DIC实验室诊断

研究血栓与止血性疾病与临床各类疾病
特 别 是 临 床 各 类 疾 病 引 起 的 DIC 或 前
DIC(Pre-DIC) 状 态 的 发 病 机 制 ， 诊 断 和
防治方面有重要价值，现将较为常用的
方法介绍如下：
（一）内皮细胞受损标志物检测
1、内皮素(ET-1)检测： 临床意义：内皮素是迄今为止最强的收缩
箱、到时未立即观察结果等，均会导致假阴性 结果。
3.若水浴温度太低或纤维蛋白原的含量过低， 都会造成假阴性结果。
• [参考值] 正常人3P试验阴性。
• [临床意义] 阳性见于DIC的早期或中期；但 本试验假阳性常见于大出血（创伤、手术、咯 血、呕血）和样品置冰箱后测定等。阴性见于 正常人、DIC晚期和原发性纤溶症。如用连续 稀释硫酸鱼精蛋白副凝固试验（SDPST）， 其结果较3P试验敏感。
• e. AT-Ⅲ活性<60%（不适用肝病）或蛋 白（PC）活性降低。
• f. 血浆纤溶酶原抗原（PLG：Ag） <200ml/L。
• g. 因子Ⅷ：C活性<50%（肝病必备）。
• h. 血 浆 内 皮 素 -1 （ ET-1 ） 水 平 >80pg/ml 或 凝 血 酶 调 节 蛋 白 （ TM ） 较 正常增高二倍以上。
• 1、 蛋白C（PC）测定 • 临床意义：先天性PC缺陷患者表现为反复原因
不明的血栓形成；PC:Ag及其活性增加多见于 冠心病、糖尿病、肾病综合征、妊娠后期等情 况。 • 正常参考值： （1）抗原（PC:Ag）测定 电 泳 法 为 102.5±20.1% ， 放 免 法 为 3.1±0.5μg/ml。 • （ 2 ） 活 性 测 定 发 色 底 物 法 参 考 值 (64 ～ 147)%。
浓度的已知因子Ⅷ含量的标准血浆混合后测定 APTT，绘制标准曲线；测定患者血浆同乏因子 基质血浆混合后的APTT，通过曲线查结果。
• [注意事项] 乏因子基质血浆活性<1％，其它因子正常；
所有标本检测前冰水浴；正常混合血浆>30人。
• [参考值] 79%-128%
• [临床意义] 血浆中凝血因子Ⅷ活性增 高，主要见于血栓前和血栓状态。
7． 血浆因子Ⅷ促凝活性检测
[原理] 在缺乏因子Ⅷ的血浆中，加入正 常血浆或病人的受检血浆，观察APTT的 结果值，依据实验室制定的标准曲线， 可以计算出病人受检血浆中凝血因子的 含量。
[材料] 乏因子Ⅷ基质、APTT试剂、缓 冲液、正常血浆、水浴箱、秒表等。
• [操作]（一期法） 将乏因子基质血浆与经过倍比稀释成不同
三、DIC简易判断标准
• 1. Plt、PT、Fbg。 • 2. TT、D-D、3P。 • 上述1三项或两项加2一项结合临床可考
虑诊断。
四、DIC一般诊断标准（全国第六届血栓与止血会议1999）
• 1、存在易致DIC的基础疾病：如感染、恶性肿 瘤、病理产科、大型手术及创伤等。
• 2、有下列二项以上临床表现： • a．严重或多发性出血。 • b．不能用原发病解释的微循环障碍或休克。 • c．广泛性皮肤、粘膜栓塞、灶性缺血性坏
• 2、 组织因子抑制物（TFPI）检测 • 临床意义：有报道Pre-DIC状态患者TF增高，
TFPI水平正常，TF/TFPI比率增高。 • 正常参考值：60～80ug/L（ ELISA法）
• 3、 D二聚体测定 • 临床意义：90～98%DIC患者D二聚体增高；是
纤维蛋白降解产物中的聚合物，在原发性纤溶 症为纤维蛋白原降解故呈阴性。 • 正常参考值：乳胶法为阴性(小于0.5mg/L)； ELISA法：0.5mg/L
正常尿液参考值：25.4±10.3ng/mg。
3、可溶性纤维蛋白单体复合物（SFMC）测定：
• 临床意义：有报道该检查在前DIC状态，阳性 诊断率为87%，敏感性为91%，特异性为83%。
参考值ELISA法：48.5±15.6g/L；
凝集法： 阴性。
• 4、凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物测定（TAT）： 临床意义：可敏感反映凝血酶的生成，增高多 见于AMI、不稳定性心绞痛、妊高征等疾病以 及DIC。
一、DIC常用检测方法(一）
1．血小板计数
3．APTT
2．PT 4．Fbg
5．D-D
DIC常用检测方法（二）
•6. TT • 7. Ⅷ：C 8. AT:A 9. 3P
6. 凝血酶时间（TT）测定 • [原理] 在血浆中加入“标准化”的凝血
酶溶液后，血浆凝固所需的时间。
[材料] 0.13mol/L枸橼酸钠溶液；凝血酶溶 液；正常血浆；水浴箱、秒表等。
• [材料] 10g/L硫酸鱼精蛋白、阳性对照 血浆、水浴等。
• [操作] 贫血小板0.5ml于试管中37℃水浴 3min；加硫酸鱼精蛋白溶液0.05ml混匀， 37℃15min，立即观察结果。
• [注意事项] 1.本试验需用枸橼酸钠抗凝，不能用草酸盐、
肝素或EDTA盐等做抗凝剂。 2.抽血不顺利、抗凝不完全、标本保存于冰
• b. 血浆纤维蛋白原含量<1.5g/L（肝病 <1.0g/L，白血病<1.8g/L）或>4.0g/L， 或呈进行性下降。
• c. 3P试验阳性，或血浆FDP>20mg/L （肝病>60mg/L）或血浆D—D水平较正 常增高4倍以上（阳性）。
• d. PT延长或缩短3秒以上（肝病 >5 秒），APTT延长10秒以上或缩短5秒以 上。
• [临床意义] TT延长多见于肝素增多或类 肝素抗凝物质存在，如系统性红斑狼疮、 肝病或肾病等；低（无）纤维蛋白原血 症，异常纤维蛋白原血症；FDP增多等。
• [评价] 过高、过低Fg可影响结果；过多 FDP和类肝素造成TT延长，可用鱼精蛋 白或蛇毒时间测定纠正及鉴别；TT可作 为临床尿激酶等溶栓及肝素等抗凝治疗 的监护指标。
8．抗凝血酶活性（AT:A）检测
• [原理] 发色底物法
在待测血浆中加入过量的凝血酶， 凝血酶与血浆中的AT形成1：1的复合物， 剩余的凝血酶作用于显色肽，裂解出显 色基因对硝基苯胺（PNA），显色程度 与剩余凝血酶的量呈正相关，而与血浆 AT：A呈负相关。
• [材料] 缓冲液、凝血酶、发色底物、 标准血浆、终止液。
1、 血小板α颗粒释放物质的测定 临床意义：血小板β-TG及PF4活性增高主要见于
各类引起血小板过度激活及消耗性疾病如DIC 时。
正常参考值： β-TG 25.3±3μg/L， PF4 3.2±0.8μg/L 2、 血小板膜及血浆血小板α-颗粒膜蛋白测定 临床意义：DIC时由于体内凝血酶大量形成，激
• [操作] 制备标准曲线：稀释标准血浆加 入酶标板；同时稀释待测血浆；加入过 量凝血酶；混匀，37℃湿盒30min；加 入发色底物，混匀3min后加终止液；酶 标仪测定数据。
• [注意事项] 不能用肝素抗凝；标本不能 反复冻融，检测前应快速解冻；每次检 测均需做标准曲线。
• [参考值] 108.5%±5.3％。
死、脱落及溃疡形成，或不明原因的肺、肾、 脑等脏器功能衰竭。 • d．抗凝治疗有效。
• 3、实验检查符合下列条件
• （1）同时有下列三项以上实验异常：
• a. 血 小 板 计 数 进 行 性 下 降 < 100×109/L （ 白 血 病 、 肝 病 <50×109/L）。或下列二项以上血小板 活化分子标志物血浆水平增高：β-TG； PF4；TXB2；GMP-140。
血管物质， 其在血浆中水平增高，反 映血管内皮损伤。 正常参考值：50.8±7.58pg/ml (放射免疫 法) 2、凝血酶调节蛋白（TM）测定： 临床意义：TM是血管损伤的分子标志物。 资料显示：90％以上DIC患者TM升高。 正常参考值：20～35μg/L(放射免疫法)。
（二）血小板激活分子标志物检测
弥散性血管内凝血实验室诊断
华中科技大学同济医学院
弥散性血管内凝血（DIC）是一种 在多种较严重疾病基础上发生的临床综 合征。以弥散性毛细血管微血栓形成及 继发性纤维蛋白溶解亢进为主要病理变 化。广泛出血、微循环衰竭及多脏器功 能不全为临床特征。
DIC改变几乎涉及到临床每一个专科，严 重危及患者的生命。因此近数十年来国内外学 者对于本病患者的血管、血小板、凝血及纤溶 功能进行了广泛、深入的研究，并在本症的诊 断与防治方面取得了较大进展。目前有关DIC 诊断的实验室检测甚多，但存在不少问题，如 部分特异性强、敏感度高的实验其不能及时提 供为临床结果而且价格昂贵，反之则特异性、 敏感性较差。
（2）疑难或特殊病例有下列二项以上异常：
• a ． 血 浆 凝 血 酶 原 碎 片 1+2 （ F1+2 ） 、 凝 血 酶—抗凝血酶复合物（TAT）或纤维蛋白肽A （FPA）水平增高。
• b. 血浆可溶性纤维蛋白单体复合物（SFMC） 水平增高。
正常参考值：
0.67±0.9nmol/L（ELISA法）
2、纤维蛋白肽A（FPA）检测：
• 临床意义： FPA可以敏感地表明血液中有凝血 酶生成。华科大同济医学院报道52例DIC患者 尿 FPA 明 显 高 于 正 常 组 (120.4±64.3ng/mg:Cr)。
正常血浆参考值：1.2±0.8μg/L
• [临床意义] AT水平降低：遗传性AT缺乏是一种常染
色体显性遗传性疾病，患者常在手术、创伤、
感染、妊娠或产后发生静脉通栓，并可在多处 反复发生血栓；获得性AT缺乏分为三个方面： AT合成降低（主要见于肝硬化、重症肝炎、肝 癌晚期）；AT丢失增加（见于肾病综合征）； AT消耗增加见于前血栓状态和血栓性疾病，如 心绞痛、心肌梗死、脑血管疾病、弥散性血管 内凝血、外科手术后等）。
减低多见于血友病患者，对于诊断 轻型血友病和血管性血友病以及判断血 友病携带者有一定的意义。因子Ⅷ:C水 平减低也是协助诊断肝病伴发DIC者的重 要诊断指标（因子Ⅷ：C活性<50%）。
• [评价] • 1. 急性期反应中可明显升高； • 2. 降低时需与VWF含量测定同时进行； • 3. 单纯APTT延长时检测。 • 4. 受检标本可用缓冲液另行稀释。
• AT水平增高：见于血友病A和血友病B、 口服抗凝药物、使用黄体酮类药等。
• [评价]
AT水平下降是高凝状态较好指标； 对疑难DIC具有诊断价值，急性白血病时 DIC的危险信号；抗凝治疗中可对肝素治 疗进行监测。
9． 血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（3P试验）
• [原理] 在凝血酶作用下，纤维蛋白原释 出纤维蛋白肽A、B后，转变为纤维蛋白 单体（FM）；纤维蛋白在纤溶酶降解下 产生（FDP）。FM与FDP形成可溶性纤 维蛋白单体复合物（SPMC）。硫酸鱼精 蛋白可使该复合物中FM游离，然后又自 行聚合呈肉眼可见的纤维状、絮状，反映 FDP尤其碎片X的存在。
• [评价] 方法简便，灵敏度较高，费用低，为 早年临床诊断DIC常用的确诊试验之一；但由 于Fg含量过低易导致3P假阴性等因素，目前
可以D－二聚体代替。
二、分子标物检测方法近
10余年来发展很快，其内容与方法颇多，
且具有特异性强、敏感性高的特点，在
• [操作] 血浆0.1ml于试管中、37℃水浴， 加0.1ml “标准化”的凝血酶溶液，计 时。连续测定两次或三次取平均值。
• [注意事项] 稀释凝血酶溶液4℃可保存3 天；血浆室温下<3h；不宜EDTA和肝素 抗凝；终点判断：出现混浊的初期凝固 为准。
• [参考值] 16~18秒，受检者超过对照3 秒以上为异常。
• 正常参考值：1.0～4.5μg/ml（ ELISA法 ）。
• 5、 组织因子（发色底物法）检测：
• 临床意义： 凝血过程的主要启动因子，约有 63.6%的DIC病例TF抗原和活性增高。
• 正常参考值：
• 97.7%±16.7％（发色底物法）
• 30～220ng/L （ELISA法）
（四）抗凝和纤溶活化分子标志物检测
活血小板使血浆中GMP140明显增高。 正常参考值：GMP－140 1.61±0.72X1010分子
数/ml。
（三）凝血活化分子标志物检测
1、凝血酶原片段1+2(F1+2)检测： 临床意义： F1+2是凝血酶原转变为凝血酶
过程中释放出的片段，可反映凝血酶原 酶及凝血酶活性，是因子Ⅱ的分子标志 物，其增高多见于血栓前状态和25~50% 易栓症患者。