华山参片总生物碱的含量测定
中药制剂分析实验
中药制剂分析实验一、中药制剂分析实验的一般知识（一）中药制剂分析实验的任务和要求中药制剂分析是一门实践性很强的学科。
中药制剂分析实验的任务是使学生加深对中药制剂分析基本理论的理解，掌握中药制剂分析的基本操作技能，学习中药制剂分析实验的基本知识，养成严格、认真和实事求是的科学态度，提高观察、分析和解决问题的能力，为将来参加工作打下良好的基础。
为了完成上述任务，提出以下要求：1、实验前认真预习，领会实验原理，明确本次实验的目的和要求，了解实验步骤和注意事项，做到心中有数，实验前可以先写好实验报告的部分内容，查好有关数据，以便实验时及时、准确地记录和进行数据处理。
2、实验时要严格按照规范操作进行，仔细观察实验现象，认真记录有关数据。
要善于思考，学会运用所学理论知识解释实验现象，研究实验中的问题。
3、要认真写好实验报告，实验报告要清楚、简练、整洁。
4、学生进入实验室必须严格遵守实验室规则，服从带教老师的指导。
5、爱护实验室的仪器设备，不准将实验室的仪器设备私自带出室外。
使用时，经老师允许后，按照仪器使用说明书进行操作，使用完毕要进行登记。
实验中如有仪器损坏应立即报告老师。
6、严格遵守操作规程及实验时应注意的事项，在使用不熟悉其性能的仪器和药品之前，应查阅有关资料或请教指导教师，不要随意进行实验，以免损坏仪器，浪费试剂，使实验失败，更重要的是预防发生意外事故。
7、实验过程中应注意防火灾、防爆炸、防腐蚀、防污染工作，牢固树立“安全第一”意识。
浓酸、浓碱具有强烈的腐蚀性，切勿溅在皮肤和衣服上。
用浓酸溶解样品时，应在通风厨中操作。
8、实验室严禁吸烟，不许会客，不许带入食物。
9、使用易燃的有机溶剂时，应远离火焰和热源。
低沸点有机溶剂应在水浴上加热，用过的此类溶剂应倒入回收瓶，不要倒入水槽。
10、实验结束后，一切仪器试剂应放回原处，玻璃仪器要清洗干净，一些有毒、有腐蚀性的废液应倒入废液缸内。
11、实验台面要擦试干净，由值日生负责安全卫生工作，包括清理实验室，检查水、电的开关，清除垃圾和污物，关好门窗后方可离开实验室。
华山参片总生物碱的含量测定
实训二十一华山参片总生物碱的含量测定一、实训目的1.掌握紫外-可见分光光度法（对照品比较法）含量测定的一般操作步骤和技能。
2.理解紫外-可见分光光度法（对照品比较法）含量测定原理二、测定依据1.华山参片药品标准 [《中国药典》2005年版（一部）正文部分 440页]本品为华山参浸膏片【含量测定】对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品，加水制成每1ml相当于含莨菪碱7μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品40片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于12片的重量），置具塞锥形瓶内，精密加入枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液（pH4.0）25ml，振摇5分钟，放置过夜，用干燥滤纸滤过，取续滤液，即得。
测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液各2ml，分别置分液漏斗中，各精密加枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液（pH4.0）10ml，再精密加入用上述缓冲液配制的0.04%溴甲酚绿溶液2ml，摇匀，用10ml三氯甲烷振摇提取5分钟，待溶液完全分层后，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷湿润的滤纸滤入25ml量瓶中，再用三氯甲烷提取3次，每次5ml，依次滤入量瓶中，并用三氯甲烷洗涤滤纸，滤入量瓶中，加三氯甲烷至刻度。
照紫外-分光光度法（附录ⅤA）分别在415nm的波长处测定吸光度，计算，即得。
本品含生物碱以莨菪碱（C17H23NO3）计，应为标示量的80.0%～120.0％。
【规格】0.12mg2.紫外-可见分光光度法[《中国药典》2005年版（一部）附录Ⅴ A]三、测定原理1.本品有效成分为莨菪类生物碱，主要有莨菪碱、东莨菪碱、山莨菪碱和东莨菪内酯等（图5-36）。
药品标准以莨菪碱为指标，测定总生物碱的含量，以此控制药品质量的优劣。
N OCOCHCH 2OHR 1R 2CH 3图5-36 主要莨菪类生物碱的结构式莨菪碱（R 1,R 2=H ） 东莨菪碱（C 6-O-C 7 R 1,R 2=H ） 山莨菪碱（R 1=OH,R 2=H ） 2.莨菪类生物碱为无色结晶，具有中强碱性，溶于酸水、甲醇、乙醇、三氯甲烷等，故本实验采用枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液（pH4.0）提取总生物碱。
总生物碱的含量测定方法
总生物碱的含量测定方法
总生物碱是指存在于植物或动物中的所有含氮有机碱，其测定方法可以采用以下步骤：
1. 样品制备：将植物或动物样品干燥、研磨成粉末状。
2. 提取：将样品加入乙醇中，用超声波或搅拌器进行提取，过滤得到提取液。
3. 分离：将提取液用酸、碱进行分离，得到酸性、中性和碱性部分。
4. 测定：将各部分分别进行测定，如酸性部分使用酸量滴定法测定，中性部分使用Kjeldahl法测定，碱性部分使用直接滴定法测定。
5. 计算：将各部分测定值加和，即为样品中总生物碱含量。
总生物碱的含量测定方法需要注意的是，样品制备和提取方法应保持一致，不同的测定方法也需要根据样品特性进行选择，如酸性部分测定时需要考虑样品中酸的影响。
此外，测定前应对测定仪器进行校准，保证测定结果准确可靠。
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2022年中药制剂分析自考试题及答案
2022年中药制剂分析自考试题及答案中药制剂分析试卷(课程代码03053)一、单项选择题{本大题共20小题，每小题1分，共20分)在每小题列出的四个备选项中只有一个是符合题目要求的，请将其代码填写在题后的括号内。
错选、多选或未选均不得分。
1.牛黄解毒片的鉴别：取样品1片，研细后置微量升华装置，收集白色升华物，加新制的1％香草醛硫酸1滴，液滴边缘渐显玫瑰红色。
此法系鉴别片剂中的哪类成分【】A．冰片B.香豆素C.挥发油D．羟基葸醌2.中药制剂砷盐检查法中加入KI试液的作用为【】A．去除H2S的干扰B．将5价砷还原为3价砷C.使砷斑更清晰D．在锌粒表面形成Zn-Sn齐3.中药制剂重金属检查：常常需要进行有机破坏，主要原因是【】A．除去制剂中的水分B．除去共存组分的干扰C．使有机结合的重金属游离D．使重金属转化成铅4．运用HPLC法进行中药制剂中指标成分含量测定时，最常用的色谱柱是【】A．C18柱B．氨基柱C．氰基柱D.硅胶柱5．薄层扫描法定量分析时，采用内标法的主要优点在于【】A．消除展开剂挥发造成的影响B.克服由于薄层板厚薄不均匀造成的影响C．防止边缘效应造成的影响D．消除点样量不准确造成的影响6.中药制剂分析的取样原则是【】A.随机取样B.均匀合理C．宜少不宜多D.宜多不宜少7.用uv法进行含量测定，需测定某一波长处一系列不同浓度的对照品溶液吸收度的方法是【】A．吸收系数法B.比较法C.标准曲线法D．计算分光光度法8．可用于样品分离净化的预处理方法是【】A．高效液相色谱法B.气相色谱法C.液-固萃取法D.超声提取法9.运用GC法分析中药制剂中的化学成分，应用最广泛的的检测器是【】A．UVDB．TCDC．ECDD.FID10．RP-HPLC法是指所用固定相和流动相的极性大小为【】A．固定相极性大于流动相的HPLC法B.固定相极性小于流动相的HPLC法C．固定相极性等于流动相的HPLC法D．固定相极性大于或小于流动相的HPLC法11．含生物碱类成分的中药及中药制剂分析时，所用的碱化试剂应根据生物碱的性质及共存杂质选定，其中常用的碱化试剂为【】A.氢氧化钠B．碳酸钠C．碳酸氢钠D.氨水12.根据药品检验标准操作规范要求，采用紫外-可见分光光度法测定药品含量，待测供试品溶液的吸光度以在哪一范围之间为宜【】A．0.1-0.9B．0.2-0.8C.0.3-0.7D.0.4-0.613．用气相色谱法对中药制剂进行鉴别或定量分析，主要适用于含哪类成分的中药制剂【】A．苷类成分B．生物碱类成分C．酸性成分D.挥发性成分14．中药注射剂注入人体后，能使血液脱钙、产生抗凝血作用和产生血栓的杂质为【】A．鞣质B．蛋白质C．草酸盐D.树脂15．用C18柱进行中药制剂中生物碱类成分的HPLC测定时，为克服拖尾的问题，可采用的方法为【】A．调整检测波长B．流动相中加入三乙胺C．调整流动相中甲醇比例D．调整注入HPLC仪供试品溶液的量16.采用RP-HPLC法测定中药制剂中大黄素、大黄酸、丹参素等化学成分时，下列哪一条件对分离及测定是重要的【】A．温度B．流速C.检测器D.流动相pH17．对于含黄芪或人参的中药制剂，运用HPLC法测定黄芪甲苛或人参皂苷等具有梦外末端吸收成分的含量时，检测器的最佳选择是【】A．UVDB．FIDC.ELSDD.FD18．气相色谱法测定中药制剂中有效成分含量最常用的定量分析方法为【】A．外标法B.内标法C.归一法D.标准曲线法19．测定中药制剂中总生物碱类成分含量，可选择的测定方法是【】A.UV法B．TLCS法C.GC法D．RP-HPLC法20.评价中药制剂含量测定方法的回收率试验结果时，一般要求回收率【】A.在80～120％，RSD≤5％(n≥6)B．在85～115％，RSD≤4％(n≥6)C.在90～110％，RSD≤4％(n≥6)D．在95～105％，RSD≤3％(n≥6)二、多项选择题(本大题共10小题，每小题2分，共20分)在每小题的四个备选项中至少有两个是符合题目要求的，请将其代码填写在题后的括号内。
生物碱含量测定方法
生物碱含量测定方法嘿，你知道生物碱不？这玩意儿可神奇了呢！生物碱在很多植物里都有，就像一个个小小的魔法分子。
今天呀，我就来和你唠唠生物碱含量测定的方法，这可是个很有趣的事儿呢。
我有个朋友叫小李，他在一家制药公司工作。
有一次，他们公司接到一个项目，就是要测定一种植物提取物里生物碱的含量。
小李当时就头大了，跑来问我。
我就跟他说，这生物碱含量测定方法可不少呢。
最常见的一种方法就是酸碱滴定法。
想象一下，生物碱就像一个个调皮的小娃娃，酸碱滴定法就像是一场给小娃娃们排队的游戏。
我们可以利用生物碱的碱性，用酸来和它反应。
酸就像一个严厉的管理员，一个一个地把生物碱小娃娃都管起来。
通过精确测量酸的用量，就能算出生物碱的含量啦。
不过，这方法也有它的小麻烦。
有时候，植物提取物里可能会有其他干扰物质，就像调皮捣蛋的小鬼，混在生物碱小娃娃中间，让这个排队游戏变得有点混乱。
还有一种方法叫比色法。
这比色法啊，就像是一场选美比赛。
生物碱和特定的试剂反应后会产生颜色变化。
就好比生物碱穿上了漂亮的衣服，然后我们根据颜色的深浅来判断它的含量。
颜色越深，就说明生物碱越多，就像穿的衣服越华丽，就越受关注一样。
我记得小李听我说到这儿的时候，眼睛都亮了。
他说：“哎呀，这听起来还挺好玩的呢！”我就笑着跟他说：“好玩是好玩，但是也得小心哦。
这个颜色变化有时候很细微，就像女孩子化的淡妆，得仔细看才能看出来呢。
而且不同的生物碱可能会产生相似的颜色，这就需要更精准的鉴别了。
”高效液相色谱法（HPLC）也是测定生物碱含量的一个得力助手。
这就好比是一条超级高速公路，不同的生物碱就像不同型号的汽车在这条公路上行驶。
通过特殊的柱子和流动相，生物碱按照各自的速度在这条高速公路上跑。
最后，检测器就像交警一样，记录下每个生物碱汽车通过的情况，从而确定它们的含量。
我跟小李说：“这个方法虽然很准确，但是设备可昂贵了呢，就像买一辆超级豪华跑车，不是谁都能轻易拥有的。
”小李听了直点头，说他们公司得好好考虑成本问题。
第九章中药质量标准的制定
（一）A型题1.批准为试生产的新药，其质量标准的试行期为（）A 1年B 2年C 3年D 4年E 5年2.质量标准中全处方量应以制成多少个制剂单位的成品量为准（）A 100个B 400个C 500个D 800个E 1000个3.中药制剂质量标准的处方量中重量应以（）为单位A μgB mgC gD kgE 均可4.中药制剂质量标准的处方量中容量应以（）为单位A μlB mlC LD kLE 均可5.中药制剂色泽如以两种色调组合，应以谁为主（）A 前者B 后者C 同样D 中间色E 其他6.外用药和剧毒药不描述（）A 颜色B 形态C 气D 形状E味7.单位制剂命名时一般采用（）A 原料名B 药材名C 剂型名D 原料（药材）名与剂型名结合E 均可8.浸出物的建立是以测试多少个批次样品的多少个数据为准（）A 5、10B 5、20C 10、20D 10、10E 20、209.在线性关系考察过程中，薄层扫描法的r值应在（）以上。
A 0.9B 0.99C 0.995D 0.999E 0.999910.质量标准的方法学考察，重复性试验相对标准差一般要求低于（）A 1%B 2%C 3%D 4%E 5%11.中药新药稳定性实验考查中气雾剂考察时间为（）A 半年B 一年C 一年半D 二年E 二年半12.中药新药稳定性试验考察中丸剂室温考察时间为（）A 半年B 一年C 一年半D 二年E 二年半13.中药制剂稳定性考察采用低温法时，温度宜在（）A 10°C～15°CB 15°C～20°CC 20°C～25°CD 25°C～30°CE 37°C～40°C14.中药制剂稳定性考察采用低温法时，相对湿度要求为（）A 60%B 65%C 70%D 75%E 80%15.中药新药稳定性考察试中，注射剂的考察时间为（）A 半年B 一年C 一年半D 二年E 二年半16.中药制剂的稳定性考察中初步稳定性试验共考察几次（）A 2B 3C 4D 5E 617.药品必须符合（）A 《中华人民共和国药典》B 部颁药品标准C 省颁药品标准D 国家药品标准E 均可18.质量标准的制定必须坚持（）A 安全有效B 技术先进C 经济合理D 质量第一E 全部19.中药制剂质量标准的起草说明，性状描述要求至少观察几批样品（）A 1～3B 2～4C 3～5D 4～6E 10批以上20.经检验符合规定的药材制成制剂后一半不再做哪项检查（）A 重金属B 砷盐C 总灰分D 甲醇量E 均不需21.在含量测定方法建立过程中，以回收率估计方法的（）A 重复性B 线性C 可靠性D 选择性E 灵敏度22.《中国药典》2000年版中，含量测定应用最多的方法是（）A HPLCB TLCSC GCD Vis-UVE CE23.《中国药典》2000年版中，重金属含量测定方法有几种（）A 1B 2C 3D 4E 524.含量测定限度低于多少，可增加一个浸出物测定（）A 百分之一B 千分之一C 万分之一D 十万分之一E 均需25.下列药物中，不必进行特殊杂志检查的是（）A 桑寄生B 川乌C 草乌D 附子E 山茱萸26.天然产物中提取的对照品验证纯度应在百分之几上，方可供含量测定（）A 90B 95C 98D 99E 10027.合成品对照品要求纯度在百分之几以上，方可提供含量测定（）A 90B 95C 98D 99E 10028.中药制剂稳定性考察中，升温法开始时，平均每分钟升高（）A 0.05℃～0.10℃B 0.10℃～0.15℃C 0.15℃～0.20℃D 0.20℃～0.25℃E 0.25℃～0.30℃29.中药制剂稳定性考察中升温法近结束时，平均每分钟升高（）A 0.01℃B 0.02℃C 0.03℃D 0.04℃E 0.05℃30.在方法学考察中收回率试验要求回收率在（）%，RSD小于（）%A 95～100,5B 100～105,5C 95～105,5D 95～105，3E 95～100,331.回收率试验至少需进行几次（）A 3次（n=3）B 3次（n=5）C 5次（n=5）D 6次（n=6）E 3次（n=6）32.一般品种储藏时可注明（）A 密封C 避光D 阴凉处E 干燥处33.下列不属检测方法选择原则的是（）A 准确B 灵敏C 简便D 快速E 先进34.下列不属于测定成分选择原则的内容的是（）A 有效成分B 毒性成分C 易损成分D 含量最大成分E 专属成分35.荧光鉴别一般采用365nm波长的紫外灯，写为（）A 365nm紫外灯观察B UV(365nm)C 365nm（UV）D 置紫外灯（365nm）下观察E 置365nm紫外灯下观察36.质量标准中，用法和用量书写先后顺序是应先写（）A 用法B 一次量C 一日使用次数D 先写BC再写AE 无固定顺序37.下列哪项为药品不具有的特性（）A 安全性B 有效性C 稳定性D 可控性E 经验型38.中药制剂稳定性考察恒温法应选用（）种以上不同温度A 2B 3C 4E 639.糖浆剂稳定性试验不需考察的项目是（）A 性状B 鉴别C 相对密度D 澄明度E pH值40、膜剂稳定性试验不需考察的项目是（）A 性状B 鉴别C pH值D 含量测定E 刺激性(二)C型题A以重量计算B以装量计算C两者均可D两者均不可1.散剂的规格有（）2.丸剂的规格有（）3.片剂的规格有（）4.液体制剂的规格有（）5.注明每片含量的药物可（）A规定一定的幅度B规定标示量C两者均是D两者均不是在中药制剂含量限度规定的方式中：6.保赤散每1g含朱砂以硫化汞计为0.21-0.25属于（）7.双黄连口服液每支含黄芩以黄芩苷计不得少于110mg属于（）8.华山参片含生物碱以莨菪碱计应为标示量的80.0%-120%属于（）9.六味地黄丸中大蜜丸每丸含丹皮以丹皮酚计不得少于1.3mg属于（）10.颠茄酊含生物碱以莨菪碱计应为0.028%-0.032%属于（）A物理因素B化学因素C两者均是D两者均不是影响中药制剂稳定性的因素中：11.口服液的沉淀属于（）12.由于细菌与微生物污染而引起的霉变、腐变属于（）13.片剂的崩解度与硬度的变化属于（）14.乳剂的乳析属于（）15.一定条件下成分本身、成分之间发生的变化导致药物变质属于（）A一年B一年半C两者均可D两者均不可中药新药稳定性试验室温考察时间为：16.片剂为（）17.膜剂为（）18.颗粒剂为（）19.膏药为（）20.栓剂为（）A 3B 4C两者均可D两者均不可21.中药制剂的稳定性考察中初步稳定性试验要求共考察（）次22.中药制剂的稳定性考察中恒温法要求将样品置于（）种不同温度的恒温容器内23.批准为试生产的新药，其质量标准的试行期为（）年24.除试生产的新药外，其他新药的质量标准的试行期为（）年25.浸出物测定的建立是以（）批样品中的20个数据为准A采用方内主药药味缩写加剂型B采用主要药材与药引相结合加剂型C两者均是D两者均不是下列复方制剂的命名方式是：26.香连丸（）27.银黄口服液（）28.川芎茶调散（）29.参附强心丸（）30.龙胆泻肝丸（）A PH值B水分C两者均需考察D两者均不需考察31.注射剂必须考察（）32.丸剂必须考察（）33.酊剂必须考察（）34.煎膏剂必须考察（）35.流浸膏必须考察（）A均匀度B粒度C两者均可D两者均不可36.眼膏剂检查项目包括（）37.颗粒剂检查项目包括（）38.散剂检查项目包括（）39.栓剂检查项目包括（）40.浸膏剂检查项目包括（）A崩解时限B重量差异C两者均可D两者均不可41.栓剂检查项目包括( )42.片剂检查项目包括（）43.胶囊剂检查项目包括（）44.滴丸剂检查项目包括（）45.散剂检查项目包括（）A标准液B标准品C两者均可D两者均不可46.应在20度±5度及50%-75%相对湿度下贮存的是（）47.需要避光保存的是（）48.有效期一般为1-3个月的是（）49.取出后严禁到会原瓶的是（）50.需要生产批号的是（）A相对密度B装量差异C两者均可D两者均不可51.煎膏剂质量检查包括（）52.合剂质量检查包括（）53.水丸剂质量检查包括（）54.糖浆剂质量检查包括（）55.膜剂质量检查包括（）。
生物碱类药物含量测定方法
生物碱类药物含量测定方法
生物碱是一类具有生物活性的碱性化合物，在自然界中广泛存在，尤其在植物和微生物中含量丰富。
生物碱的含量测定方法有多种，常用的方法包括比色法、紫外-可见分光光度法、荧光法、薄层色谱法、高效液相色谱法等。
1.比色法：该方法是通过生物碱与特定的显色剂发生化学反应，
生成有色离子或分子，根据颜色的深浅程度进行含量测定的方
法。
例如，苦参碱可以通过与溴甲酚绿显色剂发生反应来进行
含量测定。
2.紫外-可见分光光度法：该方法是通过测量生物碱溶液在紫外和
可见光区的吸收光谱，进而计算其含量的方法。
例如，盐酸吗
啡碱可以在254nm波长处进行含量测定。
3.荧光法：该方法是利用生物碱分子在特定波长激发下发出的荧
光强度来计算其含量的方法。
例如，荧光素钠在紫外光激发下
可以发出绿色荧光，可以用于含量测定。
4.薄层色谱法：该方法是利用生物碱在不同极性溶剂中的分配系
数差异，将样品溶液展开在薄层板上，然后用显色剂显色，根
据斑点面积或荧光强度来计算生物碱的含量。
5.高效液相色谱法：该方法是利用高效液相色谱仪对生物碱进行
分离和检测，然后根据峰面积或峰高来计算生物碱的含量。
该
方法具有分离效果好、灵敏度高、重现性好等优点，是生物碱
含量测定的常用方法之一。
第五讲-1 中药含量测定方法-n2
标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0
ml、5.0 ml、6.0 ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶 液1ml，使混匀，放置6分钟。加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加 氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟；以相应的溶液为空 白。照分光光度法（中国药典附录V B），在500nm为波长处测定吸度，以吸 收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
1）．冷浸法 取供试品约4g，称定重量，置250～300ml的锥形瓶 中 ， 精 密 加 入 水 100ml ， 塞 紧 ， 冷 浸 ， 前 6 小 时 内 时 时 振 摇 ， 再 静 置 18 小
时，用干燥滤器迅速滤过，弃去初滤液，精密量取滤液20ml，置己干燥至
恒重的蒸发皿中，在水浴蒸干后，于105℃干燥3小时，移置干燥器中，冷
类别品名七厘散刺五加浸膏溶剂乙醇甲醇方法热浸法热浸法限度600600醇溶性浸出物测定刺五加片甲醇热浸法80mg片儿康宁糖浆正丁醇30独一味胶囊正丁醇80鼻窦炎口服液正丁醇12挥发性醚浸出物测定午时茶颗粒沉香化气丸乙醚乙醚035040乙醚乙醚010030九味羌活丸龟龄集乙醚025水暑症片冷浸法250乙酸乙脂中国药典中国药典中成药中成药浸出物测定概况浸出物测定概况1水溶性浸出物测定法本法系以水为溶剂对制剂中水溶性成分进行提取并计算其在制剂中的含量
1）.原理 配制一系列不同浓度（Ci）的对照品溶液（5～7份），在 相同条件下分别测其吸收度(Ai)，以A为纵坐标，浓度C为横坐标绘制A-C曲 线，即得标准曲线（又称工作曲线）。在相同条件下测定供试品的A,从标准 曲线上查出与之对应的C，即可求出浓度和含量（图6－3）。亦可将一系列对 照品溶液的C与相应的A进行一元线性回归，求出回归方程（相关系 r≥0.999），将供试品溶液的A代入回归方程，算出被测成分的浓度和含
生物碱的测定方法
生物碱的测定方法生物碱是一类含有碱性氮原子的有机化合物，具有广泛的生物活性和药理学作用。
测定生物碱的含量是研究其药理活性和毒性的重要手段之一。
本文将介绍几种常用的生物碱测定方法。
一、重量法测定生物碱含量重量法是一种简单常用的测定生物碱含量的方法。
首先，将待测样品溶解在适量的溶剂中，然后通过蒸发浓缩或萃取分离得到生物碱。
最后，用称量法或比色法测定生物碱的质量或浓度。
这种方法操作简便，但对于含有多种成分的样品，可能存在干扰或误差。
二、光谱法测定生物碱含量光谱法是一种基于生物碱分子对特定波长光的吸收特性进行测定的方法。
根据不同生物碱的特点，可以选择紫外-可见吸收光谱、红外光谱、核磁共振光谱等进行测定。
这种方法准确性高，但需要仪器设备和专业知识的支持。
三、色谱法测定生物碱含量色谱法是一种通过生物碱在色谱柱中的分离和保留时间来测定其含量的方法。
常用的色谱方法包括气相色谱、液相色谱和高效液相色谱等。
这些方法能够对复杂的生物样品进行分离和纯化，准确地测定生物碱的含量。
四、生物学法测定生物碱含量生物学法是一种利用生物酶或微生物对生物碱进行催化反应，通过测定反应产物的生成量或消耗量来间接测定生物碱含量的方法。
常用的生物学方法包括酶促反应法、微生物代谢法、细胞毒性测定法等。
这些方法对于生物碱的测定具有较高的选择性和敏感性。
五、电化学法测定生物碱含量电化学法是一种利用电化学原理测定生物碱含量的方法。
常用的电化学方法包括电位滴定法、循环伏安法、电化学生物传感器等。
这些方法在测定生物碱含量时具有快速、灵敏和准确的优点。
六、荧光法测定生物碱含量荧光法是一种利用生物碱分子在特定条件下发出荧光信号来测定其含量的方法。
通过测定荧光强度或寿命可以得到生物碱的含量。
这种方法对于生物碱的测定具有高灵敏度和高选择性。
测定生物碱含量的方法多种多样，可以根据实际需要选择合适的方法进行测定。
不同的方法有其优缺点，需要综合考虑样品特点、测定目的和实验条件等因素，选择最适合的方法进行生物碱测定。
含量测定技术
吸收池误差
（二）仪器操作通法
（三）样品测定法
药典收载了三种测定方法 1.吸收系数法 2.对照品比较法 3.标准曲线法 （原计算分光光度法取消）
1、比色法（标准曲线法）
1.原理 配制一系列不同浓度（Ci）的对照品溶液（5～7
份），在相同条件下分别测其吸收度(Ai)，以A为纵坐标， 浓度C为横坐标绘制A-C曲线，即得标准曲线（又称工作曲
测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示
量的100%±10%。 3.应用实例 《中国药典》华山参片中总生 物碱、黄杨宁片中黄杨宁的含量测定等均采 用本法。
3、吸收系数法 原理
∵A = E 1cm CL ∴C = 1% A E 1% L 1cm
1%
C 为供试液浓度（g/100ml） A 为供试液测得的吸收度 E 为被测物质的百分吸收系数（药典给出） L 为比色皿（液层）厚度（1cm）
信号显示处理系统
紫外分光光度计工作原理
1—氢灯；2—凹面聚光镜；3—钨灯；4—吸收池；5—紫敏光电管；6—红敏光电管 7—光电管调动推杆；8—暗电流控制闸门拉杆；9—吸收池架；10—滤光片架拉杆 11—平面镜；12—入射狭缝及石英窗；13—球面准直镜；14—石英棱镜；15—出射 狭缝；16—石英透镜
特点 不需对照品随行测定，操作简便，仅用于紫外分光光度法。
故需严格校正仪器，规范实验条件，做好前处理工作。
四、注意事项
1、使用的吸收池必须洁净，并注意配对。 2、取吸收池时，手指应拿毛玻璃面的两侧。 3、供试液的浓度：A=0.3~0.7 4、对溶剂的要求 A尽量小，空白对照 测定波长确证 ±2nm 5、平行操作 6、狭缝宽度
二、对照品比较法 1.原理 在相同条件下分别配制供试品溶液和对照品
生物碱的测定方法
生物碱的测定方法生物碱是一类含有碱性基团的有机化合物，广泛存在于自然界中的植物和动物体内。
生物碱具有多样的生物活性，包括神经递质、毒素、药物等。
因此，准确测定生物碱的含量对于研究其在生物体内的作用机制以及开发相关药物具有重要意义。
测定生物碱的方法有很多种，下面将介绍几种常用的方法。
1. 毛细管电泳法：毛细管电泳法是一种基于电荷和大小的分离原理，可以对生物碱进行有效分离和测定。
该方法具有分离效果好、分析速度快、样品消耗少等优点，适用于各种类型的生物碱测定。
2. 气相色谱法：气相色谱法是通过气相色谱仪将生物碱样品分离并通过检测器进行定量分析。
该方法具有分离效果好、灵敏度高、分析速度快等优点，适用于测定生物碱含量较低的样品。
3. 液相色谱法：液相色谱法是通过液相色谱仪将生物碱样品分离并通过检测器进行定量分析。
该方法具有分离效果好、灵敏度高、适用范围广等优点，适用于各种类型的生物碱测定。
4. 荧光法：荧光法是利用生物碱分子在特定条件下发射荧光信号的特性进行测定。
该方法具有灵敏度高、选择性好、操作简便等优点，适用于测定生物碱含量较低的样品。
5. 分子吸收光谱法：分子吸收光谱法是通过测量生物碱在特定波长下吸收光线的强度来定量分析。
该方法具有灵敏度高、操作简便等优点，适用于测定生物碱含量较高的样品。
在实际测定生物碱的过程中，需要先选择适合的测定方法，然后提取样品中的生物碱，并根据测定方法的要求进行前处理。
接下来，根据测定方法的原理和操作步骤进行测定，并根据标准曲线或计算公式计算出生物碱的含量。
需要注意的是，不同的生物碱可能需要不同的测定方法，因此在选择测定方法时需要考虑生物碱的性质和测定要求。
此外，为了确保测定结果的准确性和可靠性，还需要注意实验条件的控制、仪器的校准以及数据的处理等方面。
准确测定生物碱的含量对于研究其生物活性和开发相关药物具有重要意义。
在选择测定方法时，需要根据生物碱的性质和测定要求进行合理的选择，并在实际操作中注意实验条件的控制和数据的处理，以确保测定结果的准确性和可靠性。
中药制剂中总生物碱含量测定方法
中药制剂中总生物碱含量测定方法
中药中含有各种活性成分，其中总生物碱是一类重要的生物成分。
总生物碱含量测定是中药研究和生产中的一个重要指标。
以下是中药制剂中总生物碱含量测定方法。
一、试剂和仪器设备
1. 注射用二甲苯、氯化钠、氢氧化钠、弗兰克试剂、盐酸、氯仿、石油醚等试剂。
2. 电子天平、恒温水浴器、分光光度计、pH计等仪器设备。
二、标准品的准备
将标准品曲马多溶于氯仿制成100μg/mL的标准溶液。
三、样品处理
1. 取适量样品，加入适量注射用二甲苯，使其充分浸泡。
2. 加入氢氧化钠调节pH值，使其接近12。
3. 加入恒定浓度的氯化钠溶液，使样品中的总碱含量沉淀。
4. 离心分离并取沉淀。
5. 用氯仿将沉淀溶解。
6. 加入弗兰克试剂，测定其吸光度，计算总生物碱含量。
四、结果计算
根据标准品和样品的吸光度值计算出总生物碱含量。
五、注意事项
1. 操作中必须保持清洁卫生，避免污染。
2. 操作中保证 pH 值稳定，减少误差。
3. 操作过程中注意仪器和试剂的准确性和稳定性。
4. 仪器设备要进行严格的校准和维护，以确保测量精度和准确性。
总结：中药制剂中总生物碱含量测定方法是一个重要的指标。
本方法简单易行，可用于中药的研究和生产中。
在操作过程中需要注意操作顺序和仪器和试剂的准确性和稳定性。
中药分析实验指导
中药分析实验指导中药教学部重庆邮电学院生物信息学院二OO五年二月前言《中药分析》是中药专业的一门专业课程，是以中医药理论为指导，应用现代分析理论和方法，研究中药制剂质量及控制方法的一门学科。
《中药分析实验》是继《中药化学实验》、《无机化学实验》、《分析化学实验》和《有机化学实验》之后而开设的实验课程，是中药学专业应用性较强的一门实验课程。
其目的主要是使学生掌握中药分析的基本原理和实验技能，熟悉常用中药及其制剂的定性鉴别、检查和含量测定方法，为进一步研究、整理和制定中药及其制剂质量标准打下一定的基础。
本课程的主要任务是：通过实验训练进一步培养学生分析问题和解决问题的能力；培养学生的创新意识、创新精神和创新能力；培养和提高学生的科学实验素养。
本教材的编写力求遵循中药专业的培养目标，适应药学类专业教育的需要，并注重突出实用性、先进性及中药分析的特色。
本教材中收载了比较成熟且基本技能训练效果较好，又切合理论课程基本要求的中药分析实验共12个，实验性质涵盖验证性、综合性和设计性三种类型。
每一实验都包括实验目的、实验提要、实验用品、实验步骤和思考题五个部分，实验内容项后附有涉及实验结果及相关内容的思考题，对开拓学生思路、加深对实验内容的理解大有裨益。
本实验教材力求选用最新研究资料，密切联系教学、生产和科研实际，对中药类本科专业学生适用。
生物信息学院中药学教学部赵颖编著2005年02月目录中药分析实验的一般知识 (3)实验一中药制剂的显微定性鉴别………………………………………………··5实验二中药制剂的理化定性鉴别………………………………………………··6实验三重量法测定苦参片中苦参总碱的含量…………………………………··7实验四甲苯法测定中药制剂中水分含量………………………………………··8实验五酸性染料比色法测定华山参片总生物碱的含量………………………··9实验六紫外分光光度法测定制剂中黄酮类成分的含量………………………10实验七高效液相色谱法测定苦杏仁中苦杏仁苷的含量………………………11实验八高效液相色谱法测定三黄片中大黄素和大黄酚的含量………………12实验九养胃舒胶囊的质量分析设计方案………………………………………13实验十小青龙颗粒的质量分析设计方案………………………………………14实验十一抗感冒注射剂的质量分析设计方案…………………………………15实验十二玉屏风口服液的质量分析设计方案…………………………………15中药分析实验的一般知识一、中药分析实验要求1．学生进入实验室必须严格遵守实验室规章制度，服从带教老师的指导。
中药学专业实验指导(十三五)
实验十一硫代硫酸 钠的制备
实验十硫酸亚铁铵 的制备
实验十二元素及其 化合物性质
实验一化学实验报告的书写方法
一实验报告的要求 二实验报告的基本格式
实验二仪器的认领和基本操作训练
实验目的 仪器、试剂及其他 实验内容 实验注意事项 预习要求 思考题
实验三电解质溶液
实验目的 实验原理 仪器、试剂及其他 实验内容 实验注意事项 预习要求 思考题
实验目的 实验原理 实验用品 实验内容 注意事项 思考题
实验十五醛和酮的性质
实验目的 实验原理 实验用品 实验内容 注意事项 思考题
实验十六羧酸、羧酸衍生物和取代羧酸的性质
实验目的 实验原理 实验用品 实验内容 注意事项 思考题
实验十七糖类化合物的性质
实验目的 实验原理 实验用品 实验内容 注意事项 思考题
实验一化学分析实验 基本常识
实验二称量操作
实验三重量分析基本 操作
实验四葡萄糖干燥失 重的测量
1
实验五生药灰 分的测定
2
实验六容量分 析器皿的校准
3
实验七苯甲酸 的含量测定
4 实验八混合碱
溶液各组分的 含量测定
5 实验九 KBr的
含量测定（莫 尔法）
实验十中药明矾含量 的测定
实验十一双氧水中过 氧化氢含量的测定
一沉淀 二过滤 三洗涤及沉淀的转移 四沉淀的干燥与灼烧
实验四葡萄糖干燥失重的测量
实验目的 实验原理 实验用品 实验内容与步骤 注意事项 数据记录及数据处理 思考题
实验五生药灰分的测定
实验目的 实验原理 实验用品 实验内容与步骤 数据记录及数据处理 思考题
实验六容量分析器皿的校准
实验目的 实验原理 实验用品 实验内容与步骤 数据记录及数据处理 思考题
中药制剂中总生物碱含量测定方法
中药制剂中总生物碱含量测定方法
总生物碱是指在中药中存在的所有生物碱成分的总和，是中药质量控制的一个重要指标。
本文介绍中药制剂中总生物碱含量的测定方法。
1. 实验仪器和试剂
（1）仪器：紫外可见分光光度计、电磁炉、恒温水浴器、滤膜器、电子天平等。
（2）试剂：苯酚酞指示剂、硫酸、磷酸、氢氧化钠、甲醇、乙醇、乙酸。
2. 样品制备
将样品粉末加入乙醇中，搅拌均匀，静置过夜，过滤，取过滤液，以甲醇稀释到适当浓度。
3. 建立标准曲线
（1）取各种浓度的对照品，稀释后以甲醇为溶剂，测量其吸光度。
（2）绘制标准曲线，以吸光度为横坐标，生物碱含量为纵坐标，进行线性回归分析。
4. 样品测定
（1）取适量样品，稀释后以甲醇为溶剂，测量其吸光度。
（2）根据标准曲线，计算出样品中总生物碱的含量。
5. 结果计算
样品中总生物碱含量的计算公式为：总生物碱含量（mg/g）=（样
品吸光度-空白吸光度）/标准曲线斜率×稀释倍数×样品量（g）。
6. 结论
本方法简便、可靠，适用于中药制剂中总生物碱含量的测定。
HPLC法测定华山参中山莨菪碱的含量
取 山莨菪 碱 对照 品溶 液 （ ． ９ ／ ） 分 别进 ０ ４ ４５ ｇ Ｌ ，
样 ４， ，０，０ ３ ，０ Ｌ， ５ １ ２ ，０ ４ 分别 注 入 液相 色谱 仪 进行
测 定 。 回 归 方 程 ： ＝ ０ Ｏ １ 一 ０ ０ ９ ７（ Ｙ ． １Ｘ ． ５ ｒ＝
管 阵列 检 测 器 ； ｇ ｅ ｔ １０系列 高 效 液 相 色 谱 仪 ； Ａ ｉ ｎ ０ ｌ ｌ
Ｋ Ｑ一３ ０型超声 波清 洗 器 ， 山超 声 仪 器有 限公 司 ０ 昆
产 品 。 山 莨 菪 碱 对 照 品 ， 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所 中
！
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１ ７８ ９． １８０ １ １
・
药 学 研 究 ・
ＨＬ Ｐ Ｃ法 测 定 华 山参 中山莨 菪 碱 的含 量
康 辉 聂 桂 华 代 雪 平 ， ，
（ ． 州市食 品 药品检验 所 ， 南 郑 州 ４ ０ ０ ２ 河 南省食 品 药品检 验所 ， 南 郑 州 ４ ０ ０ ） １郑 河 ５ ０ ６； ． 河 ５ ０ ３
０ ９ ９９ ） 结 果 表 明 ，山 莨 菪 碱 在 １ ７ ～ ． ９ ７ 。 ．９ ８ １ ． ８ ｇ 围 内线 性 良好 。 ９ ７ 范
表 １ 线 性 关 系 的 试 验 结 果
堂堂堡璺
进 样 量 Ｘ／ ｔ ｔｇ 峰面积 Ｙ
Ｗａ ｒ ６ ０高 效 液 相 色 谱 仪 一Ｗａ ｒ９ ６二 极 ｔｓ ９ ｅ２ ｔ ｓ９ ｅ
区为河南 、 西 、 陕 山西 等地 。《 国药 典》 中 最早 收 载于 １７ ９ ７版 一 部 ， 新 的 ２ １ 最 ０ ０版 中仍 有 收 载。根 据 文 献 报道， 华山参 中含有 阿托 品 、 莨菪碱 、 东 消旋 山
中国药典2000版一部：华山参片
中药名称华⼭参⽚拼⾳名 Huashanshen Pian英⽂名 TABELLAE PHYSOCHLAINAE来源本品为华⼭参浸膏⽚。
性状本品为糖⾐⽚，除去糖⾐后，显棕⾊；味苦。
鉴别 取本品20⽚，除去糖⾐，研细，加浓氨试液－⼄醇(1:1)2ml湿润，再加氯仿20ml，加热回流1 ⼩时，滤过，滤液蒸⼲，残渣加氯仿0.5ml 使溶解，作为供试品溶液。
另取硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪、氢溴酸⼭莨菪碱、东莨菪内酯对照品，加⼄醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层⾊谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述五种溶液各5～6µl,分别点于同⼀硅胶Ｇ薄层板上，以醋酸⼄酯－甲醇－浓氨试液(17:2:1)为展开剂，展开，取出，晾⼲。
置紫外光灯(365nm) 下检视，供试品⾊谱中，在与东莨菪内酯对照品⾊谱相应的位置上，显相同的蓝⽩⾊荧光斑点。
依次喷以碘化铋钾试液和亚硝酸钠⼄醇试液，⽇光下检视，供试品⾊谱中，在与对照品⾊谱相应的位置上，显相同颜⾊的四个斑点。
制法 取华⼭参,粉碎成粗粉,照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法（附录Ⅰ O），⽤含0.1%盐酸的⼄醇作溶剂，浸渍24⼩时后进⾏渗漉，⾄漉液⾊淡为⽌，漉液减压浓缩⾄稠膏状，测定⽣物碱含量，加辅料适量，制成颗粒，压⽚，包糖⾐，即得。
检查 应符合⽚剂项下有关的各项规定（附录Ⅰ D）。
含量测定 对照品溶液的制备 同华⼭参。
供试品溶液的制备 取本品40⽚，除去糖⾐，精密称定，研细，精密称出适量（约相当于12⽚的重量），置10ml量瓶中，加⽔使浸润并稀释⾄刻度，密塞，振摇1 ⼩时，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得。
测定法 同华⼭参。
本品含⽣物碱以莨菪碱（Ｃ17Ｈ23ＮＯ3）计，应为标⽰量的80.0～120.0％。
功能与主治 定喘,⽌咳,祛痰。
⽤于慢性⽀⽓管炎，喘息性⽓管炎。
⽤法与⽤量⼝服。
常⽤量，⼀次1～2⽚，⼀⽇3～6⽚。
极量，⼝服，⼀次4⽚，⼀⽇12⽚。
HPLC法同时测定华山参中山莨菪碱、东莨菪碱、阿托品的含量
HPLC法同时测定华山参中山莨菪碱、东莨菪碱、阿托品的含量陈妤;闫晓楠;杨晓宏【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2015(000)004【摘要】Objective To establish an HPLC method to determine anisodamine,scopolamine and atropine in Huashan-shen. Methods Anisodamine,scopolamine and atropine were assayed on an Agilent Zorbax SB-Aq C18( 4. 6 mm × 250 mm,5 μm)column;The mobile phase composed of acetonitrile-50 mmol·L-1 potassium dihydrogen phosphate( contai-ning 0. 08% triethylamine,adjust pH to 6. 0 with phosphatic acid)(15:85)at a flow rate of 1. 0 mL·min-1;The determi-nation wavelength was 210 nm. Results The calibration curves were linear in the range of 0. 058 8 ~2. 949 1 μg( r=0. 999 9)for anisodamine,0. 145 7~7. 284 1 μg( r=0. 999 9)for scopolamine and 0. 161 7~8. 084 4 μg( r=0. 999 9)for atropine,respectively. The average recoveries( n=6 )ofanisodamine,scopolamine and atropine were 100. 03%( RSD=0. 13%),100. 77%( RSD=0. 97%)and 99. 20%( RSD =0. 80%),respectively. Conclusion The method was simple and reliable,accurate,repeatable and can be used for the quality control of Huashanshen.%目的：建立高效液相色谱法同时测定华山参中山莨菪碱、东莨菪碱、阿托品的含量。
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实训二十一华山参片总生物碱的含量测定
一、实训目的
1.掌握紫外-可见分光光度法（对照品比较法）含量测定的一般操作步骤和技能。
2.理解紫外-可见分光光度法（对照品比较法）含量测定原理
二、测定依据
1.华山参片药品标准 [《中国药典》2005年版（一部）正文部分 440页]
本品为华山参浸膏片
【含量测定】对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品，加水制成每1ml相当于含莨菪碱7μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品40片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于12片的重量），置具塞锥形瓶内，精密加入枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液（pH4.0）25ml，振摇5分钟，放置过夜，用干燥滤纸滤过，取续滤液，即得。
测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液各2ml，分别置分液漏斗中，各精密加枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液（pH4.0）10ml，再精密加入用上述缓冲液配制的0.04%溴甲酚绿溶液2ml，摇匀，用10ml三氯甲烷振摇提取5分钟，待溶液完全分层后，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷湿润的滤纸滤入25ml量瓶中，再用三氯甲烷提取3次，每次5ml，依次滤入量瓶中，并用三氯甲烷洗涤滤纸，滤入量瓶中，加三氯甲烷至刻度。
照紫外-分光光度法（附录ⅤA）分别在415nm的波长处测定吸光度，计算，即得。
本品含生物碱以莨菪碱（C17H23NO3）计，应为标示量的80.0%～120.0％。
【规格】0.12mg
2.紫外-可见分光光度法[《中国药典》2005年版（一部）附录Ⅴ A]
三、测定原理
1.本品有效成分为莨菪类生物碱，主要有莨菪碱、东莨菪碱、山莨菪碱和东莨菪内酯等（图5-36）。
药品标准以莨菪碱为指标，测定总生物碱的含量，以此控制药品质量的优劣。
N OCOCH
CH 2OH
R 1
R 2
CH 3
图5-36 主要莨菪类生物碱的结构式
莨菪碱（R 1,R 2=H ） 东莨菪碱（C 6-O-C 7 R 1,R 2=H ） 山莨菪碱（R 1=OH,R 2=H ） 2.莨菪类生物碱为无色结晶，具有中强碱性，溶于酸水、甲醇、乙醇、三氯甲烷等，故本实验采用枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液（pH4.0）提取总生物碱。
此类生物碱在pH4.0的缓冲液中可与酸性染料溴甲酚绿定量生成有色络合物，该络合物可转溶于三氯甲烷生成供试品溶液，并在415nm 波长处有最大吸收，因此可用分光光度法测定。
这种方法又称为酸性染料比色法，常用于生物碱的含量测定。
3.对照品硫酸阿托品实际为外消旋莨菪碱的硫酸盐。
天然产物左旋莨菪碱不稳定，一般将其消旋化生成性质稳定的硫酸阿托品作为对照品或供药用。
4.测定原理：基于在一定条件下，待测成分的浓度和吸光度呈正比例关系，，将对照品硫酸阿托品和供试品中总生物碱分别与溴甲酚绿定量显色，按紫外-可见分光光度法（对照品比较法）测定，计算华山参片总生物碱的含量。
四、仪器与试剂
紫外分光光度计、石英吸收池、分液漏斗、量瓶（25ml ）、吸量管（2ml 、10ml ）、干燥箱、分析天平（感量0.0001g 、0.00001个）、具塞锥形瓶、滤纸、
华山参片、三氯甲烷、硫酸阿托品对照品、枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液（pH4.0）等。
五、实训内容与步骤：
1.对照品溶液制备 在2000ml 量瓶中用分析天平（感量0.00001g ）精密称取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品16.4mg ，称量范围0.01635～0.01645g ，加水溶解并稀释到刻度，制成每1ml 相当于含莨菪碱7.00～7.04μg的溶液，即得。
2.供试品溶液制备 取本品40片，除去糖衣，用分析天平（感量0.0001g ）精密称定并计算平均片重（保留四位有效数字），研钵研细，用分析天平（感量0.0001g ）精密称取适量（约相当于12片的重量，该重量=平均片重×12，称量范围=该重量±该重量×10%，保留四位有效数字），置50ml 具塞锥形瓶内，用吸量管精密加入枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液（pH4.0）25ml ，密塞振摇5分钟，放置过
6
7
夜，用干燥滤纸滤过，取续滤液，即得。
3.测定法 用吸量管精密量取供试品溶液与对照品溶液各2ml ，分别置50ml 分液漏斗中，用吸量管各精密加枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液（pH
4.0）10ml ，再用吸量管精密加入用上述缓冲液配制的0.04%溴甲酚绿溶液2ml ，摇匀，用量筒量取10ml 三氯甲烷，加入，振摇提取5分钟，待溶液完全分层后，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷湿润的滤纸滤入25ml 量瓶中，再用三氯甲烷提取3次，每次5ml ，依次滤入量瓶中，并用三氯甲烷洗涤滤纸，滤入量瓶中，加三氯甲烷至刻度。
照紫外-分光光度法（《中国药典》附录ⅤA ）分别在415nm 的波长处测定吸光度，记录测量数据。
4.含量计算
（1）计算供试品溶液中总生物碱的浓度C 供（μg/ml ）
C 供（μg/ml ） =（A 供/A 对）× C 对（μg/ml ） （2）计算药品中总生物碱的含量（标示含量 ％）
【操作要点】
①硫酸阿托品对照品(C 17H 23NO 3)2·H 2SO 4分子量为676.82，其中2分子阿托品（莨菪碱）(C 17H 23NO 3)2分子量为578.74，二者的比值为 1.169。
因此配制每1ml 相当于含莨菪碱7μg 的对照品溶液时，硫酸阿托品的称取量X （mg ）应按下式计算：X=1.169×14.0mg 。
②两相溶液萃取时，在无严重乳化的前提下，要充分振摇和放置，待溶液完全分层后才可分液，以提高萃取效率。
③其他可参照本章紫外-可见分光光度法中的“注意事项”。
六、结果判断
将测定结果与药品标准比较，若在规定的范围之内则判定本品符合规定。
七、实训思考
1.供试品为什么采用pH4.0枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液提取？
2.供试品和对照品与溴甲酚绿反应为什么需在pH4.0的条件下进行？
3.水/三氯甲烷两相溶剂萃取时，分液漏斗下口旋转活塞能用凡士林做润
C 供（mg/ml ）×10-3
×V 供（ml ）×平均片重（mg/片） ×100%
滑剂吗？
八、实训测试
华山参片总生物碱的含量测定实训测试表（百分计）
测试指标测试内容及观测点
分
值
评价等级
A B C D E
1.0 0.7 0.5 0.3 0
着装 2
检验依据写出检验依据的出处：
3
相关知识1.本法检测哪类生物碱？
2.根据药品标准什么规定判断本法为对照品比较法？
3.写出本法的含量测定原理。
9
操作步骤及实验先在以下括号内填写操作步骤的序号和名称，然后进行
实验。
（）
60 （）
（）
（）
（）
（）
（）
（）
结果
描述 2 清场 1
填写检验报告
10
回答问题1.本法应选用什么光源？
2.测定吸光度时，吸收池是否要加盖？为什么？。
3.除了本药品外还有哪种中成药还采用了酸性染料比
色法测定含量？
9
讨论酌情给分。