waters色谱柱相关知识
Waters高效液相色谱柱简单介绍与选择
Waters高效液相色谱柱简单介绍与选择2016-04-25 Bruce Lee生产高效液相色谱柱的厂家有很多，如Waters，Agilent，Phenomenex，Shimadzu，Thermo等，每家供应商又生产多个系列，导致市场上的液相色谱柱的可选择性极强。
目前实验室以及公司，企业使用最多的是Waters以及Agilent所生产的RP液相色谱柱。
Waters主要有Symmetry，Sunfire，XTerra，XBridge，XSelect，CORTECS以及Atlantis系列等，其详细分类以及键合相如下。
Figure 1 Waters Symmetry column familyFigure 2 Waters Sunfire column familySymmetry与Sunfire系列色谱柱使用高纯度硅胶（B型）作为固定相基质，摒除金属离子杂质对固定相Si-O键的促进水解作用，此外由于金属离子含量特别低，在对其表面键合选择性烃基或内嵌极性官能团烃基时，可通过配体添加量控制硅胶表面键合相的多少，因此其最大特点在于批次之间的重现性。
两个系列均采用封端技术，Sunfire C8与C18表面载碳量分别为12%和16%；SymmetryC8与C18载碳量均为12%，因此两个系列的C8色谱柱对于分析物的保留能力上没有本质的区别，而Sunfire C18色谱柱则相比Symmetry C18色谱柱，对于非极性比较大的分析物具有更强一些的保留能力，当然对于有机相的最低比例也相对比较高一些。
Symmetry C8 Prep与C18 Prep色谱柱的填料粒径为7 um，其设计用途为制备；Symmetry300 C18（孔径300埃，载碳量8.5%）与Symmetry300 C4（孔径300埃，载碳量2.8%）则是为生物大分子多肽以及蛋白质的分离，分析而设计。
Symmetry Shield RP 18内嵌极性官能团色谱柱，由于在靠近硅胶表面的极性官能团的存在，增加了硅胶表面的水分子浓度，改善了与水之间的浸润状况;因此可以允许使用极高水相作为分离，分析条件，而不会出现孔隙内去湿现象，对于分析碱性等大极性分析物而言，减少其保留能力，改善峰形，具有很高的方法重现性。
waters液相色谱柱的活化
waters液相色谱柱的活化
Waters液相色谱柱的活化方法如下：
1. 使用新的C18柱时，先用甲醇或乙腈冲洗20-30个柱体积，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）冲洗10个柱体积，然后再用流动相平衡10-30柱体积。
2. 若流动相含有缓冲盐，用跟流动相中盐相等比例的超纯水和有机相冲洗过渡，用量为20倍柱体积，再用含缓冲盐的流动相平衡色谱柱，用量为20倍柱体积或以上。
3. 当用HILIC模式时，新柱用50倍柱体积50/50乙腈/水活化平衡，然后再用流动相平衡20个柱体积。
另外，当出现拖尾或者柱压升高时，可以考虑将正向进口端拆开，并将筛板超声清洗干净，有时候效果很好。
若使用正相色谱柱时，用异丙醇或乙醇冲洗色谱柱50-100个柱体积。
以上信息仅供参考，具体操作建议咨询专业人士。
[课件]常用液相色谱柱原理及使用与维护保养PPT
![[课件]常用液相色谱柱原理及使用与维护保养PPT](https://img.taocdn.com/s3/m/0f2fca3cb7360b4c2e3f64f8.png)
能团与Si-OH 键合）→端基封口（对残余的Si-OH 用小分子的氯-甲基、氯乙基键合 ）→润湿混合（加乙醇等调匀，其配方各厂家均有专利保护）→ 装填（机械装填或手工装填，层层装填，压紧，润湿）→高压平衡（轴向加
压或径向加压，各厂家均有专利保护）→干燥（此步为关键工艺步骤，各厂
家均有专利保护）→削平→组件安装→预平衡→柱效测试流动相平衡→柱效 测试→封口→包装
小孔，多为聚四氟乙烯制成，用于固定筛板。
密封环：位于接头螺旋环内壁的弹性环，多为聚四氟乙烯制成， 用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封。
+ 1.3
液相色谱柱的分类与应用范围 分类方法很多，可按键合相类型、用途（分析 型与制备型）、基质种类等进行分类。 1.3.1硅胶基质柱（4大类）
目前，分析型液相色谱柱多为硅胶基质柱，细分为： 高纯硅胶柱：以高纯度硅烷化硅胶（Silica）为填料，应用范 围较广，但只能在PH2.0-7.5，小于60度的条件下使用。又由 于强极性硅羟基（Si-OH)的次级保留效应较强，所以应用受 到局限，已被键合相柱所取代。 反相硅胶柱：是以硅烷化硅胶为基质，表面键合弱极性官能 团的固定相。目前多用C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、 C6H5（phenyl，苯基）等。用于分离大多数有机化合物，应 用范围最广。
1.3.5.4其他无机物填料柱
如氧化铝、石墨化碳、氧化锆、硅藻土等，主要作制备色谱用。
1.4液相色谱柱制备工艺简述
不同品牌色谱柱制备工艺各异，但都可归纳为如下流程 （以硅胶柱为例）：
硅烷化硅胶制备（四乙氧基硅烷脱乙基与聚合）→Si-OH 基暴露（ 脱乙基， 置换成H）→海绵状多孔硅胶构造（物理匀质过程）→官能团键合（各种官
异构体；氧化铝柱刚性强，柱床稳定，可分离多种化合物且多
waters xbridge protein beh色谱柱使用说明
waters xbridge protein beh色谱柱使用说明1. 引言1.1 概述在生物医学研究和制药领域中，蛋白质是至关重要的研究对象。
为了更好地理解蛋白质的结构和功能，科学家们需要利用高效的色谱柱来进行分离和纯化。
Waters XBridge Protein BEH色谱柱作为一种先进的工具，能够提供快速、高效、稳定的蛋白质纯化解决方案。
1.2 文章结构本文将对Waters XBridge Protein BEH色谱柱进行详细介绍，并提供使用说明和操作技巧。
首先，我们将概述该色谱柱的基本情况，包括其结构和特点。
接着，我们将讨论该色谱柱的工作原理，并阐述其在不同应用领域中的优势和适用性。
然后，我们将详细介绍如何准备样品并装载到色谱柱中，以及如何设置合适的色谱条件来实现最佳分离效果。
最后，我们将介绍一些注意事项、常见问题解答以及安全须知与储存要求。
通过阅读本文，读者能够全面了解Waters XBridge Protein BEH色谱柱的使用方法，并能够在实验中取得准确可靠的结果。
1.3 目的本文旨在向用户提供关于Waters XBridge Protein BEH色谱柱的详细说明，帮助用户正确并高效地使用该色谱柱进行蛋白质纯化。
我们希望通过本文的阐述，读者能够深入了解该色谱柱的特点和应用领域，并能够根据具体实验需求，熟练掌握样品准备、色谱条件设置以及数据分析与结果解读等技巧，从而为自己的科研工作或制药生产提供有力支持。
2. Waters XBridge Protein BEH色谱柱2.1 色谱柱概述：Waters XBridge Protein BEH色谱柱是一种高性能液相色谱（HPLC）柱，主要用于蛋白质和肽段的分离和纯化。
该色谱柱具有独特的粒径和孔隙结构，能够提供出色的分离效果和样品回收率。
2.2 工作原理：Waters XBridge Protein BEH色谱柱采用亲水性强的氢化硅胶作为填料材料，通过调节流动相中溶剂成分和温度等条件，实现对不同蛋白质和肽段的选择性分离。
watershsst3色谱柱说明书
watershsst3色谱柱说明书Waters HSS T3色谱柱是一种高效液相色谱柱，被广泛应用于生命科学、制药、环境和食品分析等领域。
该柱具有优异的分离性能和稳定性，可用于分离复杂的混合物，提供准确和可靠的分析结果。
以下是关于Waters HSS T3色谱柱的详细说明：1. 柱材料：Waters HSS T3色谱柱采用高质量的硅胶材料制成，具有特殊的表面处理，能够提供优异的色谱性能和稳定性。
2. 柱尺寸：Waters HSS T3色谱柱的常见尺寸为4.6mm乘250mm，具有较大的分离能力和样品容量。
此外，还提供其他规格的色谱柱可供选择。
3. 分离性能：Waters HSS T3色谱柱具有极好的分离性能，可有效分离复杂样品中的成分。
其独特的柱底和柱壁结构可以增强样品和柱相之间的相互作用，提高分离效果。
4. 稳定性：Waters HSS T3色谱柱具有出色的稳定性和重现性，可持续运行大量样品分析而不产生漂移或降解。
柱底和柱壁的特殊表面处理使得该色谱柱不易受到污染和损害，有助于保持柱的使用寿命。
5. 应用范围：Waters HSS T3色谱柱广泛适用于各种样品类型的分析，包括有机化合物、天然产物、药物、代谢产物等。
它可用于定量和定性分析，以及结构鉴定和纯化工作。
6. 色谱条件：Waters HSS T3色谱柱适用于反相液相色谱和离子对色谱法。
在反相液相色谱中，可以使用不同的流动相和梯度条件来优化分离效果。
在离子对色谱中，可以添加离子对试剂来改变运行条件。
7. 包装和存储：Waters HSS T3色谱柱以高压不锈钢柱体包装，旨在保护柱底和柱壁免受损坏和污染。
柱体上标有批号和有效期，以便用户能够正确追踪使用日期和有效期限。
该色谱柱应存放在避光、干燥和温度控制的环境中，以确保其质量和性能。
总之，Waters HSS T3色谱柱是一种优质的色谱柱，具有卓越的分离性能和稳定性，适用于各种复杂样品的分析工作。
液相色谱柱使用原则和waters超高压柱特点
液相色谱柱使用原则和waters超高压柱特点1、何谓常规反相色谱柱？那些在硅胶或杂化基质颗粒上键合了如C18、C8、C4或苯基等键合相的色谱调料所装的色谱柱，按反相色谱条件进行操作和分离。
反相是液相色谱中最常使用的分离模式，而C18柱是最常使用的反相色谱柱之一。
2、新色谱柱开启和安装的推荐步骤：1、使用新鲜洁净的水与乙腈。
冲洗系统，确保系统干净，不含任何缓冲盐和污染物。
2、取用色谱柱时避免磕碰掉落。
3、将色谱柱入口端接到系统上，柱出口端先不要连接，色谱柱身上有箭头表明正确流向。
4、在0.1mL/min流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱，然后在2分钟内将流速升至0.5mL/min。
5、当溶剂均匀的从柱出口端流出，停流速，将色谱柱出口端接到系统检测器上（这样可以避免气泡进入检测系统，并且可快速达到基线平衡）。
6、重启流速，按照步骤4的方法逐渐提高流速，至常规分析时所使用的流速。
7、参考柱效测试报告中的方法，使用该流动相条件平衡色谱柱，通常需要使用5-10倍柱体积的流动相，直至压力与基线稳定。
8、测试柱效。
注：1、当使用2.1mm内径色谱柱时，建议优化系统以减少谱带展宽，包括：使用检测器微量流通池，减少进样器loop环体积，使用较小内径（如0.005或0.12mm）的系统管路。
确保管路与色谱柱连接恰当，无死体积。
2、当使用小颗粒填料（如2.5um）短柱进行高效快速分离时，需要考虑一下因素：1）、确保管路与色谱柱连接恰当、无死体积，尽量优化系统减少谱带展宽；2）、提高采样频率至10点/秒以上；3）、较小粒径的色谱柱产生的柱压较高，而较小粒径要达到最优色谱效率所需的线速度较高，请根据所用LC系统的实际情况条件流速；4）、可使用较高的柱温来补偿小颗粒造成的压力升高，例如40℃。
使用杂化颗粒反相色谱柱时，可使用45℃或者更高。
3、进行实际样品分析的推荐步骤：1、确保流动相洁净，每隔24-48小时就应新配水相流动相，并同时更换或仔细清洗流动相溶剂瓶，以避免流动相长菌。
waters色谱柱相关知识
流动相方面 除去微粒 纯度的要求 超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低 缓冲液的pH值，在填料的允许范围内 缓冲液（盐）的浓度 溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量 流动相对样品的溶解度 有机溶剂或水的比例
Good Column
Inject
用“5”法计算柱效
色谱柱的正确使用及操作
流动相的转换 特别是GPC柱 流速(压力)的变化幅度 温度的变化幅度 专用色谱柱∶样品及溶剂的要求
正确使用色谱柱（一）
样品方面 除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度 如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出 了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用
对HPLC柱填料的了解(五)
填料的端基封口 封口残余硅羟基 减少不可逆吸附或拖尾 增加碳含量（0.1% - 1%）
残基处理的效果
NovaPak C18
未封口 C18
① 抗坏血酸 ② 烟酰胺 ③ 对氨基苯甲酸 ④ 哌咯西叮 ⑤ 核黄素 ⑥ 苯酚 ⑦ 盐酸硫胺
对HPLC柱填料的了解（六）
硅胶的活性 主要影响碱性化合物的保留行为：k' 生产硅胶时处理温度不同，硅胶活性也不同 是选择性差异的主要来源 硅胶的杂质含量 重金属含量低，硅羟基活性小，拖尾减小 是色谱柱质量好坏的重要标志
加速色谱柱寿命试验： (pH 10 ，50 °C)
寿命 (小时)
Xterra: 快梯度分析
AU
0.00
0.10
0.20
Minutes
0.20
0.40
0.60
0.80
1.00
1.20
1.40
1.60
1.80
2.00
HPLC色谱柱介绍课件
Analyte
必须允许流动相进入内孔以 保证待分析和分离的化合物 能够和色谱填料有保留
©2014 Waters Corporation
12
键合方式：单点键合
O
OH
Si
O
+
O
H3C C C C C Si C C C C3 H
Cl C3 H
H3C
C
C
Si
C
O
O
Si O
C H3
O
C
C
C
C C H3
+ HCl
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20
对色谱柱填料的了解(二)
填料的端基封口 封口残余硅羟基 减少不可逆吸附或拖尾 增加碳含量（0.1% - 1%）
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21
残基处理的效果
① 抗坏血酸 ② 烟酰胺 ③ 对氨基苯甲酸 ④ 哌咯西叮 ⑤ 核黄素 ⑥ 苯酚 ⑦ 盐酸硫胺
硅 胶 的 溶 解 曲 线
1 2 3 4 5 6 7 8 9 p H
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27
硅胶表面键合相的水解（PH<2）
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O
OH
Si
O
+
O
H3C C C C C Si C C C C3 H
Cl C3 H
O
+ H3C
C
C
C
300 – 1,000 Å (30 -100 nm)
无孔填料
注意：孔径是分布值
Si-OH = 硅羟基 (Silanol)
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Waters紫外检测器及色谱柱技术参数
Waters紫外检测器及色谱柱技术参数
1紫外可见检测器（2489型）
1.1*波长、极性和灯源开关均可时间编程控制
1.2内置硝酸铒滤光片用于波长校准及校正，紫外光、可见光都可以校正。
用256.7nm、379.0nm、521.5nm及656.1nm共四个波长校正。
开机时
校准，随时可以进行校正
1.3*可变波长范围：190～700nm
1.4*检测通道：2个
1.5*光源：氘灯
1.6*波长准确度：±1nm
1.7*带宽：5nm
1.8*测量范围：0.0001～4.0000AUFS
1.9耐压：1000psi
1.10*基线噪音：±0.35x10-5AU，254nm在1mL/min（甲醇）
1.11基线噪音：双通道±1.0x10-5AU，230nm，280nm
1.12*漂移：1 x 10-4AU/hour
1.13*梯形狭缝的光路设计，从硬件上消除示差折光效应
1.14*具有操作面板，可以独立设定工作参数、显示运行状态
1.15*分析池：10mm池长
1.16*半制备流通池：3mm池长
2 色谱柱：C18色谱柱，4.6*150mm 1根，。
waters hss t3色谱柱说明书
waters hss t3色谱柱说明书摘要：一、Waters HSS T3 色谱柱简介二、Waters HSS T3 色谱柱的特点三、Waters HSS T3 色谱柱的应用范围四、Waters HSS T3 色谱柱的安装与使用五、Waters HSS T3 色谱柱的维护与保养正文：一、Waters HSS T3 色谱柱简介Waters HSS T3 色谱柱是一种高效、快速的液相色谱柱，由Waters 公司生产。
这款色谱柱采用了独特的HSS（High Speed Silica）技术，具有高柱效、高分辨率和快速分离等特点，广泛应用于药物分析、生物制药、环境监测等领域。
二、Waters HSS T3 色谱柱的特点1.高柱效：Waters HSS T3 色谱柱具有高柱效，可以提高分析速度和分离效果。
2.高分辨率：这款色谱柱的分辨率较高，能够对样品进行精细的分离和检测。
3.快速分离：Waters HSS T3 色谱柱采用了HSS 技术，可以实现快速分离，提高分析效率。
4.广泛的应用范围：这款色谱柱适用于多种样品的分析，包括药物分析、生物制药、环境监测等领域。
三、Waters HSS T3 色谱柱的应用范围Waters HSS T3 色谱柱主要用于药物分析、生物制药、环境监测等领域，可以对各种样品进行高效、快速的分离和检测。
四、Waters HSS T3 色谱柱的安装与使用1.安装：在安装Waters HSS T3 色谱柱时，需要先将色谱柱的两端用封口胶封好，然后将其插入色谱仪的进样口和检测器接口。
2.使用：使用Waters HSS T3 色谱柱进行分析时，需要按照以下步骤操作：（1）样品准备：将待分析的样品进行预处理，使其符合色谱分析的要求。
（2）样品进样：将样品溶液通过进样器注入色谱柱中。
（3）色谱分离：打开色谱仪的泵，使样品在色谱柱中进行分离。
（4）检测：分离后的样品通过检测器进行检测，得到色谱图。
watersxbridge苯基柱使用说明
watersxbridge苯基柱使用说明【原创版】目录1.介绍 watersxbridge 苯基柱2.详细说明使用步骤3.列举注意事项4.总结正文watersxbridge 苯基柱是一种高效液相色谱柱，适用于各种复杂样品的分析。
在使用 watersxbridge 苯基柱进行分析时，需要遵循一定的步骤和注意事项，以确保分析结果的准确性和柱子的使用寿命。
首先，需要对 watersxbridge 苯基柱进行安装。
在安装过程中，需要注意以下几点：1.确保柱子在装填过程中不受损。
2.柱子两端需要使用封口胶进行密封，以防止样品流失。
3.柱子安装完成后，需要进行检查，确认安装无误。
接下来，进行样品的进样。
进样时，需要注意以下几点：1.样品需要按照一定的比例进行稀释，以避免柱子堵塞。
2.进样量需要控制在一定范围内，过多或过少都会影响分析结果。
3.进样时需要确保样品的 pH 值在适宜范围内，以避免对柱子造成损害。
在样品分析过程中，需要注意以下几点：1.流动相的选择应根据样品的性质进行选择，以保证样品在柱子上的分离效果。
2.流速的控制应保持在适宜范围内，以保证样品在柱子上的分离效果和柱子的使用寿命。
3.检测器的选择应根据样品的性质进行选择，以保证检测的灵敏度和准确性。
最后，在使用完毕后，需要对 watersxbridge 苯基柱进行清洗和维护。
清洗时，需要注意以下几点：1.使用适宜的溶剂进行清洗，以去除残留的样品和流动相。
2.清洗时需要避免使用具有强腐蚀性的溶剂，以保护柱子的使用寿命。
3.清洗完成后，需要将柱子存放在适宜的环境中，以延长柱子的使用寿命。
总之，在使用 watersxbridge 苯基柱进行分析时，需要遵循一定的步骤和注意事项，以确保分析结果的准确性和柱子的使用寿命。
Waters HPLC色谱柱介绍
如何选择理想的 HPLC分析柱 HPLC分析柱©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation1如何看待色谱柱？色谱柱是液相色谱工作的最重要又最常使用的工具对工具了解越多，越有可能尽早选对合适的工具，使工作开展的更顺 利工欲善其事，必先利其器！©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation2沃特世价值所在： 技术能力+品质保障+专业服务Better traceability & control of the entire processWaters©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011• Manufactures under cGMP, ISO 9001 and ISO 13485 guidelines • Registered with FDA as a medical device manufacturer©2011 Waters Corporation 3概要如何认识色谱柱？ 如何认识色谱柱？ 沃特世色谱柱： 沃特世色谱柱：为色谱工作者的任务而设计 XBridge Atlantis SunFire XSelect UPLC—HPLC方法转换 HPLC—OBD 制备柱无优放大©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation4沃特世色谱柱： 专为色谱分析工作者所需而设计宽pH范围、耐受性最强、最通用的色谱柱增强极性化合物保留的专用硅胶色谱柱高容量、峰形柱效最优化的通用硅胶色谱柱宽选择性覆盖、LCMS方法开发的首选色谱柱©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation5应对耐受性、通用性的需求色谱工作者的需求： 工作者的需求：方法在高pH条件下！！ 方法在较高温度条件下！！ 耐受性？！ 通用性？！2.5, 3.5, 5, 10 µm柱效？！ 样品复杂难以分离？！ 需要各种键合相？ 需要各种柱规格？©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation6高pH耐受性对碱性化合物的分析特别有利 —分离选择性、方法耐受性与柱使用寿命©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation7XBridge： 基于第二代杂化颗粒技术BEH (Bridged Ethylene Hybrid)硅氧骨架中嵌入亚乙基桥- pH范围耐受更宽 - 机械强度更高 - 柱效佳U.S. Patent No. 6,686,035 B2©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011Anal. Chem. 2003, 75, 6781-6788©2011 Waters Corporation8增加化合物的保留并提高灵敏度： High pH Mobile phase2HIGH pH0.1% NH4OH3 6 1 4Morphine Morphine-3ß–o-glucuronide 10-hydroxymorphine5% 00.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80LOW pH0.1% HCOOHCompounds 1. % 10-hydroxymorphineMorphine-6ß–o-glucuronide6 4,5 2 1 32. 3.Morphine-3β-D-glucuronide Morphine-6β-D-glucuronide4. 5. 6. Morphine Morphine N-oxide 6-acetylmorphineMorphine N-oxide0 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©20116-acetylmorphineMinutes©2011 Waters Corporation9XBridge —耐受性最强、最为广泛适用2.5, 3.5, 5, 10 µm 1.7 µm耐受性最强、最为广泛适 广泛适用的色谱柱第二代杂化颗粒技术 无以伦比的流动相pH、温度和压力的耐受范围 达到前所未有的柱效、峰形和稳定性水平 广泛的键合相选择，配合各种分析物所需 齐全的柱规格供应，满足各种规模需要©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation103NH 3CH +17通过极性嵌入基团保留水 可完全兼容100%水相屏蔽硅醇基，对碱性化合物峰形更佳 提供与C18不同的选择性pH 7.0痢特灵(Furazolidone)原料药的杂质分析实例Ligand type:Trifunctional AmideParticle size:1.7, 3.5 µm Ligand density:7.5 µmol/m 2Carbon load:12% Endcap style:NonepH range:2-11Ligand type:UnbondedParticle size:1.7, 2.5, 3.5, 5 µm Ligand density:— Carbon load:— Endcap style:— pH range:1-9Minutes123321=0.26=0.25Reversed-PhaseXBridge C 18HILICXBridge HILIC1. 6-acetyl morphineHILIC 可以提供和反相不同的分离选择性应用于生物医药行业的：—肽的反相分析与分离纯化—小蛋白药物的反相分析—寡核苷酸的离子对反相分析与分离纯化杂化颗粒，无以伦比的流动相pH与温度的耐受性完整的方法与应用资料，整体方案专用柱，经肽谱、蛋白混标或寡核苷酸阶梯混标质控确保批次重现性工作者的需求：：解决色谱工作者的需求2.5,3.5, 5, 10 µm 适用于高pH方法！！耐受较高温度条件！！耐受性极佳！通用性好！柱效高！多种键合相、多种柱规格适应各种项目需要！色谱工作者的需求和问题：越来越多的极性化合物项目！ 极性化合物的保留难？！离子对试剂应用不便！峰形？！柱耐受性？！1. Thiourea2. 5-Fluorocytosine (B)3. Adenine (B)4. Guanosine-5'-monophosphate5. Thymine注：所示色谱柱性能比较情况，与具体操作条件相关，并不代表所有应用情况（法律申明）增强极性化合物保留的专用色谱柱—首选Atlantis T3反相保留反相保留极性化合物首选：提高保留，避免使用离子对试剂 提供pH 2-8全范围的完美峰形 低pH 条件下的耐受性强，柱寿命好积极应对色谱工作者的问题：增强对极性化合物的保留！ 简便的反相条件！ 峰形佳！ 柱耐受性好！ 广受认可与赞誉！色谱工作者的需求和问题：柱效？！柱容量？！载样量高？！中-低pH条件下碱性化合物拖尾严重？！ 样品杂质或相关物质分析及分离？！51V o 234Symmetry ®C 185 µm USP T f = 1.69N = 696151V o234以Amitriptyline （峰5）计算拖尾因子USP T f pH7条件下SunFire™C 185 µm USP T f = 1.26N = 8203MinutesZorbax®SB C18Luna®C18(2)SunFire™C 18Time (minutes)246810Conditions : 3 µm, 3.0 x 150 mm 28:72 乙腈/ 20 mM 甲酸; 0.7 mL/min; 30 °CSN NNOHCl在方法开发过程中，峰拖尾会对任何特定含量方法影响其分离度与灵敏度。
液相色谱柱使用原则和waters 超高压柱特点
1、何谓常规反相色谱柱？那些在硅胶或杂化基质颗粒上键合了如C18、C8、C4或苯基等键合相的色谱调料所装的色谱柱，按反相色谱条件进行操作和分离。
反相是液相色谱中最常使用的分离模式，而C18柱是最常使用的反相色谱柱之一。
2、新色谱柱开启和安装的推荐步骤：1、使用新鲜洁净的水与乙腈。
冲洗系统，确保系统干净，不含任何缓冲盐和污染物。
2、取用色谱柱时避免磕碰掉落。
3、将色谱柱入口端接到系统上，柱出口端先不要连接，色谱柱身上有箭头表明正确流向。
4、在0.1mL/min流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱，然后在2分钟内将流速升至0.5mL/min。
5、当溶剂均匀的从柱出口端流出，停流速，将色谱柱出口端接到系统检测器上（这样可以避免气泡进入检测系统，并且可快速达到基线平衡）。
6、重启流速，按照步骤4的方法逐渐提高流速，至常规分析时所使用的流速。
7、参考柱效测试报告中的方法，使用该流动相条件平衡色谱柱，通常需要使用5-10倍柱体积的流动相，直至压力与基线稳定。
8、测试柱效。
注：1、当使用2.1mm内径色谱柱时，建议优化系统以减少谱带展宽，包括：使用检测器微量流通池，减少进样器loop环体积，使用较小内径（如0.005或0.12mm）的系统管路。
确保管路与色谱柱连接恰当，无死体积。
2、当使用小颗粒填料（如2.5um）短柱进行高效快速分离时，需要考虑一下因素：1）、确保管路与色谱柱连接恰当、无死体积，尽量优化系统减少谱带展宽；2）、提高采样频率至10点/秒以上；3）、较小粒径的色谱柱产生的柱压较高，而较小粒径要达到最优色谱效率所需的线速度较高，请根据所用LC系统的实际情况条件流速；4）、可使用较高的柱温来补偿小颗粒造成的压力升高，例如40℃。
使用杂化颗粒反相色谱柱时，可使用45℃或者更高。
3、进行实际样品分析的推荐步骤：1、确保流动相洁净，每隔24-48小时就应新配水相流动相，并同时更换或仔细清洗流动相溶剂瓶，以避免流动相长菌。
waters维护知识
❀ Spherisorb品牌的色谱柱及Phase Separations 公司的其他品牌色谱柱用的是“Parker-style” 标准，其stop-depth为0.090英吋
样品预处理的重要性
❀ 占样品分析时间的比例最大
✎ 样品预处理所用时间远大于色谱分离的时间
❀ 占分析消耗总成本的比重最大
✎ 消耗大量的溶剂及其它化学品
❀ 实验的重复性及准确性最差的环节
✎ 影响实验结果好坏的最重要因素
ë 是决定性的步骤
样品预处理的过程
第一步
第二步
按样品的物理 性质差异，从基质 中分离出要分析的 组份
✎ 流动相:乙腈/水=60:40;流速:1ml/min ✎ 样品:50mg Acenaphthene(二氢苊)溶于100ml乙腈,
加入600μl丙酮 ✎ 进样量5μl ✎ 检测波长:254nm
计算色谱柱的柱效 N
理论塔板数计算公式：
N = σ çæ V1 ÷ö2
èW ø
W
σ
方法
Wtan
16 切线法
Wh
5.54 半峰高
W3σ
9
3σ
W4σ
16
4σ
W5σ
25
5σ
用“切线”法计算柱效
N4σ
=
16êëé108..8700
ù2 úû
= 8742 plates
VR = 18.70
VR = 16.63
N4σ
=
16êëé106..6683
ù úû
2
= 9569 plates
沃特世液相色谱柱及消耗品简要指南
英文回答：The Waters HPLC column is a sophisticated and advanced liquid chromatography apparatus, specifically engineered to facilitate the separation and analysis of a diverse spectrum ofpounds within various samples. Crafted from top-tier materials, it is adaptable to a wide array of solvents and buffers. This column is available in a variety of dimensions and particle sizes to cater to the specific demands of a plethora of applications. Installation and operation are seamless, with the added benefit of ensuring exceptional resolution and reproducibility, thereby engendering accurate and dependable results. It is the epitome of excellence for employment in pharmaceutical, environmental, food and beverage sectors, as well as various other industries, for both routine analysis and research endeavors.Waters HPLC柱是一个精密和先进的液相色谱仪，专门设计用于促进各种样品中各种磅的分离和分析。
沃特斯液相色谱柱型号
沃特斯液相色谱柱型号沃特斯（Waters）公司是世界领先的分析测试仪器和化学试剂供应商，其液相色谱（HPLC）柱广泛应用于生命科学、化学、医药等领域的研究和生产中，具有高效、高精度、高灵敏度、高重复性等优点，成为现代科学技术的重要组成部分。
沃特斯液相色谱柱型号是指沃特斯公司生产的液相色谱柱产品的唯一标识符，它包含了柱直径、柱长度、填充材料、填充粒径和填充密度等信息，可以为用户量身定制和推荐最适宜的柱型，满足不同实验需求和分析目的。
沃特斯公司的液相色谱柱型号分为以下几类：1. Symmetry列：Symmetry列是沃特斯公司最早推出的柱系列之一，其特点是高效、高灵敏度、高可重复性和高选择性。
Symmetry列包括Symmetry C18、SymmetryC8、Symmetry Shield RP18等柱型。
2. XBridge列：XBridge列是沃特斯公司全新推出的柱系列，其特点是高效、高分辨率、高选择性、高稳定性和低背景噪声。
XBridge列包括XBridge C18、XBridge C8、XBridge Shield RP18等柱型。
3. Atlantis列：Atlantis列是沃特斯公司推出的一系列针对生命科学应用的柱系列，其特点是适用于多种样品类型和复杂样品基质，并具有高效、高灵敏度、高选择性等优点。
Atlantis列包括Atlantis dC18、AtlantisT3、Atlantis HILIC等柱型。
4. Acquity UPLC BEH列：Acquity UPLC BEH列是沃特斯公司研发的一系列超高效液相色谱柱，其互相作用特性高度统一，电荷配属一致，优化了固定相的表面性质，让分析分离更加可靠。
Acquity UPLC BEH列包括BEHC18、BEH Phenyl、BEH Shield RP18等柱型。
5. Nova-Pak列：Nova-Pak列是沃特斯公司历史上推出的一系列柱，可用于分离小分子化合物和大分子生物分子。
waters色谱柱-XTerra色谱柱
基于第一代杂化颗粒技术的XTerra®系列高效液相色谱柱, 可以让色谱工作者在药物发现，方法开发和纯化分离领域使用高pH值流动相。
∙XTerra颗粒能耐受二甲基亚砜（DMSO）溶剂，可延长高通量药物发现研究中色谱柱的寿命。
∙宽pH 范围使得方法开发研究人员在所需的pH值条件下操作，以获得最佳选择性。
∙高载荷量使得分离纯化的科学家在高pH值条件下，在纯化碱性化合物时，一次进样量增加六十倍。
XTerra 色谱柱特性键合相类型颗粒状态孔径(s) (µm)碳载量 (Å)端基(%)是否端基封尾XTerra MS C18 球形 2.5, 3.5, 5, 10 µm 125 15.5 是XTerra MS C8 球形 2.5, 3.5, 5, 10 µm 125 12 是XTerra RP18 球形 3.5, 5, 10 µm 125 15是XTerra RP8 球形 3.5, 5, 10 µm 125 13.5 是XTerra Phenyl 球形 3.5, 5 µm 125 12 是[ 杂化颗粒技术] 药物发现方法开发分离和纯化XTerra®色谱柱将硅胶和聚合物的最优特性与革命性的杂化颗粒专利*技术相结合，在合成中，使用甲基取代了部分硅羟基。
疏水性Si-C基团分布在颗粒骨架结构中，最后获得耐用的杂化（无机/有机）颗粒，可在如下条件操作:∙高速∙高温∙高pH值.经过键合和封端处理后，填料表面的残留硅羟基减少了33%，因此XTerra色谱柱分析碱性化合物时可得到尖锐对称的色谱峰，从而获得更好的分离。
*美国专利号6,686,035 B2不同键合相的XTerra色谱柱对分离选择性的影响不同键合相的XTerra色谱柱是方法开发策略的关键组成部分。
时获得更快的分析速度。
更快的流速和更短的色谱柱允许更短的梯度运行时间，却不会降低峰容量。
waters液相色谱柱 结构
水相色谱柱（Waters liquid chromatography column）是一种用于分离化合物的关键仪器。
它们由高质量的材料制成，具有精确的内部结构和精确的尺寸。
水相色谱柱可以用于分离和分析各种化合物，广泛应用于生物化学、制药、环境科学和食品安全等领域。
在本文中，我们将探讨Waters液相色谱柱的结构及其在分析化学中的重要性。
一、Waters液相色谱柱的结构Waters液相色谱柱通常由三部分组成：1. 色谱柱外壳色谱柱外壳通常由不锈钢或其他耐腐蚀材料制成，具有高度的耐压性和耐腐蚀性。
外壳的设计旨在确保色谱柱稳定性和安全性，同时可以容纳色谱填料，并具有进样口和出样口等连接部件。
2. 色谱填料色谱填料是色谱柱的核心部分，一般由多孔陶瓷或有机硅材料制成。
填料的种类和粒径大小会影响色谱柱的分离效果和耐久性。
Waters提供各种类型和规格的色谱填料，以满足不同应用领域的需求。
3. 色谱柱连接件色谱柱连接件是色谱柱的重要组成部分，包括进样口、出样口和连接管道等。
这些连接件通常由高强度的不锈钢或惰性材料制成，以确保色谱分离过程的顺利进行。
二、Waters液相色谱柱在分析化学中的重要性1. 分离和提纯化合物Waters液相色谱柱可以将混合物中的化合物分离开，从而实现对目标化合物的提纯和分析。
在制药和生物化学领域，色谱柱的分离效果直接影响到最终产品的质量和纯度。
2. 分析化合物结构通过调整色谱柱的填料材料和粒径大小，可以实现对各种化合物结构的精确分析。
Waters的色谱柱具有高分离效率和分辨率，能够准确分析复杂混合物中的化合物结构。
3. 色谱柱的选择性Waters提供多种类型和规格的色谱柱，以满足不同化合物和分析方法的需求。
色谱柱的选择性对分析结果的准确性和可靠性有重要影响。
4. 持久稳定性Waters液相色谱柱具有优异的持久稳定性和耐久性，能够在长时间内保持稳定的分离效果。
这对于长时间运行的分析方法和自动化分析系统尤为重要。
waters hss t3色谱柱说明书
waters hss t3色谱柱说明书全文共四篇示例，供您参考第一篇示例：一、引言色谱柱是液相色谱技术中至关重要的部分，它直接影响到色谱分离的效果与结果。
Waters HSS T3色谱柱作为Waters公司的一款重要产品，具有高效分离、优异耐久性和广泛适用性等特点，受到了广泛的关注和应用。
本文将详细介绍Waters HSS T3色谱柱的特点、使用方法以及注意事项，希望能够帮助用户更好地了解和使用该产品。
二、产品特点1. 高效分离：Waters HSS T3色谱柱采用特殊的填料材料和粒径分布，具有优异的分离能力，能够有效解决样品分析中的复杂性和交叉干扰问题。
2. 广泛适用：该色谱柱适用于多种样品类型的分离，包括有机物、药物、生物样品等，具有很强的通用性。
3. 耐久稳定：Waters HSS T3色谱柱具有良好的耐久性和稳定性，能够承受高压和多次重复使用，保证分析结果的可靠性。
4. 高分辨率：由于HSS T3色谱柱的独特设计和材料特性，使得其在保证分离效果的能够提供高分辨率的分析结果，有利于样品成分的准确检测和定量分析。
5. 良好的再生性：Waters HSS T3色谱柱在适当条件下具有良好的再生性能，可以反复使用，延长色谱柱的使用寿命，降低分析成本。
三、使用方法1. 准备工作：在使用Waters HSS T3色谱柱前，应先进行适当的准备工作，包括浸泡、平衡和洗脱等步骤，以确保色谱柱内部的填料材料和介质处于最佳状态。
2. 样品预处理：对于不同类型的样品，需进行相应的预处理工作，如溶解、过滤、稀释等，以确保样品的纯度和适用性，避免对色谱柱造成不必要的损坏或污染。
3. 流动相选择：根据样品类型及分析要求，选择合适的流动相，并根据需要进行适当的调节和混合，以保证在色谱分离过程中的稳定性和有效性。
4. 良好的保养：在使用完成后，应及时对色谱柱进行适当的保养和再生，包括冲洗、干燥、存放等步骤，以保证色谱柱的长期稳定性和再生性能。
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色谱柱化学及外形结构的关系
液 相 色 谱 柱
填料 柱管
颗 粒 表 面 性 质
颗 粒 度 长 度 径 内 料 材
化 学 性 质 ∶ k ， 分 辨 率
a
机 械 因 素 ∶
N
寿 命 ， 柱 效 ， 速 度 ， 溶 剂 消 耗
对HPLC柱的了解
理 论 塔 板 数 (N), 容 量 因 子 (K’), 选 择 性 系 数 (a),其影响因素有∶ N：受平均颗粒度及颗粒度分布的影响,颗 粒度越小,N越高 a：受填料表面化学性质对色谱柱的影响, 不同键合相对不同种类样品分离不同 K’ ：受键合相表面含碳量的影响 , 含碳量 高 时保留时间长
Waters特殊应用的色谱柱(3)
Waters生命科学专用柱(1)
蛋白，多肽的分析和提纯
Protein-Pak系列凝胶柱
Protein-Pak系列离子交换柱
– 弱阴离子/ DEAE 弱阳离子/ CM – 强阴离子/ Q 强阳离子/ SP
疏水回受柱 亲合色谱柱 反相柱
DNA分析，同蛋白分析相近，但有些专用柱
XTerra™ MS C18 C18-Silica A C18-Silica B C18-Silica C C18-Silica D C18-Silica E C18-Silica F C18-Silica G
0
6
12
18
24
30
36
42
寿命 (小时)
Xterra: 快梯度分析
0.20
AU0.10
Waters特殊应用的色谱柱(4)
Waters生命科学专用柱(2)
糖蛋白的寡聚糖分析及纯化
离子交换柱(酸性)，Glyco-Pak
DEAE 分配柱(中性)，Glyco-Pak N (7.8×300mm) Carbohydrate Analysis
儿茶酚胺分析柱
Resolve
C18 (传统方法)、Symmetry C8
Waters色谱柱的内径
分析柱：Waters Spherisorb及其它公司品牌的 色谱柱多为 4.6mm 内径。 Waters 传统品牌的分 析柱以3.9mm内径为主，比一般分析柱(4.6mm) 细，因此： 相对灵敏度高 省溶剂，可用相对较低的流速 同样的流速下，柱压较高(高效柱尤为明显) 注意在用文献方法时转换流速 , 即 : 降低流速 , 以 保持线速度相同。
99.8 %
99.6 %
Waters 21,379
超越极限：全新Xterra色谱柱
集硅胶与聚合物基质填料的优点为一体,突破常规 高效色谱柱的极限 高效、高速分离
不仅能够使用极小粒径的填料以进行高分辨及快
速分析，而且允许在高温下进行分离
峰形优异 --对碱性化合物尤其如此 pH范围可与聚合物基质色谱柱相比
NovaPak C18 Styragel HR 100A及500A柱有效地分离。
胆甾醇及未皂化的油中的抗氧剂的分析
离子排斥类型色谱柱，用于有机酸，醇和碳水化合 物类的分析，适合于分析单糖类、有机酸或糖酸 离子排斥及反相混合类型的色谱柱，可测定葡萄酒 、啤酒或其他饮料中的乙醇及有机酸的种类及含量， 以确定其香型
氨基酸分析柱
离子交换柱
反相柱：Pico-Tag方法，AccQ-Tag方法
液相色谱实用技术（二）
色谱柱的使用及保养
色谱柱与仪器的联接
不同公司的色谱柱接头不同。处理不当时,会造 成：
色谱峰展宽(死体积)致使柱效下降或渗漏
解决办法∶
自制相应的转换接头 使用“通用”型接头（锥箍及螺母）
氨基类型柱
分析单糖、双糖及三糖等多糖的分析，最大到DP10。用途较 为广泛，主要用于食品中糖的分析。
反相类型柱 硅胶类型柱 体积排除(凝胶/GPC)类型柱
Waters特殊应用的色谱柱(2)
食品中常见有机物的分析
游离脂肪酸(Free Fatty Acid)分析 甘油三酯及胆甾醇(俗称胆固醇)的分析
C%
19 17 15 12 12 11 11 10 7
k'苊 (50/50的乙腈/水)
17 15.7 10.3 12.5 12.4 11.3 12.0 7.9 5.5
对HPLC柱填料的了解(五)
填料的端基封口
封口残余硅羟基 减少不可逆吸附或拖尾 增加碳含量（0.1% - 1%）
残基处理的效果
对HPLC柱填料的了解（二）
平均孔径/孔体积 孔径/孔体积分布
大的孔径可分析高分 子量的分子
对HPLC柱填料的了解（三）
键合相化学
影响化合物的分离度：a 不同键合相对不同种类的化合物分离不同 可能导致色谱的分离机理不同 如：C18、C8、CN
硅胶表面及键合相
H C 3 C H 2 H C 2 C H 2 H C 2 C H 2 H C 2 H C 3 C H 2 H C 2 C H 2 H C 2 H C 3 H C 3 C H 2 C H 2 H C 2 H C 2 C H 2
键合相色谱柱
以硅胶为基质，通过化学键合方式把碳十八、碳 八、胺基等基团联在基质上，作为固定相。 优点∶
固定相稳定，不易流失 应用广泛，可使用多种溶剂 消除硅羟基的不良影响
缺点∶
pH值不能小于3 同样填料，各种牌号色谱柱不尽相同
对HPLC柱填料的了解（四）
含碳量
含碳量越高，k'值越大（固定相传质效应增加）
① 抗坏血酸 ② 烟酰胺 ③ 对氨基苯甲酸 ④ 哌咯西叮 ⑤ 核黄素 ⑥ 苯酚 ⑦ 盐酸硫胺
NovaPak C18
未封口 C18
对HPLC柱填料的了解（六）
硅胶的活性
主要影响碱性化合物的保留行为：k' 生产硅胶时处理温度不同，硅胶活性也不同 是选择性差异的主要来源
硅胶的杂质含量
重金属含量低，硅羟基活性小，拖尾减小 是色谱柱质量好坏的重要标志
这种锥箍在不锈钢管上是活动的，即 stop-depth 的长度 可调。因此可以换接不同的色谱系统及色谱柱。从 Waters Phase Separations 公司能得到一些 PEEK工程塑 料的接头,可用在各种类型的色谱柱上。
2 1 3
C18-Silica
10 20
USP T =2.28
4 5
0
Time (min)
30
Alden, Iraneta
宽 pH 范围
在pH 使pH
1-12范围内保持稳定
成为改变选择性的有力工具
使可在非离子状态下进行分析
碱性物质的稳定保留
加速色谱柱寿命试验： (pH 10 ，50 °C)
0.00
0.20
0.40
0.60
0.80
1.00
1.20
1.40
1.60
1.80
2.00
2.20
2.40
Minutes
Waters特殊应用的色谱柱(1)
糖及其它碳水化合物的分析
离子交换柱(钙基/Ca)
用于单糖、双糖及糖醇等低分子量的糖、及乙醇等的分析。 主要用于药厂维生素C的原料分析(sorbitol/mannitol-山梨 醇/甘露醇)，酒厂(葡萄酒、啤酒等)的糖及乙醇含量的分析。 柱温~90℃，要求有柱温箱。对流动相(水)的要求较高，要求 用户另置超纯水系统。
对HPLC柱填料的了解（七）
填料的稳定性
硅胶填料 pH：2-8
聚合物填料
硅 胶 的 溶 解 曲 线
pH：2-12 pH值小于2时 键合相水解
1 2 3 4 5 6 7 8 9 p H
填料基质物理性质的影响
所有C18柱都是相同的吗? 填料基质的物理性质对色谱柱的影响
平均孔径及其分布∶影响被分析样品的分子量，大孔径的可 分析高分子量样品 平均孔体积及其分布∶影响同孔径 含碳量∶影响化合物的保留时间，高含碳量保留时间长 填料的端基封口 ∶主要影响碱性化合物的峰形，未封口会使 碱性化合物拖尾 硅胶的活性 ∶ 主要影响碱性化合物的保留行为： K’ ，高活 性的K’大 硅胶的杂质含量∶更苛刻条件下的碱性化合物峰形
C1 C4 C6 C8 C18 Phenyl CN NH2
mBandaPak
Resolve Nova-Pak Delta-Pak Symmetry Spherisorb
Waters不同品牌的色谱柱
m-BondaPak
文献背景强, 是工业标准 平均孔径125Å，10mm高活性、无定形硅胶 中等疏水性表面，端基封口。有独特选择性
Nova-Pak
平均孔径60Å，4mm高韧度低活性球形硅胶 低酸性，高疏水性, 极好的端基封口 有利于小分子物质的分析
Waters不同品牌的色谱柱
Resolve
平均孔径90Å，5/10 mm低活性硅胶 非常高的疏水性, 无端基封口 有利于低保留的中性及酸性化合物分离
C H 2 H C 2
H C 2
C H C H 2 2 C H 2 H C H C 2 2 H C 2
C H C H 2 2 C H C H C H C H 2 2 3 3 H C H C 3 3 H C H C C H H C H C C Hi 3 3 3 3 3 C H C HS C H C H i 3 S S i 3 S i 3 S i 3 i 3 S H H H H H H O H O O O O O O O O O O O O S i S i S i i S i i S i S S i S i S i S i S O S i O O O O O O O O O O O O O O O O O O O O O O