01月季组培最优条件的选择

表 1 增殖培养基（MS）中不同激素对芽的影响 （mg/L）
激素组成
增殖苗生长情况
NAA 0.01+BA 0.5
增殖系数较高，健壮
NAA 0.01+BA 1.0
增殖系数较高，健壮
NAA 0.01+BA 2.0
增殖系数较高，健壮
NAA 0.05+BA 1.0
增殖系数较高，健壮
NAA 0.05+BA 2.0
对 生 根 率 有 显 著 影 响 ，浓 度 过 高 会 抑 制 根 的 形 成，NAA 浓度为 0.50 mg/L 时效果最佳（表 2）。生 根阶段加入 活 性 炭（AC）后 ，有 助 于 提 高 生 根 率 和 生 根 质 量 [11]。李青等[6]利用 1/2 MS+IBA 0.2 mg/ L +活性炭诱导生根，生根率最高为 90%，且随着 活 性 炭 百 分 比 的 加 大 ，生 根 率 逐 渐 下 降 。 活 性 炭 的 加 入 能 显 著 促 进 生 根 量 和 根 的 长 势 ，但 仅 含 活 性 碳 的 培 养 基 只 见 较 少 发 根 ，且 根 细 弱 ，说 明 植 物 激 素 对 于 生 根 是 必 不 可 少 的 [9]。 Hyndman 等 [12] 用改良烟火月季品种进行研究发现，MS 培养基中 盐 浓 度 过 高 ，特 别 是 氮 素 含 量 过 高 会 导 致 生 根 不 适应，所以需减少无机盐用量。
（3）在 无 菌 苗 的 生 根 诱 导 过 程 中 ，生 长 素 的 种类和浓度起决定性作用。培养基一般选择 1/2 MS，激 素 浓 度 控 制 在 0.1~0.5 mg/L。 活 性 炭 对 生 根有一定的促进作用。
（5）影 响 移 栽 成 活 率 较 大 的 因 素 有 3 个 ：湿 度、温度和基质消毒灭菌。严格控制这 3 个条件 能得到很高的成苗率。
诱导培养基以 MS 为基本培养基，附加适量的 细胞分裂素 6-苄氨基嘌呤（6-BA）和生长素萘乙
收稿日期：2009-02-12；修订日期：2009-05-10 基金项目：格尔木市政府项目；“十一五”国家科技支撑计划（2007BAD67B02） 作者简介：邱文青（1988-），女，山东济宁人，在读硕士生，主要从事植物转基因方面的研究。 通讯作者：季静（1965-），女，吉林长春人，教授，博士后，主要从事作物和花卉转基因研究。
天津农业科学 Tianjin Agricultural Sciences 植物生理与生物技术
月季组培最优条件的选择
2009，15（3）：26-28
邱文青 1，季 静 1，杜长城 2
（1.天津大学 农业与生物工程学院，天津 300072；2.天津市林业局，天津 300061）
摘 要：综述了月季组织培养、快繁的研究技术及进展，并对月季组培的最优条件进行了总结。 关键词：月季；组培；快繁 中图分类号：S685.12 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2009.03.009
月季（Rosa chinensis）别名长春花、月月红、斗 雪红、瘦客等，蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(Rosa L.)植 物 ，是 世 界 上 著 名 的 四 大 切 花 之 一 [1]。 由 于 其 特 殊 的 情 感 内 涵 和 商 品 价 值 [2] ，被 广 泛 应 用 于 园 林 、 庭 院 装 饰 ，并 可 制 成 月 季 盆 景 ，作 切 花 、花 篮 、花 束 等 。 此 外 ，月 季 花 可 提 取 香 料 ，根 、叶 、花 均 可 入 药 ，具 有 活 血 消 肿 、消 炎 解 毒 等 功 效 。 当 前 ，月 季育种是花卉育种中最活跃的领域之一。月季 通 常 采 用 扦 插 、嫁 接 和 压 条 繁 殖 ，但 是 一 些 名 贵 品 种 扦 插 不 易 生 根 ，主 要 靠 芽 接 繁 殖 ，而 芽 接 速 度慢，因而造成优良品种的月季苗供不应求 。 [3] 随 着 生 物 技 术 的 迅 猛 发 展 ，植 物 组 织 培 养 和 细 胞 培 养 等 现 代 生 物 技 术 得 到 普 遍 重 视 和 应 用 ，为 月 季 的 快 繁 和 新 品 种 的 选 育 提 供 了 新 的 途 径 ，在 月 季 的 改 良 上 显 示 了 很 大 的 应 用 潜 力 。 同 时 ，月 季 组 培和遗传转化系统的建立也是体细胞克隆变异 育 种 和 基 因 工 程 育 种 的 重 要 前 期 工 作 [4] 。 笔 者 综 述 了 近 年 来 月 季 组 培 技 术 ，并 对 其 最 优 条 件 进 行 了总结。
增殖系数较高，健壮
NAA 0.05+BA 3.0
增殖系数高，苗发黄，细弱
NAA 0.1+BA (0.5，1.0，2.0，3.0) 增殖系数低，苗细弱，玻璃化
NAA 0.2+BA（1.0，2.0）
芽基部长有愈伤组织
1.3 生根培养 无菌芽苗在继代培养基中只诱导地上部分生
长 。 待 培 养 一 段 时 间 后 ，转 入 生 根 培 养 基 中 ，诱 导生根。多数试验采用的培养基为 1/2 MS[6,9](大量 元 素 减 半)。 Skirvin 等 [13] 在 用“Forever yours”月 季 做生根试验时发现，采用 1/4MS 培养基，不加生长 素即可以促进生根。在无菌苗的生根诱导过程 中 ，生 长 素 的 种 类 和 浓 度 起 决 定 性 作 用 。 李 青 等 [6] 分 别 使 用 不 同 浓 度 的 NAA、IBA、IAA 对 藤 本 月 季进行生根培养，发现 3 种生长素的生根效果不 同 ，且 浓 度 的 影 响 较 大 。 李 海 燕 等 [8] 发 现 低 浓 度 的生长素有利于根的形成，适当浓度的 IBA、NAA
表 2 生根培养基（1/2MS）组成对生根的影响 （mg/L）
激素组成 NAA 0.1 NAA 0.1+活性炭 0.3 NAA 0.5 IBA 0.1 IBA 0.2 IBA 0.5
生根情况 生根多，健壮 生根多，生根快 生根较多，健壮 生根率低 生根完全，生根快 生根数多，生根快
1.4 移 栽 小苗接到生根培养基上后，14 d 可见基部分
将诱导培养基上已经萌发的嫩芽转入附加 6-BA、NAA 等 激 素 的 MS 培 养 基 中 ，进 行 增 殖 继 代 。 KT，IAA 等 激 素 作 用 效 果 较 差 ，协 同 作 用 不 明显[6]。低浓度的 6-BA 有利于不定芽的增殖，浓 度过高则抑制不定芽增殖，适量 NAA 有利于芽和 叶 生 长 [7] ，但 浓 度 过 高 诱 导 产 生 大 量 愈 伤 组 织 ，不 利于侧芽的直接分化和生长[8]。在 NAA 浓度相同 而 BA 浓度不同的培养基中，随 BA 浓度的升高， 芽苗的增殖系数也相应提高。在 BA 浓度相同而 NAA 浓度不同的培养基中，随 NAA 浓度升高，小 芽 生 长 速 度 加 快 ，继 代 所 需 时 间 对 增 殖 系 数 也 有 一 定 的 影 响 [9]。 此 外 ，增 殖 系 数 还 与 品 种 有 关 [6]。 从 增 殖 倍 数 、叶 片 数 、再 生 芽 长 势 等 综 合 因 子 来 看 ，MS+BA 0.5~2.0 mg/L+NAA 0.01~0.05 mg/L 是最 适的不定芽增殖培养基（表 1）。
化出根点，20 d 则长出许多白根。此时组培阶段 结 束 ，进 入 试 管 苗 移 栽 成 活 阶 段 。 所 有 试 管 苗 移 栽前都应先将生根苗移至室温进行移栽前的锻 炼。锻炼时间与移栽成活率有关，炼苗 7 d 以上， 成活率达到 95%[6]。影响移栽成活率的主要因素 有 3 个 ：湿 度 、温 度 以 及 基 质 种 类 和 带 菌 量 。 [15,16] 考虑到这 3 个因素，移栽时应保持 90%以上湿度， 18~25 ℃ 的 环 境 温 度 ，基 质 用 0.2% 的 高 锰 酸 钾 [14] 或 其 他 灭 菌 剂 进 行 消 毒 灭 菌 [15]。 而 基 质 的 选 择 上 ，以 蛭 石 和 珍 珠 岩 的 栽 培 效 果 较 好 。 移 栽 成 活 后 喷 极 稀 的 营 养 液 ，使 小 苗 得 到 营 养 补 充 。 10~ 15 d 即长出新叶，且根系快速生长，可适时进行大 田移栽。
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mg/L+NAA 0.01~1.0 mg/L。 （2）继代增殖中，低浓度的 6-BA 有利于不定
芽 的 增 殖 ，浓 度 过 高 则 抑 制 不 定 芽 增 殖 ，又 诱 导 大 量 愈 伤 组 织 。 从 增 殖 倍 数 、叶 片 数 、再 生 芽 长 势 等 综 合 因 子 来 看 ，MS + BA 0.5~2.0 mg/L + NAA 0.01~0.05 mg/L 是最适的不定芽增殖培养基。
2 讨论
（1）外 植 体 应 选 取 当 年 生 饱 满 而 未 萌 发 的 侧 芽 ，来 源 于 枝 条 中 部 的 侧 芽 的 繁 殖 速 率 最 快 。 外 植体的接种方式对再生芽生长量具有较大的影 响 ，垂 直 接 种 ，斜 向 上 45° 接 种 是 最 佳 的 接 种 方 式。最适的侧芽诱导培养基为 MS+6-BA 0.5~3.0
第3期
邱文青等：月季组培最优条件的选择
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酸（NAA）。NAA 增加至 0.1 mg/L 时，6-BA 浓度的 高 与 低 已 对 增 殖 系 数 不 产 生 明 显 影 响 [6] 。 最 适 的 侧 芽 诱 导 培 养 基 为 MS+6-BA 0.5~3.0 mg/L+NAA 0.01~1.0 mg/L[6-9]，且 培 养 基 中 添 加 蔗 糖 有 增 加 丛 生芽数量的作用[10]。 1.2 继代增殖
1 月季组培方法及最优条件
1.1 外植体的选择、消毒及接种 外植体一般选取生长健壮的当年生枝条的饱
满而未萌发的侧芽。取回枝条用自来水冲洗干 净 ，无 菌 条 件 下 用 70%酒 精 表 面 消 毒 30~40 s，再 用 0.1%HgCl2 溶液灭菌 5~10 min，最后用无菌水冲 洗 3~5 次。芽的快速繁殖与供试材料的基因型有 关 ，同 时 还 与 外 植 体 的 取 材 部 位 有 关 ，来 源 于 枝 条 中 部 的 侧 芽 的 繁 殖 速 率 最 快 [5]。 李 青 等 [6] 分 别 选取一年生枝条的冬芽和当年生枝条的腋芽作 为 外 植 体 ，相 同 条 件 下 培 养 发 现 越 冬 芽 的 成 活 率 较 高 ，且 从 接 种 到 萌 动 时 间 较 短 ，生 长 快 ，在 后 代 繁 殖 中 植 株 健 壮 。 于 冰 沁 [7] 在 外 植 体 的 接 种 中 采 用了垂直接种，斜向上 45°接种，水平接种和反转 接种 4 种方式，发现垂直接种和斜向上 45°接种是 最 佳 的 接 种 方 式 ，腋 芽 再 生 芽 数 多 ，且 生 长 健 壮 ， 这可能与植物的生长极性有关。