氧自由基与妇科肿瘤关系的研究_郭海洁

第9卷第6期北华大学学报(自然科学版)V o l.9N o.6 2008年12月J O U R N A LO FB E I H U AU N I V E R S I T Y(N a t u r a l S c i e n c e)D e c.2008文章编号:1009-4822(2008)06-0518-04氧自由基与妇科肿瘤关系的研究郭海洁(吉林市妇产医院,吉林吉林132011)摘要:目的探讨超氧化物歧化酶(S O D)、丙二醛(M D A)、一氧化氮(N O)、谷胱甘肽(G S H-P X)与妇科常见肿瘤的关系.方法1)以20例正常健康人为对照组,子宫肌瘤30例、子宫颈癌20例、卵巢癌22例,分别用生物化学法测定血清中S O D,G S H-P X活性与M D A,N O的含量.2)以子宫肌瘤30例、子宫颈癌20例、卵巢癌22例,分别用生物化学法测定癌组织与癌旁组织、子宫肌瘤核组织与核旁组织中S O D,G S H-P X活性和M D A,N O含量.结果1)血清测定中,肿瘤患者的M D A含量、S O D活性比正常对照组高;G S H-P X活性比正常对照组低;良性肿瘤的N O含量高于正常对照组,恶性肿瘤中的N O含量低于正常组.2)组织测定中,肿瘤组织M D A含量,S O D,G S H-P X活性比肿瘤旁组织高,癌组织中N O含量比肿瘤旁组织低.结论子宫颈癌、卵巢癌、子宫肌瘤组织及血清中有明显的自由基代谢紊乱,而且良恶性肿瘤有明显差异,并且随着肿瘤恶化程度的变化,自由基也呈现规律性变化.关键词:肿瘤;自由基;宫颈癌;卵巢癌;子宫肌瘤;超氧化物歧化酶;丙二醛;一氧化氮;谷胱甘肽中图分类号:R73文献标识码:AO n t h e R e l a t i o n s h i p b e t w e e n O x y g e n F r e e R a d i c a l a n d G y n e c o l o g y T u m o rG U OH a i-j i e(J i l i nC i t y O b s t e t r i c a l a n dG y n e c o l o g i c a l H o s p i t a l,J i l i n132011,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e T oe x p l o r et h er e l a t i o n s h i p b e t w e e nS u p e r o x i d eD i s m u t a s e(S O D),M a l o n d i a l d e h y d e (M D A),N i t r i c O x i d e(N O),G l u t a t h i o n e P e r o x i d a s e(G S H-P X)a n dt u m o r.Me t h o d s(1)M a k i n g c o n t r a s t a n a l y s i s a m o n g20n o r m a l h e a l t h y p e o p l e,30p a t i e n t s w i t h m y o m a o f u t e r u s,20p a t i e n t s w i t h c e r v i c a l c a n c e r a n d 22p a t i e n t s w i t h o v a r y c a n c e r.U s i n g b i o c h e m i s t r y m e t h o d t o m e a s u r e t h e a c t i v i t y o f S O Da n d G S H-P Xa n d t h e c o n t e n t o f M D Aa n dN Oi n s e r u m.(2)M a k i n g c o n t r a s t a n a l y s i s a m o n g30p a t i e n t s w i t hm y o m a o f u t e r u s,20 p a t i e n t s w i t hc e r v i c a l c a n c e r a n d22p a t i e n t s w i t ho v a r yc a n c e r.U s i n g b i o c h e m i s t r y m e t h o dt om e a s u r et h e a c t i v i t y o f S O Da n d G S H-P Xa n d t h e c o n t e n t o f M D Aa n d N Oi n c a n c e r t i s s u e a n d t h e t i s s u e b e s i d e t h e c a n c e r, m y o m a o f u t e r u s n u c l e a r t i s s u e a n d t h e t i s s u e b e s i d e t h e n u c l e a r.R e s u l t s(1)I n t h e p r o c e s s o f m e a s u r i n g t h e s e r u m,t h e c o n t e n t o f M D Aa n d t h e a c t i v i t y o f S O Do f t h e t u m o r p a t i e n t s a r e h i g h e r t h a n t h o s e o f n o r m a l g r o u p; t h e a c t i v i t y o f G S H-P Xa r e l o w e r t h a nt h a t o f t h e n o r m a l g r o u p;t h e c o n t e n t o f N Ow i t h b e g i nt u m o r a r e h i g h e r t h a n t h a t o f t h e n o r m a l g r o u p a n d t h e c o n t e n t o f N Ow i t hm a l i g n a n t t u m o r a r e l o w e r t h a n t h a t o f n o r m a l g r o u p.(2)I n t h e p r o c e s s o f m e a s u r i n g t h e t i s s u e,t h e c o n t e n t o f M D Aa n dt h e a c t i v i t y o f S O Da n d G S H-P Xi n t u m o r t i s s u e a r e h i g h e r t h a n i n t h e t i s s u e b e s i d e t h e t u m o r s,t h e c o n t e n t o f N Oi n c a n c e r t i s s u e a r e l o w e r t h a ni n t h e t i s s u e b e s i d e t h e t u m o r.C o n c l u s i o n F r e e r a d i c a l h a s a c l e a r l y m e t a b o l i c d i s o r d e r i n t h e c a r c i n o m a o f c e r v i x, o v a r i a n c a n c e r,f i b r o i d o r g a n i z a t i o n a n d t h e b l o o d s e r u m.M o r e o v e r,t h e r e a r e o b v i o u s d i f f e r e n c e s b e t w e e n b e n i g n a n d m a l i g n a n t.W i t h t h e d e g r e e c h a n g e o f t h e t u m o r d e t e r i o r a t i n g,f r e e r a d i c a l s h a v e s h o w n c h a n g e s i n l a w.K e y w o r d s:T u m o r;F r e e r a d i c a l;C e r v i c a l c a n c e r;O v a r y c a n c e r;M y o m a o f u t e r u s;S u p e r o x i d e D i s m u t a s e(S O D); M a l o n d i a l d e h y d e(M D A);N i t r i c O x i d e(N O);G l u t a t h i o n e P e r o x i d a s e(G S H-P X)收稿日期:2008-09-01基金项目:吉林市科技发展计划项目.作者简介:郭海洁(1972-),女,主治医师,主要从事妇产科学研究.1实验材料1.1病例来源及分组所有患者均来自吉林市妇产医院,其中宫颈癌20例、卵巢癌22例、子宫肌瘤30例,年龄在38～56(47.5±8.5)岁.所有病例均为经临床病理报告已确诊的病例,分为宫颈癌组、卵巢癌组、子宫肌瘤组,相对应为3个对照组.1.2健康人的选定正常人20例,均为女性,年龄在30～46(37.4±7.5)岁,经临床检查确诊为健康人,为正常对照组.1.3样品采集1.3.1血清样品的采集用静脉血采集法,将血液置于直径为1.0c m、长为10c m的玻璃试管内,待血液分层后,取血清置于试管内,迅速放于盛有液氮的容器内冷冻,保存备检.1.3.2组织样品的采集肿瘤切除后1h内迅速冻于液氮中保存,同时取距离肿瘤组织3.0c m处的组织作为对照,同样迅速冻于液氮中保存.1.3.3组织匀浆的制备取组织块0.2～1.0g,用冰冷的生理盐水冲洗,除去血液,滤纸拭干,称重,放入5～10m L的小烧杯中.取匀浆介质生理盐水,其总量为组织块重量的9倍.用眼科小剪剪碎组织块,将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中,再将剩余的冷生理盐水用来冲洗残留在烧杯中的碎组织块,一起倒入匀浆中进行匀浆,充分研磨,使组织匀浆化.取少量匀浆组织作涂片,观察细胞已磨破.将匀浆以3500r/m i n离心15m i n,取上清液进行各种测定.2实验方法2.1血清及组织中M D A含量测定取10n m o l/L标准品0.1m L作为标准管,共2支,无水乙醇0.1m L作为标准空白管,共2支,取血清和组织匀浆上清液0.1m L作为测定管,并于测定样品中随机抽取两个各0.1m L作为测定空白管,于上述试管中分别加入所给试剂,测定空白管中加入50%冰醋酸1m L,经漩涡混匀器混匀, 95℃水浴40m i n后流水冷却,3500～4000r/m i n 离心10m i n,取上清液,倒入532n m处1c m光径的比色杯中,蒸馏水调零,比色测定各管吸光度值.2.2血清及组织中N O含量测定取双蒸水0.1m L作为空白管,共2支,100μm o l/L K N O30.1m L作为标准管,共2支,分别取血清和组织匀浆上清液0.1m L作为测定管,于上述试管中分别加入所给试剂,充分漩涡混匀30s,室温静置10m i n,3500～4000r/m i n,离心10m i n,取上清0.5m L加入显色剂混匀,室温静置10m i n,蒸馏水调零,550n m光径比色测定各管吸光度值.2.3血清及组织中G S H-P X含量的测定取1m m o l/L G S H0.2m L加入溶血液0.2m L 作为测试管,没有加入溶血液的为对照管,37℃水浴预温并加入所给试剂后,于对照管中加入溶血液0.2m L,混匀,3500～4000r/m i n,离心10m i n,取上清2m L,同时取20μm o l/L G S H标准液2m L作标准管,共2支,取所给2号试剂2m L作为空白管,共2支,与上清液一起加入所给试剂混匀,15 m i n后,倒入412n m处1c m光径比色杯中,蒸馏水调零,测各管O D值.2.4血清及组织中T-S O D和M n-S O D活性测定T-S O D测定方法,取样品0.5μL加入蒸馏水0.5m L作为测定管,取蒸馏水0.505m L作为对照管,共2支,分别加入所给试剂,经漩涡混匀器充分混匀,置37℃恒温水浴40m i n后,加入显色剂,混匀,10m i n后倒入1c m光径比色杯中,蒸馏水调零,波长550n m处比色.3实验结果3.1血清中M D A,N O,G S H-P X,T-S O D,M n-S O D含量变化血清中M D A,N O,G S H-P X,T-S O D,M n-S O D含量变化见表1.表1血清中MD A,N O,G S H-P X,T-S O D,Mn-S O D含量变化T a b.1C o n t e n t c h a n g e o f MD A,N O,G S H-P X,T-S O D,Mn-S O Di ns e r u m(P<0.01)组别ρ(M D A)/(μm o l·L-1)ρ(N O)/(m m o l·L-1)ρ(G D H-P X)/Uρ(T-S O D)/(μU·L-1)ρ(M N-S O D)/(μU·L-1)正常人对照组3.71±0.7032.12±10.4779.12±8.45102.63±16.3246.38±4.60子宫肌瘤组8.56±1.3067.86±19.8266.78±9.38118.38±10.2658.12±6.30宫颈癌组10.69±0.0910.71±6.7439.47±10.07128.61±13.8572.09±9.30卵巢癌组10.54±0.1212.28±5.1646.42±11.12126.75±16.7393.92±10.4519第6期郭海洁:氧自由基与妇科肿瘤关系的研究1)血清中子宫肌瘤组、宫颈癌组、卵巢癌组的M D A含量均高于正常对照组,差异非常显著(P<0.01);恶性肿瘤组M D A含量高于良性肿瘤组,差异性显著(P<0.05).2)血清中子宫肌瘤组N O含量高于正常对照组,差异非常显著(P<0.01);宫颈癌组、卵巢癌组N O含量均低于对照组,差异非常显著(P<0.01).3)血清中子宫肌瘤组、卵巢癌组、宫颈癌组G S H-P X含量均低于正常对照组,差异非常显著(P<0.01),而且恶性肿瘤组G S H-P X含量低于良性肿瘤组,差异性显著(P<0.05).4)血清中子宫肌瘤组、宫颈癌组、卵巢癌组T-S O D与M n-S O D含量均高于正常对照组,差异非常显著(P<0.01);恶性肿瘤组较良性肿瘤组稍高,差异性显著(P<0.05).3.2S O D,N O,G S H-P X,M D A含量变化宫颈癌患者组织中S O D,N O,G S H-P X,M D A 含量变化见表2.宫颈癌组织中M D A,G S H-P X,T-S O D,M n-S O D均高于宫颈癌子宫组织,差异性显著(P<0.05);而N O低于癌旁子宫组织,差异性显著(P<0.05).3.3M D A,N O,S O D,G S H-P X含量变化卵巢癌患者组织中M D A,N O,S O D,G S H-P X 含量变化见表3.卵巢癌组织中M D A,G S H-P X,T-S O D,M n-S O D均高于卵巢癌子宫组织,差异性显著(P<0.05);而N O低于癌旁子宫组织,差异性显著(P<0.05).3.4M D A,N O,G S H-P X,S O D含量变化子宫肌瘤患者组织中M D A,N O,G S H-P X,S O D 含量变化见表4.表2宫颈癌患者组织中S O D,N O,G S H-P X,MD A含量变化T a b.2C o n t e n t c h a n g e o f S O D,N O,G S H-P X,MD Ao f t i s s u s i np a t i e n t s w i t hc e r v i c a l c a n c e r(P<0.05)组别ρ(M D A)/(μm o l·L-1)ρ(N O)/(m m o l·L-1)ρ(G D H-P X)/Uρ(T-S O D)/(μU·L-1)ρ(M N-S O D)/(μU·L-1)宫颈癌组织0.83±0.126.83±0.7118.47±2.0611.59±2.210.05±0.02宫颈癌子宫组织0.35±0.094.26±0.9816.61±2.949.34±2.812.08±1.36表3卵巢癌患者组织中MD A,N O,S O D,G S H-P X含量变化T a b.3C o n t e n t c h a n g e o f MD A,N O,S O D,G S H-P Xo f t i s s u s i np a t i e n t s w i t hc e r v i c a l c a n c e r(P<0.05)组别ρ(M D A)/(μm o l·L-1)ρ(N O)/(m m o l·L-1)ρ(G D H-P X)/Uρ(T-S O D)/(μU·L-1)ρ(M N-S O D)/(μU·L-1)卵巢癌卵巢组织0.68±0.124.18±0.9414.92±2.8510.24±2.361.81±1.02卵巢癌子宫组织0.05±0.072.66±0.7411.60±2.364.96±1.268.25±2.14表4子宫肌瘤患者组织中MD A,N O,G S H-P X,S O D含量变化T a b.4C o n t e n t c h a n g e o f MD A,N O,G S H-P X,S O Do f t i s s u s i np a t i e n t s w i t hc e r v i c a l c a n c e r(P<0.05)组别ρ(M D A)/(μm o l·L-1)ρ(N O)/(m m o l·L-1)ρ(G D H-P X)/Uρ(T-S O D)/(μU·L-1)ρ(M N-S O D)/(μU·L-1)子宫肌瘤核组织0.26±0.054.20±0.8315.25±2.626.14±2.646.02±3.22子宫肌瘤核旁组织0.14±0.042.55±0.6212.24±2.124.78±1.5313.45±2.65子宫肌瘤核组织中M D A,G S H-P X,T-S O D, M n-S O D均高于核旁组织,差异性显著(P<0.05);而子宫肌瘤核组织中N O含量低于核旁组织,差异性显著(P<0.05).统计学分析采用t检验,平均数采用x±s表示.P<0.05为差异性显著,P<0.01为差异非常显著,P>0.05为无显著差异.4讨论S O D对机体内的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用,此酶能清除超氧阴离子(O-2),保护细胞免受损伤.M D A的测定常常与S O D的测定相互配合,S O D活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力,而M D A的高低又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度[1-6].我们应用黄嘌呤氧化酶法和M D A法检测子宫颈癌、卵巢癌组织及癌旁组织中、子宫肌瘤组织与核旁组织中S O D 与L P O含量,发现两者之间有明显的正相关关系,γ>0.84.它们都与组织中自由基含量变化有密切关系,即在肿瘤组织中T-S O D,M n-S O D活性都高于肿瘤旁组织(P<0.05),而自由基的代谢产物也相应升高[7],即肿瘤组织中M D A含量高于肿瘤旁520北华大学学报(自然科学版)第9卷组织(P<0.05).表明肿瘤组织中确实有自由基清除酶及其代谢产物L P O的升高.另外通过血清中S O D与M D A的测定,并与正常健康人比较,S O D 与M D A都高于对照组,而且恶性肿瘤组S O D与M D A都高于良性肿瘤组.我们的研究结果表明, S O D活性与肿瘤的生长阶段、增殖速度、分化程度有直接关系,N O是一种新的免疫分子和炎症介质,有介导内毒素,T N F,I L-1β,I L-6等细胞因子的病理作用.N O化学性质活泼,极易与含有F e-s中心的蛋白质的F e2+作用形成F e-N O,起到细胞毒作用,使F e2+从酶中丢失、抑制酶活性、阻滞细胞内D N A复制,从而抑制或杀伤肿瘤细胞.应用硝酸还原酶法测定肿瘤组织中N O含量均低于肿瘤旁组织(P<0.05);血清中卵巢癌组、子宫颈癌组N O 含量明显低于正常对照组(P<0.01);子宫肌瘤组N O含量高于正常对照组.研究结果表明,肿瘤组织、血清中N O含量减少与含有F e-s中心的蛋白质的F e2+作用减弱,不能抑制酶的活性,使细胞内D N A不断复制,导致肿瘤细胞的进一步增长[10-13].G S H-P X是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶.它特异的催化还原型谷胱甘肽(G S H)对过氧化氢的还原反应,可以起到保护细胞结构和功能完整的作用[13].通过实验测定:子宫颈癌、卵巢癌组织中G S H-P X活力低于癌旁组织(P<0.05);子宫肌瘤组织中G S H-P X活力低于核旁组织(P<0.05);血清中G S H-P X活力低于正常健康人(P<0.01),而且恶性肿瘤组G S H-P X活力低于良性肿瘤组.研究结果表明,肿瘤组织中、血清中G S H-P X活力降低,致使过氧化氢浓度增高,进而造成细胞膜结构和功能的破坏,最终导致细胞组织的变性坏死,而且肿瘤组织恶性程度越高,G S H-P X活力越低,组织细胞结构功能破坏越严重.综上所述,我们通过对子宫颈癌、卵巢癌、子宫肌瘤组织及血清中S O D,G S H-P X活性与M D A,N O 含量分析,认为子宫颈癌、卵巢癌、子宫肌瘤组织及血清中有明显的自由基代谢紊乱,而且良恶性肿瘤有明显差异,并且随着肿瘤恶化程度的变化,自由基也呈现规律性变化,它可能是组织损伤或癌变的直接原因.这为临床预防、诊断、治疗提供了有力的依据.另外,癌旁、子宫肌瘤核旁组织中自由基代谢产物的检测,对预后的判定亦有着重要意义.参考文献:[1]T e r u h i r oN a k a d o.S u p e r o x i d eD i s m u t a s eA c t i v i t yR e n a lC e l l C a r c i n o m a[J].E u r U r o l,1998,14:50-55.[2]J a n s s o n A M,B o s m a n C B,D u i j n W,e ta l.S u p e r o x i d eD i s m u t a s e si nG a s t r i ca n dE s o p h a g e a l C a 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