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译文标题：传统意大利榛子的体外繁殖用于当地遗传资源库的稳定和保存

译文：

关键词：欧洲榛，榛属，传统种质，体外繁殖

摘要：在地中海盆地，榛子（欧洲榛）是非常重要的一种作物。体外繁殖能够有效的稳定当地遗传资源库。为了提高榛子微组织繁殖实验记录的精确性，各种不同的研究已经在进行。这些研究通常以重要的品种为材料，然而，微组织繁殖实验记录应用在这些幼小品种上比起传统方法通常会产生相反的结果，这种技术在幼小品种上很少取得成功。本实验的目的是为重要品种微组织繁殖的操作积累相关的知识和信息。实验过程中需要设计不同成分的培养基，灭菌时间和培养时间都要进行详细的讨论。传统意大利品种植株茎芽中的N6-异戊烯腺嘌呤的作用是改善这种状态。生根阶段是榛属微组织繁殖应用于大型商业生产的关键步骤。

欧洲榛在欧洲特别是生物地理分布区地中海盆地代表一种重要的经济类林木。榛子主要产于土耳其，意大利，美国和西班牙（分别是每年55,000, 110,000, 25,000, 18,000+吨），其次是法国，希腊，葡萄牙。大约90%的产品被去皮并且以树芯的形式卖出，然而剩余的10%则作为树苗消费。极好的营养成分和营养制品的特性也使该物种产生很高的利润。此外，在一些特有的栽培地区，传统和文化身份严重受榛子产量的影响，文化身份常常会促进贫瘠土地的回收和利用。即使这样，在一些地区，这种林业作物仍然不是重要的农业资源，然而，就当地足够维持的生产式系统和作为宝贵的食物的传统而言，它却是一种有趣的收入来源。世界第二大生产商意大利说一些传统的品种主要种植在Campania ,Latium, Piedmont,在西西里岛有大量的属典型种。近几年，一些主要品种由于质量和传统特性获得了欧洲质量印模。此外，这些品种还被引进其他国家特定的果园中以增大他们的生长范围。没有经过检验的物质可能会传播疾病，也可能会导致原因不明的物质的出现。微组织繁殖法等生物技术的应用会促进健康的合乎本性的物质的产生(Nas et al.,2004)，并且提高这种林木的经济价值。育种计划可以通过样本或者新品种的快速分配来加快进程。

榛子成熟组织体外快繁的一个主要障碍是高程度的内源性污染(Diaz-Sala et al.,1998)，这使得培养体系的建立艰难又费时。

此外，一些培养基成分被用于促进一些主要榛属品种(Andres et al.,2002;Damiano et al.,2005;Messeguer and Mele,1987;Yu and Reed,1993)茎芽数目的增多和长度的增长。然而，当标准化的实验设计应用于当地数目较少的品种时，实验结果是相反的，通过观察，经的生长存在一定的困难(Bacchetta et al.,2005)。以营养成分能够保证籽苗和体外抽枝合适的生长状况的理念为基础，Nas and Read (2004)最近提出了一种新的培养基成分结构。然而，在植物的体细胞和种子细胞之间存在着生理差别。此外，种子内必需营养素化合物的浓度对于体细胞则太高甚至有毒。

在目前的工作中，这种状况有了轻微的改善，我们通过利用不同物种种子中大量元素和微量元素的差异来使榛子无机培养基的成分最优化，使得其中遗物中能够很好的适应体外的生长状况。

微组织繁殖法是多因素共同作用的结果，其中包括组织型和激素要求，外植体原始细胞培养阶段生理因素的影响和N6-异戊烯腺嘌呤对促进茎数目增多的影响。

这些实验目的正是一些工业机构和科研机构支持的SCRIGNO实验计划的目标，这项实验主要是为了估计当地传统型和典型物种的农业生物多样性，同时，它还支持了AGRI GEN RES 068 Safenut EU计划中遗传资源库的鉴定、保存及利用的内容。

实验材料和试验方法

榛属培养基的进展状况。桃枣作为参考物种(Rugini and Verma, 1983)，两物种无机营养素的比例作为调节MS培养基的调节因子(Murashige and Skoog, 1962)。培养基中刚开始培养的是种子，因此，此营养素成分必须尽可能的接近体细胞组织对营养素的要求。

通过原生质发射光谱法来估计无机组分的应用于意大利中部果园搜集的（100g）杏仁和榛子的嫩叶和裸露种子样本。这种新型培养基的研究过程如下：含盐MS培养基中阴阳离子的测定；榛子和杏仁种子中无机元素浓度比例的测定；校正系数用于计算阴离子和阳离子数量和测定新的盐浓度；KH2PO4中钾的含量少于磷的含量时，KI的量不发发生变化。新的营养成分构成改良培养基，通过改良培养基我们可以进行HM诱导，辅以含有维生素的MS培养基，加入200mg·L-1的肌醇，0.4 mg·L-1赤霉素，0.05 mg·L-1吲哚乙酸(IBA) ，3% 的蔗

糖，BA (0.5 mg·L-1)。

外植体的来源。组织培养首先要收集盆栽植物茎部分离部分（1cm长）。这些生长2年的植物分别来自六个意大利品种的根出条。这些根出条于2003年2月被种植于含有1:1:1粘土，沙，泥炭混合物的直径为30厘米的塑料容器。这些被称为母体植株的盆栽植物在自然光的照射下，并定期施肥，修剪，进行杀菌处理。

灭菌过程。外植体在自来水中用消毒剂于抗菌性药皂冲洗一小时，将植物漂洗干净。灭菌结束后将植株放入70％乙醇中浸泡5秒。重新切割，外植体表面用0.05％次氯酸钠的消毒10分钟，滴加几滴Tween-20，然后将植体在无菌蒸馏水冲洗三次。10分钟次氯酸钠和几滴Tween-20只用于在冬季采集外植体。接种到培养基之前，每个外植体基底两端分别翻新，有利于营养物质的吸收。

体外培养的建立和生根。单节外植体取自于植物的两个不同的生理阶段：快速增长和休眠期接种于HM诱导培养基。在继代培养时，高压灭菌后的HM培养基中加入加入BA(1.5 mg·L-1) 和N6-异戊烯腺嘌呤(1 mg·L-1)以促进其增值。

生根刺激：1）茎的基部浸入1 mg·L-1的IBA溶液20s，然后将外植体在没有激素的HM 培养基中培养20天。或者2）在含有1/3 HM培养基营养素成分与2 mg·L-1的IBA的培养基中培养一个月。不同的学者认为，中等浓度的矿物质浓度可以提高生根率。

培养液的PH调到5.7，然后加入0.7% (w/v)的琼脂，121℃条件下高压灭菌20分钟。外植体培养环境设置为：室温25±1℃，16小时的光周期，70% 到80%的相对湿度。每个塑料瓶中分装30毫升的培养基。

实验设计。每个榛子品种的一百个辅助芽进行培养在含有30毫升培养基的单独的试管中。每一个品种随机抽取十个重复，记录芽的数量、新叶以及茎白天的重量。通过观察估计小植株的形状。将实验重复一次。用外植体培养过程中记录的外植体数，平均芽长和腋芽数进行统计分析。统计分析采用SPSS完成（13.0，SPSS软件，芝加哥）：描述性分析和普通线性分析。

结果与讨论

榛子校正培养基。表1包含榛子和杏仁的坚果和树叶中大量元素和微量元素的浓度。差别主要体现在硼，钡，锰，铜，硅，锶的浓度上，表明榛子具有相对大的元素浓度。另一方