酪氨酸酶的提取及其酶促反应动力学研究0602

酪氨酸酶的提取及其酶促反应动力学研究

实验目的：本实验拟通过从土豆等物中提取酪氨酸酶并就其酶促反应的动力学研究其活性，使学生对酶有个初步的认识。

实验内容：

1.以土豆为原料提取酪氨酸酶；

2.以多巴为底物研究酪氨酸酶对底物的催化氧化：

①底物浓度对催化反应的影响：在一定的实验温度、酶用量的条件下，改变底物浓度（至少5个浓度），探究酶的催化氧化活性；

②研究温度对酶催化氧化的性能的影响（3～4个温度）；

③探究酶的用量对反应体系的速率的影响（至少5个浓度）；

④反应体系的pH 值对酶催化氧化反应的影响；

⑤探究抑制剂（铜试剂/磺基水杨酸/水杨酸等）对反应的影响。

数据记录及处理：

1.设计实验所需要的记录表格；

2.根据米氏方程，求出米氏常数和最大反应速度；

（Km 等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，即当V=Vm/2时，【S 】=Km,单位为mol/l 。Km 是酶极为重要的动力学参数，其物理含义是指ES 复合物的消失速度常数（k-1+k2）与形成速度常数（k1）之比。当PH 、温度、离子强度不变时，Km 是恒定的。）

3.根据实验得到的反应速率确定反应体系的最佳条件。

实验注意事项：

1.络氨酸酶的提去要现提现用；

2.提取时的温度不能太高；

3.反应温度的设置应低于40℃；

4.反应温度应保持恒定。