高效液相色谱法测定血清中维生素A、E、β-胡萝卜素
液相色谱串联质谱法测定血清维生素A、E含量
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Ｌａｂｅｌｅｄ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ＆ Ｃｌｉｒｔ Ｍｅｄ Ａｏｒ．２０１８．Ｖｏ１．２５．Ｎｏ．４ ，
维生素a的测定方法
维生素a的测定方法
维生素A的测定方法有以下几种常用的方法：
1. 油脂提取法：将样品与有机溶剂（如乙醚、二氯甲烷等）混合，利用有机溶剂提取维生素A，然后通过蒸发有机溶剂得到纯的维生素A，最后用紫外光谱法或高效液相色谱法（HPLC）进行定量分析。
2. 高效液相色谱法（HPLC）：使用适当的色谱柱和流动相，将标准品和待测样品进行分离和检测，通过测量峰的面积或浓度来定量维生素A。
3. 气相色谱法（GC）：将样品中的维生素A转化为易揮发的衍生化合物，然后通过气相色谱分离和检测，利用峰的面积或浓度进行定量。
4. 高效能液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）：结合高效液相色谱和质谱技术，对维生素A进行分离和检测，通过质谱数据进行定量分析。
5. 生物法：利用特定菌株或生物酶活性对维生素A进行测定，通过测量生物反应的光度或荧光信号来确定维生素A的含量。
需要根据具体实验目的和条件选择适合的方法进行维生素A的测定。
高效液相法同时测定生素A和维生素E的含量
高效液相法同时测定生素A和维生素E的含量发表时间：2017-11-22T13:51:43.517Z 来源：《航空军医》2017年第19期作者：王琛[导读] 建立的方法灵敏度高、准确度和重现性好，可作为多维元素胶囊的质量控制方法之一。
（厦门医学院药学系福建厦门 361023）摘要：目的建立多维元素胶囊中维生素A和维生素E的HPLC含量测定方法。
方法采用Century SIL C18柱（5μm，4.6mm×150mm），流动相为甲醇：三氯甲烷：水（体积比90：8：2）；流速：1.0mL·min-1；检测波长：选择280nm；柱温：35℃；进样量：20μL。
结果维生素A在54.4～217.5μg·mL-1（r=0.9999）、维生素E在56.3～225.0μg·mL-1（r=0.9997）范围内均呈良好的线性关系，平均回收率分别为99.70%（RSD=1.43%）、99.19%（RSD=1.25%）。
结论建立的方法灵敏度高、准确度和重现性好，可作为多维元素胶囊的质量控制方法之一。
关键词：高效液相色谱法；维生素A；维生素E多维元素胶囊为维生素及矿物质类非处方药药品，用于预防和治疗因维生素和矿物质所引发的各种疾病。
维生素A和维生素E为脂溶性维生素含量测定较为复杂[1-2]，且有可能同时测定会相互干扰，本文建立一种高效液相法同时测定生素A和维生素E含量的方法。
1仪器与材料UV-1575紫外检测器、PU-1580输液泵，N-2000双通道色谱工作站，三氯甲烷（色谱纯），二甲基亚砜（分析纯），正己烷（分析纯），甲醇（色谱纯），样品（自制），对照品：维生素A醋酸酯（瑞士Fluka公司）、维生素E烟酸酯（Sigma公司）。
2方法与结果2.1色谱条件的选择色谱柱：Century SIL C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：甲醇：三氯甲烷：水（体积比90：8：2）；流速：1.0mL·min-1；检测波长：选择280nm；柱温：35℃；进样量：20μL。
实验六 维生素E的含量测定-液相色谱
实验六高效液相色谱法分离和测定α-ＶE一、实验目的1. 了解高效液相色谱仪的基本结构，掌握液相色谱仪的基本操作方法。
2. 掌握液相色谱分析的定性及外标定量方法。
二、原理1. 高效液相色谱的特点高压泵输送流动相，梯度洗脱，可在柱后直接检测流出液成分，通过改变溶剂极性或强度进而改变色谱柱效能，分离选择性和组分的容量因子，实现改善色谱系统分离度的目的。
2. 高效液相色谱仪(1) 高压输液系统，是提供足够恒定的高压，使流动相以稳定的流量快速渗透通过固定相。
(2) 进样系统，一般采用旋转式六通阀在高压下进样。
(3) 分离系统，在液相色谱柱中完成。
(4) 检测系统，液相色谱常见检测器有：紫外光度检测器，示差折光检测器、荧光检测器电化学检测器。
3. 高效液相色谱的类型根据固定相和分离机理的不同，高效液相色谱如下几种类型(1) 液—固吸附色谱：基于各组分在固体吸附剂表面上具有不同吸附能力而进行分离。
(2) 液—液分配色谱：组分在两相间经过反复多次分配各组分间产生差速迁移，从而实现分离。
(3) 化学键合相色谱：通过共价键将有机固定液结合到硅胶载体表面得到各种性能的固定相。
(4) 离子交换色谱：离子交换树脂上可电离的离子与流动相中带相同电荷的组分离子进行可逆交换，由于亲和力的不同彼此分离。
(5) 离子色谱：用离交换树酯作为固定相，电解质溶液为流动相，用电导检测器检测。
(6) 凝胶色谱：基于试样中各组分分子的大小和形状不同来实现分离。
4. 实验原理反向色谱与正相色谱组成相反，是以非极性或弱极性的固定液制成的固定相，以极性或相对强的极性溶剂作为流动相组成的液—液分配色谱。
但目前多是采用化学反应的方法将非极性或弱极性的有机物分子键合到载体表面，制成键合相的固定相，所以也称键合相色谱。
这种色谱的分离机理比较复杂，一般认为是液—固吸附和液—液分配并存。
在反向HPLC中常用的键合相有十八烷基硅烷(Ｃ18）、辛基硅烷(Ｃ8)氰基硅烷、氨基硅烷等。
高效液相色谱法同时测定血清中VA、VD_3、VE和β-胡萝卜素
高效液相色谱法同时测定血清中VA、VD_3、VE和β-胡萝卜素邹晓莉;曾红燕;黎源倩;李晓霞;张思维;郑波;黄承钰【期刊名称】《四川大学学报：医学版》【年(卷),期】2007(38)5【摘要】目的建立能同时测定人血清中维生素A(VA)、维生素D3(VD3)、维生素E(VE)和β-胡萝卜素的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法。
方法以无水乙醇沉淀蛋白质后,血清中的脂溶性维生素用乙醚/石油醚混合溶液提取,吹氮浓缩后用HPLC测定。
结果VA、VD3、VE和β-胡萝卜素的线性范围分别为0.012μg/mL^500μg/mL、0.030μg/mL^500μg/mL、0.12μg/mL^500μg/mL和0.015μg/mL^500μg/mL;检出限分别为0.012μg/mL、0.030μg/mL、0.12μg/mL和0.015μg/mL;相对标准偏差分别为0.75%、0.54%、2.06%和2.74%。
血清样品中VA、VD3、VE和β-胡萝卜素的回收率分别为:92%~116%,98%~112%,84.8%~106%和90%~105%。
结论本法简便快速,适于血清样品中4种脂溶性维生素的同时测定。
【总页数】3页(P879-881)【关键词】HPLC;维生素A;维生素D3;维生素E;β-胡萝卜素;血清【作者】邹晓莉;曾红燕;黎源倩;李晓霞;张思维;郑波;黄承钰【作者单位】四川大学华西公共卫生学院卫生检验学教研室【正文语种】中文【中图分类】R155.5【相关文献】1.高效液相色谱法测定白牦牛乳中VA和VE的含量 [J], 常海军;甘伯中;刘长英;梁慧光;余群力;龙瑞军2.高效液相色谱法测定南瓜中β-胡萝卜素和VE的含量 [J], 田密霞;胡文忠;霍晓雪;王艳颖;姜爱丽;刘程惠;范圣第3.反相高效液相色谱法同时测定强化维生素奶制品中的VA酯和VE酯 [J], 李立平;崔景泰4.非水反相高效液相色谱法同时检测人血清中 VA、VD3、VE 和β-胡萝卜素 [J], 张翠丽;王珍;李东光5.高效液相色谱法（HPLC）测定复合多维添加剂中脂溶性维生素VA、VD_3、VE [J], 付丽华;李星明;石艳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
〖医学〗高效液相色谱法测定血清中维生素A、E、β-胡萝卜素
五、思考题
1. 维生素A、D 、E的生理作用、缺乏表 现及食物来源。
2. 哪些B 族维生素与能量代谢有关？
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1. 配制标准液时：
若有条件应对配制好的标准稀释液 维生素A、维生素E、β-胡萝卜素 200～600nm扫描，观察最大吸收峰 的波长；
如果所用HPLC仪能作波长变换，则 在测定组分的最大吸收波长下测定 可取得较高的灵敏度。
2. 吸取上清液时：
注意不可触及界面；
否则： 一方面会吸入水，影响分析和柱 的分离能力； 另一方面，界面上的脂肪层可能 会影响分析结果。
多种 肺炎
细菌均可引起大叶性肺炎，但绝大多 数为肺 炎链球 菌，其 中以Ⅲ 型致病 力最强 。肺炎 链球菌 为革兰 阳性球 菌，有 荚膜， 其致病 力是由 于高分 子多糖 体的荚 膜对组 织的侵 袭作 用。少数为肺炎杆菌、金黄*色葡萄球 菌、溶 血性链 球菌、 流感嗜 血杆菌 等。肺 炎链球 菌为口 腔及鼻 咽部的 正常寄 生菌群 ，若呼 吸道的 排菌自 净功能 及机体 的抵抗 力正常 时， 不引发肺炎。当机体受寒、过度疲劳 、醉酒 、感冒 、糖尿 病、免 疫功能 低下等 使呼吸 道防御 功能被 削弱， 细菌侵 入肺泡 通过变 态反应 使肺泡 壁毛细 血管通 透性增 强，浆 液及 纤维素渗出，富含蛋白的渗出物中细 菌迅速 繁殖， 并通过 肺泡间 孔或呼 吸细支 气管向 邻近肺 组织蔓 延，波 及一个 肺段或 整个肺 叶。大 叶间的 蔓延系 带菌的 渗出液 经叶支 气管 播散所致。 编 辑 本 段 临 床表现
多数起病急骤，常有受凉淋雨、劳累、 病毒感 染等诱 因，约1/3患病 前有上 呼吸道 感染。 病程7~ 10天。 （一 ）寒战 、高热 ：典型 病例以 突然寒 战起病 ，继之 高热， 体温可 高达39℃~40℃，呈 稽留热 型，常 伴有头 痛、全 身肌肉 酸痛， 食量减 少。抗 生素使 用后热 型可不 典型， 年老体弱者可仅有低热或不发热。
高效液相色谱法测定维生素E胶囊中α-VE的含量(2015)
高效液相色谱法测定VE胶囊中α-VE的含量一、目的要求1．了解高效液相色谱仪的基本构造和工作原理。
2．掌握高效液相色谱仪的正确操作方法。
3．学习维生素E的定量分析方法。
二、实验原理色谱法的分离原理是：溶于流动相中的各组分经过固定相时，由于与固定相发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号被检测。
高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)。
按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。
液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC)。
RPC一般用非极性固定相（如C18、C8），在现代液相色谱中应用最为广泛，约占整个HPLC应用的80%左右。
维生素E又称生育酚，目前已经确认的有8种异构体，αβγδ生育酚和αβγδ生育三烯酚，天然存在的α-生育酚的维生素E活性最强。
α-生育酚醋酸酯是α-生育酚的酯化产品，常用在维生素胶囊中，具有很强的氧化稳定性。
样品以乙醇溶解，采用RPC法，以乙醇为流动相，C18色谱柱分离，紫外检测器284 nm 波长检测，外标法定量，测定维生素E胶囊中α-生育酚醋酸酯的含量。
三、仪器和试剂维生素E醋酸酯标准品、色谱纯乙醇、分析纯四氢呋喃、无水乙醇。
HPLC高效液相色谱仪（日本岛津，LC-10A 泵，SPD-20A 紫外双波长检测器）、KQ5002B型超声波清洗器、、紫外可见分光光度计。
四、实验条件色谱柱为Eclipse XDB-C18柱( 150 mm × 4. 6 mm，5 μm i. d. ) ; 流动相为乙醇，流速0.5 mL /min; 进样量20 μL; UV 检测器，检测波长为284 nm(通过紫外分光光度计扫描确定)。
液相色谱串联质谱法测定血清维生素A、E含量
液相色谱串联质谱法测定血清维生素A、E含量贾妍;战思恩;翟燕红;姜小梅;覃素姿;曹正【期刊名称】《标记免疫分析与临床》【年(卷),期】2018(025)004【摘要】目的建立液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS法)测定血清维生素A和维生素E含量的方法.方法采用硫酸锌沉淀蛋白,96孔蛋白沉淀板过滤.采用LCMS/MS[正离子电喷雾离子化(ESI+)的多反应监测模式(MRM)]氘代同位素内标法检测血清维生素A、E含量并进行相关方法学验证.结果 LC-MS/MS检测血清维生素A的批内精密度变异系数为3.2％(2.4％～3.9％),批间变异为5.5％(5.O％～6.0％);维生素E的批内精密度变异系数为4.1％(3.0％～5.1％),批间变异为8.0％(7.6％～8.3％).维生素A在0.06 ～2 μg/mL、维生素E在1.2 ～40μg/mL范围内线性良好,线性相关系数分别为0.9987、0.9909.维生素A、维生素E的定量限分别为0.03μg/mL、0.8μg/mL;检测限分别为0.02μg/mL and 0.01 μg/mL.维生素A低浓度回收率为107.5％,高浓度为106.9％;维生素E的低浓度回收率为91.9％,高浓度为88.4％.与液相色谱方法进行比对,两种方法的结果差异无统计学意义(P值均大于0.30)说明两种方法具有一致性.结论 LC-MS/MS检测血清维生素A 及维生素E的灵敏度高,结果准确、稳定,可应用于临床分析.【总页数】6页(P574-579)【作者】贾妍;战思恩;翟燕红;姜小梅;覃素姿;曹正【作者单位】首都医科大学附属北京妇产医院检验科,北京100026;首都医科大学附属北京妇产医院检验科,北京100026;首都医科大学附属北京妇产医院检验科,北京100026;美国AB SCIEX公司北京代表处,北京100015;天津博纳艾杰尔科技有限公司,天津300462;首都医科大学附属北京妇产医院检验科,北京100026【正文语种】中文【相关文献】1.液相色谱串联质谱法测定血清中25-羟基维生素 D2及25-羟基维生素 D3含量[J], 徐凤仙;于嘉屏2.液相色谱串联质谱法测定血清中腺苷含量 [J], 程浩3.高效液相色谱串联质谱法测定当归芍药散提取物和含药血清中3种活性成分含量[J], 宋祯彦;何攀;李富周;贺春香;余婧萍;成绍武4.稳定同位素稀释-液相色谱串联质谱法测定血清中的25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3含量 [J], 刘艳琴;张璇;彭莹莹;刘圆圆;赵少志;张欣文5.反相高效液相色谱法测定人血清中维生素A含量 [J], 许蕴;马经野;付林;钱文璟;王晓丽;史敦云因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实验报告-高效液相色谱法测定VE含量
实验四高效液相色谱法测定V E含量1 实验目的1.1了解高效液相色谱仪的基本操作；1.2了解高效液相色谱仪测定V E的原理。
2 实验原理高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
V E（维生素E）又名生育酚或产妊酚，在食油、水果、蔬菜及粮食中均存在。
有抗氧化作用，能增强皮肤毛细血管抵抗力，并维持正常通透性；有改善血液循环及调整生育功能、抗衰老作用等。
V E通过高效液相色谱柱进行分离，PDA检测器检测，外标法定量。
3实验器材3.1 实验样品V E样品溶液3.2 实验试剂浓度为50µg/ml的V E标样3.3 实验仪器高效液相色谱仪附PDA检测器4 色谱条件色谱柱：C18柱；流动相速度：0.3ml/min；进样量：5µl；柱温：30℃。
5 实验结果与讨论5.1实验结果本次实验采用的是单点法测定。
实验结果见表1。
表1. 液相色谱仪测定苹果的VE含量样品中VE的浓度=乙烯标样的总量×苹果的峰面积/乙烯标样的峰面积=5µl×50μg/mL×17369/（5µl×42217）=20.57μg/mL5.2实验讨论本次实验中，测定标样溶液V E含量时，在指定的保留时间内并未出峰。
讨论分析原因：样品溶液在上周实验后，一直置于离心管中，未避光低温保存，导致样品中V E氧化，液相测定时没有在相应的时间出峰。
本次实验时间较短，且主要目的是了解高效液相色谱仪的基本操作，以及液相色谱仪测定V E的原理，故结合前组同学对V E含量的测定数据进行讨论与分析。
高效液相色谱法测定药品的维生素A含量
高效液相色谱法测定药品的维生素A含量发表时间：2018-08-27T09:50:11.280Z 来源：《健康世界》2018年15期作者：陶骥文[导读] 分析高效液相色谱法（HPLC）测定维生素AD滴剂中维生素A含量的效果西安太极药业有限公司 710119摘要：目的分析高效液相色谱法（HPLC）测定维生素AD滴剂中维生素A含量的效果。
方法 HPLC测定维生素AD滴剂中维生素A含量的色谱条件：分析柱为 Kromasil 100-5C18（150mm×43mm，5µm）；流动相为甲醇：酒精（80：20）；流速为0.5mL/min；柱温30℃，检测器在270nm波长处检测维生素A。
结果维生素AD滴剂中维生素A分离良好，回归方程为A=775.98C+12.97（r=0.9997），线性范围为1.21-2.84mg/mL。
维生素A的平均回收率为99.94%，RSD为1.28%。
维生素A样品在6h内稳定性较好。
维生素A含量为（0.3969±0.05）mg/mL。
结论用HPLC法测定维生素AD滴剂中维生素A的含量方法简便、速度快、灵敏度和精确度高、重复性和稳定性好，值得推广应用。
关键词：维生素A；高效液相色谱法维生素A具有多种生理功能[1]：调节生长发育、提高免疫力、保护视力等，缺乏维生素A会导致发育迟缓、易感性提高、视力下降等疾病。
维生素AD滴剂是临床补充维生素A的常用方法，准确检测其中的维生素A含量对于把握药物的质量和疗效至关重要。
临床测定维生素常用的一种方法是高效液相色谱法（HPLC）[2]。
本研究采用HPLC法测定药品（维生素AD滴剂）中维生素A含量，效果颇佳，现将结果报道如下。
1 资料与方法1.1 仪器及试剂高效液相色谱仪（美国赛默飞公司）、紫外检测器（南京普阳科学仪器研究所）；离心机（德国奥豪斯公司）；旋涡器（美国SCI公司）；维生素A标准品（北京神州科创化工技术研究所）；乙醇（分析纯）；甲醇（色谱纯）；正己烷（分析纯）；高纯氮气。
高效液相色谱法检测饲料中维生素a的方法步骤
高效液相色谱法检测饲料中维生素a的方法步骤高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析方法，适用于维生素A等化合物的检测。
下面是使用HPLC法检测饲料中维生素A的方法步骤：1. 样品准备：将饲料样品取出一定量，加入适量的有机溶剂进行提取。
常用的有机溶剂有甲醇、乙醇等。
提取条件可根据实际需要进行优化，如提取时间、提取剂量等。
2. 过滤样品：使用0.45μm的微孔膜过滤器将提取液过滤，以去除杂质和固体颗粒，得到清晰的样品溶液。
3. 样品进样：将过滤后的样品溶液注入到高效液相色谱仪系统的进样器中。
进样器可选用自动进样器，可以提高分析效率和减少人为误差。
4. 色谱柱选择：选择适合维生素A分析的色谱柱，常用的色谱柱有反相色谱柱、正相色谱柱等。
反相色谱柱常用的填料材料有C18、C8等。
5. 色谱条件设置：设置适宜的流动相体系，常用的流动相为甲醇/水。
可根据实际需要优化流动相的组成和流速，以提高分离和检测效果。
6. 检测条件设置：设置适宜的检测波长，维生素A在紫外光区域有较好的吸收峰。
常用的检测波长为325nm。
7. 样品分离：通过色谱柱将样品中的维生素A与其他组分分离。
根据色谱柱和流动相的选择，可以调整梯度洗脱等条件，以提高分离效果。
8. 维生素A定量：根据标准曲线，通过峰面积和浓度的线性关系，计算饲料样品中维生素A的含量。
标准曲线可通过一系列已知浓度的维生素A标准溶液进行建立。
9. 数据处理：对得到的色谱图进行峰识别和集成，计算得到维生素A的含量。
可以使用色谱软件进行自动数据处理和结果输出。
以上就是使用高效液相色谱法检测饲料中维生素A的方法步骤。
HPLC法具有灵敏度高、分析时间短、准确度高等优点，可用于快速、精确地确定饲料中维生素A的含量，为饲料生产质量控制提供科学依据。
高效液相色谱法测定水果中脂溶性维生素含量的研究
储备液: 精确 称取 标准品 VA, VD2, VD3 和 VE 用 甲醇 溶解 使浓度分别为 1. 0, 1. 0, 1. 0mg /mL 和 0. 10 g /mL 储于 - 20 冰 箱中。工作液: 测定前用甲醇 稀释 VA, VD2, VD3 和 V E储 备液, 使浓度分别为 100, 100, 100 g /mL 和 1m g /mL 应用 液, 用甲醇将 工作液稀释成一定浓度的混合标准系列溶液。
ห้องสมุดไป่ตู้
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图 3 苹果样品脂溶性维生素色谱图
4结 论
本实验对水果中脂溶性维生素的 测定作了 色谱条 件和前处 理过程的优化, 并 建立 了测 定方法, 对 样品进 行充 氮气 处 理, 皂 化时间 4h, 用乙醚 萃取, 洗去碱液, 并浓缩处理, 色谱 条件为甲醇
高效液相色谱法测定水果中脂溶性维生素含量的研究
摘 要: 建 立了 反相 色谱 法 同时 测定 水果 中脂 溶性 维生 素的 方法, 色 谱条 件为 甲醇 水 = 97 3, 检 测 波长: 300nm, 流 速:
1. 0mL /m in, 样品在 20m in内达到基线分离。该方法适用于测定水果蔬 菜等低含量脂溶性维生素的测定, 准确性高, 灵敏度好, 是一种 快速简单的分离脂溶 性维生素的有效方法, 适用于水果的质量控制, 填补了国内检测低脂溶性维生素含量检测方法的空白。
浓缩: 将分液漏斗中 的乙 醚用 滤纸过 滤入 与旋 转蒸 发器 配 套的 250mL 球形蒸发瓶中, 并用于 25 水浴减压蒸干, 用 1. 5mL 甲醇溶解. 再用 0. 22um 有机滤膜过滤, 上机进样 分析。
续表 维生素 D2 维生素 D3 维生素 E
高效液相色谱法测定β-胡萝卜素含量
高效液相色谱法测定β-胡萝卜素含量任科;李清平;张海容【摘要】用高效液相色谱法(HPLC)同时测定野核桃、胡萝卜两种食品中的β-胡萝卜素含量.采用的色谱条件为:Symmetry C18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm),以60%乙腈、20%乙酸乙酯、20%甲醇混合溶液为流动相,在波长450 nm,柱温25 ℃流速1 mL/min;进样量10 μL条件进行试验.在优化实验条件下,测得野核桃中含β-胡萝卜素为6.5 μg/g,胡萝卜中含β-胡萝卜素为358.15 μg/g.方法简便、快速,适合高效液相色谱法测定植物样品中β-胡萝卜含量.%The contents of β-carotene in wild walnut and carrot were simultaneously determined by HPLC. The chromatographic conditions were as follows:symmetryC18column (4.6 mm×250 mm,5 μm) was used with mobile phase of a mixture of 60% acetonitrile, 20% methanol at a wavelength of 450 nm, and a column temperature of 25 ℃ with 1 mL/min as the flow rate, injection volume of 10 μL. Under the optimized experimental conditions, the β-carotene content was obtained in wild walnut conta ining 6.5 μg/g and in carrots containing 358.15 μg/g for real samples. The method was simple, rapid and suitable for the determination of β-carrot content in plant samples by high performance liquid chromatography.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2018(046)004【总页数】3页(P104-106)【关键词】β-胡萝卜素;高效液相色谱;野核桃;胡萝卜【作者】任科;李清平;张海容【作者单位】忻州师范学院生化分析研究所,山西忻州 034000;忻州师范学院生化分析研究所,山西忻州 034000;忻州师范学院生化分析研究所,山西忻州 034000【正文语种】中文【中图分类】O657.7β-胡萝卜素(C40H56)是类胡萝卜素之一，也是橘黄色脂溶性化合物，它是自然界中最普遍存在也是最稳定的天然色素。
高效液相色谱法同时测定维生素A、E及β-胡萝卜素
高效液相色谱法同时测定维生素A、E及β-胡萝卜素郑明慈【期刊名称】《华夏医学》【年(卷),期】1999(0)2【摘要】本研究运用新型检测器ＳＰＤ－１０Ａ（日本岛津公司），测定维生素Ａ、Ｅ及β－胡萝卜素。
分析柱为ＣＬＣ－ＯＤＳ（日本岛津公司）。
流动相乙腈∶二氯甲烷∶甲醇＝７０∶２０∶１０，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ。
对维生素Ａ（ＶｉｔＡ）的检测波长为３２５ｎｍ，对维生素Ｅ（ＶｉｔＥ）及β－胡萝卜素的检测波长分别是２９２ｎｍ和４５０ｎｍ。
结果：ＶｉｔＡ保留时间为２．５１ｍｉｎ。
ＶｉｔＥ和β－胡萝卜素分别为５．２２ｍｉｎ和１１．５４ｍｉｎ。
３种物质峰独立完整，无干扰峰，并在１３ｍｉｎ之内可完成分析测定。
结论：本研究首次建立了一次性同时测定ＶｉｔＡ、ＶｉｔＥ及β－胡萝卜素的方法，具有节省时间和节省试剂及快速、准确的优点。
【总页数】3页(P7-9)【关键词】维生素A、E;β-胡萝卜素;同时测定;高效液相色谱【作者】郑明慈【作者单位】桂林医学院围产医学研究室【正文语种】中文【中图分类】R977.2;R-331【相关文献】1.高效液相色谱法测定复方维生素片中β-胡萝卜素 [J], 韩志辉;余克平2.超高效液相色谱法测定天然β-胡萝卜素软胶囊中β-胡萝卜素 [J], 张云伟;鄢兵3.高效液相色谱法分析牛乳中脂溶性维生素和β-胡萝卜素 [J], 叶惟泠;刘莉;李海蓉4.高压液相色谱法同时测定膳食补充剂中的维生素A和β－胡萝卜素含量 [J], SundaresanPR;赵显峰5.高效液相色谱法同时测定婴幼儿配方乳粉中的维生素A、D3、E和β-胡萝卜素[J], 吴新文;马凯;张世芹;田璞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定人血清中维生素E
高效液相色谱法测定人血清中维生素E实验目的：1.了解高效液相色谱的结构、原理及其应用范围。
2. 掌握仪器分析的研究方法和基本操作实验耗材与仪器：实验仪器：Agilent高效液相色谱仪1260系列实验设备：MX-F漩涡混合器、TGL-16G高速离心机，BF2000氮气吹干仪实验试剂：无水乙醇（分析纯）、正己烷（色谱纯）、甲醇（色谱纯）超净水、异丙醇（分析纯）实验步骤：一、样品前处理：1. 准确吸取血清0.1mL于2mL朔料离心管中，加入1μg/mL内标液（δ-VE）0.2mL。
2. 加入无水乙醇0.3mL，盖塞，用漩涡混合器充分混匀2min。
3. 加入正己烷0.6mL，盖塞，用漩涡混合器充分混匀2min。
4. 样品取出后立即离心（3000r/min，5mim），去上层（正己烷层）于另外的朔料管中（一定不要取下层）。
5. 对下层溶液重复提取2次。
6. 氮气吹干正己烷7. 立刻加入200μL无水乙醇，用漩涡器充分混合，使提取物完全溶解于无水乙醇中。
取溶解物100μL至带内衬管的进样瓶中待测。
二、标准曲线配置1.分别取γ-VE10μg/mL、α-VE20μg/mL、和内标δ-VE10μg/mL的标准工作液，用无水乙醇配置成1μg/mL的单标工作液。
2. 用α、γ-VE标准工作液配制工作曲线，使每个混合标准液中含有内标（δ-VE）1μg/mL，并用无水乙醇补足至1mL。
见下表1标准曲线配置工作表（直接配置于进样瓶）表1 标准曲线配置浓度与取样量三、用高效液相色谱法测定vit-E1. 过滤流动相2. 上机测定a)测定δ、γ、α-VE、和内标单标，保留时间定性b）测定α、γ-VE标准曲线，用他们与δ-VE内标的峰高比或面积比定量。
c）测定未知样品3. 仪器分析条件色谱柱：ZORBAX SB-Aa 5μm250*4.6mm流动相：甲醇：水=90：10流速：1.0μg/mL紫外线检测波长：295nm荧光激发波长：295nm，发射波长350nm进样量：20μL柱温：35℃实验结果与数据分析1. 定性保留时间见表2。
维生素A和维生素E的测定方法
维生素A和维生素E的测定方法（HPLC）杨月欣教授等高效液相色谱法最小检出量分别为VA：0。
8ng；α—E：91。
8ng；γ—E：36。
6ng;δ—E：20。
6ng。
1。
原理食物中的维生素A及维生素E经皂化提取以后，将其不可皂化的部分提取到有机溶剂中。
用HPLC法测定维生素A及维生素E的含量。
2. 适用范围GB12388-90 本法适用于各种食物和饲料的测定3. 仪器(1）高压液相色谱仪(带紫外检测器）（2）六孔恒温水浴锅(3) 旋转蒸发器(4）高纯氮气（5）高速离心机4。
试剂本实验所用试剂皆为分析纯，所用水皆为蒸馏水4。
1 无水乙醇:重蒸，不含有醛类物质检查方法:取2ml银氨溶液于试管中，加入少量乙醇,摇匀,再加入10%氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛.脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中。
取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。
将两者倾入1L乙醇中，振摇后，放置暗处两天（不时摇动，促进反应），经过滤，置蒸馏瓶蒸馏，弃去初蒸出的50ml。
当乙醇中：4。
2 10％抗坏血酸溶液（Vc）W/V 临用前配制4。
3 50％氢氧化钾溶液（KOH) W/V4.4 无水乙醚重蒸，不含过氧化物4.4。
1 过氧化物检查方法：用5ml乙醚加1ml10%碘化钾溶液,振摇1min,如有过氧化物则放出游离碘,水层呈黄色或加4滴0.5％淀粉液，水层呈蓝色。
该乙醚需处理后使用。
4.4。
2 去除过氧化物的方法：重蒸乙醚时，瓶中放入铁丝或铁末少许。
弃去10%初馏液和10％残馏液。
4。
5 pH 1—14试纸4.6 无水硫酸钠Na2SO44。
7 甲醇色谱纯或分析纯重蒸后使用4。
8 重蒸水蒸馏水中加入少量高锰酸钾重蒸后使用4。
9 苯并〔e〕芘标准液称取苯并〔e〕芘(纯度98%),用脱醛乙醇配制成1ml相当于5μg苯并〔e〕芘的内标溶液。
4.10 维生素A标准液视黄醇（纯度85％Sigma公司）用脱醛乙醇溶解维生素A标准品，使其浓度大约为1ml相当于1mg视黄醇。
高效液相色谱法同时测定血清中维生素A、D和E
高效液相色谱法同时测定血清中维生素A、D和E秦冰冰;李德芳;蒋贵发;罗荔【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】1993(0)2【摘要】用反相高效液相色谱同时测定血清中维生素A、D、E,采用NOVA—PAKC_(18)分析柱,流动相为:甲醇+乙腈+四氢呋喃+水=40+33+22+5。
流速1.2ml/min,紫外检测器,选用波长290nm。
只需6min便可完成一个样品的分析。
用NEC APC Ⅳ电脑为主机的810色谱工作站进行数据处理。
标准曲线决定系数r^2值维生素A为0.999 3,维生素D为0.998 6,维生素E为0.999 8。
平均回收率维生素A为100.7±2.49％,维生素D为96.3±1.93％,维生素E为96.4±1.62％。
【总页数】4页(P168-171)【关键词】高效液相色谱;血清;维生素A;维生素D;维生素E【作者】秦冰冰;李德芳;蒋贵发;罗荔【作者单位】广西医学院预防医学系;广西分析测试中心【正文语种】中文【中图分类】R【相关文献】1.高效液相色谱法测定人血清中维生素A、E、C的含量 [J], 刁娟娟;田兰;孙炜;李新霞2.高效液相色谱法快速测定血清中的维生素C [J], 段淑娥;张常虎;刘蓉园;任雪姣3.反相高效液相色谱法同时测定血清维生素A和维生素E [J], 李润亭;任鲁泰;周爱芬;王平;高静4.反相高效液相色谱法同时测定血清中5种水溶性维生素 [J], 王希希;胡燕;孙轶卓;别明江;孙成均5.高效液相色谱法测定血清中的维生素A和维生素E [J], 冯新昌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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血清样品在采血后立即离心，分离 血清； 置5ml塑料试管中，充氮、密封，于 -40℃保存备用。
在5ml棕色具塞玻璃离心管中，加入 0.25ml血清、1ml 10％邻苯三酚乙醇溶 液、0.5ml 60％KOH，用氮气将管内空 气置换，37℃水浴1h。
冷水浴3min后加入5％NaCl 1ml，己烷 /乙酸乙酯(9:1)3ml，用氮气将管内空 气置换，盖紧塞子，水平振荡器上振 荡5min(40次/min)；
β-胡萝卜素遇光和氧会被迅速破坏， 所以应临用新配，并注意避光保存。 样品的提取液比较稳定，可以隔夜 后进行分析。
五、思考题
1. 维生素A族维生素与能量代谢有关？
四、质量控制
1. 配制标准液时：
若有条件应对配制好的标准稀释液 维生素A、维生素E、β-胡萝卜素 200～600nm扫描，观察最大吸收峰 的波长。
如果所用HPLC仪能作波长变换，则 在测定组分的最大吸收波长下测定 可取得较高的灵敏度。
2. 吸取上清液时：
注意不可触及界面；
否则： 一方面会吸入水，影响分析和柱 的分离能力； 另一方面，界面上的脂肪层可能 会影响分析结果。
β-胡萝卜素以氯仿配制成不同浓 度的标准液，同样品一样处理。
分别以标准应用液浓度为横坐标， 峰面积为纵坐标，绘制工作曲线。
三、数据处理
将样品中三种待测组分平行测定的峰面 积均值分别代入各自的工作曲线，求得 测定样液中各自的含量。
再乘以样品处理时的稀释倍数，即得 到血清样品中维生素A、维生素 E及β胡萝卜素的含量。
高效液相色谱法测定血清中 维生素A、E、β-胡萝卜素
南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心
一、原理
本实验应用HPLC法测定人血清中维生 素A、维生素E及β-胡萝卜素。
一、原理
血清样品用有机溶剂处理、提取后经 HPLC色谱柱分离，根据保留时间和 峰面积(或峰高)与标准比较，便可定性 和定量。
二、操作方法
将全部己烷/乙酸乙酯层转移至含1ml 双蒸水的试管中，涡旋振荡器上振荡 10s；
精确吸取2ml已烷/乙酸乙酯层于另一 5ml棕色具塞玻璃离心管中，氮气吹干， 加入350μl甲醇，轻混至充分溶解，充 氮气置冰箱待检测。
2．工作曲线
分别取不同量的维生素A、维生素E的 标准液，以乙醇稀释混匀成不同浓度 的混合标准应用液，与样品同样处理。
3. 在测定中，可用标准血清进行质量
控制，保证测定结果的可靠性。
标准血清至少要在测定开始和结束 时各测定一次；
当样品较多时，可隔若干个样(如 12个)测定一次，最后取标准血清 测定的平均值即可。
4. 样品保存时间：
血清样品在本法的制备与贮藏温度下， 可保存6个月不发生变化。
维生素A和维生素E的无水乙醇贮备 液及应用液贮于冰箱(2~l0℃)，分别 可稳定2个星期和1个星期；