土壤中分解尿素的细菌的分离和计数ppt课件
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同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提 供选择培养的条件。
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㈣.取样涂布
◆实验时要 对培养皿作 好标记。注 明培养基类 型、培养时 间、稀释度、 培养物等。
◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，
则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如
果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试
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பைடு நூலகம்
方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验
结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养 基的配制有问题。
方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情 况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是 否受到污染。
小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有 说服力，对照的设置是必不可少的。
液中细胞浓度与混浊度成正比，即与光密 度成正比，菌越多，光密度越大。因此可 以借助于分光光度计，在一定波长下，测 定菌悬液的光密度，以光密度表示菌量。）
膜过滤法（当样品中菌数很低时，可以
将一定体积的湖水海水或饮用水等样品通 过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色，并 经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上 ( 或一定面积中 ) 的细菌数 ）
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注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三 个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出 菌落平均数。
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
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计数法
直接计数法、
活菌平板计数法、
比浊法（原理是在一定范围内，菌的悬
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㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数 目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基 中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样 的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。
原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或 者是混入了其他的含氮物质)
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二.实验的具体操作
㈠.土壤取样 ㈡.制备培养基： 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。
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[三]样品 的稀释
◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度
原因：不同微生物在土壤中含量不同
目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计
数的平板
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思考：为什么分离不同的微生物要采用不同的稀 释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分 解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？
原因：土壤中各类微生物的数量（单位：株
/kg）是不同的。
结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不
2、显微镜直接计数：
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思考书 本22页 问题：
说明设置重复组的重要性。
第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结
果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，
涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个
相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不
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实验设计步骤：
1、土壤取样 2、制备培养基： 3、样品的稀释 4、取样涂布 5、微生物的培养与观察
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微生物的培养 与观察
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三.结果分析与评价
对照的培养皿在培养中无菌落生 长，说明培养基没有被杂菌污染。 牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目 1、结合对照明，显分培大析养于培基选养具择物有培中养选是择基否作，有用说杂。明菌选择污染 以及选择培养基是否筛选出一些菌落。
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㈡.统计菌落数目：
1.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培 养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖 而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平 均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液 的体积(ml)，M代表稀释倍数。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的
分离与计数
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课题背景
1、尿素的利用:
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农 作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才 能被植物利用。
2、细菌利用尿素的原因:
CO（NH2）2+H2O 脲酶 CO2+2NH3
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3、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
琼脂
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g 1.0g 15.0g
①从物理性质看此培养基属于哪类？
固体培养基
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②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
3、培养基选择分解尿素的微生物的原理？
培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物 才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微 生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发 育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选 择出分解尿素的微生物。
2、是否获得了某一稀释度下，菌落数目在
30——300的平板。在这稀释度下，是否至少
有两个平板的菌落数相近？
验不精确，需要重新实验。 点此播放教学视频 16
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㈤.微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因 培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
一.研究思路
㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
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启示?
（一）筛选 菌株
水生耐热细菌Taq 耐高温的Taq DNA聚合酶
选择培养基
在微生物学中，将允
许 点此播放教学视频 特定种类的微生物
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思考：
KH2PO4 NaH2PO4 MgSO4`7H2O
葡萄糖
尿素
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㈣.取样涂布
◆实验时要 对培养皿作 好标记。注 明培养基类 型、培养时 间、稀释度、 培养物等。
◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，
则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如
果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试
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方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验
结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养 基的配制有问题。
方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情 况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是 否受到污染。
小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有 说服力，对照的设置是必不可少的。
液中细胞浓度与混浊度成正比，即与光密 度成正比，菌越多，光密度越大。因此可 以借助于分光光度计，在一定波长下，测 定菌悬液的光密度，以光密度表示菌量。）
膜过滤法（当样品中菌数很低时，可以
将一定体积的湖水海水或饮用水等样品通 过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色，并 经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上 ( 或一定面积中 ) 的细菌数 ）
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注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三 个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出 菌落平均数。
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
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计数法
直接计数法、
活菌平板计数法、
比浊法（原理是在一定范围内，菌的悬
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㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数 目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基 中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样 的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。
原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或 者是混入了其他的含氮物质)
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二.实验的具体操作
㈠.土壤取样 ㈡.制备培养基： 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。
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[三]样品 的稀释
◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度
原因：不同微生物在土壤中含量不同
目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计
数的平板
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思考：为什么分离不同的微生物要采用不同的稀 释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分 解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？
原因：土壤中各类微生物的数量（单位：株
/kg）是不同的。
结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不
2、显微镜直接计数：
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思考书 本22页 问题：
说明设置重复组的重要性。
第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结
果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，
涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个
相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不
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实验设计步骤：
1、土壤取样 2、制备培养基： 3、样品的稀释 4、取样涂布 5、微生物的培养与观察
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微生物的培养 与观察
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三.结果分析与评价
对照的培养皿在培养中无菌落生 长，说明培养基没有被杂菌污染。 牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目 1、结合对照明，显分培大析养于培基选养具择物有培中养选是择基否作，有用说杂。明菌选择污染 以及选择培养基是否筛选出一些菌落。
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㈡.统计菌落数目：
1.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培 养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖 而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平 均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液 的体积(ml)，M代表稀释倍数。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的
分离与计数
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课题背景
1、尿素的利用:
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农 作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才 能被植物利用。
2、细菌利用尿素的原因:
CO（NH2）2+H2O 脲酶 CO2+2NH3
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3、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
琼脂
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g 1.0g 15.0g
①从物理性质看此培养基属于哪类？
固体培养基
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②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
3、培养基选择分解尿素的微生物的原理？
培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物 才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微 生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发 育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选 择出分解尿素的微生物。
2、是否获得了某一稀释度下，菌落数目在
30——300的平板。在这稀释度下，是否至少
有两个平板的菌落数相近？
验不精确，需要重新实验。 点此播放教学视频 16
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㈤.微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因 培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
一.研究思路
㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
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启示?
（一）筛选 菌株
水生耐热细菌Taq 耐高温的Taq DNA聚合酶
选择培养基
在微生物学中，将允
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思考：
KH2PO4 NaH2PO4 MgSO4`7H2O
葡萄糖
尿素