淋巴细胞表面标志的检测及亚群分类
淋巴细胞亚群的临床应用
淋巴细胞亚群的临床应用淋巴细胞亚群的临床应用1、引言淋巴细胞亚群是指淋巴细胞在表面标志物、功能和分泌物等方面的差异化分类。
在临床实践中，淋巴细胞亚群的检测及其临床应用已经成为一个重要的领域。
本文将详细介绍淋巴细胞亚群在临床中的各种应用。
2、淋巴细胞亚群的分布及功能2.1 CD3+T细胞2.1.1 CD4+T细胞2.1.2 CD8+T细胞2.2 B细胞2.3 自然杀伤细胞（NK细胞）2.4 调节性T细胞（Treg细胞）3、淋巴细胞亚群的检测方法3.1 表面标志物的免疫荧光染色法3.2 流式细胞术3.3 其他检测方法4、淋巴细胞亚群与疾病的关系及应用4.1 免疫缺陷病4.2 自身免疫病4.3 恶性肿瘤4.4 传染病4.5 器官移植5、附件本文档涉及的附件包括相关研究论文、图表、统计数据和临床案例等。
6、法律名词及注释6.1 淋巴细胞亚群：指淋巴细胞在表面标志物、功能和分泌物等方面的差异化分类。
6.2 CD3：一种表面标志物，用于标记T细胞。
6.3 CD4：一种表面标志物，用于标记CD4+T细胞。
6.4 CD8：一种表面标志物，用于标记CD8+T细胞。
6.5 B细胞：一种淋巴细胞亚群，参与体液免疫。
6.6 NK细胞：一种淋巴细胞亚群，具有自然杀伤活性。
6.7 Treg细胞：一种调节性T细胞，参与免疫调节。
7、结束语本文对淋巴细胞亚群的临床应用进行了详细介绍，包括其分布、功能、检测方法以及与疾病的关系等方面。
深入了解淋巴细胞亚群各项指标的变化对于疾病的诊断、治疗和预后评估具有重要意义。
淋巴细胞亚群
T淋巴细胞： 主要杀伤胞内寄生的病原体，包括某些细菌、病毒、真菌及寄生虫等及肿瘤细胞。
表面标志物：CD3与TCR（T细胞表面受体）形成复合体，是T细胞识别抗原和转导信号的主要单位。
CD3+/CD4+ ：辅助性T细胞CD3+/CD8+ ：杀伤性T细胞CD8+T细胞：1、又称细胞毒性T细胞Tc或CTL，它在T细胞免疫应答中发挥重要功能。
2、CTL主要杀伤胞内寄生病原体（病毒、某些胞内寄生菌）等的宿主细胞、肿瘤细胞。
3、Tc细胞识别抗原活化后释放胞浆内颗粒毒素：穿孔素、perforin和颗粒酶granzyme杀伤靶细胞。
NK自然杀伤细胞：是一类独立的淋巴细胞群，不表达特异性抗原识别受体。
无需抗原预先致敏即可直接杀伤某些靶细胞，包括病毒感染细胞和突变的肿瘤细胞。
NK细胞表面标志物：CD3-/CD16+CD56+。
淋巴细胞亚群意义CD3+T细胞： 反映机体细胞免疫应答的能力。
CD3+CD4+T细胞： 1.针对胞内寄生的病原体 2.辅助体液免疫应答。
CD3+CD8+T细胞： 主要杀伤病毒、某些胞内寄生菌的宿主细胞、肿瘤细胞等。
CD19+B细胞： 反应机体体液免疫应答的能力。
NK细胞： 非特异性杀伤肿瘤细胞、病毒或细菌感染的细胞。
T淋巴细胞亚群临床意义CD3+降低： 见于自身免疫性疾病，如SLE、类风湿关节炎等。
CD3+增高： T系淋巴细胞白血病、重症肌无力、慢性活动性肝炎等。
CD4+降低： 见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、艾滋病、应用免疫抑制剂者。
CD8+降低： 见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病。
CD8+增高： 多见于病毒感染 如HBV、HCMV、EB等。
CD4+/CD8+比值增高： 自身免疫性疾病、病毒性感染、变态反应等。
CD4+/CD8+比值减低： 见于艾滋病，恶性肿瘤进行期和复发。
以上为一些淋巴细胞亚群的大概，若要进一步了解，那有时间和机会再一起探讨吧！最后，祝贺老师全家身体健康，阖家幸福！。
细胞亚群检测实验报告
1. 了解淋巴细胞亚群检测的基本原理和方法。
2. 掌握流式细胞术在淋巴细胞亚群检测中的应用。
3. 分析实验结果，了解淋巴细胞亚群在免疫调节中的作用。
二、实验原理淋巴细胞亚群检测是利用流式细胞术对淋巴细胞进行分类、计数和功能分析的一种技术。
通过特异性抗体标记，检测淋巴细胞表面标志物，实现对不同亚群的识别。
本实验主要检测T细胞、B细胞和NK细胞亚群。
三、实验材料1. 实验试剂：抗CD3、抗CD4、抗CD8、抗CD19、抗CD16、抗CD56单克隆抗体。
2. 实验仪器：流式细胞仪、细胞培养箱、离心机、移液器等。
3. 实验样本：新鲜血液。
四、实验步骤1. 样本采集：采集受试者新鲜血液，分离外周血单个核细胞（PBMCs）。
2. 抗体标记：将分离的PBMCs与抗CD3、抗CD4、抗CD8、抗CD19、抗CD16、抗CD56单克隆抗体混合，室温孵育30分钟。
3. 洗涤：将标记好的细胞用磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）洗涤两次。
4. 流式细胞术检测：将洗涤后的细胞上流式细胞仪，进行检测和分析。
5. 数据分析：使用流式细胞术分析软件对实验数据进行处理，计算各亚群细胞比例。
五、实验结果1. T细胞亚群：CD3+T细胞占外周血淋巴细胞的50-70%，其中CD4+T细胞占CD3+T 细胞的30-45%，CD8+T细胞占CD3+T细胞的30-45%。
2. B细胞亚群：CD19+B细胞占外周血淋巴细胞的10-20%。
3. NK细胞亚群：CD16+/CD56+细胞占外周血淋巴细胞的5-15%。
1. 实验结果表明，本实验成功检测了T细胞、B细胞和NK细胞亚群，验证了流式细胞术在淋巴细胞亚群检测中的应用价值。
2. 淋巴细胞亚群在免疫调节中发挥重要作用。
CD4+T细胞具有辅助功能，参与细胞免疫和体液免疫；CD8+T细胞具有杀伤功能，直接杀伤病毒感染细胞和肿瘤细胞；B细胞产生抗体，参与体液免疫；NK细胞具有天然杀伤功能，对病毒感染细胞和肿瘤细胞具有杀伤作用。
T淋巴细胞亚群检测参考值
T淋巴细胞亚群检测参考值淋巴细胞表面标志物检测：E玫瑰花形成试验、免疫荧光法（IFA）、荧光激活细胞分类法（FACS）、免疫金银法以及免疫酶染色法等。
E玫瑰花形成试验SRBC+CD2参考值Et 64.4%±6.7%免疫荧光法T淋巴细胞表面标志物检测意义可用于T淋巴细胞计数，T淋巴细胞亚群的分类以及判断T淋巴细胞的活化程度。
CD3 分子表达于所有成熟T淋巴细胞的表面，是总T淋巴细胞的重要标志，CD3+ 常见于甲状腺功能亢进、淋巴细胞性甲状腺炎、重症肌无力以及器官移植后排斥反应。
CD3+ 主要见于免疫缺陷病，如AIDS、先天性胸腺发育不全综合征以及联合免疫缺陷病等。
亦可见于恶性肿瘤、SLE、免疫抑制剂治疗等。
T细胞分化抗原测定白细胞分化抗原（cluster differentiation，CD）CD3代表总T淋巴细胞，CD4是辅助、诱导T细胞的标志，CD8是抑制、杀伤性T细胞的标志。
应用单抗和荧光标记二抗反应在荧光显微镜下或流式细胞仪中计数CD的百分率。
参考值：免疫荧光法（IFA）：CD3为63.1%±10.8%；CD4 为42.8%±9.5%；CD8 19.6%±5.9%；CD4 /CD8为（2.2±0.7）/1。
流式细胞术：CD3 61%~85%；CD4 28%~58%；CD8 19%~48%；CD4 /CD80.9~2.0/1。
T细胞分化抗原测定临床意义CD3CD4+T细胞下降常见于某些病毒感染性疾病，如AIDS、MCV、严重创伤、全身麻醉、大手术、应用免疫抑制剂等；升高见于类风湿性关节炎活动期。
CD8+ T细胞下降常见于类风湿性关节炎、Sjogren综合征、重症肌无力、DM（II型）以及膜型肾小球肾炎等；升高见于传染性单核细胞增多症急性期、MCV以及慢性乙肝。
CD4 +/CD8+比值下降，常见于AIDS、瘤型麻风病、恶性肿瘤进行期和复发时。
也见于部分感染性疾病如传染性单核细胞增多症、MCV、血吸虫病等；增高见于类风湿性关节炎活动期、SLE、Sjogren综合征、重症肌无力、膜型肾小球肾炎以及器官移植后排斥反应等。
t淋巴细胞亚群测定检测内容
t淋巴细胞亚群测定检测内容
淋巴细胞亚群检测主要包括以下内容：
1. T细胞亚群测定：T细胞是淋巴细胞中的一类重要的免疫细胞，根据表面标志物的不同，可以将其分为多个亚群。
常见的T细胞亚群包括CD4+ T细胞和CD8+ T细胞，它们在免疫调节和杀伤病原体方面起着重要作用。
2. B细胞细胞亚群测定：B细胞是淋巴细胞中的另一类免疫细胞，可以分泌抗体并参与体液免疫反应。
B细胞亚群测定可以确定不同类型的B细胞数量及功能状态。
3. 自然杀伤细胞（NK细胞）测定：NK细胞是淋巴细胞中的一类重要细胞，具有自然杀伤、分泌细胞因子等免疫功能。
NK细胞亚群测定可以了解NK细胞数量和杀伤活性。
4. 调节性T细胞（Treg细胞）测定：Treg细胞是T细胞中的一种特殊亚群，具有免疫抑制和免疫调节功能。
Treg细胞测定可以评估免疫调节的状态。
这些淋巴细胞亚群测定可以通过流式细胞术（Flow Cytometry）等实验方法进行。
这些检测内容可以帮助评估患者的免疫功能状态、了解免疫细胞亚群的数量及活性，对于诊断和治疗免疫相关疾病具有重要意义。
淋巴细胞亚群及检测意义
淋巴细胞亚群及检测意义淋巴细胞是构成免疫系统的主要细胞类别，占外周血白细胞总数的20%-45%；淋巴细胞亚群分类可将淋巴细胞分为T、B、NK细胞等。
T细胞主要参与细胞免疫，表达CD3抗原，T细胞又包括辅助T细胞（Th）和抑制T细胞（Ts），它们分别表达CD4和CD8。
CD4+T细胞：辅助性T细胞（help T cell, TH）包括TH 1和TH 2细胞。
TH 1细胞与抗原接触后，可通过释放IL-2、IFN-α、TFN-β等因子，引起炎症反应或迟发型超敏反应，TH1细胞又称为炎性T细胞；TH2细胞可通过释放IL-4、5、6、10等因子，诱导B细胞增殖、分化、分泌抗体,引起体液免疫应答。
外周血中CD4淋巴细胞计数在500以上则够用，350-500免疫力偏低，200-350时需要警惕。
CD8+T细胞：主要包括细胞毒T细胞（Tc或CTL）和抑制性T细胞（Ts）。
Tc细胞为细胞免疫效应细胞，经抗原致敏后，可特异性杀死带致敏抗原的靶细胞。
抑制性T细胞（Ts，其存在尚有争议）具有抑制体液免疫和细胞免疫的功能，通过分泌抑制性细胞因子和IFN-γ，抑制体液免疫和细胞免疫。
B细胞主要参与体液免疫，表达CD19抗原；NK细胞表达CD16和/或CD56，在机体中不依赖抗原刺激自发地发挥细胞毒效应。
1.T淋巴细胞检测的临床意义(1) CD4+T细胞绝对计数小于200个/μl，考虑停用药物。
在使用免疫抑制剂的过程中：当小于500个/μl，提示需要注意控制用量。
(2) CD4/CD8的值小于0.5，考虑停用药物。
(3)如果CD4+T维持低位，建议使用胸腺素等免疫增强剂。
（*CD4+T淋巴细胞＜200个/μl，易发生卡氏肺孢子虫感染；巨细胞病毒感染和鸟分枝杆菌感染常发生于CD4+T淋巴细胞＜50个/μl的病人，极少见于CD4+T淋巴细胞＞100个/μl的病人）2.调节性T细胞（Treg）检测的临床意义3.B淋巴细胞亚群检测的临床意义4.NK细胞亚群检测的临床意义。
淋巴细胞亚群检测及临床应用
一、概述
二、淋巴细胞亚群检测
1、检测原理
• 把全血加入到试剂中时，荧光标记的抗体会和白细胞表面抗原特异性结合，在采集 时，细胞通过激光束使激光散射。被染色的细胞就会发出荧光。这些被仪器检测到 的散射光和荧光信号提供了关于细胞大小、内部复杂度和相关荧光强度等信息。 BD Multitest检测试剂采用了荧光触发技术，能够直接对淋巴细胞群进行荧光设门， 以减少门中的未裂解细胞或有核红细胞带来的污染。
射光照射。于室温下(20-25℃)进行此程序操作 • 盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。室温(20-25℃)环境下避光孵育15min上
机检测。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌B（六色淋巴细胞亚群试剂）
• 取一支 Trucounttube。用反向加样法加入50μl充分混匀的抗凝全血。注意血 不要碰到试管底部的微球( Beads)。
液时，将按钮按至第二个刻度点。释放按钮时，过量样本将被吸入吸头中。 将按钮按至第一个刻度点排出精确体积的样本，将过量样本留在吸头中。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌B（四色淋巴细胞亚群试剂）
• 盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。在室温(20~25℃)环境下避光孵育 • 向各管中添加450μl 1× Multitest溶血素，注意：小心保护样本管，免受直
不能使用。室温保存的抗凝全血，可稳定48h;染色固定后的样本在2~8℃条 件下可稳定24h。 • 患者准备：无须特殊准备，检查对象生活饮食处于日常状态，空腹为宜， 静脉采血。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌A
淋巴细胞分类和标记
淋巴细胞是免疫系统中的一种白细胞，它们在机体的免疫反应和免疫防御中发挥着核心作用。
根据功能、形态和表面标志物的不同，淋巴细胞主要可以分为以下几类：
1. T淋巴细胞（T细胞）：
- 标记：CD3+，这是所有成熟T细胞的共同标记。
进一步细分，有：
- 辅助性T细胞（Helper T cells, Th细胞）：通常表达CD4分子，如Th1、Th2、Th17等亚群。
- 细胞毒性或抑制性T细胞（Cytotoxic or Suppressor T cells, Tc/Ts细胞）：主要表达CD8分子。
2. B淋巴细胞（B细胞）：
- 标记：CD19、CD20、CD22是B细胞常见的表面标志物，而成熟的B细胞还表达BCR（B细胞受体），即抗体分子。
3. 自然杀伤细胞（NK细胞）：
- 标记：虽然NK细胞不是严格意义上的淋巴细胞（因为它们不通过胸腺发育成熟），但通常也归入广义的淋巴细胞范畴。
NK细胞的主要标记包括CD56和CD16。
此外，还有一些特殊的淋巴细胞亚群，例如调节性T细胞（Regulatory T cells, Tregs）表达CD4+CD25+FoxP3+；记忆性T细胞（Memory T cells）
有不同的表型，如CD45RO+或CCR7-等。
这些不同类型的淋巴细胞在免疫应答中各有分工，协同工作以保护身体免受外来病原微生物的侵害，并维持机体内的免疫平衡。
淋巴细胞标志和功能的检测
淋巴细胞标志和功能的检测人体内的淋巴细胞分为T细胞、B细胞和包括NK细胞为代表的第三群细胞，下分若干亚群，各有其特异的表面标志和功能，据此建立许多相应的检测方法。
临床上各种类型的免疫缺陷症、自身免疫病以及肿瘤等均可出现不同群淋巴细胞数量和功能的变化。
因此计数外周血和组织内淋巴细胞及其亚群的数目或比例，以及它们所显示的功能强弱，可藉此判断机体的细胞免疫水平，对临床认识疾病，探讨其发病机制、观察病情、判断预后、考核疗效以及防治疾病等方面可提供极为有用的信息。
第一节T细胞表面标志的检测一、特异性抗原的检测检测人T细胞的特异性抗原，曾采用抗人脑、抗人胸腺细胞和抗人T细胞等抗血清，通过细胞毒试验或免疫荧光染色加以鉴定。
自抗白细胞分化抗原的单克隆抗体问世以来，上述诸多方法均被新方法取而代之。
常用以鉴定和检测计数T细胞的表面分化抗原如表21-1所示。
表21-1 T胞表面主要CD抗原及其特异性用单克隆抗体检测T细胞表面抗原的方法有两大类，一类是用标记抗体着染，如免疫荧光法、酶免疫法、生物素－亲和素（或链霉亲和素）系统的ABC法以及免疫金银染色法；另一类是用抗体致敏的红细胞作花环试验。
两类方法各有优缺点。
以下叙述有代表性的方法。
（一）间接免疫荧光法本法是将分离获得的外周血单个核细胞分别与抗相应CD的单克隆抗体（如CD2、CD4、CD8）结合后，洗去游离的抗体，继加荧光素标记的抗小鼠IgG抗血清，经温育结合后，洗去多余的标记抗体，取样制片，用荧光显微镜观察并计数约200个单个核细胞，以荧光阳性细胞与计数细胞总数之比，求得相应CD抗原阳性的T百分率。
如有条件，细胞经荧光标记抗体着染后，用流式细胞仪计数，快速而准确，但需要较多的投资，难以普及应用。
（二）免疫细胞化学法通常用酶免疫检测法，如APAAP酶免疫桥联法。
为减少非特异性着染，可选用生物素－链霉亲和素系统试剂作ABC法染色。
该类方法可用普通显微镜观察，凡呈棕黄色的细胞为相应CD抗原阳性细胞，计其占总淋巴细胞的百分率。
(新)淋巴细胞标志和功能的检测
第三节
B细胞表面标志的检测
B细胞活化后转化为浆细胞， 分泌抗体，执行体液免疫的功能。 B细胞表面有：CD 19、 CD20、 CD21、 CD22和CD23等 分化抗原。健康成人外周血 CD19、 CD20阳性的B细胞约占 淋巴细胞总数的8%~15%。
一、 B细胞表面标志的检测 B细胞表面有膜免疫球蛋白 （SmIg）、Fc受体、补体受体、EB 病毒受体和小鼠红细胞受体等标志， 其中SmIg 为B细胞所特有，是鉴别B 细胞的可靠指标。 1、 SmIg的检测－－常用间接免疫荧 光法
B细胞经荧光标记的抗体染色， 细胞膜表面呈现的荧光形式可有 多种： （1）呈环状均匀分布 （2）集中在某些部位呈斑点状 （3）集聚在一个部位呈帽状 （4）因被吞饮入胞质而膜上无 荧光着色。
这些现象的出现是由于淋巴细胞膜 由双层类脂组成，上嵌有蛋白分子， 在体温条件下膜呈半液体状，镶嵌 物能在其中移动。当SmIg抗体发生 结合时，由于抗血清为双价，使 SmIg出现交联现象，这种抗原抗体 复合物可连成斑点状和帽状，时间 一长，帽状结合物可脱落或被吞饮 而消失。因此染色后必须在30min 进行观察。
第二十一章
淋巴细胞标志 和功能的检测
何印蕾
概述 人体内的淋巴细胞分为T细胞、 B细胞和包括NK细胞为代表 的第三群细胞。淋巴细胞及其 亚群的检测是判断机体细胞免 疫水平的重要指标。
第一节 T细胞表面标志的检测 一、特异性抗原的检测
T细胞表面主要CD抗原及其特异性
CD抗原 CD2 CD3 CD4 CD8 CD25
（2）免疫细胞化学法 通常用酶免疫检测法，如生 物素-链霉素系统试剂作ABC法 染色。该方法可用普通显微镜观 察，凡呈棕黄色的细胞为相应的 CD抗原阳性细胞，计数其占总 淋巴细胞的百分率。
淋巴细胞亚群与临床
CD4/CD38/CD3/Anti-HLA-DR: 研究AIDS中活化Th细胞的百分数和绝对计数 研究活化的T淋巴细胞的百分数和绝对计数 T
CD8/CD38/CD3/Anti-HLA-DR 研究活化的T淋巴细胞的百分数和绝对计数 研究AIDS中活化Ts细胞的百分数和绝对计数 AIDS Ts 研究病毒感染性疾病,如EBV、CMV感染 研究移植 研究慢性炎症性疾病，如SLE、风湿性关节 炎
百分含量（ 百分含量（% T淋 淋 巴细胞） 巴细胞）
绝对含量 （cells/µ µ L） ） 770-2041
Total T lymphocyte (CD3+)
T helper/inducer cell (CD3+/CD4+/ CD8-) T supressor/cyto toxic cell (CD3+/CD4/CD8+) CD3+CD4+CD8+ cell Th/Ts
淋巴细胞亚群的临床及科研应用
BD FACScalibur
淋巴细胞亚群基础知识
T淋巴细胞：主要杀伤病原体感染细胞及肿瘤 细胞。 表面标志物：CD3，与TCR形成复合体，是T 细胞识别抗原和转导信号的主要单位。 CD3+/CD4+：辅助性T细胞 CD3+/CD8+：杀伤性T细胞
CD8+T细胞又称细胞毒性T细胞，Tc或CTL， 它在T细胞免疫应答中发挥重要功能。 Tc细胞识别抗原活化后释放胞浆内颗粒毒素： 穿孔素perforin和颗粒酶granzyme，杀伤靶 细胞。
34-70%
414-1123
25-54%
238-874
0.5-4.0% 0.68-2.47
项目十七 T淋巴细胞表面标志和功能检测
项目十七T淋巴细胞表面标志和功能检测一、E花环形成试验(Erythrocyte rosette formation assay)【实验原理】人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体，可与SRBC结合形成花环样细胞团(即E花环)。
此试验用于计数T细胞数量，进而可判断机体细胞免疫状况。
由于T 细胞的异质性，其中在4℃放置1h以上，所形成的花环数代表T细胞总数，称为总花环(Et 花环)，而淋巴细胞与SRBC混合后不经4℃作用，立即反应形成的花环称为活性花环(Ea花环)。
【试剂和器材】1．肝素抗凝剂用Hanks液将肝素配成500U/ml，分装，每管0.1ml，置4℃备用。
2．淋巴细胞分离液(密度为1.077±0.001)。
3．小牛血清56℃加热灭活30min，按2:1比例与沉积SRBC混合，置37℃30min，离心，收集血清备用。
4．0.5％SRBC悬液取脱纤维或Alsever液保存的羊血，用5～10倍量生理盐水洗3 次。
第3次2500r/min离心10min，弃上清液，用生理盐水配成0.5％的SRBC悬液(约108个细胞/ml)。
5．0.8％戊二醛取30.25ml 4.5 g/L NaCl 盐水，加入1ml 25％戊二醛即可。
6．姬姆萨-瑞氏染液取磷酸缓冲液(PB：1/15 mol/L, pH7.0～7.4)10ml，加入姬姆萨染液6滴及瑞氏染液1滴。
7．Alsever液、Hanks液(无Ca2+和Mg2+, pH7.2～7.4)、PB(1/15 mol/L, pH7.0～7.4)、生理盐水。
8．离心机、水浴箱、电冰箱、显微镜、离心管、载玻片、盖玻片、吸管、吸球、注射器。
【步骤和方法】1．淋巴细胞悬液的制备取2ml肝素抗凝血，加入2ml Hanks液，叠加于2ml 淋巴细胞分离液上，水平离心2000 r/min 20 min。
取出单个核细胞层，用4~5倍Hanks液洗2次，每次离心1000r/min 10min。
淋巴细胞表面标志的检测及亚群分类
粒细胞、肥大细胞、血小板等，
单纯参与免疫效应。
淋巴细胞
lymphocyte
构成机体免疫器官的基本单位，是
体内极为复杂的不均一细胞群体，包括
许多形态上相似而功能不同的亚群，功
能和表面标志各不相同，具有明显的异
质性。T细胞和B细胞是其中最主要的两
大群体。
表面标志（epitope）： 淋巴细胞表面具有可供鉴别的特殊结构 在淋巴细胞的不同分化阶段，其各种 表面标志的表达也各不相同。淋巴细胞与 其它细胞之间、与周围环境中的分子间的 相互作用以及淋巴细胞识别抗原、活化、 辅助、抑制、杀伤等生物学作用均与其表 面标志有关。
T细胞主要的CD抗原
（1）CD2： 表达于全部T细胞和NK细胞表面；由3 种抗原性不同的分子组成（CD2-1，2，3） CD2-1，2表达于静止细胞表面，CD2-3表 达于活化的T细胞表面。CD2可与绵羊红细 胞（SRBC）结合，故又称绵羊红细胞受体 （E受体），它是粘附分子之一，在抗原提 呈过程中起辅助作用。
丢失。
有些还与细胞功能相关，如： CD21和CD35
是补体受体，CD23和CD32是Ig的Fc受体。
5. Fc受体
IgG的Fc受体（CD32），与B细胞 活性相关。Fc受体可与抗体包被的红细
胞相结合形成EAC花环，是鉴别B细胞
的传统方法之一。
其他表面标志：
丝裂原受体
EB病毒受体
细胞因子受体
小鼠红细胞受体
（2）CD3： 6肽复合分子，表达于全部T细胞表面， 是T细胞共有的表面标志。 CD3 与TCR非 共价结合形成完整的TCR-CD3复合体， CD3可将TCR与抗原结合所产生的活化信 号传递入T细胞内，使之活化、增殖。
（3）CD4/CD8： T细胞亚群的表面标志。 CD4+T细胞 辅助性T细胞（T helper ， TH ），主要识别MHCⅡ类分子结合的外 源性多肽抗原，具有辅佐或诱导免疫应答 的功能，部分细胞也有杀伤和抑制功能； CD8+T细胞 细胞毒性T细胞（cytotoxic T cell, Tc），主要识别MHCⅠ类分子结合 的内源性多肽抗原，具有杀伤靶细胞和抑 制免疫功能。
细说“淋巴细胞亚群”
细说“淋巴细胞亚群”通常患者朋友对血常规非常熟悉，其中有淋巴细胞占白细胞的百分比和计数。
其实呢，淋巴细胞还分为各种亚群，临床上，经常有医生会开“淋巴细胞亚群”项目，以帮助了解患者的免疫功能。
一、那么“淋巴细胞亚群”是群什么细胞？众所周知淋巴细胞是构成机体免疫器官的基本单位，是参与机体细胞免疫和体液免疫应答功能的重要细胞。
人的淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达又可分为三大类：T淋巴细胞，B淋巴细胞和NK淋巴细胞，即是通常所谓的“淋巴细胞亚群”。
这些细胞是如何分化而来的呢？从头说起吧，骨髓造血干细胞分化为髓样干细胞和淋巴样干细胞。
前者分化为红细胞，血小板，和原粒细胞，其中原粒细胞继续分化为粒细胞，包括嗜酸性、嗜碱性粒细胞和中性粒细胞。
而淋巴样干细胞分化为原淋细胞，继续分化为T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK淋巴细胞。
这些T、B、Nk细胞也就是所称的“淋巴细胞亚群”。
当然，T细胞还进一步分为辅助性和杀伤抑制性T细胞，调节性T细胞等。
二、在化验单上，这些“淋巴细胞亚群”又是怎样标识的呢？CD3+ 代表总的T淋巴细胞，是机体免疫系统内功能最重要的一大细胞群；CD3+CD4+代表辅助/诱导性T淋巴细胞即Th细胞；CD3+CD8+代表抑制/细胞毒性T细胞即Ts细胞。
CD3-CD19+代表B淋巴细胞，CD3-CD56+CD16+代表自然杀伤性（NK）淋巴细胞。
具体报告的是各类淋巴细胞的百分比（%），以及Th/Ts的比值。
有的医院除了百分比，还报告各种淋巴亚群的细胞绝对计数（就是每微升全血中含有的这种淋巴细胞的个数）。
三、淋巴细胞亚群是怎样测定的呢？首先，检测的标本要求抽取2毫升肝素或EDTA-K抗凝全血。
利用各种单克隆抗体，与标本中淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料，就可以通过流式细胞术的分析，区分各淋巴细胞不同的亚型，进而得到各亚群的比例及绝对计数。
四、为什么要测定淋巴细胞亚群呢？概括说，淋巴细胞亚群是了解机体细胞免疫和体液免疫功能的重要指标，分析这些免疫细胞的比例和数量及活性对于评估机体的免疫功能非常重要。
淋巴细胞亚群的临床应用
疾病预后评估
淋巴细胞亚群检测还可以用于评估疾 病的预后和治疗效果。通过监测淋巴 细胞亚群的变化，可以评估病情的进 展和治疗效果，为制定治疗方案提供 依据。
肿瘤免疫逃逸
肿瘤细胞通过影响淋巴细胞亚群的活化、增殖和分化，来 逃避免疫监视和攻击，从而影响肿瘤的发展和转移。
肿瘤疫苗
利用淋巴细胞亚群设计肿瘤疫苗是当前研究的热点，通过 激活机体免疫系统来预防和治疗肿瘤。
03
淋巴细胞亚群的检测方法
流式细胞术检测
总结词
流式细胞术是一种快速、准确、灵敏的检测技术，用于分析 淋巴细胞亚群的表面标志物，从而了解淋巴细胞的功能和活 性状态。
系统性红斑狼疮
淋巴细胞亚群失调与系统性红斑狼疮的发病机制 密切相关，如B细胞和T细胞的异常活化导致自身 抗体产生。
1型糖尿病
CD4+T细胞和CD8+T细胞在1型糖尿病的发病机 制中发挥关键作用，通过攻击胰岛细胞导致胰岛 素分泌不足。
淋巴细胞亚群在肿瘤性疾病中的作用
肿瘤免疫
淋巴细胞亚群在肿瘤免疫应答中发挥重要作用，如CD8+T 细胞对肿瘤细胞的杀伤作用和CD4+T细胞对肿瘤细胞的调 节作用。
深入研究淋巴细胞亚群的表型特征和功能特点，建立更准确的淋巴细胞亚群分类标准，为临床应用提 供更准确的检测结果。
深入探究淋巴细胞亚群的功能和作用机制
深入研究淋巴细胞亚群在免疫应答、 疾病发生和发展中的作用机制，了解 其在不同疾病中的功能和作用机制。
淋巴细胞亚群检测操作方法
淋巴细胞亚群检测操作方法
淋巴细胞亚群检测是通过流式细胞术来进行的。
下面是其操作方法的一般步骤：
1. 预处理样本：收集新鲜的全血样本，并将其分成多个试管。
每个试管中的样本应含有适当的抗凝剂（例如EDTA），以防止血液凝固。
2. 样本染色：将每个试管中的全血样本分成不同的管中，每个管中加入不同的单克隆抗体染色。
根据实验需要，可以选择染色CD3、CD4、CD8、CD19等表面标记物来区分不同的淋巴细胞亚群。
染色时间和温度根据抗体厂商的建议进行。
3. 洗涤：将染色后的细胞悬液用PBS或其他适当的缓冲液洗涤，以去除未结合的抗体。
每个管中的细胞可用700 rpm离心3-5分钟，将上清液倒掉。
4. 固定：将细胞悬液溶入适当量的荧光素（如二甲亚基绿），用PBS稀释至适当浓度，静置固定30分钟。
固定之后，可以继续离心去除上清液。
5. 流式细胞术：将固定的细胞悬液在流式细胞仪中进行检测。
根据实验需要，设置适当的流速和激发波长来检测不同染色的细胞。
通过检测细胞表面荧光素的强度，可以确定不同淋巴细胞亚群的百分比和数量。
需要注意的是，以上是一般的操作方法，具体的步骤可能会因实验目的、试剂和仪器的不同而有所变化。
因此，在进行实验之前，最好参考实验方案和相关的文献资料，以确保操作的准确性和可靠性。
淋巴细胞亚群结果解读
淋巴细胞亚群结果解读
淋巴细胞是白细胞的一种，主要参与免疫反应。
根据其功能和表面标志物的不同，淋巴细胞可以分为不同的亚群。
以下是一些常见的淋巴细胞亚群及其功能：
1.CD4+ T细胞:也称为助T细胞或T辅助细胞。
它们帮助激活其他免疫细胞，如B细胞和CD8+ T细胞。
CD4+ T细胞在HIV感染中起关键作用，因为HIV病毒主要攻击这些细胞。
2.CD8+ T细胞:也称为细胞毒性T细胞或杀伤T细胞。
它们可以直接杀死被病毒感染的细胞或癌细胞。
3.B细胞:它们负责产生抗体，这些抗体可以识别并中和外来的病原体。
4.自然杀伤细胞 (NK cells):它们可以迅速杀死被病毒感染的细胞和某些癌细胞，而不需要先前的激活。
5.记忆T细胞和记忆B细胞:在初次感染后，这些细胞会“记住”病原体，并在再次遇到相同的病原体时迅速激活免疫反应。
当您收到淋巴细胞亚群的检测结果时，通常会关注以下几个方面：
绝对计数:这是每微升血液中特定淋巴细胞亚群的数量。
相对计数:这是特定淋巴细胞亚群在所有淋巴细胞中的比例。
异常值:某些疾病或状况可能会导致特定淋巴细胞亚群的数量增加或减少。
为了正确解读这些结果，您应该与您的医生或实验室技师进行详细咨询。
他们可以为您提供关于您的检测结果的具体信息和建议。
如果您有具体的检测数值或其他相关信息，我会尽量为您提供更具体的解释。
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体，在T细胞分化过程中出现较早，主要存在于粘
膜上皮和皮肤（CD8+），在防止病原体入侵粘膜
上皮中起重要作用。
TCR 能特异性地与抗原结合，但
由于 TCR 与抗原的结合力较弱，一般
只结合与 MHC 分子连接的抗原，构成
了 MHC限制性的基础。 TCR 与抗原结
合后不能直接活化T细胞，而是依赖与
其邻接的CD3分子传递活化信息。
有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性 试验及淋巴细胞分泌产物的测定。
T细胞功能的检测
1. 淋巴细胞转化实验 （lymphocyte transformation test，LTT）
基本原理：
T细胞在体外受到刺激物的刺激后将 发生增殖、转化，根据其增殖转化的能力 评定相应的细胞功能。
淋巴细胞刺激物的种类和作用细胞
淋巴细胞表面标志可用于：
1. 淋巴细胞及其亚群的鉴别
2. 研究淋巴细胞分化过程和功能 3. 临床上研究某些疾病的发病机
制和诊断方法。
T 淋巴细胞表面标志
1. 簇分化抗原(cluster of differentiation, CD)
糖蛋白，有的由数条多肽链组成，如 CD3由5条链组成。目前已鉴定的CD分子达 100多种，已弄清50%以上CD分子编码基因 的核苷酸序列及其染色体定位。大多数CD分 子分布于各种类型的白细胞表面，但近年发 现还广泛分布在造血和非造血细胞上。
T细胞主要的CD抗原
（1）CD2： 表达于全部T细胞和NK细胞表面；由3 种抗原性不同的分子组成（CD2-1，2，3） CD2-1，2表达于静止细胞表面，CD2-3表 达于活化的T细胞表面。CD2可与绵羊红细 胞（SRBC）结合，故又称绵羊红细胞受体 （E受体），它是粘附分子之一，在抗原提 呈过程中起辅助作用。
3. 组织相容性抗原（MHC）
成熟B细胞表面富含MHC-Ⅰ类和
MHC-Ⅱ类抗原。MHC-Ⅱ类对B细胞 的抗原提呈功能即在T-B细胞间相互 作用上起重要作用。
4. 簇分化抗原（cluster of differentiation, CD）
B细胞表面有CD5、CD11、CD19、 CD20、CD21、CD22、CD23等分化抗原。
刺激物
特异性刺激物 肿瘤抗原 结核性纯化蛋白衍生物 葡萄球菌毒素 同种异体细胞 非特异性刺激物 植物血凝素（PHA） 刀豆蛋白（Con A） 美洲商陆丝裂原（PWM） 细菌脂多糖（LPS） 可溶性SPA T T、B T、B T T T T、B B（小鼠） T、B
作用细胞群
T淋巴细胞转化观察方法
（1） 形态法：
TH1细胞：主要分泌IL-2、IFN-β、 IFN-γ等，介导细胞免疫和局 部炎症反应，对清除胞内病原 体起很重要作用。
CD4+T细胞
TH2细胞：主要分泌IL-4和IL-5， 辅佐B细胞增殖和抗体生成， 对清除游离病原体起重要作用。 TH0细胞： 兼具TH1和TH2的生 物学活性。
T淋巴细胞在分化过程及个体发育的 不同阶段，其表达的CD抗原不完全相同
细胞识别抗原的受体，能与相应的抗原特异性结
合；又是表面抗原，能与抗免疫球蛋白的抗体特
异性结合。常用抗Ig抗体借助荧光法来鉴定B细胞。
2. 补体受体（CR）：
表达于成熟B细胞表面，主要是
C3 受体， CR1可与 C3d和 C4b结合， 促 进 B 细 胞 活 化 或 抑 制 补 体活 化 ； CR2 受体（ CD21）可与 C3d 结合， 同时也是EB病毒的受体。
（2）CD3： 6肽复合分子，表达于全部T细胞表面， 是T细胞共有的表面标志。 CD3 与TCR非 共价结合形成完整的TCR-CD3复合体， CD3可将TCR与抗原结合所产生的活化信 号传递入T细胞内，使之活化、增殖。
（3）CD4/CD8： T细胞亚群的表面标志。 CD4+T细胞 辅助性T细胞（T helper ， TH ），主要识别MHCⅡ类分子结合的外 源性多肽抗原，具有辅佐或诱导免疫应答 的功能，部分细胞也有杀伤和抑制功能； CD8+T细胞 细胞毒性T细胞（cytotoxic T cell, Tc），主要识别MHCⅠ类分子结合 的内源性多肽抗原，具有杀伤靶细胞和抑 制免疫功能。
粒细胞、肥大细胞、血小板等，
单纯参与免疫效应。
淋巴细胞
lymphocyte
构成机体免疫器官的基本单位，是
体内极为复杂的不均一细胞群体，包括
许多形态上相似而功能不同的亚群，功
能和表面标志各不相同，具有明显的异
质性。T细胞和B细胞是其中最主要的两
大群体。
表面标志（epitope）： 淋巴细胞表面具有可供鉴别的特殊结构 在淋巴细胞的不同分化阶段，其各种 表面标志的表达也各不相同。淋巴细胞与 其它细胞之间、与周围环境中的分子间的 相互作用以及淋巴细胞识别抗原、活化、 辅助、抑制、杀伤等生物学作用均与其表 面标志有关。
健康成年人外周血 NK 细胞占淋巴细
胞总数的8%~15%。
NK细胞表面标志的检测 目前临床上常采用三色荧光标
记单克隆抗体标记NK细胞，在流
式细胞仪上进行计数分析。
T、B及NK细胞表面标志的比较
表面标志
膜免疫球蛋白(SmIg) TCR HLAⅡ类抗原
T细胞 B细胞 NK细胞
－ ＋ 极少数 ＋ － ＋ － － －
有或无 增多、嗜碱 有或无 有或无
不增大 密集 无
无 无 增多、嗜碱 极少、天青色 有或无 有或无 无 无
结果报告
原淋巴细胞、过渡型母细胞计为转化的 淋巴细胞，共计数200个细胞，计算：
淋巴细胞转化率 = 转化的淋巴细胞数 ×100% 200
健康人外周血经PHA刺激的T淋巴细 胞转化率为60%~80%
肿瘤免疫应答的重要淋巴细胞。活化的
NK细胞可分泌IFNγ、GM-CSF等因子，
发挥杀伤细胞或调节造血和免疫应答功
能。
NK细胞表面标志
NK细胞表面有多种抗原：CD2、 CD16、CD56、CD69、CD94、CD96、 CD158a、CD159a、CD161和CD244等， 均非其特有，目前多以CD3-CD16+CD56+ 作为其典型标志。
丢失。
有些还与细胞功能相关，如： CD21和CD35
是补体受体，CD23和CD32是Ig的Fc受体。
5. Fc受体
IgG的Fc受体（CD32），与B细胞 活性相关。Fc受体可与抗体包被的红细
胞相结合形成EAC花环，是鉴别B细胞
的传统方法之一。
其他表面标志：
丝裂原受体
EB病毒受体
细胞因子受体
小鼠红细胞受体
SmIg的检测
常用方法：
间接荧光免疫法（IIF） 酶免疫组化法
选择高效价、高特异性和高亲和力的 酶或荧光标记的多价抗人Ig抗体（IgG、A、 M、E等），检测各种类型B细胞，人外周 血中SmIgM-B细胞最多。
IIF结果观察
B细胞经荧光标记的抗体染色，细胞 膜表面呈现的荧光着色形式可有多种： ①呈环状均匀分布； ②集中在某些部位呈斑点状；
健康成年人外周血CD19、CD20阳性B
淋巴细胞约占淋巴细胞总数的8%~15%。
B细胞在分化成熟过程中表达不同的CD分子
有些是经常检测的B细胞标志，如：CD10只 出现在B前体细胞，CD19存在于从原始到成熟的 B细胞，CD22只在成熟B细胞表达。
有些则随B细胞活化状态而改变：如CD19在B
细胞活化后不消失；而CD20在B细胞激活后逐渐
淋巴细胞表面标志的检 测及亚群分类 彭晓东
主要内容
淋巴细胞的表面标志
淋巴细胞表面标志的检测
淋巴细胞功能的检测
参与免疫应答的细胞分为三类：
淋巴细胞
主要有T、B、NK、K细胞等， 在免疫应答中起核心作用。
单核-巨噬细胞 包括单核细胞和巨噬细胞，
在免疫应答中起辅佐作用。
其1与B2细胞的比较
特点
发生 分布(成年) 针对抗原 抗体产生
B1
早 腹腔、胸腔 多糖抗原 细菌抗原及自身抗原
B2
晚 周围免疫器官非胸腺依赖区 主要为蛋白质抗原 广谱抗原
抗体种类
更新情况
IgM>>IgG
自我更新
IgG>>IgM
不断新生（骨髓区）
B细胞表面标志的检测
常用方法：
间接荧光免疫法（IIF） 酶免疫组化法 流式细胞技术
CD2 CD3 CD19,CD20 CD16,CD56
补体受体(CR) Fc受体
＋ ＋ － － － －
－ － ＋ － ＋ ＋
＋ － － ＋ 部分 ＋
第三节 淋巴细胞功能检测技术
体内实验：进行迟发型超敏反应，借此
间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝
分裂原的应答反应。
体外实验：主要包括淋巴细胞对抗原或
5. 致有丝分裂原受体
致有丝分裂原（mitogen）能与相应 受体结合，刺激静止期淋巴细胞转化为 淋巴母细胞，发生有丝分裂而增殖。
6. 病毒受体 通过这类受体，病毒可以选择性地 感染某个T细胞亚群。如HIV可以感染 辅助性T细胞（CD4+细胞）引起艾滋病。 7. 其他表面标志： 白细胞介素受体、整合素受体 、 转铁蛋白受体等。
外周血液或 单个核细胞 适量PHA或 其他刺激物
37℃培养72小时
涂片染色镜检
未转化和转化淋巴细胞形态特征
转化淋巴细胞 细胞大小 原淋巴细胞 12~20 过渡型 12~16 未转化淋巴细 胞 6~8
核大小 染色质 核仁
有丝分裂 胞质、着色 浆内空泡 伪足
增大 增大 疏松 疏松 清晰、1~4个 有或无
免疫荧光法
直接法
显微镜观察
间接法
显微镜观察