植物制片技术研究生课件PPT幻灯片

九、脱蜡
方法:
二甲苯Ⅰ 30分钟(40 ℃温箱中)
二甲苯Ⅱ 10分钟
十、染色
（一）染料的分类
a 来源：天然 人工
b 化学性质：碱性：番红 酸性：固绿 中性：
c 性能： 核染料： 苏木精、番红 细胞质染料：固绿、苯胺蓝
细胞壁染料：番红 组织化学染料；苏丹Ⅲ 荧光染料：
（二）几种常用染料的性质及配制 a 苏木精：溶于酒精、甘油和热水中。 b 番红：溶于酒精、水中。 c 固绿 ：易溶于酒精。 d 碱性品红：作为组化试剂，用于检验DNA、多糖物质等
步骤二：继续低温浸蜡（40℃，过夜）——高温浸蜡（58℃，换纯蜡，每2h换蜡一次， 不超过6h）——包埋（一个蜡船放3-4个材料）（一天）
步骤三：修块——切片——粘片——展片 ——烘片（一天） 步骤四：脱蜡与染色：二甲苯Ⅰ（30分钟，40度温箱）——二甲苯Ⅱ（10分钟） ——
复水（ 1/2二 甲苯+1/2酒精—100%酒精—95%酒精，每步10分钟）— 染色（番红， 85%酒精配置，过夜）（半天） 步骤五：番红—85%酒精—染色（固绿，95%酒精配置，每步5分钟） —95%酒精— 100%酒精—100%酒精——二甲苯Ⅰ——二甲苯Ⅱ ——封片（标记）——烘干。（半 天） 步骤六：观察与照相（一天） 步骤七：实验报告的撰写与汇报
四 、透明
作用：1 使材料透明、干净； 2 便于包埋剂及封固剂的进入
透明剂： 1 二甲苯：1/2纯酒精+1/2二甲苯 ——二甲苯 2 甲苯或苯； 3 氯仿 4 丁香油、香柏油等
• 五、浸蜡
•
1 低温浸蜡：40℃左右（1夜）
•
2 高温浸蜡：58℃左右 （6小时以内）
• 六、包埋
•
1 选取合适熔点的石蜡；
主要参考书目：
1 植物显微技术，王灶安主编，农业出版社； 2 植物制片技术，李正理编著，科学出版社； 3 《西北植物学报》，《植物研究》，《武汉植物学
研究》，《植物分类学报》等学术杂志。
• 考核方式：撰写实验报告：对所观察的器官结构 进行详细的描述并作进一步的讨论，附上植物器 官显微结构图。
植物显微制片技术
植物制片的类型和方法
切片法：徒手切片法
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石蜡切片法
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滑走切片机切片法
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半薄切片法
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超薄切片法
非切片法：离析法
压片法
整体封存法
石蜡法制片原理与方法
一、材料的选择与分割
1. 新鲜、健康、有代表性的材料； 2.生长发育的不同阶段; 3.大小适当，0.5cm左右.
二、杀生、固定与保存
杀生：
固定： 1 根据固定目的物本身的结构性质； 2 分割大的材料； 3 抽气； 4 标记. (整染）
•
2 包埋用具的准备
• 要点：动作迅速 •
• 七、切片
1 修块; 2 切片: 厚度在8-14µm
a 切片有裂纹 b 蜡带弯曲 c 材料破碎 d 切片卷成圆筒 e 蜡带皱缩
• 八、粘片与展片
粘片剂:
明胶 1 g 石炭酸 2 g 甘油 15 ml 蒸馏水 100ml
方法:
a 38 ℃左右 b 涂抹粘片剂 c 将蜡片置于玻片中央 d 材料呈透明质感 e 38 ℃烘烤至干燥 f 标记
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（三）一般的染色方法
1 材料是否完整: 整体染色 切片染色
2 染料的种类: 单染 二重染色 三重(多重)染色
（四）染色时注意的事项
1 根据观察目的、样品的结构性质； 2 溶液和染液的浓度相同； 3 碱性染液先染，酸性染液后染； 4 染色可深不可浅； 5 染色的时间；
十一、封藏与封藏剂
目的：1 长期保存 2 使材料可以清楚的显现出来
封藏剂种类： 1 树脂性封藏剂：香柏油、合成树脂、加拿大
树胶：溶于二甲苯、氯仿等溶剂，熔点为61℃， 不能加热，折光率近似玻璃，1.547。
2 水溶性封藏剂：阿拉伯树胶、甘油、明胶、 糖浆等。
• 十二 显微观察与照相
石蜡法制片流程
步骤一： （整染） 取材 ——固定——脱水(70%酒精—85%酒精—95%酒精—100%酒精—100%酒精,每 步2-4h)——透明（1/2二甲苯+1/2酒精， 2h；纯二甲苯，2h）——低温浸蜡（加碎蜡 至饱和，40℃，过夜）（一天）