2015版计数培养基适用性检查-记录

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微生物限度检查用培养基适用性检查记录

批号：
对照培养基
枯草芽孢杆菌
R2A琼脂培养基
对照培养基
检验人：复核人：
恩施金凰新材料有限公司
微生物限度检查用培养基适用性检查记录
检验单号：记录编号：SOR-ZL-032-A/0
请验日期
年月日
报告日期
年月日
检验依据
《中国药典》20查
试验菌种名称
培养基名称
培养基批号
计数
比较%
结果
大肠埃希菌
营养琼脂培养基
营养琼脂培养基
批号：
营养琼脂对照培养基
批号：
对照培养基
金黄色葡萄球菌
营养琼脂培养基
对照培养基
枯草芽孢杆菌
营养琼脂培养基
对照培养基
白色念珠菌
沙氏琼脂培养基
沙氏琼脂培养基
批号：
沙氏葡萄糖琼脂对照培养基
批号：
对照培养基
黑曲霉菌
沙氏琼脂培养基
对照培养基
绿脓假单胞菌
R2A琼脂培养基
R2A琼脂培养基
批号：
R2A琼脂对照培养基

RA培养基适用性检查方案

题目计数培养基适用性验证方案方案号版本号01批准页起草人审核人签字日期QC经理批准人签字日期QA经理目录1.验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证人员及职责5. 判定标准6. 实验材料7. 菌液制备8. 菌液计数9. 适用性检查 10.阴性对照附件1.检测记录 1.验证目的纯化水微生物计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。

本次验证的目的是确认R2A 培养基适合纯化水中总需氧菌总数测定。

2.参照标准2015版中国药典二部1105微生物限度检查法。

3.验证项目R2A 培养基的适用性检查。

4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员: 4.2验证人员职责及要求 4.3验证中各部门的职责4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。

4.3.1.5负责验证报告的批准工作。

4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。

4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。

4.3.2.3负责验证方案的实施。

4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。

4.3.2.5参与验证结果的评价工作。

4.3.3质量部职责小组人员职务姓名所在部门组长质量部组员质量部组员质量部4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。

4.3.3.2负责验证方案的审核工作。

4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。

证过程中的各项检验工作负责。

5.判定标准被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2的范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。

6.试验材料6.1 被验证产品：R2A琼脂培养基6.2 仪器设备6.2.1 压力蒸汽灭菌器6.2.2 HF1200LC型生物安全柜6.2.3 DNP-9160BS型培养箱6.2.4 DHG90型鼓风干燥箱6.2.5微波炉6.3. 验证用培养基名称生产厂家批号R2A琼脂培养基6.4. 验证用菌株：(第代)试验菌株增菌培养基培养温度培养时间枯草芽孢杆菌胰酪大豆胨液体培养基30—35℃18-24h 铜绿假单胞菌胰酪大豆胨液体培养基23—28℃18-24h 7. 菌液制备分别取铜绿假胞杆菌、与枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，于30～35℃培养不超过18-24h。

无菌检查培养基无菌性检查记录

□霉菌培养箱型号：编号：
3、实验:
每批培养基随机取不少于5支(瓶)，置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。
天培养基
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
硫乙醇酸盐
硫体培养基
胰酪大豆胨
液体培养基
说明：“+”表示生长，“-”表示未生长。
4、结论：本次所检培养基，该培养基适用性规定。
检验人: 复核人:
无菌检查培养基无菌性检查记录
记录编号：SOபைடு நூலகம்-ZL-035-A/0
检验项目
无菌检查培养基适用性检查
检验依据
《中国药典》2015年版。
检验日期
完成日期
1、实验用培养基：
名称
生产厂家
批号
规格
硫乙醇酸盐流体培养基
胰酪大豆胨液体培养基
2、实验用仪器设备
□立式压力蒸汽灭菌器型号：编号：
□电热恒温培养箱型号：编号：

计数用培养基适用性检查记录.

计数用培养基适用性检查记录培养基名称规格批号数量
生产企业购进日期检查日期
检验依据
对照培养基适用性
试验结果
营养琼脂培养基平皿大肠埃希菌
于30～35℃
培养48小
时菌落数
金黄色葡萄
球菌于
30～35℃
培养48小
时菌落数
枯草芽胞
杆菌于
30～35℃
培养48
小时菌
落数
1
2
平均
玫瑰红钠琼脂培养基平皿白色念珠菌
于23～28℃
培养72小
时菌落数
黑曲霉于
23～28℃培
养72小时
菌落数
1
2
平均
被检培养基适用性
试验结果
营养琼脂培养基平皿大肠埃希菌
于30～35℃
培养48小
时菌落数
金黄色葡萄
球菌于
30～35℃
培养48小
时菌落数
枯草芽胞
杆菌于
30～35℃
培养48
小时菌
落数
1
2
平均
玫瑰红钠琼脂培养基平皿白色念珠菌
于23～28℃
培养72小
时菌落数
黑曲霉于
23～28℃培
养72小时
菌落数
1
2
平均
计算与结果判断
菌落数回收率计算
结果判断
检验人：复核人：。

计数培养基适用性检查 (2)

编号：SOP-VM-02-039版本号：00陕西同康药业有限公司微生物限度检查用培养基适用性检查方案陕西同康药业有限公司非无菌产品微生物限度检查用培养基适用性检查方案1 制定依据《中华人民共和国药典》2015年版，非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、控制菌检查法，纯化水、注射用水微生物限度检查法。

2 目的为保证微生物限度检查结果的正确性，供试品微生物检查中所使用的培养基应进行适用性检查。

3 适用范围微生物计数法用胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基；控制菌（大肠埃希菌）检查用麦康凯液体培养基、麦康凯琼脂培养基；控制菌（沙门菌）检查用RV沙门菌增菌液体培养基、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基和三糖铁琼脂培养基；纯化水、注射用水微生物限度检查用R2A培养基适用性试验。

4 职责质量管理处QC主管对本方案的实施负责。

5 正文6 计数用培养基适用性检查6.1 菌种及菌液的制备6.1.1 菌种金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26 003]铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10 104]枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 503]白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98 001]黒曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98 003]上述标准菌株均来自中国医学细菌保藏管理中心，工作用菌株为第3代。

6.1.2菌液的制备取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌，接种至胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度35℃，培养时间18小时；用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每1ml不大于100cfu。

取白色念珠菌，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度25℃，培养3天，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每1ml不大于100cfu的菌悬液。

取黒曲霉，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度25℃，培养5天，加入5ml 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

R2A培养基适用性检查方案

前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 1 of 9题目计数培养基适用性验证方案方案号版本号01前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 2 of 9 批准页起草人审核人签字日期QC经理批准人签字日期QA经理前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 3 of 9目录1.验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证人员及职责5. 判定标准6. 实验材料7. 菌液制备8. 菌液计数9. 适用性检查10.阴性对照附件1.检测记录前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 4 of 91.验证目的纯化水微生物计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。

本次验证的目的是确认R2A培养基适合纯化水中总需氧菌总数测定。

2.参照标准2015版中国药典二部1105微生物限度检查法。

3.验证项目R2A培养基的适用性检查。

4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:小组人员职务姓名所在部门组长质量部组员质量部组员质量部4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。

4.2.2认真观察并做好验证原始记录。

4.2.3对实施验证的结果负责。

4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。

4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。

前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 5 of 94.3.1.3负责验证方案的批准工作。

4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。

4.3.1.5负责验证报告的批准工作。

4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。

4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。

4.3.2.3负责验证方案的实施。

4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。

4.3.2.5参与验证结果的评价工作。

4.3.3质量部职责4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。

R2A培养基适用性

本次验证的目的是确认R2A培养基适合纯化水中总需氧菌总数测定。

2.参照标准2015版中国药典二部1105微生物限度检查法。

3.验证项目R2A培养基的适用性检查。

4.2.2认真观察并做好验证原始记录。

4.2.3对实施验证的结果负责。

4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。

4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。

4.3.1.3负责验证方案的批准工作。

前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 5 of 9前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 6 of 9前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 7 of 9菌落计数结果（cfu∕ml）10-5稀释10-6稀释10-7稀释试验次数1 2 平均值 1 2 平均值 1 2 平均值枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌9.适用性检查分别取铜绿假单胞菌与枯草芽孢杆菌菌悬液1ml分别注入无菌平皿中，立即倾注R2A琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，置30～35℃培养不不少于5天；菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表菌落计数结果（cfu∕ml）10-5稀释10-6稀释10-7稀释试验次数1 2 平均值 1 2 平均值 1 2 平均值枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌10.阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。

2015版中国药典微生物限度

1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑵ 水不溶性非油脂类供试品
• 取供试品，用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或 pH7.2 磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基制备成 1:10 供试液。分散力较差的供试品，可在稀释液中加入表面活性剂如 0.1%的聚山梨酯 80，使供试品分散均匀。若需要，调节供试液 pH 值至 6～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步 10倍系列稀释。
1.3.3计数方法适用性试验
1. 供试液制备 2. 接种和稀释 3. 抗菌活性的去除与灭活 4. 供试品中微生物的回收
– 平皿法 – 薄膜过滤法 – 最可能数法（MPN 法）
5. 结果判断
1.4 供试品检查
• 1.4.1检验量
– 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml
或cm²）。
– 除另有规定外,一般供试品的检验量为10g 或
• 需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的总菌落数（包括真菌菌落数）；
• 霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的总菌落数（包括细菌菌落数）。
• 若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素（如氯霉素、庆大霉素）的沙氏葡萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基（如玫瑰红钠琼脂培养基）进行霉菌和酵母菌总数测定。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑷需用特殊方法制备供试液的供试品
• 膜剂供试品 • 肠溶及结肠溶制剂供试品 • 气雾剂、喷雾剂供试品 • 贴膏剂供试品
1.4.2供试品检查
1. 平皿法
– 平皿法包括倾注法和涂布法。 – 除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性
试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每稀释级每种培养基至少制备2个平皿。 – 培养和计数除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30～35℃培养3~5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20～25℃培养5 ~7天，观察菌落生长情况,点计平板上生长的所有菌落数，必要时可适当延长培养时间至7 天进行菌落计数并报告。菌落蔓延生长成片的平皿不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。 – 若同稀释级两个平皿的菌落数平均值不小于15，则两个平皿的菌落数不能相差1 倍或以上。

2015年版微生物限度检验操作规程.

青岛**有限公司文件目的建立微生物限度检查操作规程，规范操作，保证结果的准确性。

范围成品、辅料、内包装袋及纯化水的检验。

责任品管部微生物限度检验人员内容概述：本检验操作规程依据中国药典2015年版四部《通则1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法》和《通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法》进行检查。

微生物计数法一、计数方法1．微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

2、计数方法本法包括平皿法、薄膜过滤法。

3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。

供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。

4、菌种及菌液的制备4.1试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0袋），并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。

计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验见表1。

4.2菌液制备按表1规定培养各试验菌株。

取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使用。

黑曲霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期内使用。

表1 试验菌液的制备和使用4.3阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行对照试验，阴性对照试验应无菌生长。

4.4培养基适用性检查按照表1规定，接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置规定的条件下培养。

R2A培养基适用性

本次验证的目的是确认R2A培养基适合纯化水中总需氧菌总数测定。

2.参照标准2015版中国药典二部1105微生物限度检查法。

3.验证项目R2A培养基的适用性检查。

4.2.2认真观察并做好验证原始记录。

4.2.3对实施验证的结果负责。

4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。

4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。

4.3.1.3负责验证方案的批准工作。

控制菌检查用培养基的适用性检查记录(2015版药典)

记录人/日期
备注：
结论：□符合规定□不符合规定
复核人/日期：记录人/日期：
FORM表格
Document No.:文件号:
控制菌检查用培养基的适用性检查记录
Effective Date:生效日期
Page页码
培养基名称：
培养基批号：
培养基有效期：
试验人/日期/时间：
培养箱编号：
培养箱设置温度：℃
促生长能力检查
菌种名称：□大肠埃希菌；□白色念珠菌
□液体培养基：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长良好。
□固体培养基：被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征一致。
□被检培养基与对照培养基比较，生长不良或者生长的菌落大小、形态特征不一致。
接种量
结果/cfu
NO.1
NO.2
平均数
记录人/日期/时间：
记录人/日期
抑制能力检查
菌种名称：□金黄色葡萄球菌
□与对照培养基管比较，试验菌没有生长。
□与对照培养基管比较，试验菌生长。
接种量
结果/cfu
NO.1
NO.2
平均数
记录人/日期/时间：
记录人/日期
指示特性检查
菌种名称：□大肠埃希菌
□被检培养基上生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等与对照培养基一致。
□被检培养基上生长的菌落大小、形态特征、结果/cfu
NO.1
NO.2
平均数
记录人/日期/时间：

培养基适用性检查记录

培养基适用性检查记录一、实验目的本实验旨在检查培养基的适用性，包括其成分是否合适、无污染、无毒性，并能够提供对所需生物体的适宜环境。

二、实验材料和仪器1.培养基样品：包括液体培养基和固体培养基。

2.培养基成分：包括蛋白胨、琼脂、糖类、无机盐等。

3.实验生物体：包括细菌、酵母菌等。

4.培养基制备器具：包括培养皿、试管、移液器、烧杯等。

5.实验室基本设备：包括电子天平、离心机、恒温培养箱等。

三、实验步骤1.培养基成分检查首先，检查培养基成分的符合度。

查阅培养基配方，并逐一准备并称量所需成分。

使用电子天平进行称量，确保称量准确。

检查成分是否存在误差，是否符合配方要求。

2.培养基配制检查根据培养基配方，准备液体培养基和固体培养基。

对液体培养基，按照配方将成分溶解在适量的蒸馏水中，并进行调pH处理。

对固体培养基，将成分溶解在蒸馏水中，并加入适量的琼脂糖或琼脂进行制成。

3.培养基无菌检查将配制好的培养基分别装入培养皿或试管中，并在恒温箱中进行高温高压灭菌处理。

灭菌结束后，在无菌操作台上进行无菌条件下的检查。

观察培养基是否有异常物质存在，如颜色变化、气泡、异味等。

4.培养基毒性检查将培养基分别接种相应的生物体，观察生物体的生长情况及有无异常现象。

观察时间可根据生物体的生长周期安排。

5.培养基成分调整及检查根据对培养基适用性的判断，如发现培养基的补充成分不足，或适用生物体的无法正常生长，可以对培养基的配方进行调整。

通过增加或减少特定成分的用量，或替换一些成分，再进行上述实验步骤进行再次检查。

四、实验结果和分析经过以上实验步骤，我们对培养基的适用性进行检查，并对实验结果进行记录和分析。

1.培养基成分符合度：通过称量成分的准确性和配方的符合度，可以判断培养基成分是否合适。

2.培养基配制检查：根据液体培养基和固体培养基的制备步骤，以及配方的准确性，可以判断培养基的配制是否正确。

3.培养基无菌检查：通过观察培养基灭菌后是否有异常现象，如颜色变化、气泡、异味等，可以判断培养基是否无菌。

微生物限度检查操作规程(中国药典2015版四部通则)

霉菌与酵母菌总数、控制菌得检查。

二、引用标准：《中国药典》２015年版（通则1１05-1106）三、目录1。

微生物限度标准2.设备、仪器及用具3。

消毒液、稀释剂、试液及培养基4。

检查总则(通则1105：非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法,通则1106非无菌产品微生物限度检查:控制菌检查法）5。

微生物计数法检查6.控制菌检查法7．实验技术8、附件１.微生物限度标准非无菌药用原料及辅料得微生物限度标准(2)．目测霉变者以不合格论。

（３）。

“无”为标准依据或无相应规定。

准依据或无相应规定.2.设施、仪器及用具2、１、设施：2、１、1．微生物限度检查室及相关设施：微生物计数试验环境应符合微生物限度检查得要求。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染得措施不得影响供试品中微生物得检出。

单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。

２、1、2．其她设备:高压蒸汽灭菌器;细菌培养箱(3０~3５℃);霉菌培养箱(２5～2８℃)；电炉(或其她适宜得加热装置）；恒温水浴；电热干燥箱(250~３00℃)；电冰箱。

生化试剂储存箱。

2、2仪器及器皿2、2、1。

菌落计数器；显微镜（15０0X）;电子天平或药物天平（感量0、1ｇ）;ｐH 系列比色计。

2、2、2．玻璃器皿：锥形瓶(2５０~３００ml,内装玻璃珠若干)、研钵（玻璃或陶瓷制,∮10～12ｃm)、培养皿（∮9 ｃm）、量筒(１00ml）、试管（1８×180ｍm）及塞、吸管（1ml分度0、01，10ml分度0、１)、载玻片、盖玻片、玻璃消毒缸（带盖）。

2、2、3新购得玻璃器皿得清洁:先用流水冲洗，浸泡于1％~２%盐酸（工业用）液中约2～6小时，除去游离碱质，再用流水冲洗.用于化学分析得玻璃仪器,需用重铬酸钾清洁液浸泡数分钟后，再用流水冲洗，最后以纯化水涮洗2～3次，晾干备用。

2、3用过得玻璃器皿：2、3、1未被病原微生物污染得器皿：可随时洗涤.用清水冲洗(或浸泡)，除容量仪器外，可用毛刷与肥皂粉，内外刷洗，再用清水涮洗干净,晾干备用.容量仪器宜用清洁液浸泡或涮洗，再用流水冲洗,最后以纯化水涮洗2～3次.试管及培养皿:先正放或直立于高压蒸汽灭菌器内,经1２1℃灭菌30 分钟.趁热倾出培养物，再以清水或用毛刷及肥皂粉刷洗,最后以流水涮净。

15版微生物检查法

取供试品100cm2,剪碎,加 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml(必要时可增加稀释液）浸泡，振摇,作为1∶10 的供试液。
特护方法处理
膜剂供试品
取供试品,剪碎,加pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基，浸泡，振摇，制成1∶10 的供试液。
10版
菌种名称制备方法计数培养基适用性检查
霉菌酵母菌总数
计数方法适用性检查
霉菌酵母菌总数
黑曲霉
玫瑰红钠琼脂玫瑰红钠琼脂培养基23-28℃培改良马丁培养基或改良马培养基23养5天，计数，丁琼脂培养基上，23- 28℃培养72小接种量50时，计数，接 28℃培养5-7天。种量50-100cfu。 100cfu。
10版液体供试品
取供试品10ml，加pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml, 作为1:10 供试液。油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。
固体、取供试品10g，加pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,用半固匀浆仪或其他适宜的方法，混体或匀，作为1:10 供试液。必要时粘稠加入适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品性供分散均匀。试品
菌液稀释

10版 a:用0.9%无菌氯化钠溶液制成50-100cfu/ml的菌液。 b:加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后吸出孢子悬液至无菌的试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu 的孢子悬液。 15版 a:用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌液。 b:加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后吸出孢子悬液至无菌的试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数适宜浓度的孢子悬液。（不大于100cfu/ml)

2015版微生物计数培养基适用性验证报告

非无菌产品微生物限度检查用培养基适用性验证文件编号：XXXX目录1.验证目的 (1)2.参照标准 (1)3.验证项目 (1)4.验证工作小组及职责 (1)5.试验材料 (2)6.试验过程 (3)7.验证周期 (4)8.附件 (4)1、验证目的：需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数用培养基应进行培养基的适应性检查，本次验证的目的是为了确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数的测定。

2、参照标准：《中国药典》2015年版四部3、验证项目：胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适用性验证4.验证小组及职责4.1 验证小组4.2 验证职责5.试验材料5.1验证所用培养基：5.2验证用菌株培养5.2. 仪器设备：5.2.1. XXXXX立式压力蒸汽灭菌器5.2.2.XXXX水平流净化工作台5.2.3.XXXXXX干燥箱5.2.4.XXXXX型霉菌培养箱 (20～25℃)5.2.5. XXXXX电热恒温培养箱(30～35℃)5.3. 稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液6.试验过程6.1菌液制备取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物，加入3-5ml含0.05%〔ml/ml〕聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%〔ml/ml〕聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。

菌液制备后假设在室温下放置，应在2小时内使用；假设保存在2〜8℃，可在24小时内使用。

6.2、适用性检查培养基适用性检查取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的菌悬液与黑曲霉的孢子悬液〔均不大于100cfu〕，分别注入无菌平皿中，立即倾注适用性检查的胰酪大豆胨琼脂培养基，用于检查胰酪大豆胨琼脂培养基的需氧菌总数计数适用性。

计数培养基适用性检查记录

□取黑曲霉（[CMCC(F)98 003]第代）的新鲜培养物，加入ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液(用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管)至无菌试管内，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。
检验者：复核者：
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计数培养基适用性检查记录
被检培养基名称
胰酪大豆胨液体培养基
生产厂家：
批号：
对照培养基名称
胰酪大豆胨液体对照培养基
生产厂家：中国食品药品检定研究院
批号：
被检培养基名称
胰酪大豆胨琼脂培养基
生产厂家：
批号：
对照培养基名称
胰酪大豆胨琼脂对照培养基
生产厂家：中国食品药品检定研究院
批号：
被检培养基名称
沙氏葡萄糖琼脂培养基
二者菌落பைடு நூலகம்均数的比值
1
2
1
2
1
2
1
2
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉菌
结论：
按《中国药典》2015年版四部通则1105检查，沙氏葡萄糖琼脂培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值均在范围内（应在0.5～2范围内），且菌落形态大小与对照培养基上的菌落（应一致），判该批培养基的适用性检查规定。胰酪大豆胨液体培养基与对照培养基管比较，试验菌生长（应良好）。
生产厂家：
批号：
对照培养基名称
沙氏葡萄糖琼脂对照培养基
生产厂家：中国食品药品检定研究院
批号：
检查依据
《中国药典》2015年版四部通则1105