吸光度的测定
物理实验技术中的吸光度测量方法与技巧
物理实验技术中的吸光度测量方法与技巧引言：在物理学和化学等科学领域中，吸光度是一种重要的测量参数，用于研究溶液中的物质浓度、反应动力学和分子结构等。
本文将介绍物理实验中吸光度的测量方法与技巧，帮助读者更好地理解和应用这一重要的实验技术。
一、吸光度的概念和原理吸光度是指溶液对入射光强的吸收程度，用I表示。
根据贝尔-比亚-朗伯定律，吸光度与溶液中溶质的浓度和杂质物质的影响成正比，与光程成正比，与溶液中溶质的吸收性质相关。
吸光度的定义公式为A=log(I0/I)，其中I0为入射光强，I为透射光强。
二、常用的吸光度测量方法吸光度的测量方法多种多样，下面介绍几种常用的方法：1. 分光光度法分光光度法是一种间接测定吸光度的方法，通过测量透射光的强度来计算样品的吸光度。
这种方法利用分光光度计的分光仪器，通过选择合适的波长，可以使被测样品的吸光度最大化。
2. 滴定法滴定法是一种直接测定吸光度的方法，通过溶液中反应的终点来测定吸光度。
这种方法常用于分析溶液中的金属离子或酸碱度等参数。
3. 标准曲线法标准曲线法是一种建立吸光度与浓度之间关系的方法，通过测定不同浓度的标准溶液的吸光度，建立吸光度与浓度的标准曲线。
然后通过测量待测溶液的吸光度，利用标准曲线来计算其浓度。
三、吸光度测量的技巧在进行吸光度测量时，有一些技巧和注意事项可以帮助我们获得准确可靠的测量结果：1. 选择适当的波长不同的化合物在不同波长的光下吸收情况会有所不同，因此在进行测量时选择适当的波长可以使吸光度达到最大化或最小化，提高测量的灵敏度和准确性。
2. 校正反射和散射在测量透射光强时，反射和散射会产生一定的干扰。
为减小干扰，可以使用空白对比法，即在没有溶质的情况下测量背景透过光强，再和含溶质的样品进行比较。
3. 控制光程光程是指光通过样品的路径长度，通常使用经过校准的导光管或比色皿来控制光程。
保持光程的一致性可以减小误差，确保测量结果的可靠性。
4. 溶液制备和处理在进行吸光度测量前，需要正确制备溶液并进行适当的处理。
吸光度测定的原理与应用
吸光度测定的原理与应用吸光度测定，是化学、生物学等领域中常用的一种分析技术。
它利用物质吸收特定波长的光而进行定量分析，具有操作简单、结果稳定等优点，被广泛应用于生化、医药、环保等领域。
本文将会介绍吸光度测定的原理与应用。
一、吸光度测定原理吸光度测定原理是基于实验样品对特定波长的电磁辐射（即光）吸收的现象进行的。
在吸光度测定中，首先需要制备样品溶液，并选择适当的波长，利用石英或玻璃的透明度进行测量。
一般来说，吸光度的数值越高，表示分析物的浓度越大。
吸光度是指在可见光或紫外线照射下，物质吸收光线的程度。
通常使用分光光度计进行测定，其主要原理是利用样品对光的吸收特性进行分析。
在早期的分光光度计中，需要人工对比试样和标准溶液，然后确定吸光度的数值。
现在最新的分光光度计则通过计算机对比底片的吸光度与试样的吸光度，从而进行自动分析。
二、吸光度测定的应用1. 生物学应用在生物学领域，吸光度测定可用于定量测定DNA、RNA和小分子蛋白等。
DNA和RNA在260nm处的吸光度非常强，常常被用作测量其浓度的方法之一。
在蛋白质的吸光度测定中，350–400nm波段存在一些特定的吸收峰，可用于蛋白质浓度的估算。
2. 医学应用在医学领域，吸光度测定主要用于保存血样和血型鉴定等。
血样吸光度测定不仅可以监测血液中各种成分的含量，还可用于对酸碱平衡失调、电解质紊乱以及肝功能异常等疾病的诊断。
3. 环保应用在环保领域，吸光度测定可用于监测污水中有机物、水中溶解氧和二氧化碳的含量等。
在大气环境检测中，吸光度测定可用于检测大气中臭氧、二氧化硫和氮氧化物等化学物质。
三、总结吸光度测定是一种常见的分析技术，其在生物学、医学和环保等领域中均有广泛应用。
尤其在DNA、RNA等大分子分析中，吸光度测定已经成为检测方法中的重要组成部分。
随着科技的进步，相关的技术仪器也在不断升级，吸光度测定也有望提高其灵敏度、舒适性、准确性等方面的水平。
吸光光度法
ε
S与
ε 关系式的推导： ε b c 可得 εbc
根据 S 的定义和 A = A = 0.001 =
因为 所以
A = 0.001 =
εbc
（1）
0.001 c= εb
将单位代入(1)式右端
0.001 mol ⋅ cm 0.001 mol c= ⋅ = ⋅ b cm εL εb L
即
0.001 mol c= ⋅ εb L
3、多元络合物(MRARB)的种类 a.三元混配络合物: 如V(v)—H2O2—PAR b.离子缔合物: [Ag(phen)2]+· [BPR]c.金属离子—络合剂—表面活性剂体系 如稀土元素—XO—CPB体系
d.杂多酸: 杂多酸 磷酸盐 + 钼酸盐 阴离子 或硅酸盐 （过量） 或砷酸盐 (如[PMo12O40]3-
6.2.3 测量波长和吸光度范围的选择 1、测量波长的选择 “最大吸收原则” 或“吸收最大， 干扰最小”原则。
2、吸光度范围的选择
一般控制标准溶液和被测试液的吸 光度在 0.2 ~ 0.8 范围内，才能保证 测量的相对误差较小。 原因 浓度测量的相对误差 Er 与透射 比 T（或吸光度）有关。
_________________
6.2.4 参比溶液的选择 1、参比溶液：光度测量时用来调节仪 器的零点的一种溶液。 2、参比溶液的用途 消除由于吸收池壁及溶剂对入射光 的反射和吸收带来的误差，并扣除 干扰的影响。如参比溶液选择不 当， 会使标准曲线不通过原点。
以 M + n R(过量，乙色) = MRn(甲色) 为例，说明参比溶液的重要性。 ——— A(甲)+A(乙) MRn + —— A(乙) R R (1)零点——————————— 水 —— A(甲) MRn + (2)零点______________ 调A(乙)=0 R R
简述吸光光度法测量条件
简述吸光光度法测量条件光度分析中，为使测得的吸光度有较高的灵敏度和准确度，还必须选择合适的测量条件。
1. 入射光波长的选择一般以λmax作为入射光波长。
如有干扰，则根据干扰最小而吸光度尽可能大的原则选择入射光波长。
2. 参比溶液的选择参比溶液主要是用来消除由于吸收皿壁及试剂或溶剂等对入射光的反射和吸收带来的误差。
应视具体情况，分别选用纯溶剂空白、试剂空白、试液空白作参比溶液。
3. 吸光度读数范围的选择吸光光度分析所用的仪器为分光光度计，测量误差不仅与仪器质量有关，还与被测溶液的吸光度大小有关。
由下式可计算在不同吸光度或透光度读数范围引起的浓度的相对误差。
若分光光度计的读数误差DT 为5%, 当T = 65-20%，（或 A =0.19-0.70），则测量误差。
通常应控制溶液吸光度A在0.2-0.7之间，此范围是最适读数范围。
通过调节溶液的浓度或比色皿的厚度可以将吸光度调节到最适范围内。
当T%=36.8或A=0.434时，由于读数误差引起的浓度测量相对误差最小。
在吸光度法中，影响显色反应的主要因素有哪些？⒈确定适宜的条件的原因：在可见光分光光度法的测定中，通常是将被测物与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。
因此，显色条件的完全程度和吸光度的测量条件都会影响到测量结果的准确性。
为了使测定有较高的灵敏度和准确性，必须选择适宜的显色反应条件和仪器测量条件。
通常所研究的显色反应条件有显色温度和时间，显色剂用量，显色液酸度，干扰物质的影响因素及消除等，但主要是测量波长和参比溶液的选择。
对显色剂用量和测量波长的选择是该实验的内容。
⒉如何确定适宜的条件：条件试验的一般步骤为改变其中一个因素，暂时固定其他因素，显色后测量相应溶液吸光度，通过吸光度与变化因素的曲线来确定适宜的条件⒈确定适宜的条件的原因：在可见光分光光度法的测定中，通常是将被测物与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。
吸光度测定的原理
吸光度测定的原理
吸光度测定是一种常用的分析方法，利用物质对特定波长的光的吸收特性来确定物质的浓度或反应的进程。
其原理可以概括为以下几个方面：
1. 光的传播与吸收：在物质中，光的传播是由入射光束经过物质中的分子或离子相继发生吸收和散射而完成的。
吸收是指光的能量被物质吸收，导致物质中的电子转移到激发态。
吸收现象与物质的成分及浓度有关。
2. 兰伯特-比尔定律：根据兰伯特-比尔定律，光通过物质时，
与物质中物质浓度成正比的吸收光强度可以用以下公式来表示：A = log (I₀/I)，其中A是吸光度，I₀是入射光强度，I是透过
物质后的光强度。
3. 光谱仪：吸光度测定中所使用的光谱仪能够分析和检测出样品在各个波长下的光吸收情况。
光谱仪将可见光或紫外光通过样品，测量透过或被吸收的光，然后通过光电二极管或光电倍增管转化为电信号，再根据电信号的强弱来计算样品的吸光度。
4. 基准和比较：吸光度测定中通常会设定一个基准值和一个比较值。
基准值是在未加入样品的情况下测量的吸光度，用来作为参照。
比较值则是在加入样品后所测量的吸光度。
通过计算两者之间的差异，可以得出样品浓度或反应进程。
从以上原理可以看出，吸光度测定是通过光的吸收与透过来反映物质的浓度或反应的进程的一种方法。
通过测量光的吸收强
度，结合光谱仪的工作原理，可以准确地确定物质的浓度或反应的程度。
吸光度的测定方法标准
吸光度的测定方法标准吸光度啊，这可是个很重要的东西呢！就好像我们看世界，得有个标准的眼光去衡量一样。
那吸光度的测定方法标准到底是咋回事呢？咱先来说说比色法吧。
这就好比是一场选美比赛，不同的物质就像是不同的选手，通过和标准物质进行比较，来展现出自己的独特魅力，也就是吸光度啦！在特定的波长下，让它们在比色皿这个小舞台上尽情展现，然后我们就能看出谁的吸光度更厉害。
你说这是不是很有趣呢？还有分光光度法，它就像是一个超级侦探，能把不同波长的光都分辨得清清楚楚。
通过这个厉害的侦探，我们可以准确地找到我们想要的那个波长的光，然后测量出物质对它的吸收程度，这可真是太神奇了！就好像我们能在茫茫人海中一下子找到那个最特别的人一样。
再说说原子吸收光谱法吧，这可真是个高科技玩意儿！它就像是一个精准的狙击手，专门瞄准那些微量元素，然后一枪击中，测出它们的吸光度。
这可不得了啊，那些微小的家伙们可逃不过它的法眼。
那这些测定方法标准为什么这么重要呢？你想想啊，如果没有一个标准，那大家测出来的结果岂不是五花八门，就像每个人都有自己的一套衡量美丑的标准，那不乱套了吗？有了标准，我们才能在同一个平台上比较，才能得出可靠的结论呀！而且，这些方法标准还得不断地完善和更新呢！就像我们的生活一样，一直在变化，一直在进步。
科技在发展，我们对吸光度的测定要求也越来越高，所以这些标准也得跟着时代的步伐不断前进。
你说，要是没有这些准确的测定方法标准，我们怎么能知道那些物质的特性呢？怎么能在各种领域中运用它们呢？比如在化学实验中，在医学检测中，在环境监测中，吸光度的测定可都起着至关重要的作用呢！所以啊，吸光度的测定方法标准可真是个宝贝啊！我们可得好好珍惜它，好好利用它。
让它为我们的科学研究、生活生产带来更多的便利和进步。
你难道不这么认为吗？反正我是觉得这真的是太重要啦！。
项目五——吸光光度法
03
吸光光度法的仪器和试剂
分光光度计
01
定义
分光光度计是分光光度法中使用的核心仪器，用于测量溶液对特定波长
的光的吸光度。
02 03
工作原理
分光光度计通过光源发出连续光谱的光，经过单色器分光后，得到特定 波长的单色光，照射到样品上，然后通过检测器检测透过样品的光强， 从而计算出样品的吸光度。
类型
常见的分光光度计有紫外-可见分光光度计、红外分光光度计等。
酶活性测定
某些酶催化的反应会产生或消耗具有 特定吸光特性的物质，利用吸光光度 法可以测定这些物质的浓度变化，从 而推算出酶的活性。
工业生产中的吸光光度法
产品质量控制
在某些工业生产过程中，产品的吸光特性与其质量密切相关。通过吸光光度法测 量产品的吸光度，可以实时监控产品质量，确保生产过程的稳定性和产品的一致 性。
通过合成具有更高选择性和灵敏度的试剂和探针，提高吸光光度法 对目标分析物的检测灵敏度。
引入多元校正技术
利用多元校正算法，消除干扰因素，提高吸光光度法在复杂样品中 的测量精度和灵敏度。
拓展应用领域和范围
环境监测领域
将吸光光度法应用于大气、水体 等环境样品的检测，实现对环境
污染物的快速、准确测定。
生物医学领域
引入人工智能、物联网等技术， 实现吸光光度法仪器的远程操控 、数据自动处理和分析等功能， 提高仪器的易用性和分析效率。
多功能集成
将多种分析方法集成到一台仪器 中，实现一台仪器同时具备多种 分析功能，提高仪器的综合性能
和应用范围。
谢谢您的聆听
THANKS
常见试剂
常见的吸光光度法试剂有显色剂、还原剂、氧化剂等。
使用注意事项
测定吸光度实验报告
一、实验目的1. 了解紫外分光光度法的基本原理和应用。
2. 掌握紫外-可见分光光度计的使用方法。
3. 通过实验，学会测定吸光度，并分析实验结果。
二、实验原理紫外-可见分光光度法是利用物质在紫外和可见光区域的吸收特性，对物质进行定性和定量分析的方法。
实验中，通过测定溶液在特定波长下的吸光度，根据朗伯-比尔定律（A = εlc），可以计算出溶液中待测物质的浓度。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外-可见分光光度计、移液管、容量瓶、比色皿、洗耳球等。
2. 试剂：待测溶液、标准溶液、蒸馏水、氢氧化钠溶液、盐酸溶液等。
四、实验步骤1. 标准曲线的制作：首先配制一系列已知浓度的标准溶液，分别测定其吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 待测溶液的吸光度测定：将待测溶液稀释至适当浓度，使用移液管准确移取一定体积，置于比色皿中，在特定波长下测定吸光度。
3. 结果分析：根据标准曲线，计算出待测溶液的浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
根据实验数据，得到标准曲线的线性方程为：A = 0.0478c + 0.0018，相关系数R² =0.9982。
2. 待测溶液的吸光度测定：将待测溶液稀释至适当浓度，测定其吸光度为0.745。
3. 结果分析：根据标准曲线，计算待测溶液的浓度为1.56×10⁻³ mol/L。
六、实验讨论1. 实验过程中，要注意溶液的稀释，避免溶液浓度过高或过低，影响吸光度测定的准确性。
2. 实验过程中，要确保比色皿的清洁，避免杂质对吸光度测定的干扰。
3. 实验过程中，要控制好温度和pH值，避免对吸光度测定的结果产生影响。
4. 实验过程中，要注意仪器的操作，避免人为误差。
七、实验总结通过本次实验，我们了解了紫外-可见分光光度法的基本原理和应用，掌握了紫外-可见分光光度计的使用方法，学会了测定吸光度，并分析了实验结果。
动植物油脂 紫外吸光度的测定-最新国标
动植物油脂紫外吸光度的测定1 范围本文件规定了动植物油脂紫外吸光度测定的原理、试剂、仪器、扦样、试样制备、测定步骤、结果计算、精密度和测试报告的要求。
本文件适用于动植物油脂，不适用于乳和乳制品（或从乳和乳制品中获得的脂肪）。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 5524 动植物油脂扦样（ISO 5555:2001, IDT）GB/T 6379.1 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法GB/T 15687 动植物油脂试样的制备（ISO 661:2003, IDT）3 原理将样品溶解在异辛烷或环己烷中，并在特定的紫外线波长范围内用分光光度法测量吸光度。
采用10 mm比色皿，测定浓度为1 g/100 mL的样品溶液在232 nm和268 nm处（溶剂为异辛烷时）或在232 nm和270 nm处（溶剂为环己烷时）的吸光度值。
4 试剂除另有说明，所用试剂均为分析纯。
溶剂：2,2,4-三甲基戊烷（异辛烷），用于在波长232 nm和268 nm处的测量；环己烷，用于在波长232 nm和270 nm处的测量。
以蒸馏水为参比溶液，采用10 mm比色皿，在232 nm处的吸光度需小于0.12，在250 nm处的吸光度需小于0.05。
警告：请遵循危险化学品处理的规定。
5 仪器所用的玻璃器皿在使用前都应彻底的清洗，并且要用溶剂润洗。
避免其他物质在220 nm～320 nm 波长范围内对吸收光谱的影响。
5.1 分光光度计：配置记录仪、10 mm石英比色皿。
在使用前，校验分光光度计的波长范围和光谱吸收范围。
5.1.1 波长范围：根据说明书用汞灯进行校验，或使用钬滤波片校验，其在279.37 nm 和287.5 nm 有尖锐的吸收峰。
化学物质的吸光度测定
化学物质的吸光度测定引言：吸光度测定是一种广泛应用于化学分析领域的方法，通过测量溶液或气体对特定波长的光的吸收程度，可以获得物质的浓度或含量信息。
本文将介绍吸光度测定的原理、实验操作步骤以及其在化学分析中的应用。
一、吸光度测定的原理吸光度测定是基于比尔—朗伯定律原理的一种分析方法。
根据比尔—朗伯定律，溶液中溶质的吸收光强与溶液的浓度成正比关系，即A=εlc，其中A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，l为样品溶液的光程长度，c为溶质的浓度。
二、吸光度测定的实验操作步骤1. 准备样品溶液：将待测化学物质溶解于适当的溶剂中，得到一定浓度的样品溶液。
2. 设置仪器参数：根据待测物质的吸收特性，选择合适的波长和光路，调整光谱仪或分光光度计的参数。
3. 建立工作曲线：根据已知浓度的标准溶液，进行一系列测定，得到吸光度和浓度之间的关系，建立工作曲线。
4. 测量样品溶液的吸光度：使用建立的工作曲线，测量样品溶液的吸光度，并据此计算出溶质的浓度。
5. 数据处理与分析：根据实验结果，进行数据处理与分析，包括误差分析、结果统计等。
三、吸光度测定的应用1. 环境监测：吸光度测定可用于水质、大气、土壤等环境样品中重金属、有机污染物等的测定，为环境保护提供重要数据。
2. 药物分析：在药物研究和生产中，吸光度测定可用于药物含量测定、溶出度测定、药物稳定性研究等。
3. 食品安全：吸光度测定可用于食品中添加剂、农药残留、重金属等有害物质的测定，确保食品安全。
4. 生化分析：吸光度测定广泛应用于蛋白质、核酸、酶活性等生化实验中，为生物学研究提供可靠分析手段。
结论：吸光度测定是一种简便、快速、灵敏度较高的化学分析方法，广泛应用于环境监测、药物分析、食品安全和生化分析等领域。
通过建立工作曲线，测定样品溶液的吸光度，可以获得物质的浓度或含量信息，为科学研究和工业生产提供重要参考。
在实际应用中，我们还需结合具体样品的特点和实验条件，合理选择测量方法和参数，以获得准确可靠的结果。
测定吸光度通用操作流程
测定吸光度通用操作流程一、准备工作1.1 仪器设备首先呢，咱得有一台靠谱的分光光度计，这就像是咱做饭得有口好锅一样重要。
这仪器得是经过校准的，可别整那些没谱儿的仪器，不然测出来的数据就像没根的浮萍，靠不住。
把仪器放在一个平稳的地方，别晃悠，就像咱人站着得脚踏实地一样。
1.2 样品准备样品可得处理好了。
要是溶液呢，得保证它均匀，别有的地方浓有的地方稀，那就乱套了。
就好比一碗粥，得搅和匀乎了才能吃。
把样品放到合适的容器里，容器得干净，不能脏兮兮的，不然就像在泥地里找珍珠，数据肯定不准。
二、测量操作2.1 仪器预热打开分光光度计之后，可不能着急测。
得让它先预热一会儿，就像运动员上场之前得先热身一样。
这个预热的时间得按照仪器的说明书来，可别自作主张。
一般来说，预热个十几二十分钟就差不多了，这时候仪器就像睡醒了的狮子，准备好干活了。
2.2 波长选择接下来就是选择波长啦。
这就像是在众多的道路里选择一条正确的路。
要根据你要测定的物质的特性来选，选错了波长，那就像南辕北辙，测出来的数据肯定不对。
这个波长的选择有时候得查资料，有时候得靠经验，可不能瞎蒙。
2.3 参比溶液参比溶液可不能少。
它就像一个基准，其他的测量都得跟它比。
把参比溶液放到比色皿里，放到仪器里先测量一下，这就像是给其他的测量定个调。
参比溶液的选择也很有讲究，要是选错了，那整个测量就像盖房子没打好地基，肯定不稳。
2.4 样品测量最后就是把咱准备好的样品放到比色皿里，再放到仪器里测量吸光度了。
这时候就像等待考试成绩一样，心里有点小紧张呢。
测量的时候要小心操作，比色皿得擦干净，不能有指纹或者污渍，不然就像眼睛上蒙了一层纱，看东西不清楚，数据也就不准了。
三、数据记录与处理3.1 数据记录测量出来的数据得好好记录下来。
这可不能马虎，就像记账一样，一分一厘都得清楚。
记录的时候要准确到小数点后几位，这得看仪器的精度。
要是记录错了，那就像在拼图的时候放错了一块，整个图就不对了。
吸光光度分析
吸光光度分析法基于物质对光选择性吸收而建立起来的分析方法，称为吸光光度分析法。
本章重点讨论可见光区的吸光光度分析。
第一节吸光光度分析概述吸光光度分析法(absorption spectrophotometry)，包括比色分析法、可见分光光度法、紫外分光光度法和红外分光光度法等。
与经典的化学分析方法相比，吸光光度法具有以下几个特点：1．灵敏度高吸光光度法主要用于测定试样中微量或痕量组分的含量。
测定物质浓度下限一般可达10—5～10—6 mol·L—1，若被测组分预先加以富集，灵敏度还可以提高。
2．准确度高比色法测定的相对误差为5%～10%，分光光度法测定的相对误差为2%～5%，完全可以满足微量组分测定的准确度要求。
若采用精密分光光度计测量，相对误差可减小至1%～2%。
3．仪器简便，测定速度快吸光光度法虽然需要用到专门仪器，但与其它仪器分析法相比，比色分析法和分光光度法的仪器设备结构均不复杂，操作简便。
近年来由于新的高灵敏度、高选择性的显色剂和掩蔽剂的不断出现，常常可以不经分离而直接进行比色或分光光度测定，使测定显得更为方便和快捷。
4．应用广泛吸光光度法能测定许多无机离子和有机化合物，既可测定微量组分的含量，也可用于一些物质的反应机理及化学平衡研究，如测定配合物的组成和配合物的平衡常数，弱酸、弱碱的离解常数等。
第二节吸光光度分析的基本原理一、溶液的颜色和对光的选择性吸收1．光的基本性质光是一种电磁波。
电磁波范围很大，波长从10—1 nm～103 m，可依次分为X–射线、紫外光区、可见光区、红外光区、微波及无线电波，见表8—1。
表8-1电磁波谱区域λ/ nmX –射线10-1～10远紫外光区10～200近紫外光区200～400可见光区400～760近红外光区760～5×104远红外光区5×104～1×106微波1×106～1×109无线电波1×109～1×1012注：1 m = 109 nm人的眼睛能感觉到的光称为可见光(visible light)。
第十三章 吸光光度法
Ax cx cs As
二、多组分的测定
对于含有多种被测组分的试液，如果吸光 物质之间没有相互作用，且服从 Lambert-Beer 定律，此时系统的吸光度等于各组分的吸光度 之和。 吸收光谱通常有以下两种情况。 （1）吸收峰互不重叠： （2）吸收峰重叠：
吸收峰不重叠
吸收峰重叠
A( 2)
其中，A:吸光度，T:透光率，
κ :摩尔吸收系数，d:溶液厚度，cB:溶液摩尔浓度
1 A lg κ T
•
d • cB
注意：平行单色光
均相介质 无发射、散射或光化学反应
摩尔吸收系数κ的讨论
κ 表示物质的浓度为1mol/L,液层厚度为1dm时溶
液在某一波长下的吸光度(单位：dm2 •mol-1)
def
I0 lg I
T def
A 与 T 的关系为：
I I0
A =－lgT
2、朗伯－比尔定律
朗伯定律(1760年): 光吸收与溶液层厚度成正比 比尔定律(1852年): 光吸收与溶液浓度成正比
当一束平行单色光垂直照射到样品溶液时，溶 液的吸光度与溶液的浓度及光程（溶液的厚度） 成正比关系－－朗伯比尔定律(光吸收定律) 数学表达：
第十三章 吸光光度法
第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 吸光光度法的基本原理 光吸收的基本定律 吸光光度法分析条件的选择 分光光度计 吸光光度法的测定方法
本章重点
吸收曲线 朗伯－比尔定律
根据物质对光吸收的波长的不同，吸光 光度法主要可分为:
☺比色法 ☺可见吸光光度法（400～750nm） ☺紫外吸光光度法（10～400nm） ☺红外光谱法（760～1×106nm ）
KMnO4 的吸收曲线
动植物油脂紫外吸光度的测定
动植物油脂紫外吸光度的测定动植物油脂紫外吸光度测定：1、实验目的：本实验旨在测定各类动植物油脂的紫外吸光度，以指导油脂的合成和改进工艺，提高油脂的品质。
2、试剂准备：（1）紫外吸光度仪一台；（2）三淨容量为25mL的比色管；（3）已知品质的动植物油脂样品；（4）标准校正液和缓冲液；（5）国家标准《植物油脂及类似物紫外吸光系数的测定法》（GB/T 4184，货号：CFLJ）中唯一推荐使用的测量波长为251nm常温量质比色技术。
3、实验原理：由紫外光源照射样品时，样品中吸收紫外光，其强度与其吸收率成反比，即样品紫外吸光率越高，紫外光强度越低。
4、实验方法：（1）根据国家标准，放入一定数量的校正液和缓冲液，将比色管的常温量质比色技术的测量波长调节至251nm；（2）放入比色管中适量动植物油脂，取4次同一量的此油脂；（3）在紫外吸光度仪上，调整沉淀位置、瞄准镜位置等，使得比色管位于瞄准镜光线的中心；（4）将比色管中的液体向下推至沉淀位置，根据示波器上的曲线，记录全程的实验值；（5）以上4次实验完成后，求出本次实验的平均值，以作为本次实验结果的参考数据。
5、实验数据处理：求出本次实验的平均值后，按照下列公式求出紫外吸光度：A(%) = 100 × (B – R)/B其中，A为紫外吸光度，B为校正液示波器上的实验值，R为缓冲液示波器上的实验值。
6、实验结果：经过计算，得到动植物油脂的紫外吸光度值为A。
7、安全操作：（1）在实验的过程中，动植物油脂易引起凝固，加热可使其变回液体；（2）使用玻璃器皿时务必远离高温，避免玻璃器皿破裂；（3）室内实验室温度应保持在20℃~25℃，特别是温度较低的情况下，应注意缓冲液的温度。
吸光光度法讲解
吸光光度法讲解吸光光度法是化学分析中常用的一种分析方法，用于测定物质溶液中某种物质的浓度。
其原理是利用物质对特定波长的光吸收的特性，通过测量光的透射或反射来推算出物质的浓度。
吸光光度法的基本原理是比尔定律，即物质溶液对光的吸收与其浓度成正比。
根据比尔定律，当光通过物质溶液时，其强度将减弱，而减弱的程度与物质的浓度成正比。
比尔定律的数学表达式为：A=εlc，其中A表示吸光度，ε表示摩尔吸光系数，l表示光程长度，c表示溶液浓度。
在使用吸光光度法进行分析之前，首先需要选择适当的波长。
每种物质对光的吸收有其特定的波长范围，称为吸收峰。
选择适当的波长可以提高分析的准确性和灵敏度。
吸光光度法的实验步骤通常包括以下几个步骤：1. 准备样品：根据需要测定的物质选择相应的样品，并将其溶解在适当的溶剂中，以得到一个浓度在可测范围内的溶液。
2. 校准仪器：使用一系列已知浓度的标准溶液，通过测量它们的吸光度与浓度之间的关系，建立起一条标准曲线。
这条曲线可以用来根据样品的吸光度推算出其对应的浓度。
3. 测量样品：将校准好的仪器置于样品测量位，并使样品溶液通过光路。
根据仪器的操作方法，控制光源的强度，选择波长，并记录下通过样品溶液的光的吸收强度。
4. 计算浓度：根据标准曲线上对应的吸光度值，利用比尔定律的数学关系，计算出样品的浓度。
需要注意的是，在进行吸光光度法测量时，还需要注意以下几个因素：1. 光程长度：光程长度会直接影响到吸光度的数值。
因此，在进行测量时，要保持光程长度一致，以避免测量结果的误差。
2. 溶剂选择：溶剂选择要适合样品的性质，并且要尽量选择透明度高的溶剂，以减少光的吸收。
同时，还要注意溶剂对标准溶液的影响，以保证测量结果的准确性。
3. 波长选择：选择合适的波长可以提高分析的准确性和灵敏度。
通常情况下，选择物质的吸收峰为测量波长是一个比较好的选择。
4. 仪器校准：在进行样品测量之前，需要对仪器进行校准。
校准的目的是建立起样品吸光度与浓度之间的关系，以便后续计算浓度。
吸光度测定的原理
吸光度测定的原理
吸光度测定是一种利用样品溶液对特定波长的光的吸收能力进行定量分析的方法。
它的原理基于比尔-ラン伯定律，该定律表示了光的强度和溶液中吸光物质浓度的线性关系。
吸光度测定一般使用紫外可见光谱仪进行测量。
在测定中，一束具有特定波长的光通过样品溶液，然后穿过一个光学系统到达光电探测器。
光电探测器测量光的强度，其值与被样品吸收的光的量成正比。
根据比尔-朗伯定律，吸光度（A）与样品溶液中吸光物质的浓度（c）和样品溶液的路径长度（b）有关。
即A = εcb，其中ε为摩尔吸光系数（也称为吸收率）。
吸光度（A）等于未被吸光物质吸收的入射光强度与通过样品后残余的光强度之间的比值。
因此，当溶液中吸光物质的浓度增加时，其吸收率也会增加，进而导致吸光度的增加。
吸光度测定的原理依赖于摩尔吸光系数是恒定的，并且吸光物质的溶液是均匀的，并且与所用光的波长相匹配。
此外，路径长度应该一致，以确保结果的准确性。
分光光度计测定透明液体吸光度的步骤
分光光度计测定透明液体吸光度的步骤一、引言透明液体的吸光度是指其对特定波长的光的吸收程度，是分析化学中常用的重要参数之一。
分光光度计是一种用于测量吸光度的仪器，通过测量样品溶液对特定波长光线的吸收来定量分析样品中的化学物质。
本文将介绍使用分光光度计测定透明液体吸光度的步骤。
二、实验准备1. 准备样品溶液：根据实验需求，配制透明液体样品溶液。
2. 打开分光光度计电源，并预热仪器。
三、样品测量1. 校准空白：将纯溶剂（如水或有机溶剂）注入光池，调零光度计。
校准空白的目的是消除纯溶剂对测量结果的影响。
2. 测量样品：将样品溶液注入光池，确保光线通过样品的路径长度一致。
调整分光光度计的波长为所需测量的波长。
3. 记录吸光度：在分光光度计上读取吸光度值。
根据实验需求，可以进行多次测量并求平均值，以提高测量的准确性。
四、数据处理1. 建立标准曲线：根据已知浓度的标准溶液，测量其吸光度，并绘制吸光度与浓度的曲线。
标准曲线可用于后续测量样品浓度。
2. 计算样品浓度：根据标准曲线，利用样品的吸光度值确定其对应的浓度。
五、实验注意事项1. 避免气泡：在样品注入光池之前，应先去除样品中的气泡，以免影响吸光度测量。
2. 波长选择：根据实验需求选择合适的波长进行测量，确保所选波长能够使样品发生明显的吸光现象。
3. 光池清洁：使用前应确保光池洁净，避免杂质对测量结果的影响。
4. 重复测量：为提高测量准确性，可以进行多次测量并求平均值。
六、实验结果分析通过测量样品的吸光度，并根据标准曲线计算出样品的浓度，可以得到透明液体中所含化学物质的浓度信息。
根据实验结果，可以进行进一步的数据分析和实验结论的得出。
七、实验应用分光光度计测定透明液体吸光度的步骤在化学分析、环境监测、生物医药等领域具有广泛的应用。
通过测量样品的吸光度，可以定量分析样品中的化学物质，为科学研究和工业生产提供可靠的数据支持。
八、总结分光光度计是一种常用的测量透明液体吸光度的仪器，通过测量样品对特定波长光线的吸收来定量分析样品中的化学物质。
吸光度测定溶解度计算公式
吸光度测定溶解度计算公式引言。
溶解度是指单位温度下溶质在溶剂中达到饱和溶解时的溶质的质量。
在化学实验中，通常使用吸光度测定的方法来测定溶解度。
吸光度是溶液对特定波长光的吸收程度，其数值与溶液中溶质的浓度成正比。
因此，可以利用吸光度测定的结果来计算溶解度。
本文将介绍吸光度测定溶解度的计算公式及其相关原理。
吸光度测定原理。
吸光度测定是利用溶液对特定波长光的吸收来测定溶液中溶质的浓度。
根据比尔定律，溶液的吸光度与其浓度成正比。
比尔定律的数学表达式为A = εlc，其中A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，l为光程，c为溶液的浓度。
根据比尔定律，可以得出溶液浓度与吸光度之间的关系，即c = A/εl。
根据这个关系，可以利用吸光度测定的结果来计算溶质的浓度。
吸光度测定溶解度计算公式。
在测定溶解度时，可以利用吸光度测定的结果来计算溶质的浓度，进而计算溶解度。
假设溶质在溶剂中的溶解度为S，溶解度可以用溶质的摩尔浓度来表示，即S = c/V，其中c为溶质的摩尔浓度，V为溶液的体积。
根据比尔定律，溶液的吸光度与溶质的浓度成正比，因此可以利用吸光度测定的结果来计算溶质的浓度，进而计算溶解度。
吸光度测定溶解度的计算公式为：S = A/(εlV)。
其中S为溶解度，A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，l为光程，V为溶液的体积。
根据这个公式，可以利用吸光度测定的结果来计算溶解度。
实验步骤。
进行吸光度测定溶解度的实验时，首先需要准备一定浓度的溶液，并测定其吸光度。
然后根据吸光度测定的结果，利用上述的计算公式来计算溶质的浓度，进而计算溶解度。
具体实验步骤如下：1. 准备一定浓度的溶液，并测定其吸光度。
2. 根据溶液的吸光度、摩尔吸光系数和光程，计算出溶质的摩尔浓度。
3. 根据溶质的摩尔浓度和溶液的体积，计算出溶解度。
需要注意的是，在实验中要保证测定吸光度的波长与溶质吸收的波长相对应，以确保测定结果的准确性。
应用与意义。
吸光度测定溶解度的方法在化学实验和工业生产中具有重要的应用价值。
吸光光度测定法流程
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在进行吸光光度测定之前，充分的准备工作必不可少。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
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一点法：测量I0、It的方法有一点法和基线法两种
当背景吸收较小，可以忽略不计，吸收峰对称且无其它吸收峰影响时，可用一点法测量I0、It，方法如图1所示。
图1 一点法测量A
基线法：背景吸收较大不可忽略，有其它峰影响使测量峰不对称时， 可用基线法测量I0、It。通过测量峰两边的峰谷作一切线，以两切点连线的中点确定I0,以峰最大处确定It，
如图2所示。
(2)红外吸收光谱法：物质吸收红外区辐射，引起分子中....因此，在相应范围内，通过测定溶液对一定波长入射光的吸光度，即可求出溶液中物质的浓度和含量。....含量测定时可选择一个欲测成分的特征吸收峰，此吸收峰不被其他成分所干扰即可。...峰，做基线及量取峰高吸收度比值，依对照品比较法公式计算供试品含量。
在红外定量分析中，有许多计算吸光度A的方法，我们所使用的红外仪器因为没配备数
据站，用其它方法计算非常麻烦。所以我们用基线法来求吸光度A。我们用此法求得的A在
作标准曲线时，发现其线性良好，做样品测定时，结果也尚可以，基线法数据处理较简便，
但相应而言，误差较大。
吸光度的测定
（1）一点法
该法不考虑背景吸收，直接从谱图中分析波数处读取谱纵坐标的透过率，再由公式lg1/T=A计算吸光度。实际上这种背景可以忽略的情况较少，因此多用基线法。
（2）基线法
通过谱带两翼透过率最大点作光谱吸收的切线，作为该谱线的基线，则分析波数处的垂线与基线的交点，与最高吸收峰顶点的距离为峰高，其吸光度A=lg（I0/I）。