克隆猪的重要事件资料
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直到2000年，才有我国东北农大李光鹏教授等再次成功获得胚胎细胞克 隆猪，重复出Prather等人的研究{Li GP, et al. Cloning,2(1):45-52。
普通体细胞克隆（1）
1999年，美国密苏里哥伦比亚大学Prather教授课题组报道了利用 猪胎儿成纤维细胞与体外成熟卵开展体细胞克隆的研究结果，但是 效率很低，所获囊胚质量也差，没有获得克隆猪{Tao T et al.
2003年，PPL公司的Phelps等在“Science”上报道了世界首例完 全敲除α-1,3半乳糖苷转移酶基因的体细胞克隆猪诞生;
2005年，Kolber-Simonds等在“PNAS”上才获得无α-1,3半乳糖 苷转移酶基因的体细胞克隆猪…
转基因体细胞克隆（2）
2006年，Prather课题组的Lai等成功克隆了国际首例能丰富表达 omiga-3型不饱和脂肪酸的转基因克隆猪，为家猪新品种培育奠定 了基础;
Our future?
Purpose: Commercial production of cloned/transgenic pigs for human disease models
转基因克隆来自百度文库
抗病育种 疾病模型 环境 友好型 肉、乳品质改造 生长性能改善、耐粗 生物反应器：药物蛋白
6. 易于推广商业化： 仪器设备费用低廉、技术易于掌握、人才需求方向广、生产效率 高等优点决定了易于推广。
Ovulation approx. 24/ 6 hrs Post-transfer !
1531/1562 cloned embryos 12/12 recipients 9/2 pregnancies
2000年，美国Infigen公司{Betthauser et al. Nature Biotechnol, 18:1055-59}的报 道利用体外成熟卵、胎儿成纤维细胞成功获得克隆猪，才奠定了今 天流行的利用体细胞核移植生产克隆猪的方案！！！
普通体细胞克隆（2）
此后，类似的研究如雨后春笋，虽然成功的国家不多，也还是吸 引了几十家课题组不断尝试结合转基因、基因敲除等技术为新品 种培育、异种器官移植、人类疾病模型研制等工作打基础。
cloning,1:55-62; Anim Reprod Sci,56:133-141};
Prather教授甚至一度想放弃体细胞克隆猪的研究！
2000年，英国PPL公司{Polejeva et al. Nature,407:86-90}，日本NIAI动物遗 传育种系{Onish et al. Science, 289:1188-1190}相继利用体内成熟卵开展体细 胞克隆获得成功，但是操作复杂，效率低。
转基因体细胞克隆（1）
2001年，Prather课题组报道首例转GFP基因体细胞克隆猪诞生
{Park et al. Animal Biotechnol, 12(2)173-181};
2002年，Lai等在“Science”和Dai等在“Nature biotechnology” 上几乎同时发表了敲除α-1,3半乳糖苷转移酶基因的体细胞克隆猪 的文章;
3. 操作简便性： 手工克隆完全手工完成，在经过短期培训后，一个拥有普通生物 背景的工作人员及能完成全部操作。
4. 易于推广： 已形成手工克隆实验室的标准配置以及标准操作流程，更加容易 实现整套体系的复制和推广。
5. 费用低廉： 不需要昂贵的仪器设备、不需要高级科研人才；只需要一台普通 体式显微镜、一个生物背景的工作人员、一把刀即可。
胚胎重构：传统的显微操作法Vs. 手工克隆法，二者效率相当， 但手工克隆法前期投入少，无需贵重仪器。
重构胚培养：较为成熟，体外发育囊胚率甚至高于IVF。
1. 高效性： 与传统克隆相比，手工克隆在囊胚率、怀孕率上都显示出较高
2. 稳定性： 手工克隆技术通过囊胚生产，选择优质囊胚进行移植，效率稳定。
我国每年约有150万 人因终末期器官功能 衰竭需要进行器官移 植，但每年仅1万人 左右能够得到移植治 疗，有近15－30％ 的患者因找不到合适 的器官进行移植而在 遗憾中死去。
猪 Vs. 人 器官大小 生理功能
猪 繁殖 饲养 易操作
2006年，Prather课题组Li RF等将克隆胚胎进行玻璃化冷冻，获得 克隆猪{Li et al.,Bio Reprod.75:226-230} http://arbg.missouri.edu/labs/prather/history.php
2007年，丹麦奥胡斯大学成功获得国际首例手工克隆猪{Du et al.,Theriogenology,68:1104-1110}；同年，还得到了玻璃化冷冻手工克隆胚 胎的后代{Du et al.,cloning and stem cells, 9(4):469-176} 。
9/1 term pregnancies
47(3.1%)/1(0.05%) piglets
克隆猪的商业化现状和前景
农业动物育种： 美国Viagen公司
医学 美国Infigen公司 丹麦Pixgene公司
其他 华大方舟
克隆猪商业化突破口
尤其是克隆高产优质种猪，可能还会提前；
……most likely, the first clones utilized in the swine industry will be boars with high genetic merit for production traits...... {Prat et al.
2007年，丹麦奥胡斯大学也得到了可能整合老年痴呆症致病基因 的克隆猪……
The Journal of Clinical Investigation http://www.jci.org April 2008
SEPTEMBER 26， 2008
2006年，东北农大获 得国内首例转GFP基
1989年: 该大学N. First教授课题组的Prather等，报道了世界首例胚胎细 胞克隆猪诞生{Prather, et al. Biol Reprod, 41:414-418};
特点：供核细胞为猪早期胚胎卵裂球，受体卵胞质为体内成熟的MII卵母 细胞，体内培养后进行胚胎移植！！！
此后到1999年，利用胚胎细细胞核移植获得克隆猪的报道就再也没有 了！！！
2006, Reproduction suppl. 303-}
在美国，克隆猪商业化的主要障碍还是人们的接受程度！
有望商业化的不单纯是克隆猪、猪肉，伴随着猪人工授精技术的不断成熟、大面 积推广，良种公猪的精液需求必将增加。顶级公猪的克隆成功将有助于这项工作。
即使在目前的效率下，克隆顶级公猪也能给饲养者带来较好的经济效益。而且体 细胞克隆技术在环保、降低饲料消耗上也能发挥应有的作用！
因克隆猪
2007年，广西 大学相继得到
普通克隆猪
2005年，中国农大 报道国内首例普通
克隆猪 2007年，中国农大先 后获得世界首例转溶 菌酶基因克隆猪、敲 除抑肌素基因克隆猪
2007年，上 海得到普通
克隆猪
我国大陆体细胞克隆猪概况
克隆猪技术本身的发展
卵母细胞：体外成熟（在美国已经有商业化的公司专门提供体外 成熟的卵母细胞）。
克隆猪的重要事件
以及产业化应用前景
Situation worldwide – for pig cloning
USA CHN
England
JPN
DK
ITA
AUS
South Korea
GER
胚胎细胞核移植克隆
1985年: 美国威斯康星大学 Robl and First 首次简单的描述了猪的胚胎细 胞核移植 { J Reprod Fertil, 33(Suppl):101-114} ;
普通体细胞克隆（1）
1999年，美国密苏里哥伦比亚大学Prather教授课题组报道了利用 猪胎儿成纤维细胞与体外成熟卵开展体细胞克隆的研究结果，但是 效率很低，所获囊胚质量也差，没有获得克隆猪{Tao T et al.
2003年，PPL公司的Phelps等在“Science”上报道了世界首例完 全敲除α-1,3半乳糖苷转移酶基因的体细胞克隆猪诞生;
2005年，Kolber-Simonds等在“PNAS”上才获得无α-1,3半乳糖 苷转移酶基因的体细胞克隆猪…
转基因体细胞克隆（2）
2006年，Prather课题组的Lai等成功克隆了国际首例能丰富表达 omiga-3型不饱和脂肪酸的转基因克隆猪，为家猪新品种培育奠定 了基础;
Our future?
Purpose: Commercial production of cloned/transgenic pigs for human disease models
转基因克隆来自百度文库
抗病育种 疾病模型 环境 友好型 肉、乳品质改造 生长性能改善、耐粗 生物反应器：药物蛋白
6. 易于推广商业化： 仪器设备费用低廉、技术易于掌握、人才需求方向广、生产效率 高等优点决定了易于推广。
Ovulation approx. 24/ 6 hrs Post-transfer !
1531/1562 cloned embryos 12/12 recipients 9/2 pregnancies
2000年，美国Infigen公司{Betthauser et al. Nature Biotechnol, 18:1055-59}的报 道利用体外成熟卵、胎儿成纤维细胞成功获得克隆猪，才奠定了今 天流行的利用体细胞核移植生产克隆猪的方案！！！
普通体细胞克隆（2）
此后，类似的研究如雨后春笋，虽然成功的国家不多，也还是吸 引了几十家课题组不断尝试结合转基因、基因敲除等技术为新品 种培育、异种器官移植、人类疾病模型研制等工作打基础。
cloning,1:55-62; Anim Reprod Sci,56:133-141};
Prather教授甚至一度想放弃体细胞克隆猪的研究！
2000年，英国PPL公司{Polejeva et al. Nature,407:86-90}，日本NIAI动物遗 传育种系{Onish et al. Science, 289:1188-1190}相继利用体内成熟卵开展体细 胞克隆获得成功，但是操作复杂，效率低。
转基因体细胞克隆（1）
2001年，Prather课题组报道首例转GFP基因体细胞克隆猪诞生
{Park et al. Animal Biotechnol, 12(2)173-181};
2002年，Lai等在“Science”和Dai等在“Nature biotechnology” 上几乎同时发表了敲除α-1,3半乳糖苷转移酶基因的体细胞克隆猪 的文章;
3. 操作简便性： 手工克隆完全手工完成，在经过短期培训后，一个拥有普通生物 背景的工作人员及能完成全部操作。
4. 易于推广： 已形成手工克隆实验室的标准配置以及标准操作流程，更加容易 实现整套体系的复制和推广。
5. 费用低廉： 不需要昂贵的仪器设备、不需要高级科研人才；只需要一台普通 体式显微镜、一个生物背景的工作人员、一把刀即可。
胚胎重构：传统的显微操作法Vs. 手工克隆法，二者效率相当， 但手工克隆法前期投入少，无需贵重仪器。
重构胚培养：较为成熟，体外发育囊胚率甚至高于IVF。
1. 高效性： 与传统克隆相比，手工克隆在囊胚率、怀孕率上都显示出较高
2. 稳定性： 手工克隆技术通过囊胚生产，选择优质囊胚进行移植，效率稳定。
我国每年约有150万 人因终末期器官功能 衰竭需要进行器官移 植，但每年仅1万人 左右能够得到移植治 疗，有近15－30％ 的患者因找不到合适 的器官进行移植而在 遗憾中死去。
猪 Vs. 人 器官大小 生理功能
猪 繁殖 饲养 易操作
2006年，Prather课题组Li RF等将克隆胚胎进行玻璃化冷冻，获得 克隆猪{Li et al.,Bio Reprod.75:226-230} http://arbg.missouri.edu/labs/prather/history.php
2007年，丹麦奥胡斯大学成功获得国际首例手工克隆猪{Du et al.,Theriogenology,68:1104-1110}；同年，还得到了玻璃化冷冻手工克隆胚 胎的后代{Du et al.,cloning and stem cells, 9(4):469-176} 。
9/1 term pregnancies
47(3.1%)/1(0.05%) piglets
克隆猪的商业化现状和前景
农业动物育种： 美国Viagen公司
医学 美国Infigen公司 丹麦Pixgene公司
其他 华大方舟
克隆猪商业化突破口
尤其是克隆高产优质种猪，可能还会提前；
……most likely, the first clones utilized in the swine industry will be boars with high genetic merit for production traits...... {Prat et al.
2007年，丹麦奥胡斯大学也得到了可能整合老年痴呆症致病基因 的克隆猪……
The Journal of Clinical Investigation http://www.jci.org April 2008
SEPTEMBER 26， 2008
2006年，东北农大获 得国内首例转GFP基
1989年: 该大学N. First教授课题组的Prather等，报道了世界首例胚胎细 胞克隆猪诞生{Prather, et al. Biol Reprod, 41:414-418};
特点：供核细胞为猪早期胚胎卵裂球，受体卵胞质为体内成熟的MII卵母 细胞，体内培养后进行胚胎移植！！！
此后到1999年，利用胚胎细细胞核移植获得克隆猪的报道就再也没有 了！！！
2006, Reproduction suppl. 303-}
在美国，克隆猪商业化的主要障碍还是人们的接受程度！
有望商业化的不单纯是克隆猪、猪肉，伴随着猪人工授精技术的不断成熟、大面 积推广，良种公猪的精液需求必将增加。顶级公猪的克隆成功将有助于这项工作。
即使在目前的效率下，克隆顶级公猪也能给饲养者带来较好的经济效益。而且体 细胞克隆技术在环保、降低饲料消耗上也能发挥应有的作用！
因克隆猪
2007年，广西 大学相继得到
普通克隆猪
2005年，中国农大 报道国内首例普通
克隆猪 2007年，中国农大先 后获得世界首例转溶 菌酶基因克隆猪、敲 除抑肌素基因克隆猪
2007年，上 海得到普通
克隆猪
我国大陆体细胞克隆猪概况
克隆猪技术本身的发展
卵母细胞：体外成熟（在美国已经有商业化的公司专门提供体外 成熟的卵母细胞）。
克隆猪的重要事件
以及产业化应用前景
Situation worldwide – for pig cloning
USA CHN
England
JPN
DK
ITA
AUS
South Korea
GER
胚胎细胞核移植克隆
1985年: 美国威斯康星大学 Robl and First 首次简单的描述了猪的胚胎细 胞核移植 { J Reprod Fertil, 33(Suppl):101-114} ;