维生素D3的含量检验方法
两种方法测定维生素D3含量
学 术 论 坛
Ｓｉｃ ａｄ ｅｈ ｌｙｎ ｖ ｃｎｅ ｎ Ｔｃ ｏｇ ｌｏ实验 ， 表 维生素 Ｄ 的总量 （ ｆ＋ ｉｍ／ 。 并 维生素 Ｄ 发现 ３ ｆ 。 ２ Ａ） ） ， ３的校正 因子 Ｆ Ａ ｒ— Ａ 明两方法 测得结果一 致 ， 外标法可 同时进行 含 计 算 含 量 。 Ａｒ ＝—’ 一 ２ １ 线性关 系考 察 。 量 与有 关 物 质 的检 测 。 式 中 ： ， —对 照品溶液 中维生 素 Ｄ Ａ— ３的 移取对 照品贮备溶 液 ２ ｍｌ 。 ｍｌ ０ 、３ ０ 、 ４ ０ 、５ ０ ｌ 。ｍ 于五 个 ２ ｍｌ ．ｍｌ ．ｍ 、６ ０ ｌ ０ 的容量瓶 峰面 积 ； １仪器 与试 药 Ａ —— 校正 因子测 定液 中维生素 Ｄ 的峰 ３ 加 ｍｔ加正 己烷至刻 度 ， 匀得 摇 仪 器 ： ｉ ｎ ｌＯ 高效 液相 色谱仪 ， 中， 内标 溶液 ２ ， Ａｇｌ ｔ ｌ０ ｅ 面积 五 个 不 同浓 度 的 稀 释 液 测 定 。得 相 关 系数 ＶＷＤ紫外检 测器 。 Ａ — —校 正 因子 测定 液中前 维生素 Ｄ ３ Ｒ Ｏ． ９９８， ＝ ０． ＝ ９ Ｒ ９９９９。 ． 色谱 条件 ： 的峰面 积 ２ ２ 精密 度试验 。 色谱 柱 ： 用硅 胶为填充 剂 ； 含量 测定 取供试 品溶液进行 测定 ， 下 按 取供 试 品共 ６份 ， 依法 测定 ， 并计算 相对 流 动相 ： 己烷 ： 戊醇 ＝ ９ ： ； 正 正 ９ ７ ３ 列公式计 算维生 素 Ｄ３ 前维生素 Ｄ３ 及 折算成 标 准偏 差 ， 同实验者 间 的偏差为 ０ ０ ％。 不 ．４ 检 测波长 ：５ ｎ ２ ４ ｍ； 维生素 Ｄ３ 的总峰面 积（ Ａ Ａ＝ ＋ Ｆ ×Ａ２ ， ）按 ２ ３ 回收 率试验 。 流速 ：．ｍ ／ ｎ ２０ ｌｍｉ 采 用标 准加 入法 ， 每个 浓度平 行三次 ， 计 外标 法 以峰 面 积计 算 供试 品含量 。 进 样量 ： ０ ｌ ２ ０ 。 ３ １ 线性关系考 察 ． ｎ ） 维 生素 Ｄ３对 照品（ 国药 品生物 制 品检 算 回收 率 。平均 回收 率 （＝９ 中 取 对 照 品贮 备 液 ２．０ｍｌ、 ３． ｎｌ ０ｉ 、 为 ９ 。 ％， Ｄ（＝９ 为 ０ ５ ％。 ９ ９ ＲＳ ） ． ８ 定所） ； ４ ０ 、 ５ ０ 、 ６ ０ 于 五 个 ２ ｍｌ 。 ｍｌ ． ｍｌ ． ｍｌ ０ 的 ２ ４ 样 品含量测定 ． 供 试 品 ：自制 。 取 测定样 品含量 为 ９ ． ％、 ｌ （ １ ９２ （Ｊ ％、９ ． 容 量 瓶 中 ， 此 五 个 稀 释 液 按 上 述 色 谱 条 ）． ９ 其 他 试 剂 均 为分 析 纯 。 件进样分析 。 ６％ 。 结论 ： 试 品溶 液浓 度在 ｌ ． ２ ０ ９ 供 ０ ３ ～３ ．６ ２内标 法 “ｇ ｍｌ 间 ，ｌ ｌ ／ 之 ｌ￣当于 称样 范 围在 ４ ％ ～ ｉ １ 参 照中 国药典 ２ ０ 年版附 录ｖ Ｋ 维生 ３外标法 ００ Ⅱ ２％之 间时 ， 面积与其浓 度呈 良好 的线性 。 峰 参 照Ｅ ２０口 Ｐ Ｏ２１ 维生素 Ｄ 含量测定 方法及 １４ ３ 素 Ｄ测 定法 ． 中国药典 ２ ０ 年版附 录ｖ ００ ⅡＫ 维生素 Ｄ测定 ３２ 精 密度试验 色谱 柱 ： ｌｍａ ＳＡ ａ５肚ｍ ，５ 。 ｔ ｉｃ（ ｉ ２０ｘ４ 平行 ６次测定供试 品的 含量 ， 并计算相 对 法 ６ ｍ） ａ ｒ 标准偏 差见表 ｌ 。 色谱柱 ： Ⅱｊ】 ｉｃ （ ｍ，５ Ａ ｔＩ Ｓｌａ５ Ｉａ ｉ １０×４ 。 内标 溶液 的制备 ： 称取邻 苯二 甲酸二 甲酯 ３３ 准确 度 。 ｍｍ） ２ ｒｇ， ２ ｍｌ 瓶 中 ， 正 己烷至刻 度 ， ５ ａ 置 ５ 量 加 摇 ６ 用 本法 测定 本 品三个 批号 的 含量分 别 为 供试 品溶液的配制 ： 取供试 品原液５ ， 移 ｍｌ
高效液相色谱法测定制剂中维生素D3粉的含量
高效液相色谱法测定制剂中维生素D3粉的含量摘要用高效液相色谱法测定VD3粉中VD3的含量。
采用菲罗门氨基键合硅胶柱（250mm×4.6mm，5μm），以正己烷-异丙醇（99：1）为流动相，流速为1.5ml/min，检测波长为265nm，柱温为25℃。
在此色谱条件下，维生素D3浓度在18.86μg/ml时进样量在10μl～100μl范围内呈良好的线性关系，r=1.0000，平均回收率为99.46%，RSD（n=6）为0.90%。
结论：本方法操作简便易行，系统使用性良好，适用于VD3粉中VD3的含量测定。
关键词：维生素D3粉；维生素D3；复方制剂；高效液相色谱法维生素D3（胆钙化醇；英文名：Vitamin D3）是一种脂溶性维生素，被看作是一种作用于钙、磷代谢的激素前体，帮助肠道内钙和磷的吸收，促进骨钙沉积，增加肾脏对钙、磷的重吸收，提高血钙、磷的浓度，有利于骨的矿化作用。
上市的补钙和补维生素的复方制剂中大多都含有VD3，由于VD3在复方制剂中含量极低，对光、热不稳定，在空气中易氧化和光解成前维生素D3、反式维生素D3、光甾醇和速甾醇等多种产物，在品种开发时多选取制成包合物的VD3粉为原料，以便提高产品的稳定性。
DSM生产的VD3粉加入维生素E、大豆油、明胶制成包合物的形式提高了稳定性。
但包合物的形式造成测定时VD3提取难度增大，有文献报到采用皂化后提取测定，此方法操作繁琐，而且提取中有损失影响结果。
另有采用稀释剂（DMSO-水10：2，0.2%BHT）溶解后，正己烷提取浓缩的方法，以达到液相测定浓度的要求，此方法操作时间长，提取浓缩过程中人为误差较大。
维生素D3粉进口注册标准JX2008006[7]中提取采用的是回流、萃取、旋蒸、充氮、溶解等方法，操作时间长、操作步骤繁琐，误差大。
本文参考相关文献[1] [2] [3] [8]并经验证，证明采用方法准确可靠，且操作简便、快速。
1仪器与试药高效液相色谱仪（赛默飞U3000、岛津SPD-M20A）；分析天平（奥豪斯AUW120D）；VD3对照品（批号：100061-201208，含量：99.8%，中国食品药品检定研究院）；VD3粉（10万单位/g，瑞士DSM Nutritional Products Ltd）；正己烷、异丙醇和甲醇为色谱纯；二甲基亚砜、二氯甲烷为分析纯。
维生素D3(VD3)胆钙化醇检测
维生素D3（VD3）/胆钙化醇检测
维生素D3（Vitamin D3, VD3），又称为胆钙化醇（Cholecalciferol）、胆钙化固醇，是维生素D的一种，属于脂溶性维生素，主要是由人体自身合成的，具有促进肠道钙吸收，诱导骨质钙磷沉着，维持血液中柠檬酸盐的正常水平和防止佝偻病等多种生理作用。
迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)、液质联用(LC-MS)、生化法，可高效、精准的检测维生素D3的含量变化。
此外，我们还提供其他维生素检测服务以及维生素检测试剂盒产品，以满足您的不同需求。
样品制备
1）称取粉末样品20 mg；
2）加入10 mL盐酸溶液，震荡摇匀；
3）加入10 mL水，震荡摇匀；
4）将溶液定容到200 mL；
5）用0.45 μm的微孔滤膜过滤；
6）用HPLC检测。
HPLC和LC-MS测定维生素D3样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关质谱参数（中英文）
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 维生素D3含量信息。
饲料中维生素D3含量检测
饲料中维生素D3含量检测科标化工分析检测中心通过市场调查和实验结果，发现养殖户为了解决家禽缺乏维生素D3所带来的“弱腿病”、生长率和饲料利用率下降、产蛋率下降等问题，在饲料中添加维生素D3，为了更好的监测饲料中维生素D3含量，科标化工分析检测中心现开发了其检测方法。
科标化工分析检测中心可依照ISO、ASTM、DIN、GB、HB等标准完成食品、饲料、药品、纺织品、农业、高分子材料、生物产品、建筑材料以及微生物产品理化性能、力学性能、电气性能等测试。
中心通过了中国国家认证认可监督管理委员会和中国合格评定国家认可委员会的二合一（CMA、CNAS）实验室认证认可，能出具权威的第三方检测报告。
饲料中维生素D3的含量检测(高效液相色谱法)一、实验原理科标化工分析检测中心参照国标GB/T17818-2010饲料中维生素D3的测定高效液相色谱法中第一法皂化提取法，试样经粉碎、过筛后，用碱溶液皂化，乙醚提取维生素D3，蒸发乙醚，残渣溶解于甲醇，取部分溶液用C18小柱净化，收集滤液，蒸发至干，用正己烷溶解，反相液相色谱柱分离测定，紫外检测器检测，外标法定量分析。
二、仪器和试剂试验地点：青岛科标化工分析检测中心实验室。
仪器：高效液相色谱仪带紫外检测器，AS3120超声波发生器；试剂：甲醇为色谱纯试剂，实验用水为超纯水，维生素D3标准品（购于日本CPE公司）。
三、试验方法1.皂化称取样品（配合饲料称取10g~20g，浓缩饲料10g，维生素预混饲料或复合预混合饲料1g~5g）精确至0.0001g，置于250ml圆底烧瓶中，加入50ml5g/LL-抗血酸乙醇溶液，混匀，加入10ml氢氧化钾溶液，混匀，置于沸水浴上回流30min，不时震荡防止样品粘附在壁上。
皂化结束，分别用5ml无水乙醇、5ml蒸馏水自冷凝管顶端冲洗其内部，取出烧瓶冷却至室温。
2.提取定量转移全部皂化液于盛有100ml无水乙醚的500ml分液漏斗中，用40ml水分3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗，用160ml乙醚分三次萃取，合并乙醚相。
d3-d10含量标准
d3-d10含量标准
d3-d10含量标准是指维生素D3（又称胆钙化醇）和维生素
D10（又称螺环胆醇）的含量标准。
维生素D3和维生素D10是两种维生素D的天然形式，它们在人体内起着调节钙和磷代谢的重要作用。
根据国际标准，维生素D3和维生素D10的含量标准如下：
- 维生素D3的含量标准：通常以国际单位（IU）衡量，一般建议每日摄入量为400-800 IU。
在我国，维生素D3的含量标准为每100克食品中不少于400国际单位。
- 维生素D10的含量标准：维生素D10的含量相对较少，一般以微克（μg）表示。
在我国，维生素D10的含量标准为每100克食品中不少于0.1微克。
需要注意的是，维生素D3和维生素D10主要通过阳光照射皮肤或食物摄入，而不是通过食物直接补充。
因此，食品中含有的维生素D3和维生素D10的含量标准主要用于参考和指导食品行业，在生产加工过程中，合理添加维生素D3和维生素
D10的含量。
对于个体的维生素D需求，应根据个人情况和医生的建议进行调节。
维生素D3的含量检验方法
维生素D3的含量检验方法一、目的：建立维生素D3含量检验操作规程，保证分析结果的准确性。
二、依据：GB/T 5413.9-1997含量检验操作三、范围：本规程适用于本公司维生素D3四、职责：质量检验员对本标准的实施负责五、正文：1、试制和溶液1.1 高峰氏淀粉酶（Taka-Diastase）1.2 异丙醇：色谱纯1.3 焦性没食子酸的乙醇溶液15g/L1.4 氢氧化钾溶液：质量比100:501.5 石油醚：沸程30~601.6 甲醇：重蒸后使用。
1.7 正己烷：色谱纯。
1.8 环己烷：色谱纯1.9 维生素D3标准储备液：含维生素D3100ug/ml（称取10mg维生素D3，用甲醇定容于100ml量瓶中）1.10 维生素D3标准工作液：取维生素D3标准储备液1ml于100ml量瓶中，用甲醇定容。
2、实验室常用仪器。
2.1 高效液相色谱仪：具有可变波长的紫外分光检测器、数据处理系统或记录仪。
2.2 平底烧瓶：250ml2.3 分液漏斗：500ml2.4 旋转蒸发器。
3 分析步骤3.1 试样处理准确称取10g样品，放入250ml平底烧瓶中，加入1gTaka淀粉酶（3.1），再加入30ml45~50℃的蒸馏水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置45℃烘箱内30min，于上述样品中加入100ml没食子酸的乙醇溶液（3.3），充分混匀后加入50ml氢氧化钾溶液（3.4），在蒸汽浴上回流30min后，立即冷却到室温。
将冷却后的皂化液转入500ml分液漏斗中，用100ml水分几次冲洗平底烧瓶，洗涤液并入分液漏斗中；于分液漏斗中加入100ml石油醚（3.5），盖好瓶塞，倒置分液漏斗并剧烈振摇1min，静置分层，将水相放入另一500ml分液漏斗中。
重复上述萃取过程二次，合并醚液到第一个分液漏斗中。
用蒸馏水洗至中性，通过无水硫酸钠过滤干燥，在40℃和氮气流下，于旋转蒸发器上蒸至近干后，用石油醚转移至10ml量瓶中，定容。
维生素D3的含量检验方法
维生素D3的含量检验方法维生素D3的含量检验方法含量检验操作规程，保证分析结果的准确性。
一、目的：建立维生素D3二、依据：GB/T 5413.9-1997三、范围：本规程适用于本公司维生素D3含量检验操作四、职责：质量检验员对本标准的实施负责五、正文：1、试制和溶液1.1 高峰氏淀粉酶（Taka-Diastase）1.2 异丙醇：色谱纯1.3 焦性没食子酸的乙醇溶液15g/L1.4 氢氧化钾溶液：质量比100:501.5 石油醚：沸程30~601.6 甲醇：重蒸后使用。
1.7 正己烷：色谱纯。
1.8 环己烷：色谱纯1.9 维生素D3标准储备液：含维生素D3100ug/ml（称取10mg 维生素D3，用甲醇定容于100ml量瓶中）1.10 维生素D3标准工作液：取维生素D3标准储备液1ml于100ml量瓶中，用甲醇定容。
2、实验室常用仪器。
2.1 高效液相色谱仪：具有可变波长的紫外分光检测器、数据处理系统或记录仪。
2.2 平底烧瓶：250ml2.3 分液漏斗：500ml2.4 旋转蒸发器。
3 分析步骤3.1 试样处理准确称取10g样品，放入250ml平底烧瓶中，加入1gTaka淀粉酶（3.1），再加入30ml45~50℃的蒸馏水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置45℃烘箱内30min，于上述样品中加入100ml没食子酸的乙醇溶液（3.3），充分混匀后加入50ml氢氧化钾溶液（3.4），在蒸汽浴上回流30min后，立即冷却到室温。
将冷却后的皂化液转入500ml分液漏斗中，用100ml水分几次冲洗平底烧瓶，洗涤液并入分液漏斗中；于分液漏斗中加入100ml石油醚（3.5），盖好瓶塞，倒置分液-------------------------------------------------------------------------------漏斗并剧烈振摇1min，静置分层，将水相放入另一500ml分液漏斗中。
高效液相色谱法测定维多宝泡腾片中的维生素D3的含量
高效液相色谱法测定维多宝泡腾片中的维生素D3的含量
张玫;刘新宇
【期刊名称】《上海医药》
【年(卷),期】1998(019)002
【摘要】目的：探讨维多宝泡腾片中维生素Ｄ３的含量的测定方法。
方法：高效
液相色谱法。
采用Ｎｏｖａ－Ｐａｋ硅胶色谱柱，二氧六环－１－辛醇－正乙烷（３：１：９６）为流动相，紫外检测波长２６５ｎｍ。
结果：维生素Ｄ３平均回收率为９９．４０％，ＲＳＤ为１．４０％（ｎ＝３）。
结论：本方法简便、准确、快速，且重现性好，适用于维生素Ｄ３的常规分析。
【总页数】2页(P36-37)
【作者】张玫;刘新宇
【作者单位】上海市药品检验所;上海市药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】R977.24
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路遥;晏亮;吉伟佳;虞雪军
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维生素D3和维生素E的测定
维生素D3和维生素E的测定测定参数维生素D3和维生素E原理HPLC适用产品浓缩剂和预混料测定范围维生素D3≥2000IU/g维生素E≥50IU/g方法来源（1）Baker-10SPE TM Application Guide Vol,1︰42（2）Cargill Notebook# 984︰40,41,46.实验室联系人姓名：Glenn Miller公司：Cargill Lakeshore Laboratory试剂（及适用来源）（1）乙酸，试剂纯。
（2）乙腈，HPLC纯，Am.B&J或相当等级。
（3）乙醇（无水）。
（4）异丙醇，试剂级。
（5）甲醇，HPLC纯，Am.B&J或相当等级。
（6）二氯甲烷，HPLC纯，Am.B&J或相当等级。
（7）BHT，分析纯，Chem Serv.Inc.（8）维生素D3标准品：试剂纯，U.S Biochemical Corp。
（9）dl-α-生育酚乙酸酯（维生素E乙酸酯标准），试剂纯，U.S Biochemical Corp.Eastman Kodak Co.,or Sigma.（10）dl-α-生育酚（维生素E乙醇标准），试剂级，U.S Biochemical Corp.Eastman Kodak Co.,或Sigma.仪器设备（及适用来源）（1）高效液相色谱仪，Waters590型，双活塞泵，Waters Novapak 5umC18柱，带有20ul或50ul固定环管的进样阀。
Kratos Spectraflow 783可变波长检测器，检测波长为260nm（测维生素D3）或292nm（测维生素E）或相同的HPLC系统。
（2）天平，称准到±0.0001g。
（3）水浴锅。
（4）氮气。
（5）250ml锥形瓶，带磨口接头和塞子。
（6）100、50、25、10ml容量瓶及各种移液管。
（7）Burrell旋转式振荡器。
（8）Vac-elut带减压多管装置的固体萃取器（分析化学公司生产或相当产品）。
维生素D的含量检验方法
维生素D的含量检验方法 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020维生素D3的含量检验方法含量检验操作规程，保证分析结果的准确性。
一、目的：建立维生素D3二、依据：GB/T三、范围：本规程适用于本公司维生素D3含量检验操作四、职责：质量检验员对本标准的实施负责五、正文：1、试制和溶液高峰氏淀粉酶（Taka-Diastase）异丙醇：色谱纯焦性没食子酸的乙醇溶液15g/L氢氧化钾溶液：质量比100:50石油醚：沸程30~60甲醇：重蒸后使用。
正己烷：色谱纯。
环己烷：色谱纯维生素D3标准储备液：含维生素D3100ug/ml（称取10mg维生素 D3，用甲醇定容于100ml量瓶中）维生素D3标准工作液：取维生素D3标准储备液1ml于100ml量瓶中，用甲醇定容。
2、实验室常用仪器。
高效液相色谱仪：具有可变波长的紫外分光检测器、数据处理系统或记录仪。
平底烧瓶：250ml分液漏斗：500ml旋转蒸发器。
3 分析步骤试样处理准确称取10g样品，放入250ml平底烧瓶中，加入1gTaka淀粉酶（），再加入30ml45~50℃的蒸馏水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置45℃烘箱内30min，于上述样品中加入100ml没食子酸的乙醇溶液（），充分混匀后加入50ml氢氧化钾溶液（），在蒸汽浴上回流30min后，立即冷却到室温。
将冷却后的皂化液转入500ml分液漏斗中，用100ml水分几次冲洗平底烧瓶，洗涤液并入分液漏斗中；于分液漏斗中加入100ml石油醚（），盖好瓶塞，倒置分液漏斗并剧烈振摇1min，静置分层，将水相放入另一500ml分液漏斗中。
重复上述萃取过程二次，合并醚液到第一个分液漏斗中。
用蒸馏水洗至中性，通过无水硫酸钠过滤干燥，在40℃和氮气流下，于旋转蒸发器上蒸至近干后，用石油醚转移至10ml量瓶中，定容。
饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法-最新国标
1范饲料中维生素D3的测定高效液相色谱法围本文件描述了饲料中维生素D3的高效液相色谱测定方法。
本文件中“第一法皂化提取法”适用于配合饲料、精料补充料、浓缩饲料、复合预混合饲料、维生素预混合饲料中维生素D3的测定，定量限为12.5μg（500IU）/kg。
本文件中“第二法直接提取法”适用于维生素预混合饲料中维生素D3的测定，定量限为25mg （100万IU）/kg。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。
4第一法皂化提取法注意：使用的器皿不含有氧化性物质；分液漏斗活塞玻璃表面不涂油，处理过程在避光下操作；提取过程在通风柜中操作。
4.1原理试样用碱溶液皂化后，高含量的预混合饲料皂化液经液液萃取或固相萃取净化、浓缩后，直接上反相高效液相色谱仪分离、测定，外标法测定；而低含量试样的皂化液则需在液液萃取或离线或在线固相萃取净化后，经一维色谱柱进一步分离净化，然后切换至二维反相色谱柱分离、测定，外标法定量。
4.2试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。
4.2.1水：GB/T6682,一级。
4.2.2无水乙醇：色谱纯。
4.2.3无水乙醇。
4.2.4石油醚（沸程30℃-60℃）。
4.2.5甲醇：色谱纯。
4.2.6乙腈：色谱纯。
4.2.7甲酸。
4.2.8异丙醇：色谱纯。
4.2.9L-抗坏血酸。
4.2.10二丁基羟基甲苯（BHT）。
4.2.11无水硫酸钠。
4.2.24.2.12氢氧化钾溶液（500g/L ）：称取500g 氢氧化钾，加水溶解，冷却后用水定容至1L ，混匀。
4.2.13乙醇溶液I（70%，体积分数）：量取无水乙醇70mL，用水稀释，定容至100mL ，混匀。
维生素D3 100CWS检验操作记录
对照品溶液的配制：称取10.0mg维生素D3，用流动相溶解并稀释至100ml作为对照品贮备液，精密量取10ml，用流动相稀释至50ml作为对照品溶液。
取本品10g,依法检查（中国药典2010年版二部附录IX E第二法），通过850μm（20目）孔径药筛的量应为100%，通过425μm（40目）的量不得少于90%，通过150μm（100目）的量不得过15%。
取本品1g，加20℃水100ml，用磁力搅拌器搅拌5分钟，应呈均匀的不含任何颗粒的乳状液。
避光操作。照薄层色谱法（中国药典2010版二部附录V B）试验，吸取鉴别项下的供试品溶液20μl，点于硅胶GF254薄层板上，以环己烷-乙醚（50:50）为展开剂，展开后，晾干，喷以20%三氯化锑的氯仿溶液三次（每次喷后，均需晾干）后检视。供试品溶液原点处不得显灰蓝色斑点，且原点和维生素D3主斑点之间不得有条纹
平均含量：
检验项目
操作程序
记录
S样样品峰面积
M样样品称样量（g）
10样品稀释体积（ml）
0.025每单位维生素D3重量（μg）
每克含维生素D3（C27H44O）应为100,000~110,000单位。
相对偏差=—————————×100%=
结论
本品按检验，结果
检验人/日期
复核人/日期
供试品溶液的配制：称取样品80.0mg（相当于维生素D3 200μg），加入60%乙醇溶液20ml，涡旋振摇1min，加入正己烷20ml，涡旋振摇4min，4000r/min离心10min，分离，上层正己烷层分至分液漏斗，下层水层分回离心管，再加入正己烷20ml，涡旋振摇4min，4000r/min离心5min，重复前次分离操作，水层弃去，合并正己烷层，40-50℃水浴旋转蒸干，在氮气保护下，精密加入流动相10ml，滤过，续滤液作为供试品溶液。
维生素d3粉剂质量标准
维生素d3粉剂质量标准一、概述维生素D3是人体必需的营养素之一，具有调节钙磷代谢、促进骨骼生长和免疫调节等重要作用。
随着人们对健康的关注日益增加，维生素D3的需求也逐渐增大。
为了规范市场，提高产品质量，本文制定了维生素D3粉剂的质量标准。
二、质量标准1. 外观性状维生素D3粉剂应为淡黄色至黄绿色的粉末，无杂质，无异味。
不得含有肉眼可见的杂质，如色斑、结块等。
2. 鉴别试验采用紫外可见分光光度法进行鉴别。
取适量样品，用适量甲醇溶解，在265nm的波长处测定吸光度，应符合规定。
同时可采用液相色谱法或气相色谱法等分离方法对样品进行进一步的鉴别。
3. 含量测定采用高效液相色谱法进行含量测定。
色谱柱应为硅胶柱或C18柱，流动相为甲醇-水（70:30），流速为1.0ml/min，检测波长为265nm。
将样品适量溶解于甲醇中，进样分析，根据保留时间和峰面积与标准品比较确定维生素D3的含量。
经多次试验验证，该方法的线性范围为0.5-5.0mg/ml，回收率应在95%-105%之间，相对标准偏差应小于2%。
4. 杂质限量（1）重金属：采用原子吸收光谱法或原子荧光光谱法测定样品中的重金属含量，如铅、汞等。
根据测得的数据计算最大允许限量。
参考国家相关标准，重金属限量应符合规定。
（2）有机杂质：采用高效液相色谱法或气相色谱法等分离方法对样品进行分离分析，确定有机杂质的种类和含量。
根据测得的数据计算最大允许限量。
参考国家相关标准，有机杂质限量应符合规定。
5. 微生物限度采用常规微生物培养法对样品进行微生物限度检查，包括细菌总数、霉菌总数、酵母菌总数等指标。
根据测得的数据计算最大允许限量。
参考国家相关标准，微生物限度应符合规定。
三、结论本文制定了维生素D3粉剂的质量标准，包括外观性状、鉴别试验、含量测定、杂质限量和微生物限度等方面。
通过该标准的实施，可以规范市场秩序，提高产品质量，保障消费者的健康安全。
同时，对于生产企业而言，也可以通过遵循本标准提高生产工艺和技术水平，提升产品质量和竞争力。
复方钙片中维生素D3的含量测定
复方钙片中维生素D3的含量测定维生素D 为固醇类衍生物，具抗佝偻病作用，又称抗佝偻病维生素。
它可以帮助人体更好地吸收钙，增强骨骼韧性和密度，预防骨质疏松，此外还能预防很多慢性病像癌症，糖尿病，风湿性关节炎，多发性硬化，自体免疫等疾病[1-3] 。
人体所需钙量因年龄、生理及病理等不同而异。
人们可以根据自己的需求适当补充维生素D 和钙。
维生素D3是维生素D家族中的重要成员。
实验室前期制备了维生素D3和钙的复方制剂，为了控制该制剂中维生素D3的质量，建立了高效液相色谱法测定维生素D3的含量。
1仪器与试药Agilent1100 高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；KQ5200 超声波清洗器（昆山市超声仪器XX公司）；RJ-TGL-16C?^高速离心机（无锡市瑞江分析仪器XX公司）；复方钙片（本院自制）；维生素D3对照品（1000611-200607，中国药品生物制品检定所）；甲醇、乙醇均为分析纯。
2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Venusil MPC184.6 x 250 mrp5 卩m ; 流动相：甲醇；流速：1 ml/min ;检测波长：265 nm柱温：25C; 进样量：20卩l。
2.2 溶液的制备2.2.1 对照品溶液的制备精密称取5 mg 的维生素D3 对照品置于250 ml 的棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，使成为20卩g/ml的对照品溶液。
精密吸取该对照品溶液 3 ml置于50 ml棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得 1.2卩g/ml 的对照品溶液。
2.2.2供试品溶液的制备取本品20片放入研钵中研细成粉末，取粉末适量，精密称定后放入50 ml 锥形瓶中，加入10ml 乙醇，称重，浸润10 min 后超声20 min ，补足减失的重量。
将溶液转移至离心管，放置离心机中以4000 r/min 离心5 min 。
取离心后的上清溶液，作为供试品溶液。
2.2.3阴性对照品溶液的制备照复方钙片的制备工艺制备不含维生素D3的空白片，取该片适量放入研钵中研成粉末，以下操作同2.2.2 项下供试品溶液的制备方法，制得阴性对照品溶液。
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维生素D3的含量检验方法
含量检验操作规程，保证分析结果的准确性。
一、目的：建立维生素D
3
二、依据：GB/T 5413.9-1997
三、范围：本规程适用于本公司维生素D3含量检验操作
四、职责：质量检验员对本标准的实施负责
五、正文：
1、试制和溶液
1.1 高峰氏淀粉酶（Taka-Diastase）
1.2 异丙醇：色谱纯
1.3 焦性没食子酸的乙醇溶液15g/L
1.4 氢氧化钾溶液：质量比100:50
1.5 石油醚：沸程30~60
1.6 甲醇：重蒸后使用。
1.7 正己烷：色谱纯。
1.8 环己烷：色谱纯
1.9 维生素D3标准储备液：含维生素D3100ug/ml（称取10mg维生素D3，用甲醇定容于100ml量瓶中）
1.10 维生素D3标准工作液：取维生素D3标准储备液1ml于100ml量瓶中，用甲醇定容。
2、实验室常用仪器。
2.1 高效液相色谱仪：具有可变波长的紫外分光检测器、数据处理系统或记录仪。
2.2 平底烧瓶：250ml
2.3 分液漏斗：500ml
2.4 旋转蒸发器。
3 分析步骤
3.1 试样处理
准确称取10g样品，放入250ml平底烧瓶中，加入1gTaka淀粉酶（3.1），再加入30ml45~50℃的蒸馏水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置45℃烘箱内30min，于上述样品中加入100ml没食子酸的乙醇溶液（3.3），充分混匀后加入50ml氢氧化钾溶液（3.4），在蒸汽浴上回流30min后，立即冷却到室温。
将冷却后的皂化液转入500ml分液漏斗中，用100ml水分几次冲洗平底烧瓶，洗涤液并入分液漏斗中；于分液漏斗中加入100ml石油醚（3.5），盖好瓶塞，倒置分液
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漏斗并剧烈振摇1min，静置分层，将水相放入另一500ml分液漏斗中。
重复上述萃取过程二次，合并醚液到第一个分液漏斗中。
用蒸馏水洗至中性，通过无水硫酸钠过滤干燥，在40℃和氮气流下，于旋转蒸发器上蒸至近干后，用石油醚转移至10ml量瓶中，定容。
吸取7ml醚液至一试管中，用氮气将醚液吹干，加入1ml 正己烷，即得供试品溶液。
3.2测定
3.2.1测定液的制备
仪器条件
色谱柱：30cm×40mm，硅胶柱
流动相：环己烷（3.7）与正己烷（3.8）按体积比1:1混合，并按体积
分数0.8%加入异丙醇（3.2）
流速：1ml/min
波长：265nm
柱温：20℃
灵敏度：0.005AU/MV
注射体积：200ul
制备：注射50ul维生素D标样和200ul样品溶液（试管B），根据维生素D
标样的保
留时间收集维生素D与试管C中，将试管C用氮气吹干，准确加入0.2ml甲醇（3.6）溶解。
3.2.2 测定步骤
仪器条件
色谱柱：25cm×4.6mm，C18或等同性能的色谱柱
流动相：甲醇
流速：1ml/min
柱温：20℃
波长：265nm
灵敏度：0.005AU/MV
注射体积：50ul
注射50ul维生素D标准溶液，注射50ul样品溶液（试管C中），得到标样和样品溶、液中维生素D峰面积或峰高
4、计算：
Cs ×10/75 ×100 ×40
m ×1000
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------------------------------------------------------------------------------- 样品中维生素D(IU/100g) =
Cs = × C sd
式中：Cs —进样液中维生素D 的质量浓度，ug/ml
m —样品的质量，g A S —进样液中维生素D 的峰高（或峰面积） A Sd —标样中维生素D 的峰高（或峰面积） C sd —标样中维生素D 的质量浓度，ug/ml
计算结果精确到小数点后一位。
A S A Sd。