实验五_激素对血糖浓度的影响

六、注意事项
1.采血时用耳缘静脉取血，注意安全，防止动物抓伤。 采集时要边采集边混匀。
2.准确吸取0.2ml的全血。 3.采血后要立即制备去蛋白血滤液。 4.测定管分胰岛素组和肾上腺素组，应同时测定，比
较血糖的变化时才有可比性。比色测定应同时进行。
知识回顾 Knowledge Review
实验五 激素对血糖浓度的影响
一、实验目的
1.掌握GOD-POD法测定血糖的原理及方法。 2.观察胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响。 3.了解家兔耳缘静脉取血的方法。
二、实验原理
1.血糖是指血液中的葡萄糖。 人体生理血糖水平维持在3.89~6.11mol/l。
2.血糖的来源与去路
3.血糖的激素调节
7.GOD-POD法测血糖：按下表操作
加入物(ml) 去蛋白血滤液
测定管 (注射前)
0.5
测定管 (注射后)
0.5
标准管 –
空白管 –
葡萄糖标准应用液
–
–
0.5
–
蛋白沉淀剂
–
–
–
0.5
酶酚混合试剂
3.0
3.0
3.0
3.0
混匀，置37℃水浴15min，调节波长505nm，以空白管调零，分别读取 A测、A标。
过氧化物酶
（POD）
H2O ＋红色醌类化合物
505nm
相对血糖浓度
光吸收法测定
7.朗伯-比尔定律
当一束平行的单色光通过均匀、无散射的溶液时， 在光强度、温度等条件不变的情况下，溶液吸光度 与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。
Ａ=ＫＣＬ
标准管法测定未知样Hale Waihona Puke Baidu含量
A标=KC标L A测=KC测L
C测=
A测 A标
2.制备抗凝管：在洁净、干燥的试管中放入一小勺抗凝剂（草 酸钠）。
3.注射前取血：一般以耳缘静脉取血，拔毛，用乙醇擦洗，使 血管充血（弹动几下），在耳缘静脉外侧远心端用三棱针扎 破放血，将血液滴入抗凝管中，约取1~2ml，边收集边混匀， 以防血液凝固。取血后用干棉球压迫血管止血。
4.注射激素：取血后，一只注射胰岛素，0.75U/kg，60min。
科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些 药物的研究中，也涉及血糖的测定。
5.血糖测定的常用方法
无机化学法： Folin-Wu法
测定 方法
有机化学法：邻甲苯胺法
酶法：葡萄糖氧化酶法
6.GOD-POD法原理
葡萄糖氧化酶
（1）葡萄糖＋O2＋H2O （GOD） 葡萄糖酸＋H2O2
（2）4-氨基安替吡啉＋苯酚＋H2O2
度值。
三、主要仪器与试剂
试剂：胰岛素，肾上腺素 酒精，草酸钠，蛋白沉淀剂 酶酚混合试剂，苯甲酸溶液 葡萄糖标准贮存液（100mmol/L） 葡萄糖标准应用液（5mmol/L）
四、实验操作
1.准备：正常家兔两只，实验前预先饥饿16h，称体重,并记录 （kg）。兔子抓取方法：一手抓取颈背部皮肤，另一只手托臀部。
读取6个A值并记录：A肾前、A肾后、A标 A胰前、A胰后、A标
五、结果与分析
按下式分别计算注射胰岛素或肾上腺素前、后血糖浓度：
A测
C测＝
×C标（5 mmol／L ）
A标
5 mmol／L为葡萄糖标准应用液的浓度值。
通过计算比较一下家兔注射前后血糖浓度的变化情况。
正常人空腹血糖值：3.89～6.11 mmol／L
×C标
722G型分光光度计的使用
1. 接通电源，打开开关，调整波长。 2. 比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度
计中，注意：加入样品量不超过比色杯体积的3/4。 3. 调模式为“T（透射比）”，对空白对照进行调
“0”（开盖）和调“100”（闭盖）。 4. 调模式为“A（吸光度）”，测定待测样品的吸光
另一只注射肾上腺素，0.5mg/kg，30min。
注射方法：皮下注射。肚皮朝上，掂起皮肤，刺入皮下有落空感，回抽 无血，缓慢注入激素。
5.制去蛋白血滤液：这是注射前的血液。
制备方法：蛋白沉淀剂4ml＋全血0.2ml，混匀，室温放置7 分钟后，在漏斗上过滤，取滤液，标记为注射前的去蛋白血 滤液。
6.注射后取血并制备血滤液：方法同前，选择另一只耳朵，注 意做好标记。注射胰岛素的家兔，取血后立即腹腔或皮下注 射25%葡萄糖注射液10ml，以免家兔发生胰岛素性休克。
降低血糖：胰岛素 升高血糖：肾上腺素、胰高血糖素、糖皮质激素和生长素等。
胰岛素是唯一降低血糖的激素。 胰岛素促进肝脏和肌肉将葡萄糖氧化合成糖原，
又加强糖的氧化作用，故可以降低血糖。 升高血糖的激素以肾上腺素作用迅速而明显。
肾上腺素通过促进肝糖原分解而升高血糖。
4.血糖测定的意义
临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的 主要依据。