谷丙转氨酶活性的测定
谷丙转氨酶活力测定
谷丙转氨酶活力测定（改良赖氏法）一，实验目的掌握血清丙氨酸氨基转移酶（ALT ，也称谷丙转氨酶，GPT ）活性测定的原理。
熟悉转氨酶活性测定的操作方法。
了解测定血清丙氨酸氨基转移酶活性的临床意义。
二，相关理论体内蛋白质处于不断降解与合成的动态平衡食物蛋白质经消化吸收的氨基酸和体内组织蛋白质降解产生的氨基酸混在一起，分布于体内各处，作为参与代谢的氨基酸库氨基酸分解代谢的主要反应是脱氨基作用肝脏的脱氨基方式有:氧化脱氨基,氨基转换作用及联合脱氨基氨基转移酶转氨酶： 催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶谷丙转氨酶 glutamic-pyruvic transminase GPT 又称丙氨酸转氨酶alanine aminotransferase ALT三．转氨作用的意义正常时转氨酶主要分布在细胞内，血清中酶活力很低 GOT 以心脏细胞中活力最大，其次为肝脏细胞 GPT 则以肝脏细胞中活力最大谷丙转氨酶的临床意义如果GPT 血清值超过正常上限2－3倍，并持续两周以上，表明有肝胆疾病存在的可能。
参考范围：0-50 U/L ，卡门氏单位0-25 KarU 四．酶活力单位（U ，active unit ）国际单位：61年酶学委员会建议使用统一单位，在特定条件下，1分钟内转化1 μmol底物所需的酶量，称为一个国际单位（IU ，又称U ）1个卡门氏单位的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm ，光径1cm 的条件下，1ml 血清使反应液的吸光度下降0.001的转氨酶活性。
卡门氏单位和国际单位换算1 IU/L ＝2.1 KarU 五，实验原理血清中的丙氨酸转氨酶（ALT ），在37℃、pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。
生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT 活性的高低成正比关系。
血清谷丙转氨酶的测定实验报告
血清谷丙转氨酶的测定实验报告血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase, ALT）是一种重要的肝脏酶，其测定可以用于评估肝功能和诊断肝脏疾病。
本实验旨在通过测定血清中ALT的活性，探究其在肝功能评估中的应用。
实验材料与方法。
1. 实验材料，实验所需材料包括ALT检测试剂盒、标准品、血清标本、比色皿、移液管等。
2. 实验方法：a. 样本处理，将采集的血清标本离心，取上清液置于4℃保存。
b. 实验操作，按照ALT检测试剂盒说明书进行操作，制备标准曲线和待测样本的反应体系。
c. 光度测定，使用分光光度计测定各标准品和待测样本的吸光度值。
d. 计算ALT活性，根据标准曲线计算待测样本中ALT的活性。
实验结果与分析。
经过实验测定，得到不同浓度的ALT标准曲线，吸光度与ALT浓度呈线性关系，相关系数达到0.99以上。
待测样本的吸光度值为X，通过标准曲线计算得到其ALT活性为Y。
进一步分析发现，实验组ALT活性显著高于对照组，说明实验组受到了肝脏损伤。
实验结论。
本实验通过测定血清中ALT的活性，成功评估了肝功能并诊断了肝脏疾病。
实验结果表明，ALT活性的升高与肝脏损伤密切相关，可作为肝功能评估和肝脏疾病诊断的重要指标之一。
实验注意事项。
1. 实验操作中需严格按照操作规程进行，避免操作失误导致结果误差。
2. 实验过程中需注意安全，避免接触有害化学品和受伤。
3. 实验结果需结合临床资料进行分析，以获得准确的诊断结论。
实验展望。
未来，可以进一步探究ALT在肝脏疾病诊断中的应用，寻找更为准确、快速的检测方法，为临床诊断提供更可靠的参考。
结语。
通过本实验，我们深入了解了血清谷丙转氨酶的测定方法和应用，为肝功能评估和肝脏疾病诊断提供了重要的实验依据。
希望本实验能对相关领域的研究和临床应用提供一定的参考价值。
血清中谷丙转氨酶活力测定结果
血清中谷丙转氨酶活力测定结果血清中谷丙转氨酶（ALT）活力测定是一种常见的实验室检测方法，常用于评估肝功能和诊断肝病。
本文将介绍血清中谷丙转氨酶活力测定结果的相关知识。
血清中谷丙转氨酶活力（ALT）是指血液中存在的一种酶的活性，通常用于评估肝脏功能的状况。
正常情况下，谷丙转氨酶的活力是很低的，一般小于40单位/升。
当肝细胞受损或病变时，会释放ALT，使其活力升高。
高浓度的ALT通常与肝脏病变有关，例如肝炎、肝硬化、脂肪肝、药物性肝病等。
此外，高ALT水平还可能与其他疾病有关，例如急性胰腺炎、心肌梗塞、重型结核等。
因此，如果血清中ALT活力超过正常范围，应及时进行检查和诊断。
血清中ALT测定通常是使用血清学方法进行的。
一般情况下，医师会在胳膊上绑上一条缚带，并在手腕或肘部的静脉内取一小样血液。
样本会送到实验室进行分析。
实验室会使用化学试剂和仪器来测量血清中ALT的活力。
结果会以单位/升（U/L）的形式报告。
正常情况下，成人男性的ALT浓度应在10-40 U/L之间，女性的ALT浓度应在7-35U/L之间。
但这些数值还受到年龄、体重、性别和肝脏状态等因素的影响。
因此，在解读ALT浓度时，医生还需要考虑患者的其他情况。
ALT浓度的升高程度也是确定病情的重要指标之一。
一般来说，当ALT浓度超过正常范围的两倍以上时，就可以诊断为肝炎或其他肝病。
此外，还有一种称为谷草酰转移酶（AST）的酶，也与肝脏有关，但其升高程度不如ALT明显。
需要注意的是，虽然ALT浓度升高可能表明肝脏病变，但不能单独确定肝病的类型和严重程度。
医生还需要进行其他检查和评估，例如肝脏超声、CT扫描、肝组织活检等，以帮助确定具体的病情。
总之，血清中ALT活力测定是一种常见的实验室检测方法，通常用于评估肝脏功能和诊断肝病。
需要注意的是，结果需要结合患者的其他情况进行解读，以便更准确地诊断和治疗肝病。
谷丙转氨酶活性测定
三、方法和步骤
1、肝匀浆制备：
取新鲜动物肝脏，用生理盐水冲洗，滤纸吸干，称取肝脏0.5g， 剪成小块，置于玻璃匀浆管内，加入4.5ml预冷的pH 7.4 0.1 mol/L磷酸缓冲液，制成10%肝匀浆，冰冻保存。
二． 标准曲线的绘制 取6支试管分别用0、1、2、3、5标号，按下表所列次序添加各试剂。 将试管于37℃水浴中保温，平衡管内外温度, 向各管内加0.5ml 2，4—二硝基苯肼后再保温20分钟， 最后分别向各管内加入0.4N NaOH 5毫升， 在室温下静置30分钟后， 以0号管做“空白”用520nm进行比色，读出光吸收值，以丙酮酸的微摩数为横坐标，光吸
202X
实验十七 谷丙转氨酶活性 测定 Exp.17 Activity Determination of Glutamic Pyruvic Transaminase
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演讲人姓名
一、实验原理
氨基移换酶也称转氨酶,为广泛存在于生物机体内的酶，其作用为催化 α-氨基酸的α- 氨基与α- 酮酸的α- 酮基互换。因此在氨基酸的合成 和分解，尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。转氨酶的 种类甚多。 任何一种氨基酸进行转氨作用时，都由其专一的转氨酶催 化，它们的最适pH接近7.4。
1 测定管 0.50
2 “空白”对照管 0.50
37℃水浴保温10min，使管内外温度平衡
稀释肝匀浆/ml
0.10
37℃水浴保温30分钟
2,4—二硝基苯肼试剂 /ml
稀释肝匀浆/ml
0.50
0.50 0.10
保温20分钟，冷却
NaOH (0.4N) /ml
5.0
5.0
室温下静置30分钟
A520nm
肝脏谷丙转氨酶活力测定
一、实验目的
掌握谷丙转氨酶的测定方法。
二、实验原理
谷丙转氨酶作用于丙氨酸及α-酮戊二酸，生成谷氨酸与丙 酮酸。丙酮酸与2.4-二硝基苯肼作用，生成二硝基苯腙，此 物在碱性溶液呈红棕色，与经同样处理的标准丙酮酸比色， 求得丙酮酸的生成量以表示酶的活性。
C O O H 500：标准丙酮酸浓度 2.
37℃ 水浴5 分钟
0.1
0.1（标准丙酮酸） 0.1
混匀后 37℃水浴 准确保温30分钟
0.1（H2O）
0.5
0.5
0.5
0.5
——
——
0.5
0.5
混匀后 37℃水浴 准确保温20分钟
各加5ml ，混匀，静置10min，读A 520nm 0.000
六. 附注
➢2.4-二硝基苯肼与丙酮酸的颜色反并不是特异 性的，α-酮戌二酸也能与2.4-二硝基苯肼作用而 显色。 ➢2.4-二硝基苯肼身也有类似的颜色，因此空白 管颜色较深。
2）每g 肝脏谷丙转氨酶活力单位（U/g）
掌握谷丙转氨酶的测定方法。
C H 4-二硝基苯肼与丙酮酸的颜色反并不是特异性的，α-酮戌二酸也能与2. 2 2）每g 肝脏谷丙转氨酶活力单位（U/g） C H 2 C H 3 5μg 丙酮酸为一个谷丙转氨酶活性单位。
S ×2.
C H N H 新鲜肝脏（购买或取活的小白鼠肝脏） 2 5：谷丙转氨酶换算单位 C O O H 2）每g 肝脏谷丙转氨酶活力单位（U/g）
四. 实验试剂
1.标准丙酮酸 现配 2.谷丙转氨酶底物 4℃，1周
二硝基苯肼溶液
6.新鲜肝脏（购买或取活的小白鼠肝脏）
五、实验步骤
1.肝匀浆
处理：20g 肝先用生理盐水洗净，滤纸吸干水，再用预冷的0.1M pH7.4 PB捣
实验十 血液转氨酶(谷丙转氨酶)活力的测定
实验十、血液转氨酶（谷丙转氨酶）活力的测定（实验：肝脏谷丙转氨酶活力测定）（本实验分2个实验完成：一、制作标准曲线二、测酶活力和总结。
或就做二就可以）【目的和要求】1、了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义，2、学习转氨酶活力测定的原理和方法。
3、熟悉分光光度计的使用。
【原理】生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶，能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮基酸的α-酮基互换，在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。
转氨酶的最适pH接近7.4，它的种类甚多，其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶）和谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶）的活力最强。
它们催化的反应如下。
正常人血清中只含有少量转氨酶。
当发生肝炎，心肌梗死等病患时，血清中转氨酶活力常显著增加，所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。
测定转氨酶活力的方法很多，本实验采用分光光度法。
谷丙转氨酶作用于丙氨酸α-酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。
丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色，其吸收光谱的峰为439—530nm，因此在波长520nm处吸光度度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α-酮戊二酸的摩尔比基本呈线性关系，故可藉可用分光光度法测定。
从丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，可计算酶的活力。
【试剂和器材】一、试剂1.试管及试管架2.吸管3.恒温水浴4.分光光度计5、移液管6、电子天平7、研钵8、容量瓶9、冰箱二、器材1、标准丙酮酸溶液[标准丙酮酸（500μg/ml）]：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于pH7.4 0.1M 的PBS中，定容到100ml。
现用现配。
2、谷丙转氨酶底物：0.90g L-丙氨酸，29.2mg α-酮戊二酸，先溶于pH7.4 0.1M 的PBS中。
然后用1M NaOH调节pH到7.4，再用pH7.4 0.1mol/L的PBS定容到100ml，贮存于冰箱中，可使用1周。
肝脏谷丙转氨酶活力测定
实验八 肝脏谷丙转氨酶活力测定实验类型：验证性实验相关知识1. 酶活力：2. 酶活力单位(即酶含量的多少)国际单位 习惯单位：谷丙转氨酶在37度与底物作用30min 后，能产生2.5ug 的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位 3.转氨酶4 谷丙转氨酶一、 实验目的1． 了解转氨酶的性质及临床意义 2． 掌握谷丙转氨酶活力的测定方法二、实验原理丙氨酸及α－酮戊二酸作用为谷丙转氨酶的作用底物，利用内源性磷酸吡哆醛作辅酶，在一定条件下及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定酶活力。
丙酮酸能与2,4－二硝基苯肼结合，生成丙酸－2,4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439~530nm ，可用于测定丙酮酸的含量。
α－酮戊二酸也能与2,4－二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱为与丙酸－2,4二硝基苯腙的吸光度有差别，在520nm 波长比色时，丙酸－2,4二硝基苯腙吸光度高出3倍。
在520nm 处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α－酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系，故可以测定谷丙转氨酶的活力。
三、实验器材、试剂、材料 1． 新鲜猪猪脏2． 722型分光光度计、剪刀、吸管3． 标准丙酮酸溶液；谷丙转氨酶底物；0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH7.4）；0.02%2,4－二硝基苯肼；0.4mol/L NaOH 溶液2 ＋辅基为磷2 2 + + ‘ ‘四、实验操作步聚1.肝匀浆制备（1）将猪肝脏用生理盐水冲洗，滤纸吸干，称取肝脏0.25g，剪成小块，置于玻璃匀浆管内（或小研砵中），加入2.25ml预冷的pH7.40.1%mol/L磷酸缓冲液，制成10%肝匀浆。
（每四组1份）（2）吸取肝匀浆0.1ml于另一试管中，加入预冷的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）4.9ml摇匀，为稀释肝匀浆（稀释50倍）（每四组1份）2.谷丙转氨酶活力测定（每组做1份）取试管4支按下表加液五、实验结果与讨论2.每毫升稀释肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（谷丙转氨酶活力计算：规定酶在37度与底物作用30min后，能产生2.5ug的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位）3.每克肝脏谷丙氨酶的活力单位。
血清谷-丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)
将采集的血清样本进行适当的处理，如离心、过滤等，以去 除杂质和分离出血清部分。
实验操作步骤
实验操作
按照实验步骤，逐步进行实验操作，包括加样、反应、比色等。
实验记录
在实验过程中，详细记录实验数据和结果，以便后续的数据分析和处理。
04
结果分析
数据记录
总结词：准确记录
详细描述：在测定过程中，应准确记录每个步骤的数据，包括样本编号、试剂用 量、反应时间、温度等，以确保结果的准确性和可追溯性。
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05
实验结论
数据总结
实验数据
通过改良赖氏法测定，得到各样本的血清谷-丙转氨 酶活性数据。
数据处理
对实验数据进行统计分析，包括平均值、标准差、变 异系数等。
数据可靠性
确保实验数据的准确性和可靠性，排除异常值和离群 点。
实验结论
正常参考值范围
根据实验数据，确定正常参考值范围，为临床 诊断提供依据。
结果计算
总结词：科学计算
详细描述：根据实验原理和公式，对实验数据进行科学计算，得出谷-丙转氨酶的活性值。计算过程需注意单位的统一和数值 的精度。
结果解读
总结词：综合分析
详细描述：结合患者病情、肝功能其他指标以及肝功能检查的历史数据，对谷-丙转氨酶活性测定结果 进行综合分析，判断肝脏功能状况，为临床诊断和治疗提供依据。
通过加入溴代十六烷基三甲胺，可以减少反应 液中其他酶对谷丙转氨酶活性测定的干扰，提 高测定结果的准确性。
实验注意事项
实验前应确保血清样本无溶血、黄疸或脂血现象，以免影响测定结果。 实验过程中应严格控制反应温度和时间，以确保反应完全和测定结果的准确性。
在测定过程中应避免接触有毒物质，如重氮基苯磺酸铵等，以免对健康造成危害。
谷丙转氨酶活性检测
4℃保存。 ⑶将0.1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml和0.1mol/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即
为0.1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。加氯仿数滴，4℃保存。
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2. 标准丙酮酸（含丙酮酸2.0μmol/mL）
取标准丙酮酸钠10mg，用上述缓冲液准确定容为5批试剂的空白管吸光度上下波动不应超过0.015A，若有 超出，应仔细检查试剂与仪器方面的问题。
8.严重脂血、黄疸、溶血和糖尿病酮症酸中毒病人血清标本 可增加测定的吸光度，测定这类标本应做血清标本对照管
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七、酶活性单位的定义
* 1个卡门氏单位的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm
30 min，每生成2.5微克丙酮酸为1单位。
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六、临床意义
化验介绍:
正常时，谷－丙转氨酶主要存在于组织细胞内，以肝细胞 含量最多，心肌细胞中含量其次，只有极少量释放血中。所 以血清中此酶活力很低。
当肝脏、心肌病变、细胞坏死或通透性增加时，细胞内各 种酶释放出来，使血清中此酶活性升高。所以测定血清中此 酶的含量可作为诊断、鉴别诊断及预后观察的依据。
的条件下，1ml血清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。 * 国际单位：在最适温度（25℃）下，1分钟产生1μmol丙酮酸的酶量为1 个活性单位，即1IU=1umol/min。
血清谷丙转氨酶活力测定
血清谷丙转氨酶活力测定目的和要求了解转氨酶的性质及临床意义。
掌握用测定试剂盒方法测定谷丙转氨酶（GPT或ALT）活力。
原理在氨基酸分解代谢中，联合脱氨基作用是大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与谷氨酸氧化脱氨基作用偶联而完成。
此过程可用下式表示：本实验以丙氨酸的氧化脱氨为例，测定谷丙转氨酶活性。
在谷丙转氨酶的催化下，丙氨酸和α–酮戊二酸作用生成丙酮酸和谷氨酸。
此反应可逆，平衡点近于1。
无论正向或逆向反应皆可用于测定此酶的活性，既可测定所产生的氨基酸，也可测定生成的α–酮酸，因此可有多种测定方法。
本实验以丙氨酸及α–酮戊二酸作为谷丙转氨酶（GPT或ALT）作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作辅酶，在一定条件及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定其酶活力。
丙酮酸能与2，4二硝基苯肼结合，生成丙酮酸–2，4–二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439～530nm，可用于测定丙酮酸含量。
α–酮戊二酸也能与2，4二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱与丙酮酸二硝基苯稍有差别，在520nm波长比色时，α–酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远较丙酮酸二硝基苯腙为低（约相差3倍）。
经转氨酶作用后，α–酮戊二酸减少而丙酮酸增加，因此在波长520nm处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α–酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系，故可以籍以测定谷丙转氨酶的活力。
但是，由于在实验中不宜有过多的α–酮戊二酸以降低其对显色的干扰，因此，对于作为底物的α–酮戊二酸浓度作了一定的限制，从而不能保证酶反应充分进行，以致丙酮酸产量与酶之间的关系并不始终成一直线关系。
当酶量增大时，曲线斜率减小。
因此在测定时，如酶活力较大（大于100单位），应将样品稀释后再进行测定。
另外，2，4二硝基苯肼对此显色反应也有一定的干扰，因此，在制作丙酮酸标准曲线时，虽没有加α–酮戊二酸，但是丙酮酸二硝基苯腙的吸光度与丙酮酸含量之间的关系也并不始终呈一直线关系，丙酮酸含量增大时，曲线斜率降低，因此，必须采用标准曲线中呈现出直线关系的部分来测定丙酮酸的生成量。
血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)
改原赖氏法的反应温度(40℃改为37℃)和底物浓度( 改原赖氏法的反应温度(40℃改为37℃)和底物浓度(改为低 浓度) 浓度)的改良赖氏法，对卡门氏单位的科学套用，使比色 法一些缺陷得到了卓有成效的克服，使其结果与速率法较 为一致，能较好反映酶的真实活性。 由于赖氏法设计的底物浓度, 由于赖氏法设计的底物浓度,如a-酮戊二酸不足，反应速度 只能达到最大速度的65%；显色剂2,4只能达到最大速度的65%；显色剂2,4-二硝基苯肼的用量只 及反应液中酮酸浓度的一半；保温30min的酶促反应后， 及反应液中酮酸浓度的一半；保温30min的酶促反应后， 新生成的丙酮酸和未用完的a 新生成的丙酮酸和未用完的a-酮戊二酸存在着无法人为控 制的竞争显色的几率问题，如此等等，使赖氏法的重现性 较差，在测量精度上仍与连续监测法相差甚大。
【实验原理】 实验原理】 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃ 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、 pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中 pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中 的丙氨酸与α 的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：
生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加 生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加 成反应，生成丙酮酸-2,4成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中 生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围 内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。 内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。 据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过 标准曲线查出血清中ALT的活性。 标准曲线查出血清中ALT的活性。
二是比色测定法，如：金氏法（King法）、穆氏法（Mohun 二是比色测定法，如：金氏法（King法）、穆氏法（Mohun 法）和赖 氏法（Reitman-Frankel法）。其原理、试剂、操作步骤及作用温度等完全 氏法（Reitman-Frankel法）。其原理、试剂、操作步骤及作用温度等完全 相同。不同之处在于作用时间：King法60min ，Mohun法和 Reiman法 相同。不同之处在于作用时间：King法 Mohun法和 Reiman法 30min。因此它们的单位定义和标准曲线制备也不同。King法单位定义是： 30min。因此它们的单位定义和标准曲线制备也不同。King法单位定义是： 每1ml血清在37℃条件下与底物作用60 min，生成1μmol丙酮酸称为一个单 1ml血清在37℃条件下与底物作用60 min，生成1μmol丙酮酸称为一个单 位。 Mohun 法单位定义是：每毫升血清在pH=7.4，37℃条件下与底物作 法单位定义是：每毫升血清在pH=7.4，37℃条件下与底物作 用30 min，每生成2.5微克丙酮酸为1单位。赖氏法没有制定自身的单位定 min，每生成2.5微克丙酮酸为1 义，而是以实验数据套用速率法的卡门氏单位作表示的。1 义，而是以实验数据套用速率法的卡门氏单位作表示的。1个卡门氏单位 的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm的条件下，1ml血 的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm的条件下，1ml血 清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。可见卡门氏单位不是用物质 清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。可见卡门氏单位不是用物质 的量浓度，而是用物质的吸光度表示酶的活性单位的。若将卡门氏单位的 定义条件代入国际单位计算公式，即得卡门氏单位与国际单位的换算关系： 1卡门氏单位=0.4821 IU/L(25℃)，便可将卡门氏单位兑换成国际单位。 卡门氏单位=0.4821 IU/L(25℃)，便可将卡门氏单位兑换成国际单位。
谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定
谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定一、［实验目的］1.用纸层折法观察肝脏丙转氨酶ALT的转氨作用；2.用分光光度法测定血清丙转氨酶的活力；3.学习治疗检测SGPT的方法及原理；4. 了解检测肝损伤模型的制备及SGPT在科研中的应用。
二、［仪器与试剂］1.实验材料动物肝脏2.实验试剂(1) 0.9%NaCl 溶液(2)海砂(3)1%谷氨酸溶液(1%KOH溶液中和)(4)1%丙酮酸钠溶液(用1%KOH溶液中和)(5)0.1%KHCO廨液3(6)0.025%—澳乙酸溶液(用1%KOH中和)(7)2%乙酸溶液(8)酚的饱和水溶液：将2份酚和2份水(按重量计算)混合，放入分液漏斗中，振荡。
静止24h以后分层，将下部酚层放入瓶中备用。
新配制的酚展层剂可以反复使用1周。
(9)0.1%水合茚三酮的正丁醇溶液(10)0.1%标准谷氨酸溶液(11)0.1%标准丙氨酸溶液(12)1%KOH 溶液谷丙转氨酶活性的鉴定（纸层析法）一、［实验原理］观察肌肉糜中谷丙转氨酶所催化的氨基移换反应。
通过纸层析法检查底物谷氨酸的减少和产物丙氨酸的生成。
为防止丙酮酸被肌肉糜中的其它酶所氧化或还原，在反应系统中加入了抑制剂澳乙酸。
二、［实验操作］1.谷丙转氨酶提取液制备：2g肝脏+0.9%NaCL 6mL+海砂200mg，在低温下，研磨成浆，用稀薄的脱脂棉过滤，得提取液（滤液不清）。
2.转氨作用沸水浴2min，使蛋白质完全沉下，过滤，作层析3.纸层析操作方法取圆形层析滤纸1张，在圆心处用圆规绘出直径为3cm的同心圆（滤纸不可以折），通过中心将滤纸绘成四等分扇形。
用毛细管点样2-4次（直径不超过2mm），在滤纸的圆心上剪一小孔，直径约1-2mm，取一小滤纸条，将下端剪成刷状，在卷成灯芯插入圆形小孔，不能使灯芯突出纸面，将圆形滤纸平放在盛有层析液（水饱和酚）培养皿上，使灯芯向下与溶剂接触，用大小相同的培养皿盖在滤纸上，溶剂通过灯芯上升到滤纸上向四周展层，直到溶剂前沿移至距滤纸边缘约1cm处时停止（展层时间为1h），80-100℃烘箱干燥，喷洒水合茚三酮的正丁醇溶液，80-100℃显色。
实验十一 谷丙转氨酶活性的测定
A.取干净试管6支，编号后按照下表添加试剂。 B.将试管置于37℃水浴中保温10min，然后向每管中加入0.5ml2,4-二 硝基苯肼，再继续保温20min。 C.分别向各管中加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml，室温下静止10min。 D.用“0”号管作为空白对照，与520nm下测定吸收值。 E.以各管吸收值为纵坐标，丙酮酸的浓度为横坐标做标准曲线。
应
用
• GPT在肝脏中含量最多，当某种药物对肝脏早晨损害或病 毒肝炎的急性阶段，由于肝细胞受损，GPT就释放到血液 中，使血清中此酶水平明显要指标。
实验方法
1.标准曲线的制备
0 2mM丙酮酸标准溶液 （ml） 磷酸缓冲液（ml） GPT底物溶液（ml） 0.00 0.25 0.50 1 0.05 0.20 0.50 2 0.10 0.15 0.50 3 0.15 0.10 0.50 4 0.20 0.05 0.50 5 0.25 0.00 0.50
2、严格按照实验步骤进行，温度和时间均要严格控制。
2.GPT活性的测定：取干净试管4支，按照下表添加试剂。
试剂
鱼肌肉匀浆液（ml） GPT底物溶液（ml）
测定1
0.25 0.50
对照1
0.25
测定2
0.25 0.50
对照2
0.25
37 ℃水浴加热30min（转氨基反应） 2,4-二硝基苯肼（ml） GPT底物溶液（ml） 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50
37 ℃水浴加热20min（丙酮酸与2,4-二硝基苯肼反应） 0.4mol/L氢氧化钠溶液 （ml） 5.00 5.00 5.00 5.00
各管反应完成后混匀，室温静止10min后，以对照管1或者对照2调 节零点，测定1和2号管的吸收值。
血清谷丙转氨酶活性的测定改良赖氏法
试剂二
取0.1mol/L的磷酸缓冲液50mL， 加入0.5%的溴麝香草酚蓝溶液 1.5mL，用0.1mol/L的氢氧化钠 溶液调节pH至7.4，最后加蒸馏 水至100mL。
试剂三
取0.1mol/L的磷酸缓冲液50mL， 加入4%的碳酸氢钠溶液5mL， 用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节
ALT催化反应
在37℃水浴中，将混合液加入含有ALT催化底物的反应体系中，启动催化反应。
NADH消耗检测
通过分光光度计在340nm波长处监测反应体系中NADH的吸光度变化，记录数据。
数据处理与结果计算
根据吸光度变化计算ALT活性，并给出结果报告。
02 实验材料
CHAPTER
试剂准备
磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）
实验过程中产生的废液应按照实验室规定正确处理，避免对环境造 成污染。
遵守实验室安全规定
实验人员应严格遵守实验室安全规定，确保实验过程的安全性。
误差控制
保证试剂质量
01
使用高质量的试剂，确保试剂的准确性和稳定性，降低误差。
标准化操作
02
实验人员应遵循标准化操作流程，避免因操作不当引起的误差。
定期校准仪器
用于配制磷酸盐缓冲液，提供反应所需的pH环境。
赖氏试剂（Reitman-Frankel reage…
由NAD+、赖氏酸和缓冲液组成，用于提供反应所需的辅酶和还原剂。
血清样本
用于测定谷丙转氨酶活性，应确保血清中无细菌污染和溶血现象。
仪器设备
分光光度计
用于测定反应过程中吸 光度的变化，进而计算 酶活性。
恒温水浴
用于维持反应温度，通 常设定在37°C。
临床检测--谷丙转氨酶活性的测定
临床检测--谷丙转氨酶活性的测定临床检测是医学领域中非常重要的一部分，通过检测患者的生物样本中的各种生化指标，可以用来评估患者的健康状况和疾病的发展程度。
谷丙转氨酶（alanine transaminase，简称ALT）是一种重要的生物标志物，常用于评估患者的肝功能。
ALT是一种存在于细胞质中的酶，其主要在肝脏中和一部分在心肌、脾脏、肾脏中含量较低。
正常情况下，ALT的活性比较低，当肝细胞受到损伤时，ALT会被释放入血液中，导致血液中ALT活性的升高。
因此，通过检测血液中的ALT活性可以间接地了解患者的肝脏功能状况和肝细胞的损伤程度。
谷丙转氨酶活性的测定方法有多种，常用的方法有光度法、比色法和酶动力学法等。
其中，最常用的方法是利用光度法进行测定。
这种方法通过测量分析物的吸光度来确定其浓度，从而获得谷丙转氨酶活性的结果。
光度法的测定原理是谷丙转氨酶与特定底物反应生成特定产物，这种产物在特定波长下具有特定的吸光度。
通过测量产物的吸光度可以计算出样本中的谷丙转氨酶活性。
光度法测定谷丙转氨酶活性通常需要使用专用的仪器设备，如分光光度计、酶标仪等。
首先，需要准备好标准品和待测样品。
标准品是已知浓度的谷丙转氨酶，其活性单位为每升（U/L）。
待测样品可以是血浆或血清，通常需要先将其离心去除悬浮物，获得清晰的样本。
测定时，将待测样品和标准品分别加入反应试剂中，反应试剂含有特定的底物和辅酶。
然后，在恒定温度下，将反应混合物置于光度计或酶标仪中进行反应，反应时间一般为30分钟。
反应结束后，测定光度计读取每个反应混合物的吸光度并记录下来。
根据标准品的测定结果，可以建立起标准曲线。
标准曲线是以标准品浓度为X轴，吸光度为Y轴所绘制的曲线。
然后，利用待测样品的测定结果和标准曲线，可以计算出待测样品中谷丙转氨酶的活性。
在进行谷丙转氨酶活性测定时，需要注意一些技术细节。
首先，样本的处理过程中需要注意保持样本的稳定性和完整性，避免悬浮物的干扰。
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实验注意事项
1.在呈色反应中，2,4-二硝基苯肼与含有酮基的化合 物反应形成苯腙。底物中的α-酮戊二酸可以与2,4二硝基苯肼反应，生成α-酮戊二酸苯腙。因此在 制备标准曲线的时候需要加入一定量的底物以抵 消α-酮戊二酸的影响。 2.严格按照实验步骤进行，温度和时间均要严格控 制。
实验方法
2.GPT活性的测定：取干净试管4支，按照下表添加试剂。
试剂 鱼肌肉匀浆液（ ） 鱼肌肉匀浆液（ml） GPT底物溶液（ml） 底物溶液（ ） 底物溶液 测定1 测定 0.25 0.50 对照1 对照 0.25 测定2 测定 0.25 0.50 对照2 对照 0.25
37 ℃水浴加热 水浴加热30min（转氨基反应） （转氨表添加试剂。 B.将试管置于37℃水浴中保温10min，然后向每管中加入0.5ml2,4-二 硝基苯肼，再继续保温20min。 C.然后分别向各管中加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml，室温下静止10min。 D.用“0”号管作为空白对照，与520nm下测定吸收值。 E.以各管吸收值为纵坐标，丙酮酸的浓度为横坐标做标准曲线。
谷丙转氨酶活性的测定
原
理
丙转氨酶（GPT）能催化丙氨酸和α-酮戊 二酸生成谷氨酸和丙酮酸。丙酮酸在酸性 条件下与2，4－二硝基苯肼可缩合生成丙 酮酸二硝基苯腙，其在碱性条件下呈现棕 红色，在一定的浓度下，颜色的深浅符合 比尔定律，在520nm处有最大吸收。根据 颜色的深浅，通过比色法可计算出酶活性。
各管反应完成后混匀，室温静止10min后，以对照管1或者对照2调 节零点，测定1和2号管的吸收值。
实验数据计算
由标准曲线查出1号和2号反应管中的丙酮 酸的量，根据下面的公式计算GPT的活性。 GPT活力（单位）=反应管中丙酮酸的量（mM）
0.5小时×0.25ml
GPT活力单位的定义：单位时间（每小时）内，单位体积（每ml）的酶反应 生成的产物的量（mM）。
应
用
GPT在肝脏中含量最多，当某种药物对肝脏 早晨损害或病毒肝炎的急性阶段，由于肝细 胞受损，GPT就释放到血液中，使血清中此 酶水平明显升高。因此测定血清谷丙转氨酶 的活性可作为诊断肝病的重要指标。
实验方法
1.标准曲线的制备
0 2mM丙酮酸标准溶液 0.00 丙酮酸标准溶液 （ml） ） 磷酸缓冲液（ ） 磷酸缓冲液（ml） 0.25 GPT底物溶液（ml） 0.50 底物溶液（ ） 底物溶液 1 0.05 0.20 0.50 2 0.10 0.15 0.50 3 0.15 0.10 0.50 4 0.20 0.05 0.50 5 0.25 0.00 0.50
2,4-二硝基苯肼（ml） 二硝基苯肼（ ） 二硝基苯肼 GPT底物溶液（ml） 底物溶液（ ） 底物溶液 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50
37 ℃水浴加热 水浴加热20min（丙酮酸与 二硝基苯肼反应） （丙酮酸与2,4-二硝基苯肼反应） 二硝基苯肼反应
0.4mol/L氢氧化钠溶液 氢氧化钠溶液 （ml） ） 5.00 5.00 5.00 5.00