细胞融合和单克隆抗体制备

课堂小结
动物细胞工程
植物细胞工程
基础
动物细胞培养
技术 动物细 动物细 核移植 胞培养 胞融合 技术
原理 细胞增 细胞膜 动物细 殖 具有流 胞核的 动性 全能性
结果 细胞或细 杂交细 克隆动
胞产物
胞
物
植物组织培养
植物组 植物体细 织培养 胞杂交
植物细 胞全能
性
细胞膜具 有流动性 、植物细 胞全能性
单克隆抗体的制备
注射抗原
B细胞
骨髓瘤细胞
融合
诱导细胞融合后，培养
基中有几类细胞？
B淋巴细胞 B淋巴细胞—B淋巴细胞 B淋巴细胞—骨髓瘤细胞（杂交瘤细胞） 骨髓瘤细胞—骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞
资料分析1：细胞内DNA复制有D和S两条途径，其
中D途径能被氨基嘌呤阻断。B淋巴细胞中有这两条DNA 合成途径，但体外培养时一般不会分裂增殖。鼠骨髓瘤细 胞中没有S途径，但能不断分裂增殖。
2、用于治疗疾病和运载药物
把抗癌细胞的单克隆抗体与药物相结合， 制成“生物导弹”。
“生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物
构建概念模型
1.完成学案中单克隆抗体的制备过程流程图
分组展示
记忆整合
1.背诵记忆以下问题，同位间相互检测
（1）为何要给小鼠注射抗原？获取的B淋巴细胞只有一种吗？ （2）制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞 融合形成杂交瘤细胞？ （3）如何诱导诱导细胞融合？细胞融合后，培养基中有几类细胞？ （4）单克隆抗体的制备过程中两次筛选方法、目的分别是什么 ？ （5）杂交瘤细胞的特点？单克隆抗体的优点？ （6）杂交瘤细胞的培养方法有哪两种？ （7）制备过程采用了哪些动物细胞工程技术手段？ （8）单克隆抗体的应用？
1.克隆单一的B淋巴细胞，形成B 细胞群，需要用到什么技术？
2.对B细胞进行克隆化培养可行 吗？为什么？
3.哪种细胞可以大量增殖呢？
4.如何获得既能产生专一抗体， 又能无限增殖的细胞呢？
单克隆抗体：由单一B细胞克隆产生的高度专一、 仅针对某一特定抗原的抗体。
设计方案2：
一种特定B细胞
+ 骨髓瘤细胞
B.没经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞
2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是 D
A.诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同
C. 操作步骤基本相同
D. 都能形成杂种细胞
3. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是 D
A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合
B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成
细胞融合和单克隆抗体制备
考纲要求
2.2.2细胞融合与单克隆抗体
细胞融合与单克隆抗体
Ⅱ
Ⅰ： 对所列知识点要知道其含义，能够在试题所给予的 相对简单的情境中识别和使用它们。 Ⅱ： 理解所列知识和其他相关知识之间的联系和区别， 并能在较复杂的情境中综合运用其进行分析、判断、推理 和评价。
回顾： 1、抗体的化学本质？ 2、抗体由什么细胞产生？
（2）克隆化培养和抗体检测，选出能产生特定（单一或相应） 抗体的杂交瘤细胞。
4.单克隆抗体的优点
特异性强，灵敏度高、可以大量制备
巩固训练
1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞， 经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是 A
A.经过免疫的B淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞
方思案考：：选请择根培据养资基料培设养计 （方即案加选入出氨杂基交嘌瘤呤细）胞。
结果：杂交瘤细胞
多杂种交杂瘤交细瘤胞细胞
选出杂交瘤细胞都能产生 同一种抗体吗？为什么？
资料分析2：（1）多孔细胞培养板：将细胞培养液稀释 后，转移到多孔细胞培养板上，使每孔细胞不超过一个， 通过培养让其增殖。
（2）抗体能够特异性识别抗原并与之结合。
回答下列问题： (1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需 达到16 000以上，则小鼠最少需要经过___次免疫后才能有符合要 求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备 B淋巴细胞的是__小鼠，理由是______。 (2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交 廇细胞外，还含有_____________________________， 体系中出现多种类型细胞的原因是___________。 (3)杂交瘤细胞中有__个细胞核，染色体数目最多是____条。 (4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是 _____________。
2014•新课标Ⅰ，40某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、 Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体 的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如下图 所示。
若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目 为40条)，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目为 60条)按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经 筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。
C.由小鼠一个B淋巴细胞Fra Baidu bibliotek肌瘤细胞诱导融合而成
D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成
变式训练 1、完成步步高243页第2题
2.单克隆抗体的特点是特异性强、灵敏度高、可以大量制备，已被广 泛应用于疾病的诊断和治疗。用H7N9病毒制备单克隆抗体的流程如下 图所示：
体验高考 1、完成步步高244页第3题
24孔板
方思法考：：克请隆根化培据养资+料抗设体检计测 方案选出能产生专一抗 结体果的：杂能交产瘤生细专一胞抗。体的杂交
瘤细胞
单克隆抗体的制备
选择性培养基 克隆化培养
筛选1 多种杂交 瘤细胞
归纳提升： 制备单克隆抗体过程中两次 筛选的方法、目的？
专一抗体 检验阳性
筛选2
产生专一 抗体的杂 交瘤细胞
融合的方法 去壁后诱导原生质 体融合
诱导方法
物理（离心、振荡、 电刺激） 化学（聚乙二醇）
用途
获得杂种植株
动物细胞融合
细胞膜的流动性
使细胞分散后 诱导细胞融合
物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒
制备单克隆抗体
单克隆抗体的制备
单克隆抗体的制备
注射抗原
B细胞
融合
骨髓瘤细胞
注射抗原的目的是 什么？
诱导产生相应的 效应B细胞
思考：
1.本过程利用了哪些原理？
免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理
2.为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？
杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细 胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获 得大量单克隆抗体
3.两次筛选的方法和目的？
（1）用选择性培养基，选出多种杂交瘤细胞；
既能分泌抗体 又能无限增殖
诱导细胞融合需 要什么技术？
杂交瘤细胞
动物细胞培养技术
大量的化学性质单一的抗体
动物细胞融合
原理？
细胞膜的流动性
诱导的手段？
灭活病毒、PEG、电激 等
融合成功的标志：细胞核 融合
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目 植物体细胞杂交
融合原理 细胞膜的流动性、 细胞的全能性
植物体 杂种植株
抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能 与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的 球蛋白。
B淋巴细胞（浆细胞）产生抗体。
准确识别各种抗原物质，并与特异性结 合，可以起到诊断、治疗疾病的效果。
小资料：2010年全球治疗用单克隆抗体药物的销售总额达 到440亿美元，如果加上100亿美元的单抗诊断和研究试 剂，单抗药物的市场总量达到550亿美元。2011年单抗药 物的市场总量已经达到628亿美元。到2015年，全球单克 隆抗体药销售额达980亿美元。我国的单克隆抗体药物从 无到有，并且在我国医药市场发挥越来越重要的作用。目 前我国单抗市场规模每年以50%以上的速度递增。
回顾体液免疫过程
浆细胞
思考1：传统的生产 抗体方法是？
— 把某种抗原反复注射 到动物体内，然后从动物 血清中分离出所需抗体。
思考2：用该方法生产 抗体有什么缺点？
— 产量低，纯度低，且 抗体的特异性差。
如何制备纯度高、特异性强的抗体呢？
设计方案1：
只能分泌一种特异性抗体
1个B细胞
B细胞群
大量专一抗体
单克隆抗体的制备
选择性培养基 筛选1
多种杂交
克隆化培养
瘤细胞
培养杂交瘤细胞的 方法有哪两种？
专一抗体检 验阳性
筛选2
产生专一性抗体的 杂交瘤细胞
单克隆 抗体
特异性强，灵敏度高， 并可大量制备。
单克隆抗体的制备
应用主要有： 1、作为诊断试剂
（如同位素标记单克 隆抗体，可诊断肿瘤、
准确、高效、简易、快速 心血管畸形等）