速、压力和温度等操作参数。

常见的层析设备包括高压液相层析仪（HPLC）、低压液相层析系统（FPLC）和手动操作的层析设备。

4. 蛋白检测系统：用于检测和监测层析柱流出液中的蛋白质含量。

常见的检测方法包括紫外光谱、荧光标记和蛋白质浓度测定等。

蛋白层析系统的操作步骤通常包括样品预处理、层析柱平衡、样品加载、洗脱和回收等。

不同的层析技术还可以结合其他分离方法，如亲和层析、离子交换层析、尺寸排除层析等，来实现更精确的纯化目标。

蛋白层析系统广泛应用于生物医药研究和生产中，可以从复杂的混合物中高效地纯化目标蛋白质，满足药物研发、蛋白质结构分析和生物学功能研究等领域的需求。

蛋白纯化系统原理

蛋白纯化系统原理蛋白纯化系统是一种用于分离和纯化蛋白质的实验方法，旨在从复杂的混合物中纯化目标蛋白质，并去除其他无关成分。

蛋白纯化的基本原理涉及到蛋白质的特性和相互作用。

1. 分离：蛋白纯化的第一步是根据蛋白质的特性选择适当的分离方法。

常用的分离手段包括差速离心、过滤、电泳、凝胶层析等。

这些方法根据蛋白质的大小、电荷、亲疏水性等特性进行选择，并通过分离将目标蛋白质与其他杂质分开。

2. 亲和纯化：亲和纯化是一种常用的蛋白纯化方法，其原理是利用目标蛋白质与其配体之间的特异性相互作用。

例如，可以利用抗体与目标蛋白质的特异性结合来纯化蛋白质。

此外，还可以使用其他亲和对，如金属螯合剂与螯合蛋白、酶与底物、受体与配体等。

亲和纯化可以高效地将目标蛋白质从混合物中分离出来，但选用合适的亲和对对于纯化效果至关重要。

3. 层析纯化：层析纯化是一种基于不同蛋白质与层析介质之间的相互作用原理进行分离的方法。

常见的层析介质有离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析、凝胶过滤层析等。

通过调节层析柱中的条件，如pH、离子浓度等，可以将目标蛋白质与其他成分分离开来。

4. 电泳纯化：电泳是将带电粒子在电场中根据其电荷、大小和形状进行分离的方法。

电泳纯化可以根据蛋白质的电荷差异将其分离开来。

常见的电泳技术有聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和等电聚焦（IEF）。

通过选择合适的电泳条件和电泳介质，可以将目标蛋白质从复杂的混合物中纯化出来。

综上所述，蛋白纯化系统使用不同的原理和技术进行蛋白质的分离和纯化。

通过选择合适的分离方法、亲和对和层析介质，可以实现高效、纯度较高的蛋白纯化。

蛋白纯化层析技术和工艺放大

原理
离子交换层析基于蛋白质带电性质差异分离蛋白质。在一定pH值下，蛋白质带电性质不同，与离子交换剂上的离子发生交换，从而实现分离。
应用
离子交换层析常用于分离和纯化特定类型的蛋白质，如酶、激素和抗体等。
疏水层析
原理
疏水层析基于蛋白质疏水性差异分离蛋白质。蛋白质与疏水配体结合后，通过改变流动相的pH值或离子强度，使蛋白质与配体间的疏水相互作用减弱而分离。
原理
层析技术基于不同物质在固定相和流动相之间的分配平衡差异，从而实现分离。目标蛋白与固定相的相互作用力较强，随着流动相的流动，逐渐从固定相中解离并被收集。
常用蛋白纯化层析技术
凝胶过滤层析
利用不同大小的蛋白质分子在凝胶上的扩散速度不同实现分离。常用凝胶有Sepharose、Sephacryl等。
蛋白纯化层析技术的应用场景
生物药物研发
用于分离和纯化抗体、酶、蛋白质等生物药物，提高药物的纯度和质量。
蛋白质组学研究
用于鉴定和分离蛋白质，促进蛋白质结构和功能的研究。
细胞培养与分离
用于分离和纯化细胞中的蛋白质、细胞器等，研究细胞内各组分的相互作用。
食品安全与质量控制
用于检测和纯化食品中的蛋白质，确保食品的安全和质量。
标准化操作程序
制定标准化的操作程序，确保每批次分离效果的稳定性和一致性。
流速与压力控制
采用先进的流速和压力控制系统，确保分离过程中的稳定性和层析柱寿命。
放大效应评估
在小规模试验阶段对放大效应进行评估，以便预测和解决大规模生产中可能出现的问题。
05
未来展望与研究方向
新技术与新方法的发展
01
03
工艺放大技术

AKTA(FPLC) 纯化系统

直观的系统设计
AKTApurifierTM 系统可以确保每一根柱子都运行在最佳条件下，并且可以保护它们不受某些破坏性事件 (比如超压) 的损害。只要从庞大的层析柱数据库中选择一根预装柱， AKTApurifierTM 就会自动地为它设定各种最佳的运行参数。新的层析柱可以不断地被加入到这个数据库中去，而且可以在同样的安全模式下运行。
AKTApurifierTM UPC 10 和 100 核心系统都用 UPC-900 监控器方便地同时进行紫外波长， pH 以及电导的监控。相对于 UV-900，这种监控器具有更大的灵活性，是一种更为经济的选择。
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AKTApurifier UPC 10 and 100 core system
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设计自己的快速蛋白质液相层析 (FPLC) 纯化系统
AKTApurifier 和自动控制配套组件
多功能性和自动化
自动化的FPLCTM蛋白质纯化系统采用的层析系统能够确保获得更可靠的结果和更强大的多功能性。自动化控制可以减少诸如样品溢出或是放错管子所导致的样品损失，从而确保您能够获得更多的目的蛋白质。此外，自动化控制使得纯化条件的优化变得更为便利。您可以在纯化蛋白质上节约大量的时间，从而可以集中精力去完成一些其它重要的工作。
筛选层析柱配套组件配备了可以自动进行方法优化，多步骤纯化以及更为轻松地进行层析柱筛选所需的一些电动阀 (motor valves)。一次可将多达八根层析柱接入系统。这样，在一次运行中，不同层析柱的性能可以在运行时随着条件的改变易于进行比较。而预设好的方案还可以在使用中防止系统超压以及层析柱损坏。

离子交换层析的纯化原理

离子交换层析的纯化原理离子交换层析是一种常用的分离纯化技术，它基于离子交换作用原理，通过离子交换树脂将混合物中的离子进行吸附和释放，从而实现对目标离子的纯化。

离子交换层析在生物分子的分离纯化、水处理、药物纯化等领域具有广泛的应用。

离子交换层析的纯化原理包括离子的吸附和释放步骤，具体过程如下：1. 吸附阶段：在离子交换层析中，选择具有离子交换基团的树脂作为固定相，常见的有阴离子交换树脂和阳离子交换树脂。

在混合物中，选择性地吸附目标离子，其他离子则通过树脂层析柱。

当混合物溶液通过层析柱时，目标离子与离子交换基团发生静电作用，被吸附在树脂上。

吸附过程可通过控制pH值、离子浓度和离子交换柱的选择来实现。

2. 洗脱阶段：吸附在树脂上的目标离子可以通过改变溶液性质来实现释放。

这可以通过改变pH值、离子浓度或添加竞争性离子等方式来实现。

当采用酸性洗脱时，通过调节pH值，使目标离子与交换基团结合的静电作用减弱或破坏，从而使目标离子从树脂上解吸下来。

类似地，碱性条件下发生的酸洗脱也可以通过调节pH值实现目标离子的解吸。

此外，还有一些特殊洗脱方法，如温度调控法、浓度梯度洗脱法等。

离子交换层析的纯化原理主要包括两个方面：选择性吸附和静电作用。

1. 选择性吸附：离子交换树脂的交换基团具有特定的亲和性和选择性，可以选择性地吸附目标离子。

交换基团通常是带电的官能团，如硫酸树脂的交换基团为SO3-，对应着可吸附阳离子。

这些交换基团与离子之间通过静电作用或化学键形成吸附结合，从而实现离子的选择性吸附。

通过调节交换基团的类型和性质，可以选择性吸附不同类型的离子。

2. 静电作用：离子交换主要通过静电作用来实现离子与交换基团的结合和解离。

当目标离子与交换基团发生静电作用时，会产生电荷之间的相互作用力。

离子交换树脂通常带有正电荷或负电荷，吸附的离子通常与树脂的电荷相反。

当pH值适当时，离子交换层析系统中溶液中的目标离子与交换树脂之间会出现较大的静电吸引力，从而实现目标离子的吸附。

LP 层析系统简明使用教程

BioLogic LP层析系统简明使用教程BioLogic LP 层析系统一、仪器名称：BioLogic LP 层析系统二、规格型号：BioLogic LP 三、生产厂家：Bio-Rad Laboratories, Inc 四、产品简介随着生命科学研究进入后基因组时代，以蛋白质为主要对象的研究成为各实验室研究的主题，其中，对单个蛋白质的分离纯化是蛋白质研究的基础工作，也是非常重要的工作。

对纯度均一蛋白质的研究是揭示生命规律的重要手段，也是新药研发的必要途径，因为只有获得一定量的蛋白质纯品，才能满足结构和功能的分析、物理化学参数测定、生物活性、毒理和药理实验等等，乃至大量制备用于诊断和治疗。

蛋白质分离纯化的重要问题是如何在纯化过程中保持温和的条件，从而保证在此过程中蛋白质的结构和活性不受影响。

层析技术（Chromatography）为蛋白质纯化提供了这样的条件，大都在室温或低温下操作，所用的流动相可以是与生理液相似的具有一定 pH 值、离子强度的缓冲水溶液，所用的填料表面修饰各种基团，可与蛋白质分子温和接触，从而保持了蛋白质分子的原有构象和生物活性。

层析系统以及各种分离纯化所需的填料和层析柱是保证该纯化过程的稳定性、重现性和自动化进行所必需的设备。

五、技术原理将一种混合物分成单个组份是一个熵减的过程，故外界必须要给此过程提供能量。

如下图所示，完整的层析系统主要包含泵、各种阀门、层析柱、各种在位检测器和收集器。

其主要过程是：由蠕动泵推动溶液；各种阀门控制溶液流向，或者进样，或者洗脱层析柱；样品经过层析柱并洗脱后，以样品各组分在流动相和固定相（层析介质）中的分配系数不同而保留不同，从而分开；不同组分经过各种在位检测器，如紫外检测器、电导检测器、pH 检测器等确定各组分的位置和浓度；最后各组分由收集器自动收集。

其中，泵是层析系统的心脏，用以推动溶液流动，LP 的泵是双通道蠕动泵，可提供精确稳定，双向变速可调的液流，可配不同直径蠕动管，流速范围为 0.01-40mL/min。

3-13-常见分离纯化技术原理

常见分离纯化技术原理---介绍离子交换层析、凝胶过滤层析、疏水层析、亲和层析、分配层析和电泳原理1、离子交换层析法⏹原理:根据离子间作用力的不同而将物质分离的方法⏹离子交换剂可解离出阴离子或阳离子，当待分离的溶液中含有阳离子时可以与阳离子交换剂的阳离子交换吸附在离子交换介质上，带电量不同的物质与离子交换剂的结合力不同，解离的条件不同，可通过改变条件，促使其解离和分部收集待分离物。

Sampleapplication and wash Elution Equilibration Regeneration-------------------------------------------------------++++++++++++++++++++++++++++++anion exchanger bead ----------离子交换层析步骤和发生的变化2、凝胶过滤层析技术●概念（排阻层析，分子筛层析）：当生物大分子通过装有凝胶颗粒的层析柱时，根据它们分子大小不同而进行分离的技术。

●原理：凝胶颗粒内部具有多孔网状结构，被分离的混合物流过层析柱时，比凝胶孔径大的分子不能进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动，并最先被洗脱出来；比网孔小的分子能不同程度的自由出入凝胶孔内外,在柱内经过的路程较长移动速度较慢，最后被洗脱出来。

⏹凝胶过滤法测定相对分子量◆蛋白质分子通过凝胶的洗脱体积取决于它的斯脱克半径；◆如果未知蛋白与理想的非水化球体有相同的洗脱体积，则认为这种蛋白质具有与球体相同的的斯脱克半径；◆因此，实验中只要测得标准蛋白的洗脱体积，再测得未知蛋白的洗脱体积就可以得到它的相对分子量。

3、疏水作用层析⏹非极性氨基酸残基组成的疏水区域可使蛋白质结合非极性分子，利用这种相互作用蛋白质可被吸附在基质上。

⏹在不带电荷的载体上偶联疏水基团而形成疏水吸附剂⏹利用载体和样品疏水基团间的相互作用使它们吸附在一起，然后改变层析条件，减弱疏水作用，使吸附的蛋白质从吸附剂上解吸下来。