元胡止痛方配伍的化学和药效学比较研究

中　国　药　科　大　学　学　报
Journal of China Phar maceutical University　2003,34(5):461～464
元胡止痛方配伍的化学和药效学比较研究
朱央央,余伯阳
(中国药科大学中药复方实验室,南京210009)
【摘　要】　目的:考察不同制备工艺对元胡止痛方提取物的化学和药效学的影响,阐明延胡索与白芷配伍的合理性。

方法:采用薄层层析和小鼠醋酸扭体法、热板镇痛实验两种模型比较元胡止痛方复方提取物、单味延胡索和单味白芷提取物的化学成分和镇痛作用的关系。

结果:元胡止痛方复方提取物薄层层析斑点与单味延胡索和单味白芷提取物的斑点相对应;镇痛实验结果表明复方提取物、单味延胡索和单味白芷提取物均具有镇痛作用,前者作用明显强于后两者。

结论:提示元胡止痛方中延胡索和白芷具有协同作用,元胡止痛方配伍具有合理性。

【关键词】　元胡止痛方;延胡索;白芷;配伍;镇痛
【中图分类号】　R285.5 【文献标识码】　A 【文章编号】　1000-5048(2003)05-0461-04
元胡止痛方由中药延胡索(Rhizoma Corydalis)和白芷(RadixA ngelica dahuric ae)组成,延胡索有活血、理气、止痛之功效;白芷功能为散风除湿、通窍止痛、消肿排脓。

元胡止痛方主要功能为理气、活血、止痛,常用于气滞血瘀的胃痛、胁痛、头痛及月经痛。

该方常用剂型为片剂,元胡止痛片收载于1985～2000年各版药典[1],该方疗效确切,市场前景良好[2-4],且组方简单,因此对该方进行深入研究,不仅有利于进一步了解元胡止痛方,也为今后中药复方配伍提供参考。

但目前有关元胡止痛方复方的研究报道主要为有效成分的测定[5-7]、质量标准研究[8]和新剂型的研制[9],未见有关元胡止痛方配伍方面的研究报道。

本研究通过薄层层析和动物镇痛实验,考察不同制备工艺对元胡止痛方提取物的化学和药效的影响,阐明延胡索和白芷配伍的合理性。

1　材　料
1.1　样品与试剂
延胡索、白芷购自南京药业股份有限公司,并经本文作者之一余伯阳教授鉴定;延胡索乙素对照品由中国药科大学中药复方研究室提供;去痛片:南京第二制药厂生产;其它试剂均为分析纯。

1.2　动　物
昆明种小鼠,体重20±2g,由东南大学医学院实验动物中心提供。

2　实验方法和结果
2.1　提取物的制备
2.1.1　醇提物制备　按2∶1比例称取延胡索和白芷粗粉,混合,用三倍量的60%乙醇浸泡24h,加热回流3h,收集提取液,再加2倍量的60%乙醇加热回流2h,收集提取液,合并2次提取液,减压回收乙醇,得复方醇提物(简称A,每克提取物相当于6.64g生药)。

分别单独称取延胡索和白芷粗粉,同上法制得延胡索醇提物(简称B,每克提取物相当于7.75g生药)和白芷醇提物(简称C,每克提取物相当于5.45g生药)。

2.1.2　水煎物制备　按2∶1比例称取延胡索和白芷粗粉,混合,加10倍量水,浸泡0.5h,微沸煎煮1h,过滤,残渣加10倍量水,微沸煎煮1h,过滤。

合并滤液,适当浓缩,搅拌下加入无水乙醇,静置过夜,取上清液,减压回收乙醇,得复方水合煎物(简称D,每克提取物相当于7.78g生药)。

分别单独称取延胡索和白芷粗粉,同上法制得延胡索水煎物(每克提取物相当于9.52g生药)和白芷水煎物(每克提取物相当于6.37g生药),按2∶1比例混合,得复方水分煎物(简称E)。

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【收稿日期】　2003-03-11 【＊通讯作者】　Tel:025-******* E-mail:zhuyangy@163.c om
2.2　薄层色谱分析
2.2.1　样品的制备　按原生药延胡索2.67g ,白芷1.34g 的比例分别制备复方醇提物、延胡索醇提物、
白芷醇提物、复方水合煎物,分别溶于40ml 水中,加1ml 氨水,苯萃取2次,每次40ml ,挥干苯,残渣用0.5ml 苯溶解,分别称为供试品1、2、3、4。

按同样比例称取延胡索水煎物、白芷水煎物,分别溶于20ml 水中,合并水溶液,按上述方法,制备复方水分煎物样品,称为供试品5。

另取延胡索乙素1mg ,用200μl 苯溶解,作为对照品6。

2.2.2　薄层分析　分别取5μl 供试品1、2、3、4、5和3μl 对照品6,点于同一含羧甲基纤维素钠的硅胶G 薄层板上,用石油醚-乙醚-环己烷-甲醇(7.5∶5∶3∶0.5)展开系统展开,取出,晾干,用碘蒸气熏至斑点显色明显,取出,在365nm 下摄片,见图1。

从图1看出,复方醇提物薄层色谱的斑点多于水煎物,其斑点包含了延胡索醇提物和白芷醇提物的斑点,而复方水煎物的斑点基本与延胡索醇提物斑点相一致,未见白芷醇提物的斑点。

Fi g 1.Photograms of TLC
2.3　药效学比较试验[2]
2.3.1　不同提取物对醋酸(H OAc )致小鼠扭体反应的影响　取小鼠90只,雌雄各半,随机分成9组,禁食6h 后,其中3组分别ig 不同剂量的复方醇提物,一组ig 等量的生理盐水,一组ig 去痛片,另4组分别ig 延胡索醇提物、白芷醇提物、复方水合煎物、复方水分煎物,各组给药剂量见表1。

给药30min 后ip 0.7%HOAc 溶液0.2ml ,观察注射HOAc 后15min 内小鼠出现扭体的次数。

表1可见复方醇提物对HOAc 所致小鼠扭体反应具有明显的抑制作用,高、中、低3个剂量组与生理盐水组相比均具有极显著差异(P <0.01),且
呈剂量依赖性(P <0.05),高、中2个剂量组对HAc 致小鼠扭体反应的影响与去痛片组相比无显著性差异(P >0.05)。

延胡索醇提物和白芷醇提物对HAc 所致小鼠扭体反应均有抑制作用,与生理盐水组相比具有显著性差异(P <0.05);但两者抑制作用均弱于复方醇提物中剂量组(P <0.05),说明延胡索和白芷具有协同作用;复方醇提物和复方水合煎物相比,前者药效优于后者(P <0.05)。

复方水合煎物和复方水分煎物相比,两者药效稍有区别,但没有显著性差异(P >0.05)。

Tab 1.Effect of different extract on the numbers of mice writhing test caus ed by ip injection of 0.7%acetic acid (x ±s ,n =10)Groups Dose
(g /kg )(as herbs )
Number of writhing test (Ti mes /15min )
Inhibition rate
(%)
Normal saline -44.80±4.87Somiton Tablet
0.317.80±9.52＊＊60.279.6
13.50±5.91＊＊69.87A
4.820.20±
5.81＊＊54.912.4
32.30±10.01＊＊27.90B 3.234.60±10.76＊22.77C 1.634.90±9.87＊22.10D 4.831.10±11.91
＊＊
30.58E
4.8
28.70±7.63＊＊
35.94
＊
P <0.05,
＊＊
P <0.01vs normal ;
A :EtOH Ext .of t he mi xture of Rhiz oma c orydali s and Radix Angelica dakur cea ;
B :EtOH Ext .of Rhizoma c orydal is ;
C :EtO H Ext .of Radix An -gelica dahurc ea ;
D :Decoction of the mixture of Rhiz oma c or ydalis and Radix Angelica dahur cea ;
E :The mi xture of R hiz oma corydalis dec oction with Radix Angelica dadurc ea decoction .
2.3.2　不同提取物对小鼠热板镇痛实验的影响　
雌性小鼠,体重18～22g ,实验时先在55±0.5℃的热板上筛选小鼠正常痛阈,以小鼠扭头舔后足为疼
痛出现指标,痛阈小于3s (过于敏感)或大于30s (痛觉不敏感)者弃去不用。

小鼠90只,随机分成9组,禁食6h 后,其中3组分别ig 不同剂量的复方醇提物,一组ig 等量的生理盐水,一组ig 去痛片,另四组分别ig 延胡索醇提物、白芷醇提物、复方水合煎物、复方水分煎物,给药剂量见表2。

测定给药前、给药后30,60,120,180min 时小鼠的痛阈。

462
中国药科大学学报　J China Phar m Univ 34卷
Tab2.Effect of Y uanhu Zhitong formula on mice pain threshold in hot plate tes t(x±s,n=10)
Group
Dose
(g/kg)
(as herbs)
Pre-treating
Pos t-treating
30min60min120min180min
Normal saline-18.87±4.5920.56±4.7817.75±6.3520.13±5.1322.50±5.74 Somiton tablet0.519.19±4.7138.13±11.63＊＊37.19±10.85＊＊29.75±10.36＊24.81±10.78
19.218.50±4.0437.75±13.02＊＊33.81±13.82＊＊30.88±9.85＊28.94±9.78 A9.618.75±4.1334.31±11.68＊31.88±14.36＊29.81±11.22＊26.38±12.01
4.820.25±4.1727.00±9.352
5.75±11.8022.75±
6.1422.06±13.61
B6.420.50±5.8127.88±11.8126.63±13.3324.88±6.2923.75±8.26 C3.219.75±2.9027.63±11.9024.75±13.8623.31±3.9021.69±8.03 D9.618.13±4.1622.63±8.5519.31±7.2919.63±4.3720.13±6.83 E9.616.75±5.9519.44±4.2717.81±5.1816.25±4.5616.88±6.66
＊P<0.05,＊＊P<0.01vs control
表2可见,复方醇提物能明显延长小鼠痛阈出现的时间,给药后30min小鼠热板痛阈值增加最大,给药后30,60,120min时,高、中剂量组痛阈值与生理盐水组有显著性差异(P<0.05),此后药效减弱,180min时给药组和生理盐水组相比已无显著性差异(P>0.05)。

复方醇提物和复方水合煎物相比,前者药效优于后者(P<0.05)。

延胡索醇提物和白芷醇提物单独使用对小鼠热板法镇痛作用均较弱,与生理盐水组相比,统计学上无差异(P>0.05),而复方醇提物有显著镇痛作用,说明延胡索和白芷具有协同作用。

复方水合煎物和复方水分煎物相比,没有显著性差异(P>0.05)。

3　讨　论
1)小鼠扭体实验结果表明单味延胡索、单味白芷均具有较强的镇痛效果,与文献记载的延胡索具有活血、理气、止痛之功效;白芷具有散风除湿、通窍止痛之功能相符。

小鼠扭体实验和热板镇痛实验也表明元胡止痛方复方醇提物的药效明显优于单味延胡索和单味白芷醇提物的镇痛效果,说明元胡止痛方中延胡索和白芷在镇痛方面具有协同作用,元胡止痛方的配伍具有合理性,因而该方具有确切的疗效。

有报道元胡止痛胶囊治疗偏头痛52例,总有效率达到90.38%;元胡止痛软胶囊临床控显率达63%,总有效率达93%[2,3]。

2)薄层色谱实验可见复方醇提物的斑点包含了延胡索醇提物和白芷醇提物的斑点,与镇痛实验中元胡止痛方复方醇提物的药效明显优于单味延胡索和单味白芷醇提物的镇痛效果相对应;而复方水煎物斑点少于复方醇提物的斑点,其斑点基本与延胡索醇提物斑点相一致,未见白芷醇提物的斑点,因而复方水煎物药效弱于复方醇提物,两者也具有对应性。

3)元胡止痛方复方醇提物的药效明显优于复方水煎物,说明60%乙醇提取工艺优于传统的水煎工艺。

而元胡止痛方复方合煎物与复方分煎物相比,无论薄层色谱结果,还是药效学实验结果均无显著性差异。

参考文献
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463
　5期朱央央等:元胡止痛方配伍的化学和药效学比较研究
464中国药科大学学报　J China Phar m Univ34卷Comparative Studies on Chemistry and Pharmacodynamics of the Compatibility of Yuanhu Zhitong Prescription
ZHU Yang-Yang,YU Bo-Yang
Laboratory of Chinese Traditional Me dicine,China Pharmaceutical Unive rsity,Nanjing210009,China
【ABSTR ACT】　AIM:To search the activities of complex of Rhizama C orydalis and Radix Angelica dahuricae. METHOD:TLC method and the two mice analgesic test models,acetic acid tail-flick test and hot plate test were used to compare the relationship between the chemical composition and the analgesic effect among the extract of Yuanhu Zhi-tong Prescription,Rhizoma Corydalis extract and Radix Angelica.Dahuricae extract.R ESULT:The TLC spot of Yuanhu Zhitong Prescription extract was corr espond with that of the Rhizoma Corydalis extract and Radix Angelica dahuricae extract.The analgesic experiment showed that Yuanhu Zhitong Prescription extract,Rhizoma C orydalis ex-tract and Radix A ngelica dahuricae extract all had analgesic effect,and the for mer is obviously str onger than the latter. CON CLU SION:It was pointed out that Rhizoma Corydalis and Radix Angelic a dahuric ae in Yuanhu Zhitong Prescrip-tion have synergism.The Yuanhu Zhitong Prescription has some compatibility reasonability.
【KEY WORD S】　Yuanhu Zhitong Prescription;Rhizoma Corydalis;Radix A ngelica dahuricae.;Compatibility;Anal-gesic activity
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