_助溶剂甲苯和二甲基亚砜对斑马鱼胚胎发育的复合毒性效应
斑马鱼在毒理学中的研究进展
斑马鱼在毒理学中的研究进展斑马鱼（Danio rerio）是一种小型热带鱼类，因其易于培养、繁殖和透明的胚胎而被广泛用于各个领域的研究中。
其中，斑马鱼在毒理学领域的应用日渐增多，成为一个重要的模型生物。
斑马鱼在毒理学研究中的优势短周期生长和高繁殖力斑马鱼已经被广泛用于发育生物学和基因功能研究领域。
经过多年的选择和驯化，斑马鱼已经成为了一个生长快、发育迅速、繁殖力强的模型生物。
斑马鱼的胚胎发育速度很快，一般只需要48～72小时就能完成体外受精后的胚胎发育阶段。
而成鱼也只需要3～6个月就能繁殖下一代。
相比于其他实验动物（如小鼠、大鼠等），斑马鱼具有更短的生长周期和更高的繁殖力，这使得其成为一种经济、高效的生物模型。
透明化胚胎斑马鱼的另一个优势是其胚胎具有透明性，这使得其成为观察胚胎内部结构以及进行基因表达和蛋白定位等实验的重要方法。
这也为评估毒理学研究中的毒性效应提供了可能，毒物的影响可以在胚胎期内直接观测到，进一步，胚胎期的斑马鱼也对于研究毒物产生影响的基因有着很好的体现。
遗传工具箱斑马鱼作为一种模型生物，其遗传本质有着相对较高的保真性，同时具有遗传学热点物种的共性特征。
斑马鱼的基因组序列已经被解析完成，具有包括条件性克隆、CRISPR/Cas等遗传技术，可用于进行定点基因敲除、转录因子激活和基因转染等高度智能、定制和精确的基因操作。
斑马鱼在毒理学研究中的应用范围煤矿废水生态毒性评价煤矿废水是现代工业中的常见污染源之一，不仅对水环境造成严重污染，而且具有比较强的生态毒性，对生态环境造成严重影响。
斑马鱼胚胎毒性试验是一种基于斑马鱼胚胎的评价方法，通过测定废水对斑马鱼的胚胎发育和存活的影响，推断出废水的生态毒性程度和实际环境中潜在的风险。
在煤矿废水污染控制方向，斑马鱼胚胎毒性试验具有较高的准确度和可替代性，被视为一种高效、简便、快速、低成本的毒性评价方法。
食品安全与毒性评价毒物在食品领域中的安全性是保障广大人民身体健康的重要问题。
斑马鱼胚胎评价5种药物的发育毒性与模型验证
斑马鱼胚胎评价5种药物的发育毒性与模型验证许冰洁;张立将;李春启;宣尧仙【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2016(0)1【摘要】目的：用斑马鱼胚胎探究环磷酰胺、乙酰水杨酸、盐酸四环素、乙酸地塞米松、阿扎胞苷5种已知对人类胚胎致畸药物的毒性和安全性。
方法挑选4 hpf 发育正常的受精卵,采用水浴染毒法,将药物添加到人工海水中,每种药物分别设置5个浓度组,另设空白对照组和溶剂对照组,观察给药120 hpf 后斑马鱼的死亡情况,统计各实验组斑马鱼胚胎的死亡数、畸形数,并求出120 hpf 时斑马鱼胚胎的死亡率、畸形率、半数致死浓度(LC50)、半数致畸浓度(EC50)、致畸指数(TI)。
并利用公式：TI = LC50/ EC50计算出阳性药物的致畸指数。
根据已经测得的 LC50,求出各药物的最大非致死浓度(MNLC),分别设置1/10 MNLC 、1/3 MNLC, MNLC 和LC104个浓度,以沙利度胺为阳性对照,维生素 C 为阴性对照,人工海水为空白对照,0．5% DMSO 为溶剂对照,28．5℃下作用至120 h,每天观察胚胎的发育情况,统计胚胎死亡及畸形状态。
结果5种药物的 LC50从大到小依次为：环磷酰胺>阿扎胞苷>盐酸四环素>乙酰水杨酸>乙酸地塞米松。
EC50从大到小依次为：环磷酰胺>盐酸四环素>阿扎胞苷>乙酰水杨酸>乙酸地塞米松。
环磷酰胺、乙酰水杨酸、盐酸四环素、乙酸地塞米松、阿扎胞苷 TI 值分别为1．92,1．11,1．05,1．44,2．99。
结论斑马鱼胚胎模型可用于初步评价药物的发育毒性和安全性。
%Aim To explore the toxicity and safety of five kinds of known positive drugs, cyclophosphamide, acetyl salicylic acid, tetracycline hydrochloride, dexa-methasone acetate and azacitidine, using zebrafish em-bryos. Methods Weselected normally developed 4 hpf zygote, and used water bath infecting method to add the drug to the artificial seawater. Each drug had five concentrating groups, a separate control group and solvent control group. We observed the dead zebrafish embryos after 120 hpf drugs, counted the number of deaths and deformities of zebrafish embryos, and cal-culated mortality abnormal rate, the median lethal con-centration (LC50 ), concentration for 50% of maximal effect (EC50 ), therapeutic index (TI) under 120 hpf condition. We also used the formula TI = LC50 / EC50 to calculate positive drug therapeutic index. Based on measured LC50 we calculated most nonlethal concentra-tion (MNLC) of each drug setting, namely 1 / 10 MN-LC, 1 / 3 MNLC, MNLC,LC10 four concentration, tha-lidomide as a positive control, vitamin C as a negative control, artificial seawater as control, 0. 5% DMSO as solvent control. Put in 28. 5 ℃ environment for 120 hours,embryo development was observed daily for de-velopmental state,mortality,deforming rate and abnor-mal condition. Results The result of five drugs LC50 in descending order: cyclophosphamide > azacitidine> tetracycline hydrochloride > acetylsalicylic acid >dexamethasone acetate. EC50 in descending order: cy-clophosphamide > tetracycline hydrochloride > azaciti-dine > acetylsalicylic acid > dexamethasone acetate. The TI values of cyclophosphamide, acetyl salicylic acid, tetracycline hydrochloride, dexamethasone ace-tate, azacitidine were 1. 92, 1. 11, 1. 05, 1. 44, 2. 99, respectively. Conclusion Zebrafish embryo model can be used in thepreliminary evaluation of drugs, and the study of early developmental toxicity and safety.【总页数】6页(P74-78,79)【作者】许冰洁;张立将;李春启;宣尧仙【作者单位】浙江省医学科学院安全性评价研究中心，浙江杭州 310013;浙江省医学科学院安全性评价研究中心，浙江杭州310013;杭州环特生物科技有限公司，浙江杭州 311231;浙江省医学科学院安全性评价研究中心，浙江杭州 310013【正文语种】中文【中图分类】R-332;R321.3;R971.1;R979.1;R977.1;R978.14;R991【相关文献】1.利用胚胎干细胞试验模型评价矮壮素的发育毒性 [J], 孔丹;郝卫东;蒋建军;尚兰琴;魏雪涛;时福礼2.药物生殖和发育毒性评价试验的有关问题 [J], 胡渝华;漆波3.斑马鱼胚胎发育毒性模型评价方法的验证 [J], 常嘉;陆亮;常艳4.利用全胚胎和微团培养模型评价硝酸镧的发育毒性 [J], 康陈萍;刘青云;肖倩倩;郝卫东5.利用全胚胎和微团培养模型评价硝酸铈的发育毒性 [J], 刘青云;康陈萍;肖倩倩;郝卫东因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
斑马鱼在毒性检测上的应用
method ISO73463:Waterquality―Determinationoftheacutelethaltoxi cityofsubstances
toafreshwaterfish[BrachydaniorerioHamiltonBuchanan(Teleostei,Cyprinidae)]―Flow-
throughmethod
上述标准对检测用斑马鱼的繁殖、饲养和维持的 用水的硬度、PH、水温，斑马鱼诱导产卵的方法， 产卵的温度，产卵时食物喂养，卵和幼苗的保护
方法，成鱼饲养的时间与饲料，鱼苗的饲养方法 均作了详细的规定。
斑马鱼已经被经济合作发展组织(的指导手册列为 实验的标准鱼类，被用于乙酸甘油酯和氯化钾危
害评价，a
-二氯甲苯和11-氨基十一烷酸急性毒性检测。 国内利用斑马鱼检测水质的应用：
2001年，上海市环境监测中心从青浦赵屯等处多 个断面采来水样，用斑马鱼作了河水
急性毒性试验。试验结果显示，从苏州河干流取 来的河水，没有达到急性毒性试验规定的50%鱼 类致死的浓度（上海标准化.2001(5).-24-24）。
ethod ISO73462:Waterquality―Determinationoftheacutelethaltoxi cityofsubsta[BrachydaniorerioHamiltonBuchanan(Teleostei,Cyprinidae)]―Static
源于印度，为小型的热带鱼类，染色体数为50， 成体长3～4cm，孵出后约3个月可达性成熟。成
熟的雌鱼每隔一周可产几百粒卵子。卵子体外受 精，体外发育，胚胎发育同步，
且速度快，在25～31℃之间发育正确。斑马鱼是
实验室里标准毒理学检验的最常用的实验动物， 也是ISO推荐河水毒性试验鱼种。
水体中3种磺胺类药物对斑马鱼的生态毒性效应
水体中3种磺胺类药物对斑马鱼的生态毒性效应谢美萍;颜勇【期刊名称】《环境科技》【年(卷),期】2015(000)002【摘要】采用斑马鱼作为模式动物,针对斑马鱼的代谢能力,进行3种磺胺类药物(磺胺甲恶唑,磺胺嘧啶,磺胺二甲嘧啶)的暴露实验。
实验选取谷胱甘肽s-转移酶(GST)和丙二醛(MDA)含量作为评判斑马鱼代谢能力的指标。
在实验过程中,随着暴露时间的改变,GST活性和MDA含量都呈现出不同的变化。
在实验前3 d,GST酶活性在不同浓度下都呈现出显著增长。
但是MDA的含量在第1天达到顶峰,随后都呈现出下降趋势。
由结果可得,MDA含量指标对磺胺类药物的毒性更加敏感,其指示作用更优于GST活性指标。
同时,实验结果中可以看出,在磺胺嘧啶作用下的GST酶活性和MDA含量都呈现更加明显的变化,因此实验推断磺胺嘧啶会对水环境具有更潜在的危害。
【总页数】5页(P30-34)【作者】谢美萍;颜勇【作者单位】扬州自来水有限责任公司，江苏扬州 225000;扬州自来水有限责任公司，江苏扬州 225000【正文语种】中文【中图分类】X8【相关文献】1.HPLC-MS-MS法测定养殖水体中18种磺胺类药物的残留量 [J], 黄江南2.水体酸化条件下Cu(Ⅱ)对斑马鱼胚胎的毒性效应 [J], 吴寅;吴永贵;马岚;熊宇霏;张枢;陈琴3.水体甲苯、乙苯和二甲苯对斑马鱼的毒性效应 [J], 范亚维;周启星4.恩施城区典型区域水体中磺胺类药物的检测评价 [J], 屈桃李;危志峰;周红艳;王联芝5.基于金属有机骨架材料分散固相萃取-高效液相色谱法检测环境水体中两种磺胺类药物 [J], 张鸣珊;李腾崖;雷宇;吴艳;何书海因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
四种烷基酚类化合物对斑马鱼毒性效应的初步研究的开题报告
四种烷基酚类化合物对斑马鱼毒性效应的初步研究的开题报告一、研究背景与意义烷基酚类化合物是一类在工业生产和日常生活中广泛使用的化学物质，主要用于制备塑料、树脂、橡胶、涂料等产品。
然而，这些化合物也存在毒性效应，而且大多数烷基酚类化合物能够在环境中积累，对水生生物造成潜在的危害。
斑马鱼是一种常用的实验动物，其胚胎和幼虫期均处于发育阶段，对环境污染物质的影响非常敏感，因此成为研究环境毒理学的重要模式生物。
本研究旨在探讨四种烷基酚类化合物（包括对甲酚、对硝基苯酚、对羟基苯酚和对甲苯酚）对斑马鱼的毒性效应，为人们更深入认识这些化合物的危害性提供科学依据，为环境保护和人类健康提供参考。
二、研究内容和方法1. 烷基酚类化合物的选择和制备本研究选取了对甲酚、对硝基苯酚、对羟基苯酚和对甲苯酚四种烷基酚类化合物。
这些化合物的纯度均达到99%以上，将采用溶液稀释法制备五个不同浓度的测试溶液。
2. 斑马鱼的饲养和采样从实验动物中心购买健康的斑马鱼，根据其饲养要求进行培育，选取幼鱼阶段的斑马鱼进行实验。
在实验结束后，采样斑马鱼进行生化指标的检测。
3. 毒性实验的设计和操作使用斑马鱼实验设计制定毒性实验，根据烷基酚类化合物五个不同浓度的测试溶液的浓度，设计出五个处理组和一个对照组，每组包含30条斑马鱼，进行14天的毒性试验，并对实验结果进行统计学分析。
三、预期结果和意义本研究将评估四种烷基酚类化合物对斑马鱼的毒性效应，包括生长、发育、免疫系统和生化指标等方面的影响，并探究不同浓度的化合物对斑马鱼的影响程度。
通过本研究，了解不同类型的烷基酚类化合物对环境的影响，为科学管理和环境保护提供依据。
《2024年典型酚类抗氧化剂对斑马鱼的神经毒性效应研究》范文
《典型酚类抗氧化剂对斑马鱼的神经毒性效应研究》篇一一、引言抗氧化剂在现代工业及食品中广泛应用，对于预防食品变质和保持生物活性分子稳定起着关键作用。
然而，许多人工合成的抗氧化剂，尤其是酚类抗氧化剂，可能会对生物体产生不同程度的毒性影响。
本文旨在探讨典型酚类抗氧化剂对斑马鱼神经系统的毒性效应，以期为环境保护和食品安全提供理论依据。
二、材料与方法1. 实验材料本实验选取了常见的几种典型酚类抗氧化剂，如BHA（丁基羟基茴香醚）、BHT（二丁基羟基甲苯）和TPHP（叔丁基-羟基茴香醚），并使用斑马鱼作为实验动物模型。
2. 实验方法实验将斑马鱼分为对照组和实验组，实验组分别暴露于不同浓度的酚类抗氧化剂中。
通过观察斑马鱼的行为变化、神经元活性、神经递质水平等指标，评估酚类抗氧化剂的神经毒性效应。
三、实验结果1. 行为变化实验发现，随着酚类抗氧化剂浓度的增加，斑马鱼的行为出现明显变化。
低浓度下，斑马鱼活动性增强；高浓度下，斑马鱼活动性降低，出现异常行为，如游动迟缓、失去方向感等。
2. 神经元活性通过电生理技术检测发现，实验组斑马鱼神经元活性明显降低，且随着抗氧化剂浓度的增加，神经元活性逐渐减弱。
3. 神经递质水平实验结果显示，实验组斑马鱼脑部神经递质水平发生显著变化。
部分神经递质水平升高，部分则降低，表明酚类抗氧化剂可能对斑马鱼神经系统的信息传递产生干扰。
四、讨论本研究表明，典型酚类抗氧化剂对斑马鱼的神经系统具有一定的毒性效应。
这可能与抗氧化剂干扰神经元功能、影响神经递质传递等有关。
此外，不同浓度的抗氧化剂对斑马鱼的影响也不同，低浓度可能产生一定的刺激作用，而高浓度则可能对神经系统造成损害。
五、结论本研究通过实验发现典型酚类抗氧化剂对斑马鱼的神经系统具有一定的毒性效应。
因此，建议在实际应用中严格控制酚类抗氧化剂的用量和浓度，以降低其对生物体的潜在危害。
此外，为更好地保护环境生态和保障食品安全，未来仍需深入研究酚类抗氧化剂在环境中的累积效应及长期影响。
水体甲苯_乙苯和二甲苯对斑马鱼的毒性效应
收稿日期：2008 - 06 - 05
录用日期：2008 - 07 - 15
基金项目：国 家 自 然 科 学 基 金 面 上 项 目 （No . 20777040）
作者简介：范亚维 （1981 —），女，硕士研究生； 通讯作者 （Corresponding author），E-mail: zhouqx@
Received 5 June 2008
accepted 15 July 2008
Abstract ： Aquatic ecotoxicological effects of toluene, ethylbenzene and xylene on zebrafish （Brachydanio rerio） were investigated in this paper using the semi -static bioassay. Results indicated that the 96h LC50 values of the three chemicals acting on zebrafish were 77.5, 31.0 and 34.8mg·L -1, respectively. According to the criteria for evaluating and grading toxicity of chemicals toxic to fishes, the toxicity of the three chemicals should be at the middle toxic level. The toxicity was in the sequence of ethylbenzene >xylene >toluene. There were some abnormal behavioral changes including hyperactivity, erratic swimming and convulsions of zebrafish exposed to the three chemicals at the highest exposure levels, especially exposed to toluene. The further analysis showed that the toxicity of the three chemicals to zebrafish was closely related to the octanol -water coefficient of partition （Kow）. Chemicals with higher hydrophobicity induced higher aquatic toxicity to Brachydanio rerio. Keywords ：toluene ；ethylbenzene ；xylene ；aquatic pollution ；zebrafish （Brachydanio rerio）；toxic effect
水体甲苯、乙苯和二甲苯对斑马鱼的毒性效应
水体甲苯、乙苯和二甲苯对斑马鱼的毒性效应范亚维;周启星【期刊名称】《生态毒理学报》【年(卷),期】2009(004)001【摘要】以斑马鱼(Brachydanio rerio)为实验生物,采用半静态实验方法,研究了甲苯、乙苯和二甲苯的水生生态毒性效应.研究表明,水体中甲苯、乙苯和二甲苯对斑马鱼96h半致死浓度LC50分别为77.5、31.0和34.8mg·L-1,根据化学物质对鱼类毒性分级标准,3种物质均属中等毒性,其毒性大小顺序为:乙苯＞二甲苯＞甲苯.在最高暴露浓度下,斑马鱼均出现了剧烈、无序游动,并伴有抽搐等现象,其中暴露在甲苯中的斑马鱼行为改变更为严重.分析认为,3种物质对斑马鱼毒性大小与疏,亲水性有关,疏水性越强,对水生生物的毒性作用越大.【总页数】6页(P136-141)【作者】范亚维;周启星【作者单位】南开大学环境科学与工程学院,环境污染过程与基准教育部重点实验室,天津,300071;南开大学环境科学与工程学院,环境污染过程与基准教育部重点实验室,天津,300071;中国科学院沈阳应用生态研究所,中国科学院陆地生态过程重点实验室,沈阳,110016【正文语种】中文【中图分类】X171.5【相关文献】1.甲苯、乙苯和二甲苯对中华新米虾的毒性效应 [J], 李学峰;周启星;罗义2.土壤甲苯、乙苯和二甲苯对蚯蚓及小麦的毒性效应 [J], 刘尧;周启星;谢秀杰;林大松;荣伟英3.气相色谱法测定建筑防水涂料中有害物质苯、甲苯、乙苯、二甲苯、苯酚、蒽、萘的检验方法的优化和改进 [J], 黄祝华;黄舒雯;戴敏辉;姜振军;王兵;赵孝佳;陈竹青4.气相色谱法测定建筑防水涂料中有害物质苯、甲苯、乙苯、二甲苯、苯酚、蒽、萘的检验方法的优化和改进 [J], 黄祝华;黄舒雯;戴敏辉;姜振军;王兵;赵孝佳;陈竹青;5.气相色谱内标曲线法测定墙面水性涂料中的苯、甲苯、乙苯、二甲苯总和方法研究 [J], 张丽莉;周元敬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
TCIPP和TCEP对斑马鱼胚胎_仔鱼神经发育的影响研究
密级学校代码10488TCIPP和TCEP对斑马鱼胚胎/仔鱼神经发育的影响研究学位申请人：王恒琦学科专业：公共卫生与预防医学指导教师：张志兵李瑞雯答辩日期：2019年5月22日A Dissertation Submitted in Partial Fulfillment of the Requirementsfor the Degree of Master in MedicineThe adverse effect of TCIPP and TCEP on neurodevelopment of zebrafishembryos/larvaeMaster Candidate：Wang HengqiMajor：Public health and preventive medicine Supervisor ：Prof. Zhang Zhibing Dr Li RuiwenWuhan University of Science and TechnologyWuhan, Hubei 430081, P.R.ChinaMay, 2019摘要目的：本项目拟以广泛存在于环境介质中的氯代有机磷阻燃剂（TCEP及TCIPP）为研究对象，以斑马鱼为模式生物，探讨TCEP及TCIPP对斑马鱼仔鱼早期神经发育的影响，以揭示TCEP及TCIPP对斑马鱼的神经毒性作用及潜在的分子机制。
方法：将斑马鱼胚胎（受精后2小时[hpf]内）暴露于不同浓度的TCEP及TCIPP （0, 100, 500及2500 μg/L）直至120 h，同时选用典型的神经毒性物质毒死蜱（CPF，100 μg/L）作为阳性对照。
实验过程中对斑马鱼仔鱼72 hpf孵化率、96 h死亡率以及畸形率等生长发育指标进行测定，同时对斑马鱼仔鱼在光暗交替刺激下的自主运动行为、乙酰胆碱含量和乙酰胆碱酯酶活性、中枢神经发育相关的基因（主要包括：α1-tubulin、mbp、syn2α、gfap、shha、ache及gap43）和蛋白等指标进行测定，综合评价TCEP和TCIPP对斑马鱼早期神经发育的影响，并与CPF进行对比研究。
《2024年BHT及其代谢产物对斑马鱼心脏发育的影响及机制》范文
《BHT及其代谢产物对斑马鱼心脏发育的影响及机制》篇一一、引言近年来，关于环境污染物对水生生物的毒性影响已成为生态学和毒理学研究的热点。
其中，BHT（丁基羟基甲苯）作为一种广泛使用的抗氧化剂和防腐剂，在工业、食品包装等领域得到广泛应用。
然而，随着其在环境中的积累和暴露的增加，其对水生生物的潜在危害也逐渐被关注。
本篇论文主要研究BHT及其代谢产物对斑马鱼心脏发育的影响及机制，旨在探讨BHT对水生生物心脏发育的毒性作用及其潜在机制。
二、材料与方法1. 实验材料BHT、斑马鱼胚胎、相关实验试剂等。
2. 实验方法（1）BHT处理：将斑马鱼胚胎暴露于不同浓度的BHT溶液中，以探究不同浓度BHT对斑马鱼心脏发育的影响。
（2）代谢产物分析：通过生物分析技术，检测斑马鱼体内BHT的代谢产物及其浓度变化。
（3）心脏发育观察：利用显微镜观察斑马鱼胚胎心脏发育情况，记录心脏形态、心率等指标。
（4）基因表达分析：通过实时荧光定量PCR技术，分析BHT处理后斑马鱼心脏相关基因的表达变化。
三、实验结果1. BHT对斑马鱼心脏发育的影响实验结果显示，随着BHT浓度的增加，斑马鱼胚胎心脏发育出现异常的比例逐渐升高。
高浓度BHT处理组的斑马鱼胚胎心脏形态畸形、心率异常等现象明显增多。
2. BHT代谢产物的检测与分析通过生物分析技术检测到斑马鱼体内BHT的代谢产物，并发现代谢产物的浓度随着暴露时间的延长而增加。
这表明BHT在斑马鱼体内发生了代谢作用，并可能对心脏发育产生不良影响。
3. 基因表达分析实时荧光定量PCR结果显示，BHT处理后，与心脏发育相关的基因表达出现显著变化。
部分基因表达上调，部分基因表达下调，这可能与BHT对斑马鱼心脏发育的毒性作用有关。
四、讨论根据实验结果，我们可以得出以下结论：BHT对斑马鱼心脏发育具有明显的毒性作用，高浓度BHT处理组的斑马鱼胚胎心脏形态畸形、心率异常等现象明显增多。
此外，BHT在斑马鱼体内发生代谢作用，产生代谢产物，这些代谢产物可能对心脏发育产生不良影响。
二甲基联苯胺对斑马鱼胚胎发育及成活率的影响
致鱼卵形态及最 终孵 化 率 和成 活率 的变 化 ， 索其 敏感 性 指 探
标， 以填 补此类 化合 物对水 生生 物毒性 数据研 究 的短缺 ， 一 进
步完善联苯胺类化合物对水生生物 的毒性 研究 资料 ， 并可 为环
境 卫 生 标 准 和 职 业 卫 生 标 准 的制 定 提 供 科 学 依 据 ， 为 致 癌 研 也
斑 马鱼 为 ６个月龄 以一 ， ｔ －
体 长 ４ｃ ｍ左 右的红色 品种 亲鱼 。按 照雌 雄鱼数量 约为 １ １ ： 的
率较 高 ， 故引起 了科学家对联苯胺 类化学物 质的关注 。陈纪纲 通过 连续 １ ８年的健康 监护 ， 采用 病例 对照研 究发 现联 苯胺 的 职业接 触 人群 中膀 胱 癌发 病 率超 过 １ ， 膀 胱癌 的高 危人 ％ 是
研究表明这类化合物对哺乳动物具有 直接或潜在 的致癌作用 ， 关 于联苯胺类化合物对水生生物 的毒性研究也有 一些报道 ＿ 。 ３
近年来斑马鱼胚胎毒性试 验 以其特 有的优 势正逐 步成 为急性 毒性试验 的替代 手段 ， 目前有 关 ３ ３ 一 甲基 联苯胺 对 斑 ， ’二 马鱼胚胎发育影响还 未见研 究报 道 。本研 究通 过对斑 马鱼 胚 胎的急性毒性试验 ， 观察胚胎发 育期 间二 甲基联 苯胺 暴露所 导
浓度的二 甲基联苯胺对斑马鱼的 受精 卵及 其胚胎发 育有严 重的毒 害和致 死作 用，． ６ｍｇＬ低浓度 的 ３ ２ １ ／ ， ３－ ’二甲基联 苯胺 对斑马鱼的胚胎发育可能有一定的加速作 用。
【 关键词 】 ３３ 一 甲基联苯胺 ； ，’ 二 斑马鱼 ； 胚胎发 育； 成活率 【 中图分类号 】 Ｒ３ １ ３ ２－ 【 ３ 文献标识码 】 Ａ 【 文章编号 】 １０ — ３６ ２１ ）７ ２ １ ０ ０２ ７８ （０ １１ — ６０— ３
典型环境污染物BPA、BaP对斑马鱼胚胎的毒性效应研究
目录中文摘要 (I)ABSTRACT (III)第一章综述 (1)1BPA、BaP的研究现状 (1)1.1BPA、BaP的应用 (1)1.2BPA、BaP的毒理学研究现状 (2)2BPA、BaP的生物毒性研究现状 (2)2.1BPA、BaP的生长发育毒性 (2)2.2BPA、BaP的内分泌干扰效应及作用机制 (3)3斑马鱼在毒理学研究中的应用 (4)3.1斑马鱼在急性毒性实验中的应用 (5)3.2斑马鱼在亚急性毒性实验中的应用 (5)3.3斑马鱼在慢性毒性实验中的应用 (5)4本论文的研究内容和研究意义 (6)5技术路线 (6)第二章双酚A对斑马鱼胚胎的急性毒性及内参基因的筛选 (9)1引言 (9)2材料方法 (9)2.1实验动物 (9)2.2实验试剂 (10)2.3实验仪器 (10)2.4BPA暴露 (10)2.5死亡率、孵化率、心率以及发育畸形的观察 (10)2.6总RNA提取及反转录 (10)2.7实时荧光定量PCR (11)2.8统计分析 (12)3结果 (13)3.1BPA对斑马鱼早期发育的毒性影响 (13)3.2不同浓度BPA处理下斑马鱼胚胎内参基因的筛选 (15)第三章双酚A暴露对斑马鱼胚胎雌激素受体及抗氧化酶基因表达的影响 (21)1引言 (21)2材料方法 (21)2.1实验动物 (21)2.2实验试剂 (21)2.3实验仪器 (22)2.4BPA暴露 (22)2.5酶活性测定 (22)2.6总RNA提取及反转录 (23)2.7实时荧光定量PCR (23)2.8统计分析 (23)3结果 (23)3.1BPA暴露对斑马鱼胚胎ERα、ERβmRNA表达的影响 (23)3.2BPA暴露对斑马鱼胚胎SOD、CAT、GPX mRNA表达的影响 (24)3.3BPA暴露对斑马鱼胚胎抗氧化酶活性的影响 (26)4讨论 (27)第四章苯并[a]芘暴露对斑马鱼胚胎的急性毒性及内参基因筛选 (29)1引言 (29)2材料方法 (29)2.1实验动物 (29)2.2实验试剂 (29)2.3实验仪器 (29)2.4BaP暴露 (29)2.5死亡率、孵化率以及心率的测定 (30)2.6总RNA提取及反转录 (30)2.7实时荧光定量PCR (30)2.8统计分析 (30)3结果 (30)3.1BaP暴露对斑马鱼早期发育的毒性影响 (30)3.2不同浓度BaP处理下斑马鱼胚胎内参基因的筛选 (32)第五章苯并[a]芘暴露对雌激素受体及抗氧化酶基因表达的影响 (37)1引言 (37)2材料方法 (37)2.1实验动物 (37)2.2实验试剂 (37)2.3实验仪器 (37)2.4BaP暴露 (38)2.5酶活性测定 (38)2.6总RNA提取及反转录 (38)2.7实时荧光定量PCR (38)2.8统计分析 (38)3结果 (38)3.1BaP暴露对斑马鱼胚胎ERα、ERβmRNA表达的影响 (38)3.2BaP暴露对斑马鱼胚胎SOD、CAT和GPX mRNA表达的影响 (39)3.3BaP暴露对斑马鱼胚胎抗氧化酶活性的影响 (40)4讨论 (41)参考文献 (43)全文总结 (53)致谢 (54)个人简况及联系方式 (55)承诺书 (56)学位论文使用授权声明 (57)ContentsABSTRACT(in Chinese) (I)ABSTRACT(in English) (III)Chapter One Literature review (1)1Research Status of BPA and BaP (1)1.1Application of BPA and BaP (1)1.2Research progress in toxicology of BPA and BaP (2)2Research progress in Biological toxicity of BPA and BaP (2)2.1Growth toxicity of BPA and BaP (2)2.2BPA,BaP's endocrine disruption effect and mechanism (3)3Application of Zebrafish in Toxicology (4)3.1Application of zebrafish in acute toxicity experiment (5)3.2Application of Zebrafish in Subacute Toxicity Experiment (5)3.3Application of Zebrafish in Chronic Toxicity Experiment (5)4Purpose and significance of this study (6)5Technical route (6)Chapter Two Acute Toxicity of Bisphenol A to Zebrafish Embryos and Screening of Internal Reference Genes (9)1Introduction (9)2Materials and methods (9)2.1Materials (9)2.2Reagents (10)2.3Equipments (10)2.4BPA exposure (10)2.5Observation of mortality,hatchability,heart rate,and developmentalabnormalities (10)2.6RNA extraction and reverse transcription (10)2.7Real-time quantitative PCR (11)2.8Statisical analysis (12)3Results (13)3.1Toxic effect of BPA on zebrafish during early development (13)3.2Comparison of reference genes in zebrafish exposed to BPA (15)4Conclusion (19)Chapter Three Effects of bisphenol A exposure on estrogen receptor and antioxidant enzyme gene expression in zebrafish embryos (21)1Introduction (21)2Materials and methods (21)2.1Materials (21)2.2Reagents (21)2.3Equipments (22)2.4BPA exposure (22)2.5Enzyme activity determination (22)2.6RNA extraction and reverse transcription (23)2.7Real-time quantitative PCR (23)2.8Statisical analysis (23)3Results (23)3.1Effects of BPA exposure on ERαand ERβmRNA expression in zebrafishembryos (23)3.2Effects of BPA exposure on SOD,CAT,GPX mRNA expression in zebrafishembryos (24)3.3Effects of BPA exposure on antioxidant enzyme activity in zebrafishembryosembryos (26)4Discussion (27)Chapter Four Acute Toxicity of Benzopyrene to Zebrafish Embryos and Screening of Internal Reference Genes (29)1I ntroduction (29)2Materials and methods (29)2.1Materials (29)2.2Reagents (29)2.3Equipments (29)2.4BaP exposure (29)2.5Determination of mortality,hatchability and heart rate (30)2.6RNA extraction and reverse transcription (30)2.7Real-time quantitative PCR (30)2.8Statisical analysis (30)3Results (30)3.1Toxic effect of BaP on zebrafish during early development (30)3.2Comparison of reference genes in zebrafish exposed to BaP (32)4Discussion (36)Chapter Five Effects of Benzopyrene exposure on estrogen receptor and antioxidant enzyme gene expression in zebrafish embryos (37)1Introduction (37)2Materials and methods (37)2.1Materials (37)2.2Reagents (37)2.3Equipments (37)2.4BaP exposure (38)2.5Enzyme activity determination (38)2.6RNA extraction and reverse transcription (38)2.7Real-time quantitative PCR (38)2.8Statisical analysis (38)3Results (38)3.1Effects of BaP exposure on ERαand ERβmRNA expression in zebrafishembryos (38)3.2Effects of BaP exposure on SOD,CAT,GPX mRNA expression in zebrafishembryos (39)3.3Effects of BaP exposure on antioxidant enzyme activity in zebrafishembryosembryos (40)4Discussion (41)References (43)Full test summary (53)Acknowledgment (54)Personal profiles (55)Letter of commitment (56)Authorization statement (57)中文摘要双酚A（BPA）和苯并[a]芘（BaP）是典型的环境污染物，也是典型的内分泌干扰物。
《2024年BHT及其代谢产物对斑马鱼心脏发育的影响及机制》范文
《BHT及其代谢产物对斑马鱼心脏发育的影响及机制》篇一一、引言生物医学领域正逐渐聚焦于心血管疾病的研究，特别是在发育过程中出现的各种异常和病症。
对环境因素，包括食物成分与生物污染物的影响机制进行研究是其中的关键点之一。
作为潜在的食品抗氧化剂和潜在的污染物，BHT（二羟基甲苯）在环境中广泛存在，其对斑马鱼心脏发育的影响及机制尚待进一步研究。
本文旨在探讨BHT及其代谢产物对斑马鱼心脏发育的影响及潜在机制。
二、材料与方法1. 材料：实验中使用的BHT购自X公司（公司具体名称未在材料部分公开，以便遵守科学道德规定），而实验所涉及的代谢产物依据现有研究得出；实验使用的斑马鱼来源及品质符合国家规定。
2. 方法：采用不同浓度的BHT溶液处理斑马鱼胚胎，并对其心脏发育进行观察和记录。
同时，对BHT的代谢产物进行监测分析，并通过转录和翻译等实验方法分析BHT的作用机制。
三、实验过程及结果1. BHT处理组斑马鱼心脏形态变化我们观察到，随着BHT浓度的增加，斑马鱼胚胎心脏的形态出现明显变化。
高浓度的BHT处理组中，斑马鱼心脏发育迟缓，心腔大小明显小于对照组。
同时，心脏的瓣膜结构也出现异常，如瓣膜关闭不全等。
2. BHT代谢产物的分析通过分析发现，BHT在斑马鱼体内有多个代谢产物。
这些代谢产物在不同程度上对斑马鱼的心脏发育产生影响。
具体而言，某些代谢产物可能导致心腔的扩大和瓣膜功能的不稳定等影响。
3. 分子生物学实验结果我们进一步采用分子生物学方法分析了BHT及其代谢产物的作用机制。
结果显示，BHT及其部分代谢产物能够影响心脏发育相关基因的表达水平，从而影响心脏的形态和功能。
同时，我们还发现这些物质可能通过影响细胞内信号传导通路来干扰心脏的正常发育过程。
四、讨论1. BHT及其代谢产物的毒性作用本研究发现，BHT及其代谢产物对斑马鱼心脏发育具有明显的毒性作用。
这种毒性作用可能与这些物质干扰了心脏发育相关基因的表达和细胞内信号传导通路有关。
四种新型农药对斑马鱼胚胎发育的毒性效应
四种新型农药对斑马鱼胚胎发育的毒性效应吴玉琼;陈莹;胡永乐;左正宏;王重刚【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2017(033)006【摘要】In order to study the effects of fourpesticides(fenbuconazole,pyraclostrobin,metoxazon,and pencycurone),either individually or jointly,on the development of zebrafish embryos,seven experiments(blank control,solvent control,individual of 4 pesticides,and jointly combined four pesticides)were designed to treat zebrafish embryos for 72 h. The results showed that individual exposure to any of 4 pesticides at 50 ng/L led to the significant elevation on the rate of pericardial and yolk sac edema and the frequency of dorsal curvature in the larvae compared to the control. The exposure to fenbuconazole,metoxazon,and combined four pesticides resulted in a significant reduction in the heart rate and a significant increase in cardiac arrhythmia in the zebrafish larvae. The activities of Na+/K+-ATPase and Ca2+-ATPase of the embryos were significantly induced by the individual exposure to 4 pesticides,while the both activities were remarkably inhibited by the combined exposure. The results confirmed that these pesticides at environmental relevant concentration presented the clear toxicity to the development of fish embryo.%为了研究4种农药(腈苯唑、吡唑醚菌酯、恶霜灵、戊菌隆)单独及联合作用对斑马鱼胚胎发育的影响,设计7个实验组(空白组、溶剂组、4种农药单独暴露组及联合暴露组)对斑马鱼胚胎暴露72 h,结果显示,浓度50 ng/L的4种农药单独暴露导致心包囊和卵黄囊水肿比率、脊柱弯曲率均显著高于对照组;腈苯唑、恶霜灵及联合暴露导致斑马鱼仔鱼心率显著下降,出现显著的心律不齐;斑马鱼胚胎的Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性被显著诱导,而联合暴露表现出显著的抑制作用.结果说明,环境浓度的农药暴露对鱼类胚胎发育具有明显的毒性.【总页数】7页(P155-161)【作者】吴玉琼;陈莹;胡永乐;左正宏;王重刚【作者单位】武夷学院茶与食品学院,武夷山 354300;厦门大学生命科学学院,厦门361005;武夷学院茶与食品学院,武夷山 354300;厦门大学生命科学学院,厦门361005;厦门大学生命科学学院,厦门 361005【正文语种】中文【相关文献】1.菲并咪唑衍生物的体外抗肿瘤活性及其对斑马鱼胚胎发育的毒性效应研究 [J], 陈坚平;余楚钦;郑康帝;杨怡;刘杰;邬凤娟2.重金属Cu2+、Cd2+、Hg2+对斑马鱼胚胎发育的毒性效应 [J], 陈玉翠;陈锦云3.急性镉暴露对斑马鱼早期胚胎发育的毒性效应 [J], 杨瑞瑞;王兰;孙敏;申萍4.不同亚硝酸盐对斑马鱼胚胎发育的急性毒性效应 [J], 李琳;梁辉;陈俗汝;刘迎佳;王维香5.汞和铅的单一和复合作用对斑马鱼胚胎发育的毒性效应研究 [J], 李倩;李鲁美;姜丝涛;崔龙波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
有机助溶剂对血管生成斑马鱼模型的适用性研究
得受精卵。对受精卵进行消毒和清洗后，移入斑
马鱼 胚 胎 培 养 用 水 中 ，２ ℃ 下控 光 培养 。 ８ １ 试剂 及其 配制 ． ２
二 甲基 亚 砜 、 丙 酮 、 甲醇 、 异 丙 醇 （ 析 分 纯） ，天津 市广 成 化 学试 剂 有 限公 司产 品；麻 醉剂
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有机助溶剂对血管生成斑马鱼模型 的适用性研 究
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【 基金项 目】 山东省科技 攻关项 目（ｏ６ Ｇ ２ ２ ３ ） ２ ０Ｇ ３ Ｏｏ ８ ［ 作者简介】 王思锋（９ １ ， 理学硕士， １８ － 男， ） 研究方向为药物筛
1,3-二苯胍对斑马鱼早期生命阶段的影响
生态毒理学报Asian Journal of Ecotoxicology第18卷第4期2023年8月V ol.18,No.4Aug.2023㊀㊀基金项目:国家自然科学基金资助项目(22076214,42207320,42007226)㊀㊀第一作者:赵娟(1998 ),女,硕士研究生,研究方向为环境毒理学,E -mail:*********************DOI:10.7524/AJE.1673-5897.20230222001赵娟,常静,郝伟玉,等.1,3-二苯胍对斑马鱼早期生命阶段的影响[J].生态毒理学报,2023,18(4):265-278Zhao J,Chang J,Hao W Y ,et al.Effects of 1,3-diphenyl guanidine on early life stages of zebrafish [J].Asian Journal of Ecotoxicology,2023,18(4):265-278(in Chinese)1,3-二苯胍对斑马鱼早期生命阶段的影响赵娟1,2,常静1,郝伟玉1,马政1,2,宋哲媛1,2,万斌1,2,王会利1,*1.中国科学院生态环境研究中心,北京1000852.中国科学院大学,北京100049收稿日期:2023-02-22㊀㊀录用日期:2023-05-09摘要:1,3-二苯胍(1,3-diphenyl guanidine,DPG)是橡胶生产过程中添加的硫化促进剂,在水环境中广泛存在㊂然而作为水环境中的一种污染物,目前DPG 对水生生物的毒性及其机制的研究极为匮乏㊂为了研究DPG 对水生生物的生殖发育毒性及潜在机制,选择水生模式生物斑马鱼(Danio rerio )作为受试生物㊂将斑马鱼胚胎分别暴露于浓度为30㊁100和300μg ㊃L -1的DPG 溶液中120h ,通过转录组测序㊁基因表达水平定量分析及性激素水平测定(雌二醇和睾酮)来探究其对斑马鱼早期生命阶段的生殖发育毒性及机制㊂转录组测序结果表明,DPG 暴露可以显著影响与精卵识别及生殖细胞发育相关的生物学过程㊂DPG 暴露使类固醇合成通路相关基因(cyp11a1㊁cyp17a1㊁cyp19a1a ㊁hsd17b1㊁ar )的转录表达显著上调㊂激素结果表明DPG 暴露导致斑马鱼仔鱼体内雌二醇水平显著升高㊂以上研究结果表明,在分子水平上,DPG 能够影响斑马鱼胚胎及仔鱼的发育,但是在个体水平上仍然缺乏直接的证据揭示DPG 暴露对斑马鱼生殖和胚胎发育的不良结局㊂本研究为DPG 对水生生物的毒性研究奠定了一定的基础,并为轮胎磨损颗粒的毒性研究提供了新的线索㊂关键词:1,3-二苯胍;斑马鱼胚胎;生殖发育毒性;仔鱼;转录组;定量PCR文章编号:1673-5897(2023)4-265-14㊀㊀中图分类号:X171.5㊀㊀文献标识码:AEffects of 1,3-diphenyl Guanidine on Early Life Stages of ZebrafishZhao Juan 1,2,Chang Jing 1,Hao Weiyu 1,Ma Zheng 1,2,Song Zheyuan 1,2,Wan Bin 1,2,Wang Huili 1,*1.Research Center for Eco -Environmental Sciences,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100085,China2.University of Chinese Academy of Sciences,Beijing 100049,ChinaReceived 22February 2023㊀㊀accepted 9May 2023Abstract :1,3-diphenyl guanidine (DPG)is a vulcanization accelerator added during rubber production and has been widely detected in aquatic environments.However,the information on the aquatic toxicity and the toxic mech -anism of this pollutant is still very limited.To study the reproductive and developmental toxicity as well as the un -derlying mechanisms of DPG in aquatic organisms,we employed zebrafish (Danio rerio )as the model and exposed zebrafish embryos to 30,100and 300μg ㊃L -1of DPG solution for 120h.After that,transcriptome sequencing,gene expression analysis and sex hormone determination (estradiol and testosterone)were performed.RNA sequen -cing data revealed that DPG significantly affected biological processes related to sperm -egg recognition and germ cell development.In addition,qPCR analysis demonstrated that DPG also stimulated the expression of a few genes266㊀生态毒理学报第18卷closely related to the steroid biosynthesis pathway,including cyp11a1,cyp17a1,cyp19a1a,hsd17b1,and ar,in ze-brafish larvae.ELISA analysis showed elevated estradiol levels in zebrafish larvae upon DPG exposure.Our results suggest that,at the molecular level,DPG is capable of affecting the development of zebrafish embryo and larvae; however,there is still a lack of direct evidence at the individual level showing the adverse outcome of DPG expo-sure on the reproduction and embryo development.This study lays the foundation for the study on the aquatic tox-icity of DPG and provides new clues of the potential influence of tire wear particles.Keywords:1,3-diphenyl guanidine;zebrafish embryo;reproductive and developmental toxicity;larvae;transcrip-tome;quantitative PCR㊀㊀轮胎磨损颗粒是轮胎胎面与路面滚动剪切时产生的一种新型微塑料[1],也是环境中微塑料的主要来源之一[2]㊂据报道,欧盟轮胎磨损颗粒每年的排放量可达1327000t,美国每年的排放量可达1120000t;德国每年的排放量可达12200t;其中,约有11000t的轮胎磨损颗粒会进入地表水中[3]㊂这些颗粒的可浸出物质会迁移到水环境中,并对水生生物产生不利影响㊂已有研究表明,轮胎浸出液会影响黑头鲦鱼(Pimephales promelas)胚胎的生长发育,导致胚胎孵化率下降,畸形率上升,眼睛和身体的黑色素减少[4]㊂Tian等[5]也发现轮胎浸出液对银大马哈鱼(Oncorhynchus kisutch)有剧毒,可在短时间内导致银大马哈鱼的大量死亡㊂已有文献指出,轮胎浸出液中含有重金属㊁多环芳烃㊁挥发性有机化合物及半挥发性有机化合物等有毒物质[6]㊂1,3-二苯胍(1,3-diphenyl guanidine, DPG)是橡胶生产过程中添加的硫化促进剂,用于促进橡胶的生产[7]㊂研究表明,DPG是轮胎浸出液的主要成分之一[8],并且在世界范围内的水环境中广泛存在㊂加拿大多伦多地区的地表水样和污水处理厂中均检测到了DPG的存在,其峰值浓度达0.52μg㊃L-1[9];德国㊁西班牙及荷兰的水样也检测到了浓度达100ng㊃L-1的DPG[10];DPG在欧洲的莱茵河水样中的检出频率高达91%,最大浓度达140ng㊃L-1[11];日本的荒川河中检测到浓度为467ng㊃L-1的DPG[12];美国华盛顿州的水域中也检测到浓度高达540ng㊃L-1DPG[13]㊂DPG还可从高密度聚乙烯管道中迁移,在中国长沙自来水中曾检测到高达230 ~560μg㊃L-1的DPG[14]㊂DPG在加拿大安大略省4个污水处理厂的进水口处的浓度分别为(47.7ʃ0.6)㊁(57.5ʃ9.9)㊁(77.9ʃ8.1)及(141.6ʃ16.4)ng㊃POCIS-1 (POCIS是广泛采用的极地有机化学综合采样器,因暂无DPG的采样率,故未能换算为ng㊃L-1),出水口及(143.4ʃ18.4)ng㊃POCIS-1[15]㊂DPG在中国珠江三角洲3个污水处理厂进水口处的浓度分别为(3570ʃ2580)㊁(137ʃ10.6)及(505ʃ38.8)ng㊃L-1,在出水口处的浓度为(116ʃ6.95)㊁(158ʃ7.8)及(58.2ʃ10.1)ng㊃L-1,去除率分别为96.8%㊁-15.2%㊁88.5%[16]㊂根据Scheurer等[11]通过固定生物床反应器模拟生物降解过程,发现DPG的生物半衰期<10d;而Zahn等[8]通过活性污泥模拟生物转化过程,发现DPG不可被生物转化㊂因此,综合比较国内外污水处理厂进出水口处检测到的DPG浓度,表明DPG在污水处理过程中的去除率可能和污水处理工艺相关㊂DPG 不仅广泛存在于环境样本中,在人体血清中也检测到浓度达1.7ng㊃mL-1的DPG,并且DPG可以透过胎盘屏障,进而可能对胎儿的生长发育造成不利的影响[17]㊂目前有关DPG的毒性报道较少,将DPG以4 mg㊃kg-1㊃d-1和8mg㊃kg-1㊃d-1的剂量暴露于小鼠,会导致小鼠生成形态异常的精子,并使精子数量及睾丸质量显著减少,此外,DPG还可诱导小鼠生成不规则形状的生精小管,从而降低小鼠的生育指数[18]㊂因此认为DPG具有潜在的生殖毒性,可能会影响小鼠的生殖能力㊂然而作为水环境中的一种污染物,目前DPG对水生生物的生殖发育毒性及其机制尚不清楚,其对轮胎磨损颗粒的水生生物毒性贡献仍未可知㊂鱼类的生殖过程是由下丘脑-垂体-性腺(hypo-thalamic-pituitary-gonadal,HPG)轴介导,并受到类固醇激素的调控[19]㊂因此类固醇激素水平变化及性腺指数异常是鱼类生殖毒性的主要特征[20]㊂例如,暴露于阿特拉津后,斑马鱼出现性别分化偏向雌性㊁产卵减少及精子缺陷[20];双酚F会导致斑马鱼的性腺凋亡及性腺指数的下降,并诱导斑马鱼生殖系统的氧化应激和凋亡[21];三氯生会影响斑马鱼体内的性第4期赵娟等:1,3-二苯胍对斑马鱼早期生命阶段的影响267㊀从而损害其生殖能力[22]㊂这些指标的改变对化合物生殖发育毒性具有很好的指示作用㊂斑马鱼(Danio rerio,zebrafish)作为一种水生模式生物,具有很多优势:成鱼个体小㊁易于养殖㊁产卵周期短且产卵量大㊁胚胎透明且发育迅速㊁遗传学背景清楚且与人类基因组同源性高[23-25]㊂因此,在急性毒性㊁神经毒性㊁遗传毒性㊁慢性毒性㊁生殖毒性㊁内分泌干扰效应和发育毒性等生态毒理学研究中得到广泛的应用[26-30]㊂基于以上研究背景,本研究以斑马鱼为受试模型生物,将不同浓度的DPG暴露于斑马鱼胚胎及仔鱼,通过转录组测序㊁基因表达水平定量分析及对斑马鱼仔鱼体内的性激素水平测定,来揭示DPG对斑马鱼的生殖发育毒性及机制㊂本研究为轮胎磨损颗粒的毒性研究提供了新的线索㊂1㊀材料与方法(Materials and methods)1.1㊀化学品和试剂DPG(纯度ȡ99.5%;分子量:211.268;CAS号: 102-06-7)购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司㊂甲醇采用色谱纯等级,购自迪码科技有限公司(北京),为助溶剂[31]㊂暴露液使用标准稀释水进行稀释㊂标准稀释水的配制参考‘化学品鱼类急性毒性试验“(GB/T 27861 2011)标准[32](包含294.00mg㊃L-1CaCl2㊃2H2O,123.35mg㊃L-1MgSO4㊃7H2O,64.75mg㊃L-1NaHCO3及5.75mg㊃L-1KCl)㊂配制标准稀释水的化学品均采用分析纯等级,购自迪码科技有限公司(北京)㊂1.2㊀斑马鱼饲养亲本野生AB型斑马鱼购于中国科学院武汉水生生物所,养殖于自控循环集中养殖系统(北京爱生科技发展有限公司,中国)㊂培养条件:温度为(28.0ʃ2.0)ħ,pH为7.2ʃ0.2,电导率为450~500μS㊃cm-1,光暗循环为14hʒ10h,每日早晚各喂食丰年虾一次㊂产卵前一天,将雌雄鱼以1ʒ1的比例置于产卵缸中,使用挡板将雌雄鱼分开,于第2天一早抽掉隔板,使雌雄鱼自由交配,30min后收集受精卵㊂1.3㊀斑马鱼胚胎暴露斑马鱼胚胎及仔鱼急性毒性实验的设计参考‘鱼类胚胎急性毒性测试(OECD TG236)“[33]㊂使用前将DPG用甲醇配制成高浓度的储备液,急性毒性准稀释水稀释而得,并且保证最高浓度暴露液中甲醇的含量不超过暴露溶液体积的1%(VʒV)㊂根据Maes等[34]的研究,将1.5%(VʒV)的甲醇暴露于斑马鱼胚胎及仔鱼168h,该浓度对斑马鱼胚胎及仔鱼没有任何明显的不良反应㊂因此,根据DPG在甲醇中的溶解度,本文将含1%(VʒV)甲醇的最高浓度组作为最大浓度来研究DPG对斑马鱼胚胎及仔鱼的急性毒性,故暴露浓度分别设置为0.0000㊁1.5625㊁3.1250㊁6.2500㊁12.5000㊁25.0000mg㊃L-1,溶剂对照组为1%(VʒV)的甲醇溶液,同时设置空白对照组(标准稀释水),且空白对照组与溶剂对照组在死亡率㊁孵化率及体长等生理指标的差异无统计学意义㊂使用六孔板作为暴露容器,每孔放置20枚受精正常的胚胎(4hpf;hours post fertilization,hpf),并加入10mL的暴露液,每个浓度设置3个生物学重复㊂暴露时间为120h,期间每隔24h更换新的暴露液,并于24㊁48㊁72㊁96㊁120h记录胚胎的死亡数,每日仔细观察胚胎的死亡㊁孵化及畸形情况,并及时移除死亡胚胎㊂斑马鱼胚胎及仔鱼暴露实验中所用的相应浓度的暴露液由高浓度储备液经标准稀释水稀释而得,并且保证最高浓度暴露液中甲醇的含量不超过暴露溶液体积的0.1%(VʒV)㊂根据我国自来水厂管道中DPG的浓度(230~560μg㊃L-1),将低㊁中㊁高3个浓度暴露组的浓度分别设置为30㊁100和300μg㊃L-1,来研究DPG潜在的毒性效应,溶剂对照组为0.1%(VʒV)的甲醇溶液㊂使用六孔板作为暴露容器,每孔放置50枚受精正常的胚胎(4hpf),并加入10mL的暴露液,每个浓度设置12个生物学重复㊂暴露时间为120h,期间每隔24h更换新的暴露液㊂每日仔细观察胚胎的死亡㊁孵化及畸形情况,并及时移除死亡胚胎㊂暴露结束后,收集120hpf 的斑马鱼仔鱼,除水后置于液氮中冷冻,并于-80ħ冰箱中保存,用于后续的转录组测序㊁生殖细胞发育及类固醇合成通路相关基因的表达水平分析及性激素水平测定㊂1.4㊀总RNA提取和cDNA合成使用TRNzol A+试剂(北京天根生化科技有限公司)从斑马鱼仔鱼中提取总RNA,并使用Nano-Drop-2000分光光度计(Thermo Fisher Scientific,美国)测定提取的总RNA浓度,并通过A260/A280的比值对提取的总RNA质量进行监测㊂268㊀生态毒理学报第18卷thesis SuperMix Kit试剂盒(北京全式金生物技术有限公司)将提取的总RNA反转录成cDNA,反应体系为20μL,于42ħ孵育15min,85ħ加热失活5s,得到的cDNA保存在-20ħ冰箱中㊂1.5㊀转录组测序与分析将收集的高浓度DPG暴露组的斑马鱼仔鱼用于转录组测序㊂转录组测序工作由上海中科新生命生物科技有限公司完成㊂获得原始数据后,去除带有接头和低质量的reads,以确保测序质量并获得clean reads㊂并与NCBI网站上的斑马鱼参考基因组(https:///genome/?term=Da-nio+rerio)进行比对㊂本次测序共注释到31949个基因,通过R包对注释到clusterProfiler的所有基因基于GO数据库及KEGG数据库分别进行基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA),将富集到的Padjust<0.05的生物学过程定义为显著富集的生物学过程;通过DEseq2R包对注释到的基因进行差异基因分析,并将Padjust <0.05且|log2(foldchange)|>1的基因定义为差异基因(differential ex-pressed genes,DEGs),其中将Padjust <0.05且log2(foldchange)>1的基因定义为上调基因,Padjust<0.05且log2(fold change)<-1的基因定义为下调基因;将得到的差异基因通过clusterProfiler R包基于GO数据库进行GO富集分析,基于KEGG数据库进行KEGG富集分析,将富集到的Padjust<0.05的生物学过程定义为显著富集的生物学过程㊂1.6㊀实时荧光定量PCR(RT-qPCR)使用TransStart Top Green qPCR SuperMix试剂盒(北京全式金生物技术有限公司)将反转录合成的cDNA在Bio-Rad CFX(Bio-Rad,美国)实时荧光定量PCR仪中进行RT-qPCR分析㊂热循环程序如下:94ħ30s,开始40个循环,94ħ5s,53ħ15s 和72ħ10s㊂引物通过Primer Primer5软件自行进行设计,并由生工生物工程(上海)股份有限公司进行合成㊂实验结果使用2-ΔΔC t方法进行相关定量,以斑马鱼的rpl13a基因作为管家基因,选择与生殖细胞发育相关的SRY盒转录因子(sox9b)㊁种质(buc)㊁透明带糖蛋白(zp3)㊁双性别和mab-3相关转录因子(dmrt1)基因及促卵泡激素亚基β(fshb)基因,与类固醇合成通路相关的细胞色素P450酶(cyp11a1㊁cyp17a1㊁cyp19a1a)㊁3-β-羟基类固醇脱氢酶(hsd3b1)㊁17-β-羟esr1)㊁尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(ugt1a5)及磺基转移酶(sult1st7)基因进行表达水平分析,引物序列见表1㊂1.7㊀激素的测定将收集到的斑马鱼仔鱼按比例加入预冷的PBS 进行匀浆处理,并于4ħ㊁5000r㊃min-1下离心7min㊂取上清液根据斑马鱼ELISA试剂盒(上海酶联生物科技有限公司,中国)说明书对斑马鱼仔鱼体内的性激素(雌二醇E2和睾酮T)水平进行测定,同时使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)(碧云天生物技术有限公司,上海)测定总蛋白浓度用于归一化处理㊂数据结果以总激素含量与总蛋白浓度的比值表示㊂1.8㊀数据统计和分析使用SPSS软件对实验数据进行统计分析,所有数据均以平均值ʃ标准差(meanʃstandard devia-tion)进行表示㊂多个均值之间使用单因素方差分析进行比较,并进行最小显著差异法(least significant difference,LSD)检验或Dunnett s T3(不假设等方差)事后检验㊂P<0.05被认为具有显著的统计学差异㊂2㊀结果(Results)2.1㊀斑马鱼胚胎及仔鱼的急性毒性根据Zahn等[8]的研究,DPG可在水溶液中稳定存在㊂将0.0000㊁1.5625㊁3.1250㊁6.2500㊁12.5000㊁25.0000mg㊃L-1的DPG暴露于斑马鱼胚胎进行急性毒性实验,溶剂对照组与空白对照组在孵化率㊁存活率及体长等生理指标上无显著性差异㊂与溶剂对照组相比,DPG的所有暴露浓度对斑马鱼胚胎及仔鱼的孵化率(72h)㊁存活率(120h)及体长(120h)均没有任何显著影响,急性毒性为低毒(表2)㊂2.2㊀转录组数据分析通过转录组数据分析发现,300μg㊃L-1DPG暴露组与溶剂对照组相比,有4797个差异基因,其中包含2985个上调基因和1812个下调基因(图1)㊂GSEA的GO分析结果表明,有18个与生殖发育相关的生物学过程被显著富集,主要分为三大类㊂(1)与性别分化相关的生物学过程,包括生殖结构发育(GO:0048608)㊁生殖系统发育(GO:0061458)㊁初级性特征的发育(GO:0045137)㊁性腺发育(GO:0008406)㊁雌性主要性征的发育(GO:0046545)㊁雌性性腺的发育(GO:0008585)及性别决定(GO:0007530);(2)与精卵识别相关的生物学过程,包括:精子与透明带的结第4期赵娟等:1,3-二苯胍对斑马鱼早期生命阶段的影响269㊀表1㊀用于RT-qPCR的引物序列Table1㊀Primer sequences used for RT-qPCR基因Gene序列(5 ~3 )Sequence(5 ~3 )基因IDGene ID产物/bpProduct/bprpl13aF:GGCGGACCGATTCAATAAR:GCGGAGGAAAGCCAAATACNM_212784.1181sox9b F:CGGGTCCAGCATAAGAAAGR:CTCTGAACAGCGCATTGGTNM_131644.1130buc F:CTACCCACAAGTGACCCAAGAR:CCTACCACCACCAACATAAACANM_001256780.1139zp3F:CTGCAACTGCTGCGACTCTAR:ACCTCCACAGGACCAACCAANM_131331.1114dmrt1F:GCAGTCGCTCCATGTTGTCTR:GTGGGCTGGTAAAGGTTGTAATAF439562.1109fshb F:GGACTATGCTGGACAATGGAR:CACGAAGACTGAATCAACCCNM_205624.1138cyp11a1F:GGGGTGGACTCGGTTACTTTR:CAATACGAGCGGCTGAGATAF527755.1106cyp17a1F:TTTCTCCGCTCCTCATCCCTR:GCACAAACCATCACCCTCCTNM_212806.3182cyp19a1a F:CTGGGTCCTGTTGTCTCCTACTR:CCAGTTTACTTCCAAAGCGTGANM_131154.3196hsd3b1F:CAGGCTGCCGATTTACTTTR:CCGTCCTGCTTGTAGATGTGNM_001386297.1140hsd17b1F:ATCCGCACCATACAGACCTTR:CTAGCACAGTAGACCTCGTTGANM_205584.2119ar F:ACCCGTCATCCGTACCCTAAR:TCACTCCTCCCTCCGTCAAANM_001083123.1104esr1F:GGCTGGAAGTGTTGATGATTGR:CGAGCCACAGTTGCTAAGAGNM_152959.1154ugt1a5F:ACTGTCGGAGTCATTGCTGCR:CACTTCTTTGCCAGAGGTTCATNM_001177340.2169sult1st7F:CCAATCCTCCCTGCCTATCTR:ACCACCCTTGAGTTCTGCTCNM_001139481.2174表2㊀1,3-二苯胍(DPG)对斑马鱼仔鱼生理参数的影响Table2㊀Effects of1,3-diphenyl guanidine(DPG)on physiological parameters of zebrafish larvae浓度/(mg㊃L-1) Concentration/(mg㊃L-1)72h孵化率/%72h hatching rate/%120h存活率/%120h survival rate/%120h体长/mmBody length/mm0.000093.33ʃ4.71100.00ʃ0.00 4.11ʃ0.131.5625100.00ʃ0.00100.00ʃ0.00 4.19ʃ0.123.125096.67ʃ2.3698.33ʃ2.894.14ʃ0.126.250095.00ʃ4.0898.33ʃ2.89 4.05ʃ0.0612.500098.33ʃ2.3698.33ʃ2.89 4.02ʃ0.1425.000091.67ʃ4.7198.33ʃ2.89 3.98ʃ0.15注:含1%CH3OH(VʒV)的溶剂对照设为浓度0.0000mg㊃L-1㊂270㊀生态毒理学报第18卷图1㊀300μg㊃L-11,3-二苯胍(DPG)暴露组与溶剂对照组的差异基因火山图注:红色的点表示上调基因,蓝色的点表示下调基因,灰色的点表示没有显著性变化的基因㊂Fig.1㊀V olcano plot of differentially expressed genes between the300μg㊃L-11,3-diphenyl guanidine(DPG)exposure groupand the solvent control groupNote:Red dots represent up-regulated genes,blue dots represent down-regulated genes,and grey dots represent genes with no significant change.(GO:0009988)及生殖过程的调控(GO:2000241);(3)与生殖细胞发育相关的生物学过程,包括:雌性配子产生(GO:0007292)㊁参与多细胞生物生殖的细胞过程(GO:0022412)㊁卵子发生(GO:0048477)㊁种质(GO: 0060293)㊁生殖细胞发育(GO:0007281)㊁极质(GO: 0045495)及多细胞生物生殖过程(GO:0048609)(表3)㊂进一步对差异基因进行GO富集分析发现,有17个与生殖发育相关的生物学过程被显著富集,主要分为两大类,一类是与精卵识别相关的生物学过程,包括:精子与透明带的结合(GO:0007339)㊁精卵识别(GO:0035036)㊁细胞识别(GO:0009988)㊁顶体反应的调节(GO:0060046)㊁顶体反应的正向调节(GO: 2000344)及顶体酶结合(GO:0032190);另一类是生殖细胞发育相关的生物学过程,包括:与生殖有关的发育过程(GO:0003006)㊁参与多细胞生物生殖的细胞过程(GO:0022412)㊁雌性配子产生(GO:0007292)㊁多细胞生物生殖(GO:0032504)㊁卵壳形成(GO: 0035803)㊁配子产生(GO:0007276)㊁卵子发生(GO: 0048477)㊁生殖细胞发育(GO:0007281)㊁生殖过程(GO:0022414)㊁生殖(GO:0000003)及有性生殖(GO:表3㊀300μg㊃L-1DPG暴露组GSEA的GO富集分析Table3㊀GO enrichment analysis of GSEA in300μg㊃L-1DPG-treated group类别Category 生物学过程Term描述Description校正的P值PadjustBP GO:0007292雌性配子产生Female gamete generation0.0072BP GO:0022412参与多细胞生物生殖的细胞过程Cellular process involved in reproduction in multicellular organism0.0087BP GO:0007339精子与透明带的结合Binding of sperm to zona pellucida0.0093 BP GO:0048608生殖结构发育Reproductive structure development0.0119 BP GO:0061458生殖系统发育Reproductive system development0.0119 BP GO:0045137初级性特征的发育Development of primary sexual characteristics0.0132 BP GO:0048477卵子发生Oogenesis0.0144 BP GO:0035036精卵识别Sperm-egg recognition0.0146 BP GO:0009988细胞识别Cell-cell recognition0.0190 BP GO:2000241生殖过程调控Regulation of reproductive process0.0199 BP GO:0008406性腺发育Gonad development0.0206 CC GO:0060293种质Germ plasm0.0301 BP GO:0007281生殖细胞发育Germ cell development0.0314 BP GO:0046545雌性主要性征的发育Development of primary female sexual characteristics0.0348 CC GO:0045495极质Pole plasm0.0390 BP GO:0008585雌性性腺发育Female gonad development0.0391 BP GO:0048609多细胞生物生殖过程Multicellular organismal reproductive process0.0462 BP GO:0007530性别决定Sex determination0.0499注:BP是指生物学过程(biological process),CC是指细胞成分(cellular component)㊂第4期赵娟等:1,3-二苯胍对斑马鱼早期生命阶段的影响271㊀0019953)(表4)㊂综合比较GSEA的GO富集分析及差异基因的GO富集分析发现,均富集到了7个相同的与生殖发育相关的生物学过程,包括:精卵识别(GO:0035036)㊁卵子发生(GO:0048477)㊁生殖细胞发育(GO:0007281)㊁雌性配子产生(GO:0007292)㊁参与多细胞生物生殖过程中的细胞过程(GO:0022412)㊁细胞识别(GO:0009988)及精子与透明带的结合(GO: 0007339)(图2)㊂2.3㊀与生殖细胞发育相关基因的表达在GSEA的GO富集分析及差异基因的GO富集分析中均富集到了与生殖细胞发育相关的生物学过程,因此选择了与生殖细胞发育相关的基因进行表达水平分析㊂通过3个暴露组的qPCR结果发现低浓度组sox9b(P<0.01)㊁zp3(P<0.001)㊁dmrt1(P <0.05)基因的表达水平显著下调,buc(P<0.05)基因的表达水平显著上调;中浓度组zp3(P<0.001)㊁dm-rt1(P<0.01)基因的表达水平显著下调;高浓度组zp3(P<0.001)㊁dmrt1(P<0.05)基因的表达水平显著下调,buc(P<0.05)及fshb(P<0.05)基因的表达水平显著上调;且高浓度组sox9b㊁buc及fshb基因的表达水平与RNA-seq结果一致(图3)㊂2.4㊀类固醇生物合成相关基因的表达类固醇激素在调控鱼类的生殖过程中有重要的作用[19],故选择了类固醇合成通路的相关基因进行表达水平分析㊂与溶剂对照组相比,低浓度组cyp17a1(P<0.01)㊁ar(P<0.001)㊁esr1(P<0.05)及sul1st7(P<0.001)基因表达水平显著下调;中浓度组ar(P<0.05)㊁esr1(P<0.05)及sult1st7(P<0.01)基因表达水平显著下调,cyp19a1a(P<0.05)㊁ugt1a5(P <0.05)基因表达水平显著上调;高浓度组sul1st7(P <0.05)基因表达水平显著下调,cyp11a1(P<0.01)㊁cyp17a1(P<0.001)㊁cyp19a1a(P<0.01)㊁hsd17b1(P< 0.001)及ar(P<0.01)基因表达水平显著上调;且cyp19a1a基因的表达水平随着暴露剂量的增加而增加;在3个暴露浓度下,hsd3b1的表达水平均无明显变化(图4)㊂将高浓度组的类固醇合成通路相关基因的RNA-seq和qPCR结果进行对比,发现hsd17b1㊁cyp11a1㊁cyp17a1㊁cyp19a1a㊁ar及ugt1a5基因的表达水平与RNA-seq结果一致(图5)㊂表4㊀300μg㊃L-1DPG暴露组差异基因的GO富集分析Table4㊀GO enrichment analysis of differentially expressed gene in300μg㊃L-1DPG-treated group类别Category 生物学过程Term描述Description校正的P值PadjustBP GO:0003006与生殖有关的发育过程Developmental process involved in reproduction0.0028BP GO:0022412参与多细胞生物生殖的细胞过程Cellular process involved in reproduction in multicellular organism0.0037BP GO:0007292雌性配子产生Female gamete generation0.0045 BP GO:0032504多细胞生物生殖Multicellular organism reproduction0.0045 BP GO:0035803卵壳形成Egg coat formation0.0079 BP GO:0007276配子产生Gamete generation0.0079 BP GO:0007339精子与透明带的结合Binding of sperm to zona pellucida0.0101 BP GO:0035036精卵识别Sperm-egg recognition0.0130 BP GO:0009988细胞识别Cell-cell recognition0.0159 BP GO:0048477卵子发生Oogenesis0.0169 BP GO:0007281生殖细胞发育Germ cell development0.0223 BP GO:0022414生殖过程Reproductive process0.0256 BP GO:0060046顶体反应的调节Regulation of acrosome reaction0.0284 BP GO:2000344顶体反应的正向调节Positive regulation of acrosome reaction0.0284 BP GO:0000003生殖Reproduction0.0303 BP GO:0019953有性生殖Sexual reproduction0.0326 MF GO:0032190顶体酶结合Acrosin binding0.0471注:BP是指生物学过程(biological process);MF是指细胞成分(molecular function)㊂272㊀生态毒理学报第18卷图2㊀差异基因的GO 富集分析与GSEA 的GO 富集分析结果对比(P adjust <0.05)注:点的大小和该点富集到的基因数目成正比,点的颜色与差异显著性成正比,颜色越红代表与溶剂对照组差异越显著㊂Fig.2㊀The contrast of GO enrichment analysis between DEGs and GSEA (P adjust <0.05)Note:The size of the dots was proportional to the number of genes enriched at the point,and the color of the dots was proportional to thedifference significance;the reder the color,the more significant the difference from the solvent controlgroup.图3㊀120hpf 斑马鱼仔鱼体内与生殖细胞发育相关基因的表达注:SK 表示含0.1%CH 3OH(V ʒV )的溶剂对照,*表示P <0.05,**表示P <0.01,***表示P <0.001㊂Fig.3㊀Expression of genes involved in germ cell development in larval zebrafish at 120hpf第4期赵娟等:1,3-二苯胍对斑马鱼早期生命阶段的影响273㊀图4㊀120hpf 斑马鱼仔鱼体内类固醇生物合成通路相关基因的表达注:SK 表示含0.1%CH 3OH(V ʒV )的溶剂对照,*表示P <0.05,**表示P <0.01,***表示P <0.001㊂Fig.4㊀Expression of genes involved in steroid biosynthesis pathway in larval zebrafish at 120hpfNote:SK stands for solvent control containing 0.1%CH 3OH (V ʒV );*represents P <0.05,**represents P <0.01,and ***represents P<0.001.图5㊀通过RNA 测序和qPCR 检测DPG 暴露后斑马鱼仔鱼中类固醇生物合成通路相关基因的mRNA 水平注:*表示P <0.05,**表示P <0.01,***表示P <0.001㊂Fig.5㊀The mRNA levels of genes involved in steroid biosynthesis pathway in zebrafish larvae determined usingRNA sequencing and qPCR after DPG exposure274㊀生态毒理学报第18卷2.5㊀性激素水平测定通过性激素水平测定进一步验证DPG 的暴露对斑马鱼生殖发育的影响㊂与溶剂对照组相比,3个浓度组的斑马鱼仔鱼体内的雌二醇水平均出现了显著上升(低浓度组P <0.05,中浓度组及高浓度组P <0.01),而睾酮水平无明显变化,高浓度组雌二醇与睾酮的比值显著增加(P <0.05),且雌二醇与睾酮的比值与暴露浓度之间存在剂量响应关系,即雌二醇与睾酮的比值随着暴露浓度的增加而增加(图6)㊂3㊀讨论(Discussion )在DPG 对斑马鱼胚胎及仔鱼的急性毒性实验中,与溶剂对照组相比,在设计的最高浓度25mg ㊃L -1下,DPG 对斑马鱼胚胎及仔鱼的孵化率(72h)㊁存活率(120h)及体长(120h)均没有显著影响,表明DPG 对斑马鱼胚胎及仔鱼的120h -LC 50>25mg ㊃L -1㊂参照我国‘危险化学品鱼类急性毒性分级试验方法“(GB/T 21281 2007)[35],当10.0mg ㊃L -1ɤ96h -LC 50ɤ100.0mg ㊃L -1为急性毒性三级,推测DPG 对斑马鱼的急性毒性为低毒㊂进一步对高浓度暴露组的斑马鱼仔鱼进行转录组测序分析,从分子水平来揭示其潜在的毒性作用机制㊂从转录组测序结果分析,DPG 高浓度暴露组使与生殖发育相关的生物学过程被显著富集,包括:精卵识别(GO:0035036)㊁卵子发生(GO:0048477)㊁生殖细胞发育(GO:0007281)㊁雌性配子产生(GO:0007292)㊁参与多细胞生物生殖过程中的细胞过程(GO:0022412)㊁细胞识别(GO:0009988)及精子与透明带的结合(GO:0007339)(图2)㊂这表明DPG 的暴露会影响斑马鱼的生殖发育㊂将10mg ㊃L -1降解较差的医用口罩(PDM)暴露于斑马鱼胚胎及仔鱼10d ,发现PDM 可显著富集斑马鱼仔鱼中与生殖相关的生物学过程:精子与透明带的结合㊁顶体反应的正向调节和卵壳形成;而将同等浓度高度降解的医用口罩(HDM)暴露于斑马鱼胚胎及仔鱼10d ,发现HDM 也可显著富集斑马鱼仔鱼中与生殖相关的生物学过程:极粒组织㊁参与配子生成的DNA 甲基化㊁卵壳形成㊁顶体反应的正向调节㊁精子与透明带的结合㊁配子生成㊁减数分裂的核分裂㊁卵子发生㊁生殖细胞发育㊁精子细胞发育㊁减数分裂细胞周期和精子发生[36]㊂这与本研究结果类似㊂虽然转录组测序结果是可靠的,但是因其在数据采集过程中固有的随机抽样过程导致转录组数据具有测量噪声[37],并且由于转录组测序和qPCR 在检测方法及基因表达定量上的不同,因此可能会出现转录组测序结果与qPCR 结果不一致的情况㊂相比较而言,针对特定基因的qPCR 的结果具有更高的准确性㊂因此,转录组测序结果需要qPCR 进一步验证㊂通过转录组分析结果,选择与生殖细胞发育相关的基因(sox9b ㊁buc ㊁zp3㊁dmrt1及fshb )进行表达水平定量分析㊂生殖细胞在斑马鱼性别分化中具有重要作用,生殖细胞缺陷会导致第二性征的性别逆转[38-39]㊂sox9是睾丸决定的重要调节因子,在斑马鱼中,sox9分为sox9a 和sox9b 这2个亚型,sox9a 在发育和成熟的睾丸中特异性表达,而sox9b 参与原始卵巢卵泡的发育[40],并且sox9b 对日本青鳉生殖细胞增殖具有重要作用[41];buc 通过调节种质mRNA 的表达来参与斑马鱼早期发育过程中的种质组装[42];dmrt1在脊椎动物的性别决定和性腺性别分化中起着至关重要的作用,对斑马鱼睾丸小管的正常发育和精子发生至关重要[43];zp3蛋白在斑马鱼卵母细胞中特异性表达,是主要精子受体并能图6㊀斑马鱼体内的雌二醇水平(a )㊁睾酮水平(b )和斑马鱼体内雌二醇与睾酮的比值(c )注:SK 表示含0.1%CH 3OH(V ʒV )的溶剂对照,*表示P <0.05,**表示P <0.01㊂Fig.6㊀Estradiol levels (a),testosterone levels (b)and the ratio of estradiol to testosterone (c)in zebrafish。
木香及藏木香挥发油对斑马鱼胚胎发育毒性研究
木香及藏木香挥发油对斑马鱼胚胎发育毒性研究杨雨婷;何贝轩;彭成;张雪;卢俊宇;熊亮;何育霖;曹治兴【摘要】目的:以斑马鱼胚胎为模型,研究木香及藏木香挥发油对斑马鱼胚胎发育毒性及心脏发育毒性的影响.方法:采用斑马鱼胚胎模型,将其暴露于含有不同浓度(50、25、12.5、6、3、1.5mg·L-1)的木香及藏木香挥发油中培养96h,于24,48,72,96hpf观察斑马鱼胚胎发育形态,畸形率,24hpf摆尾率,48hpf心率及各时间点的死亡率.结果:24hpf,藏木香挥发油和木香挥发油对斑马鱼胚胎毒性的LC50分别为12.71、44.88mg·L-1;96hpf藏木香挥发油和木香挥发油对斑马鱼胚胎毒性的LC50分别为7.11、17.18mg·L-1.在6mg·L-96hpf藏木香挥发油胚胎发育主要表现为脊柱侧弯、心脏水肿、卵黄囊水肿;而相同浓度、相同剂量的木香挥发油则未监测到该现象.12mg·L-1藏木香挥发油可致斑马鱼摆尾次数和心率明显下降(P＜0.01),木香挥发油则无明显影响(P＞0.05).结论:藏木香和木香挥发油对斑马鱼毒性大小:藏木香挥发油＞木香挥发油.【期刊名称】《中国民族民间医药》【年(卷),期】2016(025)001【总页数】3页(P23-25)【关键词】藏木香挥发油;木香挥发油;斑马鱼;胚胎发育毒性【作者】杨雨婷;何贝轩;彭成;张雪;卢俊宇;熊亮;何育霖;曹治兴【作者单位】成都中医药大学,四川成都611137;中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地,四川成都610075;成都中医药大学,四川成都611137;成都中医药大学,四川成都611137;中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地,四川成都610075;成都中医药大学,四川成都611137;中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地,四川成都610075;成都中医药大学,四川成都611137;成都中医药大学,四川成都611137;中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地,四川成都610075;成都中医药大学,四川成都611137;成都中医药大学,四川成都611137;中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地,四川成都610075【正文语种】中文【中图分类】R285.5斑马鱼是鲤科短担尼鱼属，原产于南亚，是一种常见的热带鱼。
有机助溶剂对血管生成斑马鱼模型的适用性研究
有机助溶剂对血管生成斑马鱼模型的适用性研究王思锋;王希敏;侯海荣;刘可春;韩利文;陈锡强;王雪【期刊名称】《实验动物与比较医学》【年(卷),期】2008(28)4【摘要】目的研究二甲基亚砜、丙酮、甲醇、异丙醇四种有机溶剂在斑马鱼模型抗血管生成药物筛选中作为助溶剂的适用性.方法以每种有机溶剂系列浓度处理发育12h或24h斑马鱼胚胎,到发育72 h观察胚胎血管生成、畸形、死亡状况,计数体节问血管,并计算畸形率和死亡率.结果有机溶剂中存活的斑马鱼胚胎体节间血管形态和数量正常,与对照一致.0.1%浓度二甲基亚砜、丙酮和1%浓度甲醇中斑马鱼胚胎无畸形和死亡状况,但随着浓度上升畸形率和死亡率均显著高于对照.0.1%浓度异丙醇中斑马鱼胚胎的畸形率和死亡率已显著高于对照.结论作为助溶剂,二甲基亚砜、丙酮适宜浓度为≤0.1%,甲醇适宜浓度为≤1%,异丙醇不适合用于斑马鱼模型抗血管生成药物筛选.【总页数】5页(P238-242)【作者】王思锋;王希敏;侯海荣;刘可春;韩利文;陈锡强;王雪【作者单位】山东省科学院生物研究所,山东省科学院药物筛选研发平台,济南,250014;山东省科学院生物研究所,山东省科学院药物筛选研发平台,济南,250014;山东省科学院生物研究所,山东省科学院药物筛选研发平台,济南,250014;山东省科学院生物研究所,山东省科学院药物筛选研发平台,济南,250014;山东省科学院生物研究所,山东省科学院药物筛选研发平台,济南,250014;山东省科学院生物研究所,山东省科学院药物筛选研发平台,济南,250014;山东省科学院生物研究所,山东省科学院药物筛选研发平台,济南,250014【正文语种】中文【中图分类】R965.1【相关文献】1.盐酸肾上腺素诱导建立斑马鱼血栓模型的优化与适用性研究 [J], 樊娇娇;林瑞超;李发荣;赵崇军;徐柯心;杨冉;乔艺涵;倪媛媛;王雨彤;马志强2.斑马鱼血栓模型在中药抗血栓活性筛选中的适用性研究 [J], 樊娇娇;乔艺涵;赵崇军;倪媛媛;杨冉;冯娅茹;马志强;林瑞超3.基于斑马鱼模型羟苯磺酸钙抑制高糖环境血管生成及机制研究 [J], 唐志宇;邓杰强;王猛;左玲;吴金峡4.利用斑马鱼模型与代谢组学技术研究瓦他拉尼抑制血管生成的作用及其机制 [J], 吴晓敏;董榕;陈善军;刘拥军;杨官娥;韩利文5.基于斑马鱼模型对α-倒捻子素抗血管生成活性的初步探讨 [J], 李增光因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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第28卷 第6期2009年 11月环 境 化 学E NV I RONMENTAL C H E M I STRY V o.l 28,N o .6N ove m ber 20092009年2月10日收稿.*湖北省科技攻关计划(N o .2006AA301C35)和国家科技支撑计划(N o 2007BAC27B01)资助.**通讯联系人.助溶剂甲苯和二甲基亚砜对斑马鱼胚胎发育的复合毒性效应*李 佳1 周 珍1 胡 芹2 王 玥1 梁 勇1,3**(1 江汉大学医学院,武汉,430056;2 华中农业大学资源与环境学院,武汉,430070;3 中国科学院生态环境研究中心,环境化学与生态毒理学国家重点实验室,北京,100085)摘 要 研究了甲苯和二甲基亚砜(DM S O )对斑马鱼胚胎生长、发育的毒性效应.实验结果表明:低剂量的甲苯(0 05%)单一暴露对斑马鱼胚胎发育有一定毒性,DM S O (0 45%)对斑马鱼胚胎无明显毒性;但甲苯与D M SO 具有较强的复合毒性效应,随着D M S O 含量的增加,与甲苯单一暴露组相比,斑马鱼胚胎死亡率显著增加、胚胎孵化率下降、胚胎发育迟缓并生成大量畸形;但甲苯以及甲苯和DM SO 复合物对人胚肾HEK 293细胞株和人胃癌SGC 7901细胞株的活力均没有明显效应.D M S O 可通过提高甲苯在水中的分散性,增加甲苯的神经毒性,但对离体实验模型无显著效应,故在选择不同生物模型评估有机污染物毒性效应时,需考虑不同类型助溶剂所产生的复合效应,以减少实验误差.关键词 甲苯,二甲基亚砜,斑马鱼,毒性. 常用的助溶剂二甲基亚砜(DM SO)、丙酮、乙醇等在常用的浓度下,对环境毒理学常用的模式动物如鱼类、两栖类等没有明显的毒性效应[1].为评估二英、多氯联苯、多溴联苯醚中某些高氯代、高溴代异构体的生物效应,在常规的D M SO 溶剂中,会适当添加少量的甲苯、正己烷等极性低的有机溶剂,以增加其溶解性[2 5],但这些已知具有较高毒性的溶剂与其它助溶剂之间是否存在相互作用,并对实验结果造成偏差,需要加以评估.甲苯作为一种常见的有机溶剂,其脂溶性高,挥发性较强,可通过鳃、体表进入鱼体,能轻易透过血脑屏障,进而抑制乙酰胆碱酯酶活性,并造成神经系统功能损伤、影响神经系统发育,具有明显的神经毒性效应[6,7].斑马鱼胚胎发育毒性技术是国际认可的评价化学品毒性效应的标准方法[1,8 10].在本研究中,选取低剂量的甲苯(0 05%)和不高于0 45%的DM SO,研究助溶剂单一、复合暴露后,对斑马鱼胚胎发育的毒性效应;同时,为进一步验证斑马鱼胚胎毒性实验结果,选择人胚肾293细胞株和人胃癌7901细胞株,研究助溶剂对离体细胞活力的影响,以综合评价其毒性效应.1 实验方法1 1实验材料将性成熟斑马鱼(Danio rerio ,AB 系)雌雄分缸,饲养于流水养殖系统.水温保持在26 2 左右,光照/黑暗周期控制在12h /12h .暴露实验开始前两天将雌雄以1 2配对,自然交配产卵.取受精1hpf(hour post fertilization)以内受精卵进行暴露实验.1 2暴露实验挑选正常发育的受精卵,3hpf 开始染毒进行暴露实验.实验于直径为7c m 的玻璃表面皿中进行,所用水均取自系统曝气水.试验浓度为:0(对照组)、0 05%甲苯、0 45%DM SO 、0 1%(D M SO +甲苯)、0 3%(DMSO+甲苯)和0 5%(D M SO +甲苯)(V /V ).其中,3种助溶剂复合物(DM SO +甲苯)分别由甲苯与D M SO 按不同体积比(1 1,1 5,1 9)混合配制而成,各助溶剂复合物试验组中甲834环 境 化 学28卷苯的浓度均为0 05%,D M SO浓度分别为0 05%,0 25%,0 45%.每个试验浓度均设3个平行组,每个平行组含25粒卵.同样的暴露实验重复两次.暴露实验每天定时更新一半染毒溶液,同时挑出死亡个体.水温保持在26 2 左右,光照/黑暗周期控制在12h/12h.在特定时间段(受精后12h,36h,60h,84h,108h,132h,156h等)对染毒斑马鱼胚胎死亡数、孵化数进行统计.观察胚胎的形态变化,如:发育停滞、心包水肿、卵黄水肿、脊柱卷曲等畸形状况.1 3 细胞毒性实验MTT比色法测定细胞活力.人胚肾HEK 293细胞株和人胃癌SGC 7901细胞株分别使用DME M 培养基和RP M I1640培养基进行培养.用0 25%胰蛋白酶消化处于对数生长期的细胞,加入新鲜培养基轻轻吹打制成细胞悬液,用血细胞记数板计算细胞密度,用培养基稀释到1 105个 m l-1,然后以每孔5 103个接种到96孔板,每孔含200 l培养基.37 培养箱中培养12h,细胞贴壁后,吸去培养基,分别加入含0(对照组)、0 05%甲苯、0 45%D M SO、0 1%(DM SO+甲苯)、0 3%(D M SO+甲苯)和0 5%(D M SO+甲苯)(V/V)的含1%胎牛血清的无酚红培养基180 ,l分别暴露24h和48h.暴露结束后每孔加入5m g m l-1MTT溶液20 l继续培养4h.小心吸尽孔内培养液,然后每孔加入150 lDM SO,轻轻振荡5m i n,使结晶物充分溶解,在酶标仪上于490nm波长处测定各孔吸光度值(A).每个试验组设置8个平行孔.采用SPSS10 0分析全部数据,实验结果用平均值 标准误差表示.2 结果与讨论2 1 甲苯和D M SO对斑马鱼胚胎发育的影响甲苯和D M SO复合暴露对斑马鱼胚胎的致死效应如图1A所示.与对照组相比,随着暴露时间的延长,0 45%DM SO单一暴露组对斑马鱼胚胎没有显著致死效应,0 05%甲苯单一暴露组的胚胎死亡率为12%(156hpf),0 1%(D M SO+甲苯)助溶剂复合物对斑马鱼胚胎的死亡率无明显效应;但0 3% (D M SO+甲苯)和0 5%(DM SO+甲苯)助溶剂复合物可明显提高斑马鱼胚胎的死亡率,暴露到156hpf时,0 3%(DM SO+甲苯)助溶剂复合物可造成39%的斑马鱼胚胎死亡,而0 5%(D M SO+甲苯)暴露组斑马鱼胚胎死亡率为74%,这表明,随着助溶剂复合物中D M SO含量的增加,斑马鱼胚胎的死亡率显著上升.图1 甲苯和DM SO复合暴露对斑马鱼胚胎死亡率(A)和孵化率(B)的影响Fig 1 E ffec ts o f to l uene and DM SO co m bined exposure on m orta liti es(A)and ha tch i ng rate(B)o f zebra fi sh e m bryos甲苯和D M SO各暴露组对斑马鱼胚胎孵化率的影响如图1B所示.对照组斑马鱼胚胎48hpf时开始出膜,胚胎发育到60hp f时,80%的胚胎均已正常孵化出膜,84hpf时,所有对照组胚胎均已孵化出膜,胚胎孵化率为100%.与对照组相比,DM SO单一暴露组、0 1%(DM SO+甲苯)助溶剂复合物6期李佳等:助溶剂甲苯和二甲基亚砜对斑马鱼胚胎发育的复合毒性效应835暴露组的斑马鱼胚胎总孵化率均无显著差异,0 05%甲苯暴露组的胚胎孵化率为92%,但各暴露组斑马鱼胚胎在60hpf和84hpf时的孵化率均显著低于对照组,说明D M SO和甲苯均可阻碍斑马鱼正常胚胎发育.另外,与对照组以及甲苯、D M SO单一暴露组相比,0 3%(DM SO+甲苯)和0 5%(D M SO +甲苯)助溶剂复合物暴露组的胚胎孵化率显著降低,暴露到108hp f时,0 5%(DM SO+甲苯)暴露组的胚胎孵化率仅为37%.上述结果说明,DM SO和甲苯对斑马鱼胚胎发育存在明显的复合毒性效应,随着助溶剂复合物中D M SO比例的增加,DM SO和甲苯复合物可显著降低斑马鱼胚胎孵化率并造成大量斑马鱼胚胎死亡.在实验过程中,我们还发现甲苯以及甲苯和DM SO复合物可造成斑马鱼胚胎发育迟缓并造成大量的畸形.如图2所示,与对照组(图2A、C)相比,0 05%甲苯、0 1%(DM SO+甲苯)、0 3%(D M SO +甲苯)和0 5%(D M SO+甲苯)实验组的斑马鱼胚胎均出现不同程度的发育停滞(图2B),并可观察到心包、卵黄水肿(图2D、E)、尾巴弯曲(图2F)等畸形现象.甲苯、DM SO阻碍斑马鱼胚胎发育并造成斑马鱼胚胎发育畸形的具体数据如表1所列.与DM SO、甲苯复合物对斑马鱼胚胎孵化率、死亡率的结果相同,随着助溶剂复合物中DMSO比例的增加,DM SO、甲苯复合物可显著阻滞斑马鱼胚胎的正常发育,并造成大量的胚胎畸形.图2 甲苯和D M S O复合暴露组斑马鱼胚胎畸形现象A 正常鱼卵B 发育停滞C 正常鱼体D 心包水肿E 心包、卵黄水肿F 尾巴弯曲Fig 2 M orpho log i ca l develop ment o f nor m a l and m a lf o r m ed embryo s i n to l uene and DM S O comb i ned exposure groups表1 甲苯和DM SO复合暴露对斑马鱼胚胎发育的影响(n=75)(单位:个)T ab le1 Comb i ned e ffect o f to l uene and DM SO exposure on dev elopment o f zebra fi sh e m bryos(n=75)发育畸形0 45%DM SO0 05%甲苯0 1%(D M SO+甲苯)0 3%(DM SO+甲苯)0 5%(DM SO+甲苯)发育停滞0802327心包水肿0802112卵黄水肿010111尾巴弯曲0501626注:1个斑马鱼胚胎可同时具有几种畸形现象.甲苯以及甲苯和D M SO复合物对斑马鱼胚胎发育的毒性结果表明,低剂量的甲苯(0 05%)单一暴露对斑马鱼胚胎具有较小毒性,但甲苯与DM SO混合物对斑马鱼胚胎具有很强的复合毒性效应.甲苯的神经毒性效应主要表现为抑制生物体内乙酰胆碱酯酶活性,并干扰神经系统的正常发育,但其急性毒性较低,大鼠经口LD50为5500m g kg-1,LC50为17020m g m-3,小鼠经口LD50为8000 m g kg-1,LC50为25900m g m-3[11],而D M SO在低于0 5%的浓度下基本没有毒性效应,被认为是适用于生物分析的有机溶剂[12].实验结果也表明,低剂量的甲苯(0 05%)可降低斑马鱼胚胎的孵化率,并可造成胚胎发育畸形,这与甲苯可干扰斑马鱼胚胎神经系统发育相关.由于甲苯在水中的分散性差,静置一段时间后,在液面表层聚集形成一些小的油滴,而未出膜和刚出膜的斑马鱼胚胎不能在水中自由游泳,故甲苯进入斑马鱼胚胎体内的途径主要是吸附在斑马鱼胚胎卵壳上,并进一步渗透进入斑马鱼体内,结果造成部分斑马鱼胚胎发育迟缓并出现严重的畸形.DM SO作为一种水溶性的化合836环 境 化 学28卷物,同时能溶解甲苯,显著提高甲苯在水中的分散性.甲苯和DMSO复合暴露实验中,当DM SO和甲苯的比例为1 1时,助溶剂混合物对斑马鱼胚胎的死亡率、孵化率均无明显作用,也未观察到斑马鱼胚胎发育畸形,在表面皿表层无甲苯油滴的形成.但与之相对应的是,进一步增加DM SO和甲苯复合暴露中D M SO的比例(5 1和9 1),斑马鱼胚胎的孵化率下降,出膜时间延迟,发育停滞,并出现多种严重的畸形,胚胎的死亡率显著升高.可能的原因是:尽管甲苯对鱼类的毒性较大,但在单一暴露条件下,由于甲苯在水中的分散性很差,低浓度的甲苯较少进入胚胎或幼鱼体内,相应产生的毒性较低,但随着溶液中DM SO含量的升高,甲苯在水溶液中的分散性增加,进而促进了斑马鱼胚胎及幼鱼通过卵壳、体表、鳃等对甲苯的吸收,最终产生非常明显的毒性效应.2 2 甲苯和D M SO对体外培养细胞活力的影响甲苯和D M SO对人胚肾HEK 293细胞和人胃癌SGC 7901细胞的活力影响如图3所示.与斑马鱼胚胎发育毒性实验结果不同的是,甲苯和DM SO单一、复合暴露24h和48h后,对人胚肾H E K 293细胞和人胃癌SGC 7901细胞的活力均未造成显著影响,这说明甲苯以及甲苯、DMSO复合物对体外培养的细胞株没有明显的毒性效应.甲苯作为一种脂溶性的毒物,主要作用位点是神经系统,对神经细胞如海马细胞等具有一定的毒性效应,但对其它种类的细胞株影响较小[10].实验结果表明,D M SO和甲苯复合暴露可显著抑制斑马鱼胚胎发育,但甲苯、DMSO单一、复合暴露对人胚肾HEK 293细胞以及人胃癌SGC 7901细胞的细胞活力均无明显效应,这也从侧面反映了甲苯主要通过干扰神经系统发育而造成斑马鱼胚胎发育异常及死亡.图3 甲苯和D M S O对H E K 293(A)和SGC 7901(B)细胞活力的影响S1:0 05%甲苯,S2:0 45%D M SO,S3:0 1%(D M SO+甲苯),S4:0 3%(DM SO+甲苯),S5:0 5%(D M SO+甲苯)Fig 3 E ff ec ts o f to l uene and DM SO co m bined exposure on ce ll acti va ti on o fHEK293(A)and S G C7901(B)3 结论实验结果证实DM SO可通过增加甲苯在水中的分散性,显著提高低浓度甲苯(0 05%)对斑马鱼胚胎的毒性效应,DM SO和甲苯存在明显的复合毒性效应.利用离体实验模型评估D M SO和甲苯的毒性效应时,因助溶剂本身的靶分子、致毒机制不同,对人胚肾HEK 293细胞和人胃癌SGC 7901细胞两种细胞株的毒性较低,并不影响最终的实验结果及分析.故在选择不同生物模型评估有机污染物毒性效应时,需考虑不同类型助溶剂所产生的复合效应.参 考 文 献[1] H allare A,NagelK,K h l erH et al ,Co m parative Em bryot oxici ty and Proteotox i cit y of Three Carri er Solven ts to Zeb rafis h(Dan i o reri o)Em bryos E cot ox i cology and Env i ronm e n t a l Safet y,2006,63(3) 378 388[2] A sariM,T akats uk iH,Ya m azak iM et al ,W asteW ood Recycli ng as An i m alB edding and Devel op m en t of B i o m on it ori ng ToolU s i ng t h eCALUX Assay Env ironm ent In t erna tional,2004,30(5) 639 649[3] S ci ppoM,E pp e G,D e P E et al ,DR CALUX Screen i ng of Food Sa m p l es:Eval uati on of theQu antit ati ve Approac h toM eas u re D i ox i n,Furans and D ioxi n Li k e PCB s Ta l an t a,2004,63(5) 1193 12026期李佳等:助溶剂甲苯和二甲基亚砜对斑马鱼胚胎发育的复合毒性效应837[4] V an W N,W i ndal I,Vand erperren H et al ,Vali dati on of t he CALUX B ioass ay for PCDD/F Analyses i n Hum an B lood P l as m a and Co mp ari on w it h GC HR M S Talanta,2004,63(5) 1157 1167[5] H a m ers T,Van Schaard enbu 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toluene(0 05%V/V)had lo w tox icity to the zebrafish e mbryon ic developm en,t wh ile DM SO(0 45%V/V)by itself pr oduced no observable effect But t h e t w o solvents together sho w ed strong synergistic tox ic ity Co m pared to t h e to l u ene sing le expo sure con tro l group,w ith the i n crease o fDMSO concentration,the e m bryos sho w ed sign ificant reduction in sur vival and hatch i n g rate,retarded e mbryon ic develop m ent and pronounced abnor m aliti e s On t h e contrary,no such effectw as recor ded w it h hum an e m br yon ic k i d ney(H EK 293)ce ll li n e and hu m an gastric cancer(SGC 7901)cell li n e The resu lts suggested that D M SO could enhance the neurotox i c ity o f to l u ene by increasing the dispersi o n in w ater,but there is no re m ar kable effect on the in vitro m odel B ased on t h e study,w hen using of different b i o log ica lm odels to assay the tox ic ity of o r gan ic co m pounds,the co m b i n ed effects of coso lvents shou l d be consi d ered to m i n i m ize experi m ental errorK eyw ords:toluene,D M SO,zebrafish,tox icity.。