淋巴细胞表面标志的检测及亚群分类

3. 组织相容性抗原（MHC）
成熟B细胞表面富含MHC-Ⅰ类和
MHC-Ⅱ类抗原。MHC-Ⅱ类对B细胞 的抗原提呈功能即在T-B细胞间相互 作用上起重要作用。
4. 簇分化抗原（cluster of differentiation, CD）
B细胞表面有CD5、CD11、CD19、 CD20、CD21、CD22、CD23等分化抗原。
肿瘤免疫应答的重要淋巴细胞。活化的
NK细胞可分泌IFNγ、GM-CSF等因子，
发挥杀伤细胞或调节造血和免疫应答功
能。
NK细胞表面标志
NK细胞表面有多种抗原：CD2、 CD16、CD56、CD69、CD94、CD96、 CD158a、CD159a、CD161和CD244等， 均非其特有，目前多以CD3-CD16+CD56+ 作为其典型标志。
5. 致有丝分裂原受体
致有丝分裂原（mitogen）能与相应 受体结合，刺激静止期淋巴细胞转化为 淋巴母细胞，发生有丝分裂而增殖。
6. 病毒受体 通过这类受体，病毒可以选择性地 感染某个T细胞亚群。如HIV可以感染 辅助性T细胞（CD4+细胞）引起艾滋病。 7. 其他表面标志： 白细胞介素受体、整合素受体 、 转铁蛋白受体等。
检测T淋巴细胞表面标志的方法
抗体致敏花环法
免疫细胞化学法
免疫荧光法
抗体致敏细胞花环法
T淋巴细胞
绵羊红细胞
抗CD单克隆抗体
免疫细胞化学法

细胞酶免疫组化技术
生物素-链霉亲和素放大系统 以酶作为抗体标记物 普通显微镜观察 结果判断：凡着色的细胞即为相应 CD抗原阳性细胞 阳性细胞/总记数细胞×100%
TH1细胞：主要分泌IL-2、IFN-β、 IFN-γ等，介导细胞免疫和局 部炎症反应，对清除胞内病原 体起很重要作用。
CD4+T细胞
TH2细胞：主要分泌IL-4和IL-5， 辅佐B细胞增殖和抗体生成， 对清除游离病原体起重要作用。 TH0细胞： 兼具TH1和TH2的生 物学活性。
T淋巴细胞在分化过程及个体发育的 不同阶段，其表达的CD抗原不完全相同
SmIg的检测
常用方法：
间接荧光免疫法（IIF） 酶免疫组化法
选择高效价、高特异性和高亲和力的 酶或荧光标记的多价抗人Ig抗体（IgG、A、 M、E等），检测各种类型B细胞，人外周 血中SmIgM-B细胞最多。
IIF结果观察
B细胞经荧光标记的抗体染色，细胞 膜表面呈现的荧光着色形式可有多种： ①呈环状均匀分布； ②集中在某些部位呈斑点状；
体，在T细胞分化过程中出现较早，主要存在于粘
膜上皮和皮肤（CD8+），在防止病原体入侵粘膜
上皮中起重要作用。
TCR 能特异性地与抗原结合，但
由于 TCR 与抗原的结合力较弱，一般
只结合与 MHC 分子连接的抗原，构成
了 MHC限制性的基础。 TCR 与抗原结
合后不能直接活化T细胞，而是依赖与
其邻接的CD3分子传递活化信息。
刺激物
特异性刺激物 肿瘤抗原 结核性纯化蛋白衍生物 葡萄球菌毒素 同种异体细胞 非特异性刺激物 植物血凝素（PHA） 刀豆蛋白（Con A） 美洲商陆丝裂原（PWM） 细菌脂多糖（LPS） 可溶性SPA T T、B T、B T T T T、B B（小鼠） T、B
作用细胞群
T淋巴细胞转化观察方法
（1） 形态法：
粒细胞、肥大细胞、血小板等，
单纯参与免疫效应。
淋巴细胞
lymphocyte
构成机体免疫器官的基本单位，是
体内极为复杂的不均一细胞群体，包括
许多形态上相似而功能不同的亚群，功
能和表面标志各不相同，具有明显的异
质性。T细胞和B细胞是其中最主要的两
大群体。
表面标志（epitope）： 淋巴细胞表面具有可供鉴别的特殊结构 在淋巴细胞的不同分化阶段，其各种 表面标志的表达也各不相同。淋巴细胞与 其它细胞之间、与周围环境中的分子间的 相互作用以及淋巴细胞识别抗原、活化、 辅助、抑制、杀伤等生物学作用均与其表 面标志有关。
B1细胞：参与机体免疫调节，与 自身免疫病及B细胞源
B细胞
性肿瘤密切相关。 B2细胞：执行体液免疫功能，产 生高亲和力抗体。
B1和B2细胞的表面标志
表面标志 IgM IgD CD5 CD11 CD19 CD23 CD44 MHCⅡ B1细胞 +++ +/+ + + + +++ B2细胞 + +++ + + ++
淋巴细胞表面标志的检 测及亚群分类 彭晓东
主要内容
淋巴细胞的表面标志
淋巴细胞表面标志的检测
淋巴细胞功能的检测
参与免疫应答的细胞分为三类：

淋巴细胞
主要有T、B、NK、K细胞等， 在免疫应答中起核心作用。

单核-巨噬细胞 包括单核细胞和巨噬细胞，
在免疫应答中起辅佐作用。

其他免疫细胞
包括中性粒细胞、嗜酸性
有或无 增多、嗜碱 有或无 有或无
不增大 密集 无
无 无 增多、嗜碱 极少、天青色 有或无 有或无 无 无
结果报告
原淋巴细胞、过渡型母细胞计为转化的 淋巴细胞，共计数200个细胞，计算：
淋巴细胞转化率 = 转化的淋巴细胞数 ×100% 200
健康人外周血经PHA刺激的T淋巴细 胞转化率为60%~80%
CD2、 CD7 CD3、TCR、 CD4+/CD8+ CD4+ 外周 免疫 器官 CD8+ 干细胞 胸腺外层皮质 胸腺内层皮质 髓质
2. T细胞受体（T cell receptor, TCR）
表达于所有成熟T细胞表面，是T细胞识别外 来抗原并与之结合的特异受体。 （1） TCR2 占大多数，是由α、β两条链组成的 异二聚体(heterodimer)，分布在成熟T细胞表面， 有CD4+和CD8+两个亚群。 （2） TCR1 占少数，是由γ、δ链组成的异二聚
淋巴细胞表面标志可用于：
1. 淋巴细胞及其亚群的鉴别
2. 研究淋巴细胞分化过程和功能 3. 临床上研究某些疾病的发病机
制和诊断方法。
T 淋巴细胞表面标志
1. 簇分化抗原(cluster of differentiation, CD)
糖蛋白，有的由数条多肽链组成，如 CD3由5条链组成。目前已鉴定的CD分子达 100多种，已弄清50%以上CD分子编码基因 的核苷酸序列及其染色体定位。大多数CD分 子分布于各种类型的白细胞表面，但近年发 现还广泛分布在造血和非造血细胞上。
T细胞主要的CD抗原
（1）CD2： 表达于全部T细胞和NK细胞表面；由3 种抗原性不同的分子组成（CD2-1，2，3） CD2-1，2表达于静止细胞表面，CD2-3表 达于活化的T细胞表面。CD2可与绵羊红细 胞（SRBC）结合，故又称绵羊红细胞受体 （E受体），它是粘附分子之一，在抗原提 呈过程中起辅助作用。
（2） 放射性核素法
基本原理：
绝大多数外周血T细胞处于静止期 （G0），当受刺激物刺激后将进入增殖 期（S），合成大量DNA，此时在培养 液中加入3H-TdR，后者则会掺入新合成 的DNA中，根据其掺入的多少可推测细 胞的增殖程度。
③集聚在一个部位呈帽状；
④因被吞饮入胞浆而膜上无荧光着色。
B细胞亚群的测定
方法：流式细胞技术
外周血单个核细胞
+
FITC-CD19或PE-CD5单抗 流式细胞仪上进行计数
自然杀伤细胞
自然杀伤细胞(natural killer, NK)
可非特异性地杀伤肿瘤细胞和病毒感染
细胞，是参与机体免疫应答反应特别是
丢失。
有些还与细胞功能相关，如： CD21和CD35
是补体受体，CD23和CD32是Ig的Fc受体。
5. Fc受体
IgG的Fc受体（CHale Waihona Puke Baidu32），与B细胞 活性相关。Fc受体可与抗体包被的红细
胞相结合形成EAC花环，是鉴别B细胞
的传统方法之一。
其他表面标志：
丝裂原受体
EB病毒受体
细胞因子受体
小鼠红细胞受体
CD2 CD3 CD19,CD20 CD16,CD56
补体受体(CR) Fc受体
＋ ＋ － － － －
－ － ＋ － ＋ ＋
＋ － － ＋ 部分 ＋
第三节 淋巴细胞功能检测技术
体内实验：进行迟发型超敏反应，借此
间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝
分裂原的应答反应。
体外实验：主要包括淋巴细胞对抗原或
细胞识别抗原的受体，能与相应的抗原特异性结
合；又是表面抗原，能与抗免疫球蛋白的抗体特
异性结合。常用抗Ig抗体借助荧光法来鉴定B细胞。
2. 补体受体（CR）：
表达于成熟B细胞表面，主要是
C3 受体， CR1可与 C3d和 C4b结合， 促 进 B 细 胞 活 化 或 抑 制 补 体活 化 ； CR2 受体（ CD21）可与 C3d 结合， 同时也是EB病毒的受体。
外周血液或 单个核细胞 适量PHA或 其他刺激物
37℃培养72小时
涂片染色镜检
未转化和转化淋巴细胞形态特征
转化淋巴细胞 细胞大小 原淋巴细胞 12~20 过渡型 12~16 未转化淋巴细 胞 6~8
核大小 染色质 核仁
有丝分裂 胞质、着色 浆内空泡 伪足
增大 增大 疏松 疏松 清晰、1~4个 有或无
常用单克隆抗体来鉴定和检测计数T细 胞及亚群的表面标志（CD） 表13-1 Ｔ细胞表面主要CD抗原及其分布
CD抗原 CD2(ER) CD3 CD4 (HIVR) CD8 CD25(IL-2R) CD28 分 布 全部Ｔ细胞和NK细胞 成熟Ｔ细胞 TH/Td细胞、Mφ Tc/Ts细胞、部分NK细胞 活化Ｔ细胞 活化Ｔ细胞
（2）CD3： 6肽复合分子，表达于全部T细胞表面， 是T细胞共有的表面标志。 CD3 与TCR非 共价结合形成完整的TCR-CD3复合体， CD3可将TCR与抗原结合所产生的活化信 号传递入T细胞内，使之活化、增殖。
（3）CD4/CD8： T细胞亚群的表面标志。 CD4+T细胞 辅助性T细胞（T helper ， TH ），主要识别MHCⅡ类分子结合的外 源性多肽抗原，具有辅佐或诱导免疫应答 的功能，部分细胞也有杀伤和抑制功能； CD8+T细胞 细胞毒性T细胞（cytotoxic T cell, Tc），主要识别MHCⅠ类分子结合 的内源性多肽抗原，具有杀伤靶细胞和抑 制免疫功能。
B1与B2细胞的比较
特点
发生 分布(成年) 针对抗原 抗体产生
B1
早 腹腔、胸腔 多糖抗原 细菌抗原及自身抗原
B2
晚 周围免疫器官非胸腺依赖区 主要为蛋白质抗原 广谱抗原
抗体种类
更新情况
IgM>>IgG
自我更新
IgG>>IgM
不断新生（骨髓区）
B细胞表面标志的检测
常用方法：
间接荧光免疫法（IIF） 酶免疫组化法 流式细胞技术
健康成年人外周血CD19、CD20阳性B
淋巴细胞约占淋巴细胞总数的8%~15%。
B细胞在分化成熟过程中表达不同的CD分子
有些是经常检测的B细胞标志，如：CD10只 出现在B前体细胞，CD19存在于从原始到成熟的 B细胞，CD22只在成熟B细胞表达。
有些则随B细胞活化状态而改变：如CD19在B
细胞活化后不消失；而CD20在B细胞激活后逐渐
3. 绵羊红细胞受体（SRBC）
又称E受体（CD2），是人类T细胞 的重要表面标志。E受体具有重要的生物 学意义，CD2与其配体（如抗T11McAb） 结合有类似丝裂原的作用，使T细胞活化、
增殖、表达IL-2受体（T细胞激活的旁路
途径）。
4. 组织相容性抗原（MHC）
活化T细胞可表达MHCⅡ类抗原， 静止状态的T细胞仅表达MHCⅠ类抗原。
健康成年人外周血 NK 细胞占淋巴细
胞总数的8%~15%。
NK细胞表面标志的检测 目前临床上常采用三色荧光标
记单克隆抗体标记NK细胞，在流
式细胞仪上进行计数分析。
T、B及NK细胞表面标志的比较
表面标志
膜免疫球蛋白(SmIg) TCR HLAⅡ类抗原
T细胞 B细胞 NK细胞
－ ＋ 极少数 ＋ － ＋ － － －
有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性 试验及淋巴细胞分泌产物的测定。
T细胞功能的检测
1. 淋巴细胞转化实验 （lymphocyte transformation test，LTT）
基本原理：
T细胞在体外受到刺激物的刺激后将 发生增殖、转化，根据其增殖转化的能力 评定相应的细胞功能。
淋巴细胞刺激物的种类和作用细胞

免疫荧光法
直接法
显微镜观察
间接法
显微镜观察
B细胞表面标志
1. 表面免疫球蛋白
（surface membrane immunoglobulin, SmIg） 镶嵌于细胞膜类脂质分子中的免疫球蛋白， IgM和IgD量因成熟程度而异，IgM>>IgD细胞较幼
稚，IgD>> IgM则较成熟。
SmIg是B细胞最具特征性地表面标志。既是B