植物制片技术研究生课件PPT幻灯片

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植物制片技术

植物制片技术

二、杀死、固定、保存
✤固定液的选择 根据观察目的和对象,选择固 定剂。同时,要充分考虑植物 种类、不同器官的特性。
二、杀死、固定、保存
✤固定液的渗透力 1)选择固定剂时,要充分考虑 固定液的性质、浓度和温度对 渗透力的影响。 2)植物材料的大小和组织紧密 程度对渗透的影响。
二、杀死、固定、保存
一、选 材
• 叶的切取:横切面。
第二章 植物制片技术原理步骤
第一节 选材
第二节 杀死、固定与保存
第三节 清洗与脱水 第四节 透明与过渡
第五节 渗蜡与包埋
第六节 切片
第七节 粘片与展片
第八节 染色
第九节 封片
二、杀死、固定、保存
杀死:迅速终结植物材料的生命。要 求越快越好,使用渗透力强的药剂。
固定:在杀死基础上,组织或细胞保 持生活的状态,并在以后制片的过程 中不发生变化。
放入冷水中,促进石蜡短时间内凝 固。 (3)过夜后,取出备用。
五、浸透和包埋
第二章 植物制片技术原理步骤
第一节 选材
第二节 杀死、固定与保存
第三节 清洗与脱水 第四节 透明与过渡
第五节 渗蜡与包埋
第六节 切片
第七节 粘片与展片
第八节 染色
第九节 封片
六、切片
(1)修块: 将包有材 料的蜡块 修成一个 上窄下宽 的台体。 粘在木块 上,即可 切片。
植物显微技术
绪论
一、什么是植物显微技术 用于观察研究植物内部精细结
构的技术方法,包括制片技术、 光学显微镜技术和显微摄影技术, 是一门建立在生物学、化学以及 物理等多门学科基础之上的综合 性技术性学科。
绪论
二、植物显微技术的任务和目的 根据材料的自然特性,观察

植物显微技术-整体装片法ppt课件

植物显微技术-整体装片法ppt课件

2018/10/23
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切片法
显 微 制 片 法
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涂片法
压片法 整体封片法
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整体装片法的适用范围及优点
• 用于单细胞、微小生物体或分散的器官。例 如丝状或叶状的藻类、、 花粉粒、幼胚等幼小的器官
• 可以显示植物或植物器官的整体,能及时观 察研究植物生活组织的结构 • 方法及用具简单,不需切片机等机械设备, 短时间即可完成
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六、透明:
透明是制片过程中的基础工作,材料经各级酒 精脱水以后,要经过常用的有机榕剂进行透明。只 有当组织材料全为透明剂所占,并在显微镜下观察 呈透明状态时,这种材料才符合制片要求,故透明 是制片的重要环节,万不可忽视,凡未经透明的材 料(不论在何步骤透明)都必须重新退回处理,直 到材料透明再继续向下处理。 常用透明剂种类:二甲苯、氯仿、苯、甲苯、丁 香油、冬青油、香柏油等。
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注意:
要注意固定目的物本身的结构性质,以便选用适合的 固定液,如一般根、茎、叶的组织切片用FAA,根尖、 花药压片材料用卡诺式固定液,花药胚囊用纳瓦申(Na vashin‘s)液,茎尖(根尖)用铬酸-醋酸液。另外,固 定时间的长短,要根据材料的特点而增减 常用的固定液有以下几种: 1、FAA固定液(福尔马林-冰醋酸-酒精) 2、FPA固定液 3、CanoysFluid(卡诺氏液 )
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注意:一般选用二甲苯作为透明剂。材料在二甲苯 中时间不宜过长,否则材料收缩变硬,变脆。 方法: 1/2无水酒精 +1/2二甲苯和纯二甲苯中透 氯仿透明的优点是: ①组织材料在氯仿中浸存,收缩不显著 ②易挥发,如浸蜡时,使用的氯仿经包埋前的 处理便于除去 其缺点有: ①渗入组织内力量较二甲苯弱、时间长 ②氯仿能使染料褪色,故染色后的切片处理不宜 用氯仿透明而用二甲苯。

植物标本制作(全)课件PPT

植物标本制作(全)课件PPT
固定拉丁方名法::___①__针__线___固__定____背__面___将__线___打__结____
产地:__________________________________
采集人:__②___纸__条__ 固采定集日背期:面__粘__贴_年__月__日
鉴定人:__③___纸__条___贴__压____正__面___粘__贴_________
3、烘制:40-50℃,2小时后取出。更换汲水纸和硅胶。 如此连续4-5次,标本干燥。 4、消毒和上台纸,同普通腊叶标本。
方法三、叶脉标本制作
1、离析:用10-20% NaOH 溶液煮20-30分钟,再用清水 洗。在水中用毛笔扫去叶表皮和叶肉组织。
2、漂白:用10% H2O2 溶液浸泡8-12小时。 3、染色:10%品红、品绿等浸染几分钟。 4、清洗:5%稀盐酸、清水冲洗。 5、压制、消毒和上台纸,同普通腊叶标本。
【器材】 枝剪、掘根铲、采集箱、剪刀、放大镜、 镊子、塑料袋、水网、号签、笔、记录本。
【方法】
三、采集
1.草本植物,应该采齐全的植株。
2、注意标本的大小 标本的大小一般以台纸为标准,植物体不到
40cm高的小草木应连根采取整个植株。较高的 草木必须把它的茎做适当的折叠,使之成“V”或 “N” 、“W”字形,不要直折,应略扭转后折而 不致使茎弄断。对木本植物只需采集具有花、 果且姿态最好的枝条,大小适应台纸。
4、在整理好的植株上盖3层吸水纸,以后每放 一标本就盖3层纸,10份左右,到最后一份标 本上盖5层纸,再将标本夹的另一扇压上,尽 量压紧、用绳子将其绑牢,放于通风处压制。
五、换纸
用干纸去替换标本夹里的湿纸,第一次换纸时, 要用镊子整理,使根、茎、叶展开。
换纸关系到标本质量好坏,换纸勤、干的快、颜 色好。头三天每天换纸2-3次,以后可以每天换一次, 一般一星期可完全干燥。叶片较硬的植物需时间长。 换下来的纸可放于阳光下晒干,以备下次再用。

组织切片技术PPT72页

组织切片技术PPT72页

2.1.3 组织取材注意事项
1.组织要求离体后30min内浸入固定液,尤其是开展分子生物学研究。 动物放血处死后立即取材,最好在心脏还在跳动时立即取材,马 上投入固定液中;
2.注意防止人为因素的影响 切取组织的刀剪必须锋利,刀要足够长。切分组织块时,不
可来回切割。夹取组织时,镊子要轻,切勿挤压。以免损伤组织; 3.组织块的大小
大多数的生物材料,在自然状态下是不适合显微观察 的,也无法看到其内部结构。因为材料较厚,光线不易透 过,另外由于细胞内各个结构的折射率相差很小,即使光 线可透过,也难以辩明。
组织学技术是教学和科研中常用的方法。组织在经过 固定,脱水,透明,包埋等手续后,用切片机切成较薄的 切片,再经不同的染色就可以显示不同细胞组织的形态及 其中某些化学成份含量的变化,组织切片也便于保存。
混合固定液:是用几种化学试剂,按一定的比例混 合配制而成的,由于各种试剂的优缺点互相弥补,因此 可产生较好的效果。
(1)甲醛固定液:
是一种还原剂,呈酸性,原液浓度为37%~40%,配成 固定液的浓度为4%,习惯上称为10%,配制时取甲醛原液 10ml,加蒸馏水(D.W)或缓冲液至100ml,为甲醛固定液 (10%福尔马林) 。
二甲苯是使用最广泛的一种透明剂,它具有渗透力强, 溶解石蜡量大,又易挥发的优点,其缺点是易使组织收缩, 变硬,变脆,因此透明时间应根据组织块大小及质地酌情 而定
注意事项:
1.使用透明剂时,要随时盖紧盖子,以免空气中的水分 进入。
2.更换每级透明剂,动作要迅速,一方面为了不使材料 块干涸,另一方面能避免吸收湿气。
(3) Bouin’S液
苦味酸饱和水溶液 75ml
甲醛
25ml
冰醋酸
5ml

制片、染色及显微观察课件

制片、染色及显微观察课件
掌握染料的性质和浓度
不同染料具有不同的性质和浓度要求,需根据实际情况进行调整。
注意染色温度和时间
染色温度和时间对染色效果有影响,需根据染料和实验要求进行控制。
03
显微观察技巧
显微镜的种类与选择
光学显微镜
选择依据
利用可见光和光学透镜放大物体,主 要用于生物学和医学领域。按用途可 分为普通光学显微镜、荧光显微镜、 相差显微镜等。
根据观察需求选择合适的显微镜,如 观察细胞结构可选择光学显微镜,观 察超微结构可选择电子显微镜。
电子显微镜
利用电子束代替可见光,通过电磁透 镜放大物体,主要用于观察超微结构。 按原理可分为透射电子显微镜和扫描 电子显微镜。
显微观察的基本步骤与技巧
制片
染色
调焦与对光
观察与记录
技巧
将待观察样品制备成适 合观察的薄片或切片, 如血液涂片、组织切片 等。制片过程中需注意 保持样品新鲜、无污染 ,切片厚度适中。
制片、染色及显微观察课 件
• 制片技术简介 • 染色技术详解 • 显微观察技巧 • 制片染色一体化技术 • 实际操作演示
01
制片技术简介
制片技术的定义与重要性
定义
制片技术是指通过一系列处理, 将生物或无生命样本制成可以在 显微镜下观察的薄片或切片的过 程。
重要性
制片技术是生物学、医学、农业 等领域研究的基础,对于观察细 胞结构、组织形态、微生物特性 等方面具有重要意义。
涂片制作
讲解如何将待观察的标本涂抹在载玻片上,并保证其均匀、平整,以便后续染 色和观察。
染色技术操作演示
常用染色方法
介绍几种常见的染色方法,如HE染色、Masson染色等,以及它们在制片过程中 的作用和效果。

植物学完整-植物组织ppt课件

植物学完整-植物组织ppt课件

类型 同化组织 贮藏组织 储水组织 通气组织 传递细胞
结构特点
功能
细胞含大量叶绿 光合作用 体
细胞含大量贮藏 贮藏作用 营养物质
细胞储藏丰富水 储水抗旱 分
胞间隙发达的细 贮存、交换气体 胞群
特化的薄壁细胞,短途运输 细胞内折生长
四、机械组织
芹菜叶柄纵切面、横切面
厚角组织
厚壁组织
薄荷茎的厚角组织
6、分泌组织——(1)精油腔:柑橘果皮。

(2)腺毛:天竺葵叶表皮。
一、分生组织
•分生组织:是具有分裂功能的细胞组成的组织。
•存在部位:主要存在于植物体生长和增粗的部位,

如根尖、茎尖的生长锥以及茎和根

的形成层、木栓层。
•特点:细胞一般排列紧密体积小,细胞壁薄,细

胞核相对大,细胞质浓,一般没有液泡
韧皮部
外部的分泌 结构
内部的分泌 结构
木栓 木栓形成层
栓内层
导管 管胞 纤维 薄壁组织 筛管 伴胞 薄壁组织 纤维 腺表皮 腺毛 蜜腺 排水器 分泌细胞 分泌腔 乳汁管
实验报告
1、绘南瓜茎横切面图,示表皮、厚角组织、厚壁组织、薄壁细胞、外韧皮 部、束中形成层、木质部、内韧皮部、髓腔。
2、绘制天竺葵或紫竹梅叶下表皮图,示气孔、保卫细胞、叶绿体、腺毛或 非腺毛。
南瓜茎维管束横切面
筛胞
• 筛胞是单独的输导单位,它们存在于蕨类植物和裸子植物 之中。
• 筛胞通常比较细长、末端渐尖或形成很大倾斜度的端壁, 侧壁和尖端部分可有不甚特化的筛域出现,这种筛域也不 聚生在一定范围的壁上,因此,不具筛板。
• 侧壁和末端部分只有一些初步分化的小孔,孔中有细窄的 原生质丝通过。

植物学实验1 显微镜的使用及植物细胞观察ppt课件

植物学实验1 显微镜的使用及植物细胞观察ppt课件

整理版课件
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2)标本放置
(1)放载玻片。 (2)从左侧观察移动推进器,使观察物于光束中央。 (3)双手调节粗准焦螺旋使载物台升至最高。 (4)调节目镜间距。
整理版课件
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3)低倍镜观察(双眼同睁) (1)调节粗准焦螺旋下降载物台使物像清晰。 (2)调节细准焦螺旋(前后半圈)。 (3)观察部位于视野中央。 (4)左眼观察,右眼画图。
细胞质 细胞核
细胞壁
洋葱表皮
整理版课件
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(三)生物绘图
记录植物形态结构的方法: 绘图法、照相法、 录像法等。
1. 生物绘图的特点
生物绘图是形象描述生物外部形态和内部 结构的一种重要的科学记录方法,通常用 点线图的形式来描绘。
整理版课件
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生物绘图具有以下基本特征:
① 具科学性 ② 比例正确 ③ 层次分明
物镜数字:表示镜头的主要性能 参数
“40”:放大倍数
“0.65”:镜口率(或称数值孔径, 数值越大分辨率越高)
“160”:镜筒长度(mm)
“0.17”:盖玻片厚度(mm)
整理版课件
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物镜的工作距离 :从物镜组最前面×、40×和100×物镜的工作距离分别为 34.7、7.634、0.53和0.198毫米。 调焦时要特别小心,以免碰坏镜头或损坏标本。
整理版课件
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(二)常用的植物制片技术
植物制片技术是观察植物内部形态结构的主要手段之一, 常用的有徒手切片法、压片法、石蜡切片法和树脂切片法 等。
(1)临时封片:是植物学实验中最常用的观察植物形态 结构的方法之一。基本方法是:①准备好载玻片、盖玻片, 擦拭时要小心,以免弄碎玻片;②在载玻片的中央滴一滴 蒸馏水,用镊子或解剖针取植物材料置于水滴上,并使材 料展开或分散均匀;③盖上盖玻片,方法是用镊子夹住盖 玻片的一边,另一边与水滴的边缘接触,然后慢慢放下盖 玻片,这样可避免混入气泡。如盖玻片下水过多,可用吸 水纸吸掉多余的水。做好的封片可直接放在显微镜下观察。

植物实验切片观察(课堂PPT)

植物实验切片观察(课堂PPT)
3.梨石细胞→载玻片→压碎→盖片→观察厚壁组织 4.洋铁酸模叶表皮→载玻片→加水→盖片→观察表皮、
气孔器 六、作业 绘出所观察的四种组织的显微结构图,标出结构豆老根切片
蚕豆幼根切片
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水稻老根横切
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松一年生茎横切
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椴 木 三 年 生 茎 横 切
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单子叶植物茎横切
63玉米叶片过主脉作横切面646565松树茎三切面松树茎三切面成长柱形的植物细胞排列紧密不规则成长柱形的植物细胞排列紧密不规则6666洋葱根尖纵切洋葱根尖纵切6767松叶横切松叶横切6868花粉萌发花粉萌发6969胞间连丝切片胞间连丝切片7070其它显微镜下的植物细胞其它显微镜下的植物细胞7171实验感想实验感想本次实训不仅提高了同学自己动手操作的本次实训不仅提高了同学自己动手操作的能力并形成了初步的认知植物细胞特征与能力并形成了初步的认知植物细胞特征与重要性的思路对以后巩固植物基础知识重要性的思路对以后巩固植物基础知识是非常有效的
2、记录及数据处理一项,请分别就观察的根、茎、叶挑选一个植物横切面,画 图示意,简要标明各处名称。推荐:玉米根横切、双子叶草本茎横切、松针 叶横切;(可参阅网络资源)
3、实验分析及总结一项, (1)先将观察的有关切片归类为双(单)子叶植物(若重复则记为一种),然
后以表格的形式总结出两类植物的区别(要求见后);(名单见下页) (2)写出自己参加本次实验的感想。
并与裸子植物、被子植物叶进行区别。(可以染色尝试) • 取卷柏属植物的茎作徒手横切,观察茎的横切结构,注意中柱类型、
横桥细胞的观察。
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(2)观察卷柏属植物的孢子囊纵切片 取卷柏属植物的孢子叶球纵切片观察,可见穗轴两侧排列着孢子叶, 孢子异形,大、小孢子囊各生于孢子叶内侧,并具囊柄。 注意:叶舌的结构;
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植物制片的类型和方法
切片法:徒手切片法

石蜡切片法

滑走切片机切片法

半薄切片法

超薄切片法
非切片法:离析法
压片法
整体封存法
石蜡法制片原理与方法
一、材料的选择与分割
1. 新鲜、健康、有代表性的材料; 2.生长发育的不同阶段; 3.大小适当,0.5cm左右.
二、杀生、固定与保存
杀生:
固定: 1 根据固定目的物本身的结构性质; 2 分割大的材料; 3 抽气; 4 标记. (整染)
九、脱蜡
方法:
二甲苯Ⅰ 30分钟(40 ℃温箱中)
二甲苯Ⅱ 10分钟
十、染色
(一)染料的分类
a 来源:天然 人工
b 化学性质:碱性:番红 酸性:固绿 中性:
c 性能: 核染料: 苏木精、番红 细胞质染料:固绿、苯胺蓝
细胞壁染料:番红 组织化学染料;苏丹Ⅲ 荧光染料:
(二)几种常用染料的性质及配制 a 苏木精:溶于酒精、甘油和热水中。 b 番红:溶于酒精、水中。 c 固绿 :易溶于酒精。 d 碱性品红:作为组化试剂,用于检验DNA、多糖物质等
(三)一般的染色方法
1 材料是否完整: 整体染色 切片染色
2 染料的种类: 单染 二重染色 三重(多重)染色
(四)染色时注意的事项
1 根据观察目的、样品的结构性质; 2 溶液和染液的浓度相同; 3 碱性染液先染,酸性染液后染; 4 染色可深不可浅; 5 染色的时间;
十一、封藏与封藏剂
目的:1 长期保存 2 使材料可以清楚的显现出来
四 、透明
作用:1 使材料透明、干净; 2 便于包埋剂及封固剂的进入
透明剂: 1 二甲苯:1/2纯酒精+1/2二甲苯 ——二甲苯 2 甲苯或苯; 3 氯仿 4 丁香油、香柏油等
• 五、浸蜡

1 低温浸蜡:40℃左右(1夜)

2 高温浸蜡:58℃左右 (6小时以内)
• 六、包埋

1 选取合适熔点的石蜡;
主要参考书目:
1 植物显微技术,王灶安主编,农业出版社; 2 植物制片技术,李正理编著,科学出版社; 3 《西北植物学报》,《植物研究》,《武汉植物学
研究》,《植物分类学报》等学术杂志。
• 考核方式:撰写实验报告:对所观察的器官结构 进行详细的描述并作进一步的讨论,附上植物器 官显微结构图。
植物显微制片技术
步骤二:继续低温浸蜡(40℃,过夜)——高温浸蜡(58℃,换纯蜡,每2h换蜡一次, 不超过6h)——包埋(一个蜡船放3-4个材料)(一天)
步骤三:修块——切片——粘片——展片 ——烘片(一天) 步骤四:脱蜡与染色:二甲苯Ⅰ(30分钟,40度温箱)——二甲苯Ⅱ(10分钟) ——
复水( 1/2二 甲苯+1/2酒精—100%酒精—95%酒精,每步10分钟)— 染色(番红, 85%酒精配置,过夜)(半天) 步骤五:番红—85%酒精—染色(固绿,95%酒精配置,每步5分钟) —95%酒精— 100%酒精—100%酒精——二甲苯Ⅰ——二甲苯Ⅱ ——封片(标记)——烘干。(半 天) 步骤六:观察与照相(一天) 步骤七:实验报告的撰写与汇报
封藏剂种类: 1 树脂性封藏剂:香柏油、合成树脂、加拿大
树胶:溶于二甲苯、氯仿等溶剂,熔点为61℃, 不能加热,折光率近似玻璃,1.547。
2 水溶性封藏剂:阿拉伯树胶、甘油、明胶、 糖浆等。
• 十二 显微观察与照相
石蜡法制片流程
步骤一: (整染) 取材 ——固定——脱水(70%酒精—85%酒精—95%酒精—100%酒精—100%酒精,每 步2-4h)——透明(1/2二甲苯+1/2酒精, 2h;纯二甲苯,2h)——低温浸蜡(加碎蜡 至饱和,40℃,过夜)(一天)

2 包埋用具的准备
• 要点:动作迅速 •
• 七、切片
切片有裂纹 b 蜡带弯曲 c 材料破碎 d 切片卷成圆筒 e 蜡带皱缩
• 八、粘片与展片
粘片剂:
明胶 1 g 石炭酸 2 g 甘油 15 ml 蒸馏水 100ml
方法:
a 38 ℃左右 b 涂抹粘片剂 c 将蜡片置于玻片中央 d 材料呈透明质感 e 38 ℃烘烤至干燥 f 标记
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