细胞融合和单克隆抗体制备
单克隆抗体的制备过程
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。
通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。
制备过程1、免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。
一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。
抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。
2、细胞融合采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。
将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。
在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。
3、选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。
在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。
未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。
只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。
4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。
通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。
采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。
经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。
5、单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。
单克隆抗体制备之细胞融合
单克隆抗体制备之细胞融合细胞融合：⼴义上的细胞融合指两个或者多个细胞的原⽣质体融合形成⼀个杂种细胞的过程。
⼴义上的细胞融合可以是同种属的细胞发⽣，也可以是不同种属的细胞发⽣。
在单抗制备过程中的细胞融合专指瘤细胞与脾细胞的融合。
在介绍融合技术之前，有必要先了解⼀下⾻髓瘤细胞。
⾻髓瘤细胞的选择在前⾯概述部份就讲到，为了便于筛选出成功融合的杂交瘤细胞，需要选择DNA合成主要途径缺陷型的⾻髓瘤细胞（HGPRT-或TK-）与脾细胞融合，通常是HGPRT-的⾻髓瘤细胞。
要得到这种细胞需要做两件事，第⼀是得到⾻髓瘤细胞，第⼆步是诱导和筛选出HGPRT-的⾻髓瘤细胞。
⼀般可以通过向⼩⿏腹腔内注射碳氢化合物、⽯蜡或者油类物质⽽诱发其产⽣⾻髓瘤细胞，通常的做法是注射降植烷（Pristane，⼜称姥鲛烷）。
诱导出⾻髓瘤后，在⽆菌条件下取出此⾻髓瘤，⽤完全培养基培养⼀段时间后，再⽤8-氮杂鸟嘌呤或者5-溴脱氧尿嘧啶核苷酸进⾏筛选即可得到HGPRT-的⾻髓瘤细胞。
对于第⼀步的诱导过程，⽬前只有BALB/C和N2B品系的⼩⿏才具有⾼度的敏感性。
⽬前最常⽤的⾻髓瘤是来⾃BALB/C⼩⿏的，为了减⼩远亲属种系之间的排斥反应，单抗制备中⽤来免疫的动物品系应该与⾻髓瘤来源的品系相同。
1972年，Potter第⼀次从Balb/C⼩⿏中分离⾻髓瘤细胞株MOPC,第⼀次⽤于脾细胞融合的⾻髓瘤细胞株为P3-X63-Ag8,简称X63或P3，它由Milstain 实验室将P3K(源⾃MOPC)细胞系经8-Aza筛选得到。
X63⾃⾝不能分泌完整的免疫球蛋⽩，但是可以合成并分泌γ1重链和κ轻链，因此如果⽤X63⾻髓瘤细胞与脾脏融合，得到的融合细胞除分泌脾细胞的抗体外，还可以分泌X63的γ1链和κ链。
后来⼜从P3K细胞系选育出另⼀变种P3-NS1-Ag4-1,简称NS-1,它不能合成γ1重链，能合成κ轻链，但是合成之后在细胞内降解⽽不能被分泌出来。
单克隆抗体制备流程图
单抗制备流程1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。
这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。
制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤，下面按照制备单克隆抗体的流程顺序，逐一介绍其实验方法。
一、细胞融合前准备(一) 免疫方案选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。
一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。
.1.颗粒性抗原免疫性较强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。
下面以细胞性抗原为例的免疫方案:初次免疫1×10７／ ip (腹腔内注射)↓2～3周后第二次免疫1×10７／ ip↓3周后\加强免疫(融合前三天) 1×10７／ ip或iv(静脉内注射)↓取脾融合2.可溶性抗原免疫原性弱，一般要加佐剂，常用佐剂：福氏完全佐剂，福氏不完全佐剂。
要求抗原和佐剂等体积混合在一起，研磨成油包水的乳糜状，放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态。
商品化福氏完全佐剂在使用前须振摇，使沉淀的分枝杆菌充分混匀。
初次免疫 Ag 1～50μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射│(一般～1ml ／点)^↓3周后第二次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip│(ip剂量不宜超过↓3周后第三次免疫剂量同上，不加佐剂，ip}│ (5～7天后采血测其效价，检测免疫效果)↓2～3周后加强免疫，剂量50～500μg为宜，ip或iv↓3天后取脾融合目前，用于可溶性抗原(特别是一些弱抗原)的免疫方案也不断有所更新，如①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。
3.细胞融合及单克隆抗体的制备
恶性增殖的转化细胞，只要营养条件
适合可永远分裂和存活——长命细胞。
经筛选与驯化，现已建立多种骨髓瘤 细胞株——没有抗体分泌物。
2. 细胞融合技术：
分泌抗体 短命 脾细胞 (B淋巴细胞) 长命 不分泌抗体 骨髓瘤细 胞 分泌抗体 长命 杂交瘤细 胞
Köhler和Milstein, 1975
1984年Nobel医学奖
外源性途径(旁路途径)
谷氨酰胺 or 单磷酸尿苷酸
二氢叶酸还原酶
A
DNA
T
内源性途径(主要途径) 外源性途径(旁路途径) 胸腺嘧啶激酶 ( TK ) (Thymidine kinase)
B淋巴细胞： HGPRT+， TK+ 骨髓瘤细胞： HGPRT-， TK-
存活
死亡
单克隆抗体技术操作流程
目的：
触1分钟；
（4）加9ml 培养液，离心沉淀，吸去上清液； （5）加5ml 培养液，分别接种5个直径60mm平皿，每个 平皿加培养液至 5ml，37℃的CO2培养箱中培养。 （6）6—24小时后，换成选择培养液筛选杂交细胞。
电融合法
电融合法是80年代出现的细胞融合技术，在直流电 脉冲的诱导下，细胞膜表面的氧化还原电位发生改变， 使异种细胞粘合并发生质膜瞬间破裂，进而质膜开始连 接，直到闭和成完整的膜，形成融合体。
150ul/孔 A、B
+3.6ml M
2个cell/孔 1个cell/孔
150ul/孔 C、D
+3.6ml M
150ul/孔 E、F、 G、H
0.5个cell/孔
6.杂交瘤细胞的鉴定
染 色 体 核 型 分 析
大规模培养——批量生产单克隆抗体
单克隆抗体制备步骤及注意事项
单克隆抗体制备步骤及注意事项单克隆抗体（Monoclonal antibody，mAb）是指由单一B细胞克隆分离得到的抗体，其具有高特异性和高亲和力。
制备单克隆抗体的方法主要有杂交瘤技术和重组DNA技术。
以下是单克隆抗体制备的步骤及注意事项。
步骤一：抗原免疫1.选择合适的抗原：根据需要检测的分子或细胞表面标志物，选择合适的抗原。
2.免疫动物：常用的动物有小鼠、兔子等。
选择适合的动物后，根据抗原的种类和免疫动物对该抗原的敏感性，设计免疫方案。
3.免疫计划：免疫计划包括免疫剂量、免疫途径和免疫次数等。
通常先进行原位免疫，然后再以单体或混合抗原进行体内免疫。
步骤二：细胞融合1.收集脾细胞：在最佳时期，解剖免疫动物，取出脾脏。
2.细胞培养：将收集的脾细胞在无菌条件下分散成单个细胞，并在培养基中培养，以供细胞融合使用。
3.准备骨髓瘤细胞：选择合适的骨髓瘤细胞，例如NS0或SP2/0等。
将其培养至对数生长期。
4.细胞融合：在抗原刺激下，将脾细胞与骨髓瘤细胞以一定比例混合，用聚乙烯醇或其他化合物促进细胞融合。
步骤三：细胞筛选与扩展1. HT增重培养：用含有hprt缺陷的培养基筛选融合细胞，以选择杂交瘤细胞。
2. Limited Dilution扩展：以一细胞一孔的方式将杂交瘤细胞进行有限稀释，使其实现单克隆化。
3.细胞培养：将单克隆细胞株移植到培养瓶中，进行培养和扩增。
步骤四：单克隆抗体鉴定1.酶联免疫吸附试验（ELISA）：用ELISA方法筛选单克隆细胞株，检测其抗原特异性。
2.免疫组织化学检测：将单克隆抗体应用于细胞和组织切片，检测其在特定细胞或组织中的反应。
3.流式细胞术：通过流式细胞仪检测单克隆抗体与特定细胞表面标志物的结合情况。
步骤五：单克隆抗体生产与纯化1.细胞培养：将单克隆细胞株培养扩增至一定程度。
2.抗体收集：将培养上清液进行抗体收集。
3.纯化与浓缩：利用亲和层析、离子交换、凝胶过滤等技术，对抗体进行纯化和浓缩。
单克隆抗体制备流程
单克隆抗体制备流程单克隆抗体是一种来源于单一B细胞克隆的抗体，具有高度的特异性和亲和力，被广泛应用于生物医药领域。
其制备流程主要包括免疫原制备、动物免疫、细胞融合、筛选和鉴定等步骤。
下面将详细介绍单克隆抗体制备的流程。
1. 免疫原制备。
首先需要准备纯化的抗原蛋白，可以是蛋白质、多肽、细胞膜蛋白等。
抗原蛋白的纯度和活性对单克隆抗体的制备至关重要，因此需要进行严格的纯化和活性检测。
通常采用亲和层析、离心、电泳等方法进行抗原蛋白的提取和纯化。
2. 动物免疫。
将纯化的抗原蛋白注射到小鼠或兔子等动物的体内，诱导其产生特异性抗体。
在免疫过程中，需要注意控制免疫程序，监测抗体滴度，以及合理调整免疫方案，以提高单克隆抗体的产量和质量。
3. 细胞融合。
从免疫动物中获取脾细胞或骨髓细胞，与骨髓瘤细胞（如SP2/0、NS-1等）进行融合，得到杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞具有较高的产抗体能力，能够长期稳定地分泌单克隆抗体。
4. 筛选和鉴定。
通过ELISA、免疫印迹、细胞免疫荧光等方法对杂交瘤细胞培养上清液进行筛选和鉴定。
筛选出特异性较强的单克隆抗体阳性杂交瘤细胞，并进行亚克隆的鉴定，最终获得单克隆抗体细胞株。
5. 扩大培养和纯化。
将筛选出的单克隆抗体细胞株进行扩大培养，获得大量的单克隆抗体上清液。
然后采用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等方法对单克隆抗体进行纯化，获得高纯度的单克隆抗体制剂。
总结。
单克隆抗体制备流程是一个复杂而又精细的过程，需要在每个环节都严格控制条件，确保单克隆抗体的产量和质量。
通过上述步骤的实施，可以获得高效、高纯度的单克隆抗体，为生物医药领域的研究和应用提供有力支持。
单克隆抗体的鉴定
单克隆抗体的鉴定引言单克隆抗体是一类由单个免疫细胞分泌的抗体，具有高度特异性和亲和力。
它被广泛应用于医学诊断、药物研发和治疗等领域。
单克隆抗体的鉴定是确保其质量和效力的关键步骤之一。
本文将介绍单克隆抗体的鉴定方法和流程。
一、单克隆抗体的来源和制备单克隆抗体的制备通常分为两个阶段：免疫原注射和细胞融合。
免疫原注射是将特定抗原注射到动物体内，诱导免疫细胞产生特异性抗体。
细胞融合是将免疫细胞与肿瘤细胞融合，形成可无限增殖的杂交瘤细胞。
二、鉴定单克隆抗体的特异性特异性是评估单克隆抗体质量的重要指标。
常用的鉴定方法包括ELISA、免疫组织化学和免疫印迹等技术。
其中，ELISA是最常用的方法之一，可以通过将抗原固定在微孔板上，然后加入单克隆抗体进行检测，来评估其特异性和亲和力。
三、鉴定单克隆抗体的亲和力亲和力是指抗体与抗原结合的强度。
常用的亲和力鉴定方法包括ELISA、流式细胞术和生物传感等技术。
其中，ELISA是最常用的方法之一，可以通过变化抗原的浓度或稀释单克隆抗体的方式来评估其亲和力。
四、鉴定单克隆抗体的稳定性稳定性是评估单克隆抗体质量的重要指标之一。
常用的稳定性鉴定方法包括温度稳定性、冻融稳定性和长期保存稳定性等。
其中，温度稳定性可以通过将单克隆抗体暴露在不同温度下，然后检测其活性的变化来评估。
五、鉴定单克隆抗体的纯度纯度是评估单克隆抗体质量的重要指标之一。
常用的纯度鉴定方法包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、高效液相色谱和质谱等技术。
其中，聚丙烯酰胺凝胶电泳是最常用的方法之一，可以通过检测单克隆抗体与其他蛋白质的分离情况来评估其纯度。
六、鉴定单克隆抗体的交叉反应性交叉反应性是指单克隆抗体与非目标抗原结合的能力。
常用的交叉反应性鉴定方法包括ELISA、免疫组织化学和免疫印迹等技术。
其中，ELISA是最常用的方法之一，可以通过将非目标抗原固定在微孔板上，然后加入单克隆抗体进行检测，来评估其交叉反应性。
七、鉴定单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用广泛，包括医学诊断、药物研发和治疗等领域。
第5章细胞融合与单克隆抗体(共114张PPT)
×100％
细胞融合(cell fusion)
细胞融合基本过程
1. 去除细胞壁以获得大量的原生质体
2. 诱导细胞融合形成杂种细胞
细胞相互靠近
形成细胞桥 – 最关键的一步
胞质渗透 细胞核融合
3. 筛选,培养,促进细胞分裂,分化,
4. 从细胞团,愈伤组织到最后成株
细胞融合(cell fusion)
动物细胞融合基本过程
硫由酸淋铵 巴沉器淀官法、组织–、细中胞共枢同构免成疫。 器官：骨髓、胸腺、（鸟、禽）法氏囊
电融合诱导法原理示意图
细胞融合(cell fusion)
电融合优点： 融合效率高，可达50～80％ 产生杂交细胞的频率高，是PEG法的100倍。
操作简便、稳定，但需设备。 对细胞无毒害作用。
可在显微镜下观察操作。
细胞融合(cell fusion)
融合率
融合率=
融合细胞的细胞核总数
视野内全部细胞的细胞核总数
细胞融合(cell fusion)
融合过程：
1. 病毒颗粒附着细胞膜上起搭桥作用，使细胞粘着成堆，在4℃冰
浴中细胞紧密靠近，但不发生融合。 2. 37 ℃温浴后，粘结部位的细胞膜破坏，形成通道，细胞质流通、融汇。
3. 病毒颗粒进入细胞质，此时两个细胞合并、变圆，完成融合，全过程 约15～30分钟。
膜融合过程大体概括为两大阶段：首先是两膜脂相互聚合和 接触，其次是接触部位的局部脱水，形成不稳定中间结构，使 膜脂发生混合而最终导致膜的融合。
显微镜下细胞融合 过程
细胞融合(cell fusion)
细胞融合(cell fusion)
初步分析 可能是由于带有大量负电荷的PEG分子和原生质体表面的负电荷
单克隆抗体制备流程
单克隆抗体制备流程首先，在单克隆抗体制备之前，需要选择一个适当的抗原。
抗原可以是蛋白质、多肽、糖类或其他小分子。
选取抗原时，需要考虑抗原的表达水平、抗原的免疫原性以及抗原的稳定性等因素。
接下来，选择一个合适的实验动物进行免疫。
常用的实验动物有兔子和小鼠。
在免疫之前，需要先给实验动物注射适量的佐剂，以增强免疫效果。
通常，实验动物会被多次免疫，每次免疫之间有一段时间的间隔。
在实验动物免疫一段时间后，可以进行细胞融合以产生混杂瘤细胞。
混杂瘤细胞通常是由B细胞和骨髓瘤细胞融合而成，对于小鼠骨髓瘤细胞，常用的有SP2/0和NS0细胞系。
融合的方法主要有两种：一种是将免疫细胞和骨髓瘤细胞混合，然后使用聚乙二醇（PEG）进行融合；另一种是使用电击脉冲进行细胞融合。
融合细胞会经过适当的培养条件进行筛选和扩增。
在融合细胞扩增过程中，会进行筛选以保证融合细胞是产生单克隆抗体的。
最常用的筛选方法是酶联免疫吸附测定（ELISA）。
抗原会被固定在微孔板上，然后将培养液中的细胞涂覆在孔中。
如果其中一孔中有抗体分泌，则抗原会被结合，并且可以通过添加辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗和基质来检测抗体的存在。
经过筛选和鉴定后，选择一个或多个产生单克隆抗体的细胞进行单克隆扩增。
单克隆扩增时，可以通过细胞有限稀释法以及酵母酶聚合酶链式反应（YAC-PCR）等方法进行。
最后，可以通过收集上述单克隆细胞的上清液或细胞提取物来得到单克隆抗体。
上清液或细胞提取物中的抗体可以通过纯化方法，如蛋白A/G 亲和层析或蛋白L亲和层析等，得到纯化的单克隆抗体。
综上所述，单克隆抗体的制备流程包括抗原选择、免疫动物、细胞融合、筛选和克隆等步骤。
通过这些步骤，可以获得单克隆抗体用于科学研究和临床应用。
制备单克隆抗体的原理
制备单克隆抗体的原理
单克隆抗体制备的原理是使用相同的抗原去刺激小鼠免疫系统产生抗体，然后利用细胞融合技术融合小鼠脾细胞和肿瘤细胞，形成的杂交瘤细胞能够长期稳定地分泌单一种抗体。
制备单克隆抗体的步骤包括：免疫小鼠、采集脾细胞、合并脾细胞和肿瘤细胞、筛选杂交瘤细胞、克隆化杂交瘤细胞、培养单克隆细胞、收集单克隆抗体。
首先，将目标抗原注射到小鼠体内，刺激其免疫系统产生抗体。
随后，采集小鼠脾脏，分离脾细胞。
接下来，将脾细胞与骨髓瘤细胞（如myeloma）进行细胞融合，形成杂交瘤细胞。
这个步骤可以通过短暂的高温、聚乙二醇或其他化学物质来促进细胞融合。
随后，将杂交瘤细胞进行筛选。
通常通过培养基中加入选择性抗生素来杀死未融合的脾细胞和骨髓瘤细胞，只留下融合细胞的杂交瘤细胞。
这些细胞称为杂交瘤克隆细胞。
然后，将杂交瘤克隆细胞进行克隆化。
将单个克隆细胞分离，分别培养成单个细胞克隆，并扩展培养。
接下来，用ELISA等技术对克隆细胞的细胞上清进行筛选，
以检验其对目标抗原的特异性。
只有对目标抗原产生特异性抗体的克隆细胞才能被选择出来。
最后，收集特异性单克隆抗体。
将特异性的克隆细胞进行扩增
培养，并收集细胞上清中的单克隆抗体。
通过上述步骤，可以制备出具有高特异性、高亲和力的单克隆抗体，用于特定抗原的检测、定量、纯化等实验和应用中。
细胞融合与单克隆抗体
优点： 外源DNA大小基本不受限制（1-50kb）；导入过
程直观； 整合率高
缺点： 设备昂贵、环节较多 对操作人员有较高的技术要求 低效率（尤其是大家畜） 对卵子伤害大，胚胎存活率低 基因整合随机性
2、胚胎干细胞（ES细胞）法
ES细胞是早期胚胎的内细胞团经过体外培养建立起来的多潜 能细胞系。
1．核受体细胞的准备 去核卵母细胞常常作为核移植的受体细胞。 卵母细胞的来源有两种方式：一是用激素对雌体进行超排处理， 从输卵管冲出体内成熟的卵母细胞。二是从屠宰场收集卵巢，吸出 滤泡中的卵丘—卵母细胞复合体(COCs)，在体外培养成熟后作为受 体。
2．核供体细胞的准备 在核移植操作中，细胞核供体细胞首先必须是完整的二倍体，
该细胞必须保持有供体动物完整的基因组； 其次，供体细胞核必须能够在受体细胞质的作用下，产生细
胞分化过程的倒转，变得如同刚刚受精的合子一样，能重新完成 从受精到发育成一个正常动物个体的全过程。
供体细胞主要有两大类：胚胎卵裂球和体细胞。另外，核供 体细胞的来源还有胚胎干细胞和胎儿成纤维细胞。
3．细胞核移植 常用的核移植方法有两种，即胞质内注射和透明带下注射。胞质
细胞融合和单克隆抗体 胡丽芳
一、细胞融合
细胞融合，又称体细胞杂交或细胞杂交，是指在离体条件 下用人工方法将不同种生物或同种生物不同类型的单细胞 通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。 杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信 息的细胞。 细胞融合技术的出现标志着细胞工程的诞生。
广泛应用于单克隆抗体制备、生物的远缘杂交、新品种培 育等。
体外培养 注射到小鼠腹腔
单克隆抗体
单抗的制备过程要点：
1. 动物特异性免疫 2. 分离B淋巴细胞（B）；培养骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞
制备单克隆抗体的原理
制备单克隆抗体的原理单克隆抗体是一种高度特异性的抗体，它可以识别并结合到特定的抗原上。
制备单克隆抗体的原理是通过克隆单个B细胞，使其产生同一种特异性的抗体。
这种方法可以获得高度特异性和高亲和力的抗体，因此在医学、生物学和生物技术领域得到了广泛的应用。
制备单克隆抗体的过程可以分为四个步骤：免疫、细胞融合、筛选和扩增。
第一步是免疫。
在这一步中，动物（通常是小鼠）被注射一种特定的抗原，以刺激其免疫系统产生抗体。
这些抗体会被B细胞产生并分泌到血液中。
第二步是细胞融合。
在这一步中，从免疫小鼠的脾脏中收集B细胞，并与一种特殊的癌细胞（称为骨髓瘤细胞）融合。
这种融合产生的细胞称为杂交瘤细胞，它们具有两种细胞的特性：B细胞的抗体产生能力和骨髓瘤细胞的无限增殖能力。
第三步是筛选。
在这一步中，杂交瘤细胞被分配到96孔板中，每个孔中只有一个细胞。
然后，每个孔中的细胞被检测其是否产生特定的抗体。
这种检测通常使用酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫荧光染色法。
只有产生特定抗体的细胞才会被保留下来。
第四步是扩增。
在这一步中，产生特定抗体的杂交瘤细胞被扩增，以获得足够的单克隆抗体。
这些抗体可以通过培养杂交瘤细胞或通过收集细胞培养液来获得。
制备单克隆抗体的原理是利用B细胞的特异性和骨髓瘤细胞的无限增殖能力，通过细胞融合和筛选，获得同一种特异性的抗体。
这种方法可以获得高度特异性和高亲和力的抗体，因此在医学、生物学和生物技术领域得到了广泛的应用。
单克隆抗体的应用非常广泛。
它们可以用于诊断、治疗和研究。
例如，单克隆抗体可以用于检测病原体、肿瘤标志物和药物残留物。
它们还可以用于治疗癌症、自身免疫性疾病和传染病。
此外，单克隆抗体还可以用于研究蛋白质结构和功能，以及开发新的生物技术产品。
制备单克隆抗体的原理是通过克隆单个B细胞，使其产生同一种特异性的抗体。
这种方法可以获得高度特异性和高亲和力的抗体，因此在医学、生物学和生物技术领域得到了广泛的应用。
单抗制备原理
单抗制备原理
单抗制备原理是指通过免疫细胞融合技术，将特定的抗原与特异性抗体结合，最终合成出具备相应特异性的单克隆抗体。
单克隆抗体是一种具有高特异性和高亲和力的抗体，可用于诊断、治疗和研究等领域。
单克隆抗体的制备主要包括以下步骤：
1. 免疫原制备：提取目标抗原并纯化，使其成为单克隆抗体的免疫原。
2. 免疫兔子或小鼠：将免疫原注射到兔子或小鼠体内，激发其免疫系统产生特异性抗体。
3. 细胞融合：从兔子或小鼠体内提取骨髓细胞，与无限增殖潜能的骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。
4. 杂交瘤筛选：通过限制性稀释法或酶免疫吸附筛选法，筛选出产生特异性抗体的杂交瘤细胞。
5. 单克隆抗体培养：将筛选出的杂交瘤细胞进行单克隆化，分离成单个克隆株，每个克隆株都产生特异性的单克隆抗体。
6. 单克隆抗体纯化：通过层析、电泳等技术对单克隆抗体进行纯化，去除杂质。
7. 鉴定和鉴定：利用免疫学技术对单克隆抗体进行鉴定，确定其特异性和亲和力。
8. 大规模制备：将特异性的单克隆抗体进行扩增和大规模制备，以满足实际需求。
通过以上步骤，可以制备出具有高特异性和高亲和力的单克隆抗体。
这些单克隆抗体可以应用于疾病的诊断、治疗和研究中，为医学和生物科学领域提供重要的工具和技术支持。
动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体的制备2.难点：动物细胞培养
【弄清四个原因】----帮助学生理解
（1）为什么动物组织细胞要用胰蛋白酶处理？ 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维
等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和 韧性的组织和器官（接触抑制现象）。
（2）为什么要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来？
大多数组织细胞不适应悬浮生长，它们必须在 固定的表面上生长和分裂。细胞在培养瓶中贴壁生 长，随着细胞越来越多，当贴壁生长的细胞分裂生 长到表面相互接触时就停止分裂增长，这种现象叫 做接触抑制。需要定期用胰蛋白质酶使细胞从壁上 脱下来，传代培养。
（3）胰蛋白酶会消化细胞吗？
胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质为， 长时间作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损 伤作用；作用时间太短，细胞不容易脱落，因 此必须控制好作用时间。实际应用中的处理： 做预实验，摸清效果最好时的胰蛋白酶的用量 和作用时间。
（4）细胞培养中 “危机”出现的原因
干细胞简介 干：有树干、茎干的起源之意。 干细胞：理论上是指具有无限自我更新能力（有细 胞周期）和多方向分化潜能的一类细胞。
1.动物细胞培养过程
动物胚胎或幼龄动物 的组织、器官
胰蛋白酶
细胞悬浮液 原代培养
细胞株 细胞系
10代细胞 50代细胞 无限传代
传代培养
【明确四个概念】要能界定原代培养和传代培养；
细胞株和细胞系。理解传代培养的原因。
细胞 悬浮 液
随细胞增多且细胞贴壁生长。
细胞株
细胞系 遗传物质改变
10代 细胞
50代 细胞
受精卵至囊胚期细胞
代数低
细胞分裂、 分化
原肠胚以后的细胞
代数高
细胞分裂、 分化
受精卵
单克隆抗体的制作流程
单克隆抗体的制作流程一、引言在生物医学研究和临床治疗中，单克隆抗体被广泛应用。
它可以通过与特定的抗原结合来识别和定位目标分子，为研究人员提供了重要的工具。
在本文中，我们将深入探讨单克隆抗体的制作流程，包括免疫原选择、免疫动物制备、细胞融合和单克隆抗体筛选等环节。
二、免疫原选择免疫原的选择对于制备具有高特异性和亲和力的单克隆抗体至关重要。
首先要确定所需的抗原特征，例如结构域、修饰形式等。
常见的免疫原包括蛋白质、多肽、糖类、小分子化合物等。
在选择免疫原时，需考虑其易得性、免疫原性、纯度、稳定性等因素。
2.1 蛋白质和多肽免疫原蛋白质和多肽通常是制备单克隆抗体最常用的免疫原。
选择合适的蛋白质或多肽，可以根据目标蛋白的功能域、线性表位或立体结构等特征。
对于复杂的蛋白质，可以选择亲和纯化后的特定结构域或表位作为免疫原。
2.2 糖类免疫原糖类通常具有较复杂的结构，选择适当的免疫原十分关键。
在制备糖类免疫原时，可以选择与糖链特异性结合的蛋白质作为载体，通过共价结合将糖类连接到蛋白质上，并保持其天然的空间构象。
2.3 小分子化合物免疫原小分子化合物通常具有较弱的免疫原性，需要通过与载体结合形成分子复合物来增强免疫性。
常用的方法包括与大分子带电载体或蛋白质偶联，或通过共价结合形成分子复合物。
三、免疫动物制备合适的免疫动物选择和制备是单克隆抗体制备的重要环节。
常用的免疫动物包括小鼠、兔子和大鼠等。
3.1 小鼠小鼠是最常用的免疫动物，且易于操作。
在选择小鼠品系时，需考虑其免疫反应能力、抗原耐受性和容易获得的特点。
通常使用BALB/c小鼠或nude小鼠。
3.2 兔子兔子具有较强的免疫反应能力和较大的体积，可以提供大量的抗体。
但兔子对某些抗原可能产生耐受性。
3.3 大鼠大鼠易于操作且免疫反应充分，但体积较小，提供的抗体量相对较少。
四、细胞融合细胞融合是制备单克隆抗体的关键步骤之一。
通过将免疫动物的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，可以获得具有免疫动物和癌细胞特点的杂交瘤细胞。
第2章 第2节 动物细胞融合技术与单克隆抗体 讲义【新教材】人教版(2019)高中生物选择性必修3
第2课时动物细胞融合技术与单克隆抗体课标内容要求核心素养对接1.阐明动物细胞融合是指通过物理、化学或生物学等手段，使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
2．概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。
1.生命观念：以细胞结构与功能为基础，理解动物细胞融合的内涵。
2．科学思维：结合具体实例，以流程图的形式表示单克隆抗体的制备过程。
3．社会责任：说明单克隆抗体的特点及应用。
一、动物细胞融合技术1．概念使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
2．诱导原理和结果(1)诱导原理：细胞膜的流动性。
(2)诱导结果：形成杂交细胞。
3．诱导方法：PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。
4．意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。
5．动物细胞融合技术的应用(1)成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
(2)用于制备单克隆抗体。
二、单克隆抗体1．制备原理(1)B淋巴细胞特点：一种B淋巴细胞分泌一种特异性抗体。
(2)骨髓瘤细胞特点：能在体外大量增殖。
(3)杂交瘤细胞特点：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能无限增殖又能产生大量特定抗体。
2．制备过程3．单克隆抗体的优点能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备。
4．单克隆抗体的应用(1)作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点。
(2)用于治疗疾病和运载药物。
判断对错(正确的打“√”，错误的打“×”)1．动物细胞融合过程中既有细胞膜融合也有核的融合。
(√) 2．与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒。
(×) 提示：动物细胞融合特有的诱导因素为灭活的病毒。
3．用特定的抗原对小鼠进行免疫后，从小鼠脾脏中只能得到一种B淋巴细胞。
(×) 提示：免疫后的小鼠从脾脏中获取的是多种B淋巴细胞。
4．单克隆抗体是单个B淋巴细胞增殖并产生的抗体。
单克隆抗体制备的原理
单克隆抗体制备的原理
单克隆抗体制备的原理
单克隆抗体是指由同一种细胞分泌的具有相同结构和功能的抗体分子。
单克隆抗体制备的过程主要包括以下几个步骤：抗原制备、免疫动物、细胞融合、筛选和克隆。
1. 抗原制备
首先需要准备纯化的抗原，通常采用多肽、蛋白质或其他生物大分子
作为抗原。
这些抗原必须具有足够的纯度和特异性，以便在后续步骤
中能够有效地诱导特异性免疫反应。
2. 免疫动物
将纯化的抗原注射到实验动物体内，例如小鼠、大鼠或兔子等。
这些
实验动物会产生针对该特定抗原的免疫反应，并产生多种不同类型的
抗体。
3. 细胞融合
将产生针对目标抗原特异性的B淋巴细胞与肿瘤细胞进行融合，形成
杂交瘤（hybridoma）。
肿瘤细胞通常来自于小鼠或人类，由于其具
有不受限制的增殖能力，可以保证单克隆抗体的持续生产。
4. 筛选
对杂交瘤进行筛选，以确定产生特定单克隆抗体的杂交瘤。
通常采用ELISA、Western blotting等技术对杂交瘤进行筛选，以检测其是否
产生目标抗原的特异性抗体。
5. 克隆
将产生目标抗原特异性抗体的杂交瘤进行单克隆化处理。
这个过程中
需要将杂交瘤分离，并将其分别培养在不同的培养基上。
最终，每个
单一细胞会形成一个单克隆群落，并产生相同结构和功能的抗体分子。
总之，单克隆抗体制备是一项复杂而精密的过程。
通过以上步骤，可
以从多种不同类型的B淋巴细胞中筛选出具有特定结构和功能的单克
隆抗体，并为医学、科学等领域提供了广阔应用前景。
单克隆抗体的制备流程
单克隆抗体的制备流程制备单克隆抗体的流程包括动物的选择与免疫以及细胞融合两个步骤。
在动物的选择方面，纯种BALB/C小鼠是较为理想的选择。
这种小鼠温顺、离窝的活动范围小，体弱，食量及排泄物也较少，适合在洁净的实验室中饲养。
目前，许多实验室都选择纯种BALB/C小鼠来进行杂交瘤技术。
在免疫方案的选择方面，合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功以及获得高质量的单克隆抗体至关重要。
一般来说，根据抗原的特性不同，需要制定不同的免疫方案。
对于可溶性抗原，由于免疫原性较弱，需要加佐剂。
常用的佐剂包括XXX完全佐剂和XXX不完全佐剂。
初次免疫时，抗原的剂量一般为1-50μg，加福氏完全佐剂进行皮下多点注射或脾内注射（一般0.8-1ml，0.2ml/点）。
之后，每隔3周进行一次免疫，剂量同初次免疫，但XXX不完全佐剂进行皮下或腹腔内注射（ip剂量不宜超过0.5ml）。
第三次免疫时，剂量同前两次，不加佐剂，进行腹腔内注射，5-7天后采血测其效价。
如果需要加强免疫，剂量一般为50-500μg，可以进行腹腔内或静脉内注射。
对于可溶性抗原，还有一些更新的免疫方案，如将可溶性抗原颗粒化或固相化、改变抗原注入的途径以及使用细胞因子作为佐剂等。
对于颗粒抗原，免疫性较强，不需要加佐剂就可以获得很好的免疫效果。
以细胞性抗原为例，免疫时要求抗原量为1-2×107个细胞。
初次免疫时，抗原剂量为1×107/0.5ml，进行腹腔内注射，之后每隔2-3周进行一次免疫，剂量同初次免疫。
如果需要加强免疫，在融合前三天进行1×107/0.5ml的腹腔内或静脉内注射。
在细胞融合前的准备工作中，选择合适的骨髓瘤细胞系也是十分重要的。
骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，这样可以提高杂交融合率，也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量的单克隆抗体。
在组织培养中，单个或少数分散的细胞不易生长繁殖。
为了促进细胞的生长繁殖，需要加入其他活细胞，这些细胞被称为饲养细胞。
生物-动物细胞融合技术与单克隆抗体
动物细胞融合技术与单克隆抗体[高中生物] 1.阐明动物细胞融合技术的概念，举例说出诱导动物细胞融合的方法。
2.概述单克隆抗体的制备过程。
一、动物细胞融合技术1．概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
2．原理：细胞膜的流动性。
3．诱导融合的方法Error!4．意义：细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。
5．应用(1)成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
(2)用于制造单克隆抗体。
判断正误(1)与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导因素有聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒( ) (2)灭活的含义是用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构( ) (3)二倍体动物细胞融合后的杂交细胞仍然是二倍体细胞( )答案 (1)× (2)√ (3)×探讨点 动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较1．19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中，观察到多核细胞。
如何解释这一现象？提示 病人体内的病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。
2．比较动物细胞融合技术和植物体细胞杂交技术(1)动物细胞融合和植物体细胞杂交技术的原理分别是什么？提示 动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性；植物体细胞杂交技术的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。
(2)两者在方法上有什么异同？提示 都可用聚乙二醇(PEG)融合法和电融合法诱导融合；但动物细胞还可用灭活病毒诱导法诱导细胞融合。
(3)两者在最终结果上有什么不同？提示 动物细胞融合最终得到的是杂交细胞，而植物体细胞杂交技术最终得到的是杂种植株。
核心归纳 动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性步骤酶解法去掉细胞壁后，诱导原生质体融合，形成杂种细胞，再经植物组织培养形成杂种植株分散成单个细胞后诱导细胞融合，形成杂交细胞方法聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca 2＋—高pH 融合法、电融合法、离心法PEG 融合法、电融合法、灭活病毒诱导法结果形成杂种植株形成杂交细胞，以生产细胞产品意义打破生殖隔离，实现远缘杂交育种突破有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能1．下列关于动物细胞融合的说法，不正确的是( )A ．常用于诱导动物细胞融合的方法有PEG 融合法、灭活病毒诱导法、电融合法、紫外线照射等B ．动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的细胞称为杂交细胞C ．动物细胞融合就是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程D ．细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能答案 A解析 常用于诱导动物细胞融合的方法有PEG 融合法、灭活病毒诱导法、电融合法等，紫外线照射不是诱导动物细胞融合的方法，A 错误。
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24孔板
方思法考：：克请隆根化培据养资+料抗设体检计测 方案选出能产生专一抗 结体果的：杂能交产瘤生细专一胞抗。体的杂交
瘤细胞
单克隆抗体的制备
选择性培养基 克隆化培养
筛选1 多种杂交 瘤细胞
归纳提升： 制备单克隆抗体过程中两次 筛选的方法、目的？
专一抗体 检验阳性
筛选2
产生专一 抗体的杂 交瘤细胞
回顾体液免疫过程
浆细胞
思考1：传统的生产 抗体方法是？
— 把某种抗原反复注射 到动物体内，然后从动物 血清中分离出所需抗体。
思考2：用该方法生产 抗体有什么缺点？
— 产量低，纯度低，且 抗体的特异性差。
如何制备纯分泌一种特异性抗体
1个B细胞
B细胞群
大量专一抗体
思考：
1.本过程利用了哪些原理？
免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理
2.为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？
杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细 胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获 得大量单克隆抗体
3.两次筛选的方法和目的？
（1）用选择性培养基，选出多种杂交瘤细胞；
融合的方法 去壁后诱导原生质 体融合
诱导方法
物理（离心、振荡、 电刺激） 化学（聚乙二醇）
用途
获得杂种植株
动物细胞融合
细胞膜的流动性
使细胞分散后 诱导细胞融合
物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒
制备单克隆抗体
单克隆抗体的制备
单克隆抗体的制备
注射抗原
B细胞
融合
骨髓瘤细胞
注射抗原的目的是 什么？
诱导产生相应的 效应B细胞
1.克隆单一的B淋巴细胞，形成B 细胞群，需要用到什么技术？
2.对B细胞进行克隆化培养可行 吗？为什么？
3.哪种细胞可以大量增殖呢？
4.如何获得既能产生专一抗体， 又能无限增殖的细胞呢？
单克隆抗体：由单一B细胞克隆产生的高度专一、 仅针对某一特定抗原的抗体。
设计方案2：
一种特定B细胞
+ 骨髓瘤细胞
单克隆抗体的制备
选择性培养基 筛选1
多种杂交
克隆化培养
瘤细胞
培养杂交瘤细胞的 方法有哪两种？
专一抗体检 验阳性
筛选2
产生专一性抗体的 杂交瘤细胞
单克隆 抗体
特异性强，灵敏度高， 并可大量制备。
单克隆抗体的制备
应用主要有： 1、作为诊断试剂
（如同位素标记单克 隆抗体，可诊断肿瘤、
准确、高效、简易、快速 心血管畸形等）
单克隆抗体的制备
注射抗原
B细胞
骨髓瘤细胞
融合
诱导细胞融合后，培养
基中有几类细胞？
B淋巴细胞 B淋巴细胞—B淋巴细胞 B淋巴细胞—骨髓瘤细胞（杂交瘤细胞） 骨髓瘤细胞—骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞
资料分析1：细胞内DNA复制有D和S两条途径，其
中D途径能被氨基嘌呤阻断。B淋巴细胞中有这两条DNA 合成途径，但体外培养时一般不会分裂增殖。鼠骨髓瘤细 胞中没有S途径，但能不断分裂增殖。
2014•新课标Ⅰ，40某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、 Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体 的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如下图 所示。
若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目 为40条)，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目为 60条)按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经 筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。
课堂小结
动物细胞工程
植物细胞工程
基础
动物细胞培养
技术 动物细 动物细 核移植 胞培养 胞融合 技术
原理 细胞增 细胞膜 动物细 殖 具有流 胞核的 动性 全能性
结果 细胞或细 杂交细 克隆动
胞产物
胞
物
植物组织培养
植物组 植物体细 织培养 胞杂交
植物细 胞全能
性
细胞膜具 有流动性 、植物细 胞全能性
既能分泌抗体 又能无限增殖
诱导细胞融合需 要什么技术？
杂交瘤细胞
动物细胞培养技术
大量的化学性质单一的抗体
动物细胞融合
原理？
细胞膜的流动性
诱导的手段？
灭活病毒、PEG、电激 等
融合成功的标志：细胞核 融合
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目 植物体细胞杂交
融合原理 细胞膜的流动性、 细胞的全能性
2、用于治疗疾病和运载药物
把抗癌细胞的单克隆抗体与药物相结合， 制成“生物导弹”。
“生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物
构建概念模型
1.完成学案中单克隆抗体的制备过程流程图
分组展示
记忆整合
1.背诵记忆以下问题，同位间相互检测
（1）为何要给小鼠注射抗原？获取的B淋巴细胞只有一种吗？ （2）制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞 融合形成杂交瘤细胞？ （3）如何诱导诱导细胞融合？细胞融合后，培养基中有几类细胞？ （4）单克隆抗体的制备过程中两次筛选方法、目的分别是什么 ？ （5）杂交瘤细胞的特点？单克隆抗体的优点？ （6）杂交瘤细胞的培养方法有哪两种？ （7）制备过程采用了哪些动物细胞工程技术手段？ （8）单克隆抗体的应用？
方思案考：：选请择根培据养资基料培设养计 （方即案加选入出氨杂基交嘌瘤呤细）胞。
结果：杂交瘤细胞
多杂种交杂瘤交细瘤胞细胞
选出杂交瘤细胞都能产生 同一种抗体吗？为什么？
资料分析2：（1）多孔细胞培养板：将细胞培养液稀释 后，转移到多孔细胞培养板上，使每孔细胞不超过一个， 通过培养让其增殖。
（2）抗体能够特异性识别抗原并与之结合。
植物体 杂种植株
细胞融合和单克隆抗体制备
考纲要求
2.2.2细胞融合与单克隆抗体
细胞融合与单克隆抗体
Ⅱ
Ⅰ： 对所列知识点要知道其含义，能够在试题所给予的 相对简单的情境中识别和使用它们。 Ⅱ： 理解所列知识和其他相关知识之间的联系和区别， 并能在较复杂的情境中综合运用其进行分析、判断、推理 和评价。
回顾： 1、抗体的化学本质？ 2、抗体由什么细胞产生？
C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成
D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成
变式训练 1、完成步步高243页第2题
2.单克隆抗体的特点是特异性强、灵敏度高、可以大量制备，已被广 泛应用于疾病的诊断和治疗。用H7N9病毒制备单克隆抗体的流程如下 图所示：
体验高考 1、完成步步高244页第3题
回答下列问题： (1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需 达到16 000以上，则小鼠最少需要经过___次免疫后才能有符合要 求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备 B淋巴细胞的是__小鼠，理由是______。 (2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交 廇细胞外，还含有_____________________________， 体系中出现多种类型细胞的原因是___________。 (3)杂交瘤细胞中有__个细胞核，染色体数目最多是____条。 (4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是 _____________。
（2）克隆化培养和抗体检测，选出能产生特定（单一或相应） 抗体的杂交瘤细胞。
4.单克隆抗体的优点
特异性强，灵敏度高、可以大量制备
巩固训练
1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞， 经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是 A
A.经过免疫的B淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞
抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能 与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的 球蛋白。
B淋巴细胞（浆细胞）产生抗体。
准确识别各种抗原物质，并与特异性结 合，可以起到诊断、治疗疾病的效果。
小资料：2010年全球治疗用单克隆抗体药物的销售总额达 到440亿美元，如果加上100亿美元的单抗诊断和研究试 剂，单抗药物的市场总量达到550亿美元。2011年单抗药 物的市场总量已经达到628亿美元。到2015年，全球单克 隆抗体药销售额达980亿美元。我国的单克隆抗体药物从 无到有，并且在我国医药市场发挥越来越重要的作用。目 前我国单抗市场规模每年以50%以上的速度递增。
B.没经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞
2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是 D
A.诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同
C. 操作步骤基本相同
D. 都能形成杂种细胞
3. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是 D
A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合
B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成