蜡样芽孢杆菌试纸说明书
蜡样芽孢杆菌国标检测方法
蜡样芽孢杆菌国标检测方法蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）是一种广泛存在于自然环境中的细菌，它可以生长在食品和环境中，因此对于食品和饮料行业来说，蜡样芽孢杆菌的检测非常重要。
国际上已经制定了相关的标准，而国内也制定了具体的检测方法。
本文将介绍蜡样芽孢杆菌国标检测方法并展开详细描述，以供相关行业参考。
1. 国标检测方法蜡样芽孢杆菌国标检测方法主要采用了生物学检测和分子生物学检测方法。
生物学检测主要使用平板计数法和过滤膜法，分子生物学检测主要使用聚合酶链式反应法（PCR法）和实时荧光定量PCR法（qPCR法）。
2. 样品选择需要检测的样品包括：发酵食品、膳食补充剂、调味品、果蔬制品、肉制品和乳制品等。
3. 样品制备样品制备前应先进行预处理。
首先采样应在保持样品原有状态的基础上进行。
对于固体样品，应采用加热处理或浸泡法进行分离；对于液体样品，应使用过滤方法或离心沉淀法进行分离。
4. 平板计数法平板计数法是指直接将样品加入含有富含营养物质的寒天平板中，将平板培养在适宜的环境中，形成菌落后进行计数。
整个操作过程需要消毒操作标本及工具，取样后用无菌吸管挤压或邀约样本，点样于寒天平板上，用无菌毛细管在菌液上滴蒸馏水，最后在恰当条件下培养。
5. 过滤膜法过滤膜法将膜片放入模具上，加入样品后进行过滤，将膜片放入含营养物质的寒天平板中，使其形成菌落后，进行计数。
操作过程中需要对膜片进行密封操作以避免空气污染。
6. PCR法PCR法是指从样品中提取DNA，并使用特定引物进行扩增，在扩增过程中计量目的DNA 的含量。
PCR方法的核心技术是产生大量DNA分子复制，以此来检测目标DNA。
7. qPCR法qPCR法是指通过PCR法产生信息荧光信号，以定量检测目标DNA的含量。
qPCR法和PCR法类似，都是通过DNA扩增并检测扩增产物来判断样品是否含有目标DNA。
8. 标准限值国标GB 4789.38-2016中规定蜡样芽孢杆菌在各类食品和饮料中的限值分别为100CFU/g和10CFU/mL，不得检出则符合标准。
蜡样芽孢杆菌检测国标
蜡样芽孢杆菌检测国标蜡样芽孢杆菌是一种常见的致病微生物，它会引起食物中毒的发生。
针对蜡样芽孢杆菌的检测方法，我国制定了相关国家标准，本文将从以下三个方面进行介绍。
一、蜡样芽孢杆菌简介
蜡样芽孢杆菌又称为蜡样芽孢菌（Bacillus cereus），是一种革兰氏阳性菌。
其孢子分布广泛，可以在空气、土壤、水、食品等各种环境中存活，甚至在高温加工食品中也可以存活。
蜡样芽孢杆菌是一种致病微生物，能够引起急性食物中毒，这是因为它产生的毒素能够影响肠胃道，引起呕吐、腹泻等症状。
二、蜡样芽孢杆菌检测国标
为了保障人们的食品安全，我国对食品中的蜡样芽孢杆菌进行了规范化的检测方法，主要是通过标准的培养及鉴定步骤进行。
1.样品采集：首先需要确定样品的种类，其次选择适当的采集方法，例如在市场上购买的食品需要在废弃部位进行采集，以保障采样的准确性。
2.样品处理：将采集到的食品样品进行前处理，包括样品的清洁去除外部污染等步骤。
3.菌液制备：将采样到的食品样品用合适的培养基进行培养，培养出的菌落进行鉴定，得到蜡样芽孢杆菌后进行菌液制备。
4.检测方法：采用PCR法、生物分子方法、蛋白质检测法等方式对菌液进行检测，以确认菌液中是否有蜡样芽孢杆菌存在。
5.结果判定：判定样品中是否存在蜡样芽孢杆菌，并进行定性和定量分析。
三、总结
蜡样芽孢杆菌检测国标对食品安全有着重要的意义，它通过科学、规范的检测方法保障了人们的食品安全。
在实际操作中，应加强样品采集及前处理，保证样品的准确性。
同时，为了提高检测的灵敏度和准确性，应选择合适的检测方法。
最后，需要将检测结果进行有效记录，以便后续参考。
蜡样芽胞杆菌检验
生化鉴定
挑取纯培养的单个菌落，进行 酪蛋白分解试验（+）、动力试验 （大多+）、V-P试验（+）、硝酸盐 还原试验（+）、糖发酵试验（+）、 溶菌酶耐性试验（+）。
根状生长试验
挑取单个可疑菌落平行划线接种于 营养琼脂平板上，30 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h 蕈状芽胞杆菌形成根状生长的特征 蜡样芽胞杆菌菌株形成粗糙的似毛 玻璃状或融蜡状的菌落
蜡样芽胞杆菌检验 标准操作程序
国巢湖国巢
背景
革兰氏阳性芽胞杆菌 在自然界广泛存在 可引起食物中毒等食源性疾病
背景
国际上，早在1906年就有由该菌引起的病例报道，目前全世界 每年都有相当数量的病例发生
在国内，首次报告是1973年南京某托儿所儿童因进食泡饭引起呕 吐型蜡样芽胞杆菌食物中毒，至今除西藏外，每个省、自治区、直辖 市已经都有报，有些地区甚至占细菌性食物中毒的首位
溶血试验
挑取纯培养的单个可疑菌落接种于 TSSB琼脂（胰酪胨大豆羊血琼脂） 平板上，30 ℃±1 ℃培养24 h±2 h。
溶血试验
蜡样芽胞杆菌菌落为浅灰色，不透明，似白色 毛玻璃状，有草绿色溶血环或完全溶血环 苏云金芽胞杆菌和蕈状芽胞杆菌呈现弱的溶血 现象 多数炭疽芽胞杆菌为不溶血 巨大芽胞杆菌为不溶血
使用前，如MYP琼脂平板表面有水珠，可放在25℃ ～ 50℃的培养 箱里干燥，直到平板表面的水珠消失
30 ℃±1 ℃培养24 h±2 h 同一稀释度3个平板所有菌落数合计 在15CFU～150CFU典型或可疑蜡样芽 胞杆菌菌落的平板，进行计数
从典型菌落中至少挑取5个（小于5 个全选），划线接种于营养琼脂平 板， 30 ℃±1 ℃培养24 h±2 h， 进行确证实验
蜡样芽胞杆菌的检验实验讲义-2011
蜡样芽胞杆菌的检验实验讲义前言蜡样芽孢杆菌为革兰氏阳性需氧芽胞杆菌，在自然界分布广泛。
在植物、许多生熟食品上均能分离到，例如乳制品、禽畜类制品、蔬菜、汤汁、淀粉类制品等。
污染食品后，在20℃～45℃，pH4.9～9.3条件下可以迅速繁殖并产生大量肠毒素。
该菌引起的食物中毒的食品感官性状均无明显变化，除食品有发粘、稍有异味无明显腐败变质现象，容易被人忽视。
当一次摄入食品中细菌数量达到100万／g（ml），即可发生食物中毒。
特性：①生物学性状，革兰氏阳性大杆菌，菌体两端较平整，多数呈链状排列。
芽胞呈椭圆形，多位于菌体中央或稍偏于一端，芽胞囊不突出菌体。
引起食物中毒的菌株多为周毛菌，有动力，不形成荚膜；②培养特性，需氧菌，最适生长温度28 ℃～35℃，最适pH7.0～7.4，营养要求不高。
在普通培养基上生长的菌落较大，直径3mm～10mm，灰白色，不透明，表面粗糙成毛玻璃状或融蜡状，边缘不整齐，呈扩散状。
在血平板上形成浅灰色、不透明呈毛玻璃状的菌落，有草绿色溶血环或完全溶血环。
在甘露醇卵黄多粘菌素（MYP）培养基菌落为粉红色（不发酵甘露醇），周围有粉红色的晕（产生卵磷脂酶）。
在普通肉汤中呈混浊生长，常形成均膜或壁环；③生化性状，卵磷脂酶、酪蛋白酶、过氧化氢酶、青霉素酶、明胶液化、硝酸盐还原试验均阳性。
溶血。
不发酵甘露醇、木糖、阿拉伯糖。
实验安排一、稀释菌悬液的制备：二、细菌接种：不发酵甘露醇，且产生卵磷脂酶的细菌。
（在MYP培养基上呈粉红色，周围有粉红色晕的菌落。
三、菌数测定：四、形态学观察：肉汤培基、营养琼脂培基、革兰氏染色、动力。
五、生化试验：酪蛋白酶、硝酸盐还原酶、明胶酶、过氧化氢酶阳性第一部分用灭菌生理盐水将检样作成10-1～10-5的稀释液。
取每个稀释度0.1ml接种在甘露醇卵黄多粘菌素（MYP）琼脂培养基上，用L形棒涂布于整个表面，置于32±1℃温箱培养12～20h。
一、稀释菌悬液的制备：1. 每组取5支高压灭菌的玻璃试管，用10ml吸管吸取9ml生理盐水分别加入5支试管之中。
蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程
蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程一、引言蜡样芽孢杆菌是一种常见的微生物，其活菌数含量的测定对于粮食、食品和医药行业具有重要意义。
本文档旨在提供一份蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程，以确保测定结果准确可靠。
二、仪器与试剂- 无菌培养基- 自动培养箱- 显微镜- 十倍镜- 干燥烘箱- 无菌分注器- 离心机- 紫外灯三、操作步骤1. 准备工作- 清洗并消毒所有使用过的实验器材。
- 配制无菌培养基，确保培养基的质量符合要求。
2. 样品处理- 将待测样品加入适量的无菌水中，并通过搅拌均匀。
- 取适量的处理后的样品，通过无菌分注器加入无菌培养基中。
3. 培养- 将含有待测样品的无菌培养基均匀涂布于一片无菌培养基平板上。
- 将平板放入自动培养箱中，设置适当的温度和培养时间进行培养。
4. 菌落计数- 取出培养完毕的平板，使用显微镜和十倍镜对菌落进行观察和计数。
- 记录菌落数，得到待测样品中蜡样芽孢杆菌的菌落形成单位（CFU）。
5. 活菌数计算- 将菌落计数结果乘以相应的稀释倍数，得到待测样品中蜡样芽孢杆菌的活菌数含量。
6. 结果确认- 将结果与标准值进行比较，确保测定结果准确可靠。
四、风险提示- 操作过程需保持无菌操作，避免污染。
- 使用紫外灯时需注意安全，避免直接照射眼睛和皮肤。
五、总结蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程是确保测定结果准确可靠的重要工作。
按照本文档的要求进行操作，能够有效地保证测定的准确性，并为粮食、食品和医药行业的安全生产提供科学依据。
蜡样芽孢杆菌使用说明
蜡样芽孢杆菌编号 名称北京华越洋生物NRR00420 蜡样芽孢杆菌基本信息：名称：蜡样芽孢杆菌规格：300ul甘油菌储存温度：-‐80℃基因组：蜡样芽孢杆菌简介：蜡样芽孢杆菌是芽胞杆菌属中的一种。
菌体细胞杆状，末端方，成短或长链，1.0～1.2×3.0～5.0微米。
产芽孢，芽孢圆形或柱形，中生或近中生，1.0～1.5微米，孢囊无明显膨大。
革兰氏阳性，无荚膜，运动。
菌落大，表面粗糙，扁平，不规则。
菌落形态：在普通琼脂平板培养基上，37 ℃，培养24 h，可形成圆形或近似圆形、质地软、无色素、稍有光泽的白色菌落(似蜡烛样颜色)直径5-‐7 m m．在M.S.P 培养基上生长更旺盛，菌落直径达8-‐10 m m，质地更软，挑起来呈丝状，培养时间稍长，菌落表面呈毛玻璃状，并产生红色色素。
在蛋白胨酵母膏平板上菌落为灰白色，不透明，表面较粗糙，似毛玻璃状或融蜡状，菌落较大。
蜡状芽胞杆菌细菌对外界有害因子抵抗力强，分布广，是典型的菌体细胞，有部分菌株能产生肠毒素，呈杆状(约 1.5μm)，有色，孢子呈椭圆形，有致呕吐型和腹泻型胃肠炎肠毒素两类。
兼性好氧。
生长温度范围20～45℃，10℃以下生长缓慢或不生长。
操作说明：1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。
也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。
2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
冷冻管开封：用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌株复溶：无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml 左右复溶液，加入到冷冻管中。
轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮：用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。
做好标识，在适宜温度下培养。
细菌在30-‐35℃培养箱中培养24-‐48h，真菌在23-‐28℃培养箱中培养24-‐72h （必要时，可适当延长培养时间）。
蜡样芽孢杆菌显色培养基 说明书
专注微生物监测控制 为食药安全保驾护航广东环凯微生物科技有限公司 网址：地址：广州市黄埔区科学城神舟路788号 邮编：510663 传真：************-8619销售热线：************转8602（分机） 技术热线：************转8876、8877（分机）产品说明书Product Manual【产品名称】通用名称：蜡样芽孢杆菌显色培养基英文名称：Chromogenic Bacillus Cereus Agar【产品编号与包装规格】产品编号 产品类型 包装规格 CRM005 干粉 1000mL/瓶 SR0210A 配套试剂A 1瓶 SR0210B配套试剂B10支/盒【产品用途】用于蜡样芽孢杆菌的选择性分离和初步鉴别。
【检验原理】蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素；氯化钠维持均衡的渗透压；丙酮酸钠刺激蜡样芽胞杆菌的生长；琼脂是培养基的凝固剂；显色剂与蜡样芽孢杆菌具有的酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在乳白色平板上，蜡样芽孢杆菌产生绿~蓝绿色的粗糙边缘不整齐菌落，周围有乳白色脂肪水解圈；抑菌剂可抑制杂菌。
【配方成分】成分 含量（每升） 成分 含量（每升） 蛋白胨 8.0g 琼脂 15.0g 酵母膏粉 3.0g 丙酮酸钠 8.0g 氯化钠 5.0g 显色剂 0.3g 蒸馏水 1000mL 抑菌剂0.7g最终pH7.2±0.2【使用方法】称取瓶内干粉基础培养基40g ，用950mL 蒸馏水或去离子水溶解，可按比例扩增或缩小。
搅拌加热煮沸至完全溶解，同时将配套试剂A(SR0210)加入40mL 蒸馏水或去离子水中，充分混匀成均一乳白色溶液(可借用磁力搅拌器或涡漩混合器)，基础培养基和配套试剂A 分别在121℃高压蒸汽灭菌15min ， 冷至约50℃备用； 取10支配套试剂B(SR0210)分别加入1mL 无菌水，使之完全溶解；将配套试剂A 和B 加入到约50℃基础培养基中，充分混匀后倾注无菌平皿。
新版word版蜡样芽孢杆菌的测定作业指导书
一、编制目的为规范本单位蜡样芽孢杆菌的检验方法，编制本指导书。
二、适用范围本指导书规定了食品蜡样芽孢杆菌的检验方法。
本标准第一法适用于蜡样芽孢杆菌含量较高的食品中蜡样芽孢杆菌的计数，第二法适用于蜡样芽孢杆菌含量较低的食品样品中蜡样芽孢杆菌的计数。
三、编制依据GB 4789.14—2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验》。
四、设备和材料4.1冰箱:2℃一5℃；4.2恒温培养箱:30℃±1℃ , 36℃士1℃；4.3均质器；4.4显微镜:lO倍一100倍（油镜）；4.5电了天平:感量0.1 g；4.6无菌锥形瓶:100mL、500mL；4.7无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)；4.8无菌平皿:直径90mm；4.9无菌试管:18mm×180mm；4.10 L涂布棒。
五、培养基和试剂5.1 磷酸盐缓冲液（PBS)。
5.2 甘露醇卵黄多黏菌素（MYP)琼脂。
5.3 胰酪胨大豆多黏菌素肉汤。
5.4 营养琼脂。
5.5 过氧化氢溶液。
5.6 动力培养基。
5.7 硝酸盐肉汤。
5.8 酪蛋白琼脂。
5.9 硫酸锰营养琼脂培养基。
5.10 0.5%碱性复红。
5.11 糖发酵管。
5.12 V-P培养基。
5.13 胰酪胨大豆养血（TSSB)培养基。
5.14 溶菌酶营养肉汤。
5.15 西蒙氏柠檬酸盐培养基。
5.16 明胶培养基六、检验程序6.1蜡样芽孢杆菌平板计数法检验程序见图1。
图1 蜡样芽孢杆菌平板计数法检验程序6.2 操作步骤6.2.1样品处理冷冻样品应在冷冻样品应在45 ℃以下不超过15 min或在2 ℃～5 ℃不超过18 h解冻，若不能及时检验，应放于-10℃~ -20℃保存；非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于2 ℃～5 ℃冰箱保存，24 h内检验。
6.2.2样品制备称取样品25 g，放入盛有225 mL PBS或生理盐水的无菌均质杯内，用旋转刀片式均质器以8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL PBS或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min。
yocon 蜡样芽孢杆菌生化反应管 说明书
蜡样芽孢杆菌生化反应管使用说明书注意事项：1、所有的操作过程应避免杂菌污染，否则会影响实验结果！2、请仔细阅读各种生化反应管的详细说明，以免操作过程中的错误影响实验结果。
3. 被测菌必须是新鲜的纯培养物，严格避免从平皿上刮取两种或两种以上的菌落或用陈旧的培养物进行试验。
4、废弃的生化反应管应做高压灭菌处理！贮存条件： 2-8℃保存有效期： 6个月 使用方法：1、半固体琼脂试验方法：将培养物按不同的标准要求，穿刺接种于半固体琼脂中，培养24小时，观察动力，如沿穿刺线扩散生长，则动力阳性，反之则阴性。
2、葡萄糖发酵管3、甘露醇发酵管试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±1℃培养24-48h，阳性者生化管变成黄色，阴性者不变色4、木糖发酵管试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±1℃培养24-48h，阳性者生化管变成黄色，阴性者不变色5、明胶液化试验方法：用琼脂培养物穿刺接种，放在36士1℃培养，每天取出，放冰箱内30min后再观察结果。
阳性者明胶被液化，阴性者无变化。
6、MR-VP试验7、硝酸盐还原试验方法：接种后在36±1℃培养24-48h，加入甲液和乙液各一滴，观察结果。
硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。
注：本试验阴性的原因有三：细菌不能还原硝酸盐；亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮；培养基不适于细菌的生长。
如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解，可再加入锌粉少许，可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。
生化反应管组成：1、（BC0016）半固体琼脂2、（BC0057）葡萄糖发酵管3、（BC0080）甘露醇发酵管4、（BC0012）木糖发酵管5、（BC0006）明胶液化6、（BC0019）葡萄糖磷酸盐胨水(配3个配套试剂）(BC1191 甲基红试剂BC1291 6% a-萘酚-乙醇溶液 BC1292 40%氢氧化钾溶液）7、（BC0003）硝酸盐（还原）配套试剂BC1013 （对氨基苯磺酸乙酸溶液）BC1032(甲萘胺乙酸溶液）8、（BC0024）西蒙氏柠檬酸盐9、（BC0005）淀粉水解(BC1051配套lugol碘液）10、（BC0001）触酶（3%过氧化氢）8、西蒙氏柠檬酸盐试验方法：挑取少量琼脂培养物接种，于36±1℃培养4d，每天观察结果。
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商品名称：蜡样芽孢杆菌测试片
规格：24批次/盒
检测项目：用于乳制品、肉类、淀粉类食品、各种甜点等的蜡样芽孢杆菌检测产品简介：
蜡样芽孢杆菌测试片(FilmplateTM Bacillus cereus BL210)是一种商品化的一次性培养基产品，由选择性培养基、高分子吸水凝胶和专一性酶指示剂等构成，一步培养显色就可确认是否有病原菌的存在，大大地简化了检测程序，对于提高细菌性食物中毒突发事件的反应能力具有重要的作用，同时也可在食品生产企业使用。
本产品适用于乳制品、肉类、淀粉类食品、各种甜点等的快速检测。
执行标准：食品卫生微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验（GB/T 4789.14-2003）。
技术参数
1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液。
用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液。
2、接种：将蜡样芽孢杆菌测试片(BL210)置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管每个梯度各取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右，使培养基凝固，每个稀释度接种两片，同时做一片空白对照。
3 、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。
培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。
4、结果判读：对测试片进行观察，呈蓝绿色的菌落为蜡样芽孢杆菌。
对于出现阳性菌落的样品，最好用其他方法作进一步的鉴定。
品牌：天迈生物
产地：杭州
附加说明
1、本产品具有很好的特异性，接种蜡样芽孢杆菌纯菌株产生典型的蓝绿色点，而大部分非目标菌如大肠杆菌、大肠杆菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌和阪崎肠杆菌等均被抑制。
2、初步试验表明，蜡样芽孢杆菌测试片对纯菌的最低检测限为1cfu/mL。
用蜡样芽孢杆菌测试片检测了23种食品样品，同时接种平皿做对比试验。
测试片检出阳性样品7个，检出率为30.4％；用平皿法检出阳性样品6个，检出率为26.1％，测试片法比平皿法高了4.3％。
3、注意使用过的测试片上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。
4、保存条件：本产品需存放在4℃～10℃冰箱中，保质期为一年，铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好，放到冰箱中，一个月内用完。
在高湿度的环境中可能出现冷凝水，最好在拆封前将整包回温至室温。