丙泊酚血药浓度测定

分子式： C12H18O 。分子量：178.274

血浆丙泊酚浓度高效液相色谱法（HPLC ）测定方法

色谱条件 色谱柱为Kromasil C18 (5μm, 4.6mm×250mm, 柱号：KR- 002545)；柱压：90～100kg·cm -1；柱温：40℃，流动相：乙腈-水（70:30）；流速：1ml·min -1；荧光激发波长为276nm ；发射波长310 nm ；内标物：麝香草酚；定量方法：峰面积法。高效液相色谱法测定中血浆内源性物质对测定无干扰，内标麝香草酚与丙泊酚完全分离, 内标麝香草酚的保留时间约为7.1 min ，丙泊酚保留时间约为11.1min 。样品分离色谱图见图1。

图1 丙泊酚和麝香草酚的高效液相色谱图

A 空白血浆

B 丙泊酚的标准溶液

C 丙泊酚和麝香草酚的标准溶液

D 样品血浆

1 麝香草酚

2 丙泊酚 丙泊酚标准溶液配制 精密称取丙泊酚对照品10mg,并加入100ml 的量瓶中,

A

B

C

D

1

2

2

1

2

用乙腈溶解并稀释至刻度,摇匀后即可得浓度为100 mg ·L - 1的丙泊酚标准储备液。精密量取丙泊酚对照品储备液1ml ，加至10ml 量瓶中用乙腈稀释至刻度,摇匀,配成浓度为10mg ·L -1的丙泊酚对照品标准工作液。

麝香草酚标准工作液配制 精密称取麝香草酚10mg,加入100ml 的量瓶中,用乙腈溶解并稀释至刻度,摇匀后即可得浓度为100mg ·L -1的麝香草酚标准工作液。

血药浓度测定 量取待测的肝素抗凝血浆1ml 加入试管中，并准确加入内标物即100mg ·L -1麝香草酚标准储备液100μl ,再加入PH6.0、浓度为0.1mol.l -1的磷酸二氢钾缓冲溶液100μl ，摇匀混合后,加入5 ml 环己烷有机溶剂,立即漩涡混和3min 。再在低温离心机中3000r.min -1离心20min,静置分层，取4ml 上层液移至另一尖底试管中，在50℃下用N 2 吹干，用100μl 流动相溶解,取20μl 进样分析。？

乙腈-水（70:30） 麝香草酚

磷酸二氢钾缓冲液PH6.0、浓度为0.1mol.l -1 环己烷

标准曲线制备 取6支10ml 具塞试管，并分别加入1ml 空白血浆，再精密量取适量的丙泊酚标准溶液，使其血药浓度分别相当于0.04μg.ml -1，0.1μg.ml -1，0.25μg.ml -1，1μg.ml -1，5μg.ml -1，25μg.ml -1的6种浓度的含药血浆（10mg ·L -1：4μl 、10.1μl 、25.64μl 、111.1μl 、1000μl ，100 mg ·L - 1：333.3μl ），取上述含药血浆各1ml ，按上述的血药浓度测定方法进行操作，以丙泊酚对内表物的峰面积比（X ）与丙泊酚的质量浓度(μg.ml -1)的进行线性回归。得丙泊酚在

0.04

～25μg.ml -1浓度范围内线性回归方程为Y =1.1679X -0.0025，相关系数r=0.9979，见图2

y = 1.1679x - 0.0025

R 2 = 0.996

5

10152025300.0000

5.0000

10.000015.000020.000025.0000

图2 标准曲线和线性方程

回收率与精密度实验

提取回收率在1ml空白人血浆中准确加入适量的丙泊酚标准溶液，分别配制成0.1μg.ml-1，1μg.ml-1和25μg.ml-1低、中、高3种质量浓度的丙泊酚标准血样（10mg·L-1：10.1μl、111.1μl，100 mg·L- 1：333.3μl），经萃取后再加内标，测定其峰高比R1，同法测定不经萃取的标准丙泊酚溶液加内标的峰高R2，按R1/R2×100%计算提取回收率，结果见表1.

x±，n=5）

表1 血浆中丙泊酚提取回收率（s

质量浓度（μg.mL-1）回收率/% RSD/%

0.1 99.15± 2.38 2.40

1 106.88±3.28 3.07

25 98.28±4.49 4.58

方法回收率同上述方法分别配制浓度也为0.1μg.mL-1，1μg.mL-1，25μg.mL-1三种浓度的丙泊酚标准血样各5份（10mg·L-1：10.1μl、111.1μl，100 mg·L- 1：333.3μl），按上述血药浓度测定方法进行操作，将测定的丙泊酚峰高与内标峰高比带入标准曲线，求出测定药物浓度，用测定浓度/实际浓度×100%公式求得方法回收率，见表2。

x±，n=5）

表2 测定方法回收率（s

质量浓度（μg.mL-1）回收率/% RSD/%

0.1 101.85±1.36 1.34

1 101.16±1.64 2.14

25 100.01±1.74 1.74

精密度实验同上述方法分别配制浓度为0.1，1，25μg.mL-1三种浓度的丙泊酚标准血样各5份（10mg·L-1：10.1μl、111.1μl，100 mg·L- 1：333.3

μl ），按上述血药浓度测定方法进行操作。以上3种浓度的血浆样品分别于同一日内不同时间内测定，共计5次，根据同一浓度的不同时间点测得的数值，计算各质量浓度的日内变异系数，即为日内精密度；另在连续5日每日测定一次丙泊酚的质量浓度，根据所测得浓度计算日间变异系数，即为日间精密度，低、中、高三种浓度日内、日间变异均小于10%，表明该方法的精密度符合生物样品的分析要求。结果见表3。

表3丙泊酚测定精密度（s x ±，n=5）

浓度（μg.mL -1

）

日内精密度 日间精密度

RSD/% RSD/% 0.1 0.10±0.02 1.86 0.10±0.01 2.26 1 1.03±0.04 1.36 1.01±0.02 3.14

25 24.78±1.65 2.46 24.38±2.03 4.41

灵敏度实验 精密取丙泊酚标准工作液用乙腈稀释不同浓度后进样，测得本

方法测定丙泊酚最低浓度为0.01μg. mL -1，灵敏度为1ng.ml -1。

抗干扰实验 本实验研究表明，正常人无药空白血浆中内源性物质不干扰本测定。为考察临床麻醉中合并用药对本测定方法的影响,对全麻手术前和手术中的一些常用药物包括阿托品、瑞芬太尼、七氟烷、顺式阿曲库铵等分别作了实验分析,结果发现,在本实验条件下，这些药物均不出峰或远离测定峰,表明这些药物均不干扰丙泊酚的测定。

同上述血药浓度的检测方法，依次对本实验的340个血样进行进样检测，求得各样品的丙泊酚和内表的峰面积，并计算出他们峰面积之间的比值，将其带入标准曲线方程即可求得各样品的血药浓度。

3.2 两组病人丙泊酚的血药浓度

丙泊酚静脉单次注射后，两组病人血药浓度下降均很快；两组病人的10min 以内的丙泊酚血药浓度女性低于男性（P <0.05）；10min 以后各时间点女性病人的血药浓度与男性相比仍有降低趋势，但差异无统计学意义（P >0.05）。见图5、6、7和表6。

s

x ±s x ±