疟原虫的镜检技术.

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疟原虫镜检技术操作规范

疟原虫镜检技术操作规范疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方法，具有严格的操作程序和技术要求，为了统一方法、规范程序、提高血检质量，特制定本操作规范。

一、血片制作（一）所需器材载玻片玻片3张（1张作载玻片，1张作推片，1张作采血后滴于玻片备血用）采血针采用一次性采血针。

玻片盒存放50或100片玻片的木质或塑料盒。

皮肤消毒液、棉签或酒精棉球75%的酒精、安尔碘、碘伏等皮肤表面消毒剂。

记号笔用于玻片上书写血检病人基本信息。

（二）操作步骤1、载玻片基本信息登记取1张载玻片，首先用目测法将载玻片从右（磨砂处为右）到左等分成6格，接着用记号笔在第1、2格即（磨砂处）写下血检病人基本信息：编号、姓名、制片日期结果（镜检结束后补写）。

载玻片上信息应与血检登记表中的项目对应。

如图12、采血采血部位为手指末端或耳垂，婴儿可从拇趾或足跟取血。

用消毒剂消毒取血部位皮肤后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1～2mm 深，约挤出1-2滴血，滴于玻片上（以备涂制厚薄血膜用）。

3、涂制血膜用推片的左下角刮取玻片上的血液4～5μl，涂于载玻片的第三格（靠近磨砂侧），由里向外一个方向旋转2～4圈，涂成直径为0.8～1.2cm的圆形厚血膜；再用该角沾取血液1～1.5μl血置于载玻片的中心点即（第四格前缘中点）；接着用干棉球或卫生纸擦净推片角上的血渍；最后用推片的下缘置载玻片的中心点（1～1.5μl血液处），当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°～35°角，从右向左迅速推成舌状薄血膜，即（薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部）。

如（图1）、（图2）疟原虫镜检涂制血膜方法示意图2薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳，（直观透过玻片能清晰看到报纸上的字）；厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜。

二、固定（一）所需器材1、甲醇2、器具玻璃棒、吸管（二）操作步骤薄血膜固定薄血膜晾干后，用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醇平铺于薄血膜上，起固定薄血膜作用，（注意不能固定厚血膜）。

疟原虫镜检技术技术和要求 (王波)

（五）血片的染色
吉氏染液保存时间长，保存时间长，染色时间长瑞氏染液保存时间短，保存时间短，染色时间短瑞吉氏
Hale Waihona Puke 六、镜检工作的一些要求1、疟原虫镜检工作中，凡是发热病人。疟疾、疑似疟疾、疟原虫镜检工作中，凡是发热病人。疟疾、疑似疟疾、及不明原因的发热病人均需进行疟原虫镜检。及不明原因的发热病人均需进行疟原虫镜检。 2、做好镜检登记：凡是镜检疟原虫的均需如实登记，阴、做好镜检登记：凡是镜检疟原虫的均需如实登记，阳性片保存待复核。阳性片保存待复核。每一个月均要向所在的县区疾控中心上报一次镜检数。 3、每一个月均要向所在的县区疾控中心上报一次镜检数。包括镜检人数、阳性、阴性数。包括镜检人数、阳性、阴性数。血片需要制作厚、薄血膜。 4、血片需要制作厚、薄血膜。镜检结果需分型。（如果无法确定疟原虫类型，。（如果无法确定疟原虫类型 5、镜检结果需分型。（如果无法确定疟原虫类型，可及时联系所在辖区疾控中心，进行血片复核）联系所在辖区疾控中心，进行血片复核）一旦发现阳性病例，需留存血样。 6、一旦发现阳性病例，需留存血样。
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（二）采血的部位
以耳垂采血为主。以耳垂采血为主。如使用抗凝静脉血，如使用抗凝静脉血，制作的血片容易造成厚血膜的脱落。的脱落。
（三）采血的血量
厚血膜血量约为5立方毫米左右(即一小滴) 厚血膜血量约为5立方毫米左右(即一小滴)，涂成边缘光滑之圆形，直径约0.8 1.0厘米左右 0.8— 厘米左右。边缘光滑之圆形，直径约0.8—1.0厘米左右。薄血膜血量只需0.5 1.0立方毫米左右 0.5立方毫米左右, 薄血膜血量只需0.5-1.0立方毫米左右,过多则血膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状长约2.5厘米， 2.5厘米膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状长约2.5厘米，宽约厘米。 2厘米。

疟原虫镜检技术-制片与染色PPT课件

能够根据形态特征鉴别不同种类的疟原虫，如恶性疟原虫、间日
疟原虫等。
病例分析
通过实际病例分析，提高疟原虫形态鉴别能力。
诊断结果的判定与报告
结果判定
根据镜下观察到的疟原虫形态特征，准确判定是否感染疟疾。
报告撰写
按照规范撰写诊断报告，包括患者基本信息、临床表现、镜检结果和诊断意见等。
沟通与反馈
及时与临床医生沟通，提供诊断意见，并根据医生反馈调整镜检技术。
05
注意事项与质量控制
制片过程中的注意事项
样本采集
采集的血液样本应新鲜，避免长时间放置，以免影响制片效果。
血膜制备
血膜应均匀涂片，避免出现厚薄不均或气泡，影响镜检结果。
干燥与固定
制片应在室温下自然干燥，避免过热或过冷，以免影响染色效果。
染色过程中的注意事项
染色液选择
01
根据制片要求选择合适的染色液，确保染色效果良好。
血膜的固定与干燥
固定方法
将固定液滴加在血膜上，使血膜完全浸没在固定液中，静置 10分钟，然后晾干或用吹风机吹干。
干燥注意事项
确保血膜干燥彻底，以免在染色过程中出现脱落或染色不均的情况。同时，干燥后的血膜应妥善保存，避免污染和损坏。
03
染色技术
染料的种类与选择
染料种类
注意事项
生物染料、荧光染料、酸性染料等。
02
制片技术
血液样本采集与处理
血液样本采集
采集患者耳垂或指尖血，确保血液新鲜、无污染。
血液处理
将采集的血液与等量抗凝剂混合，摇匀后静置10分钟，然后离心分离出血浆和血膜。
血膜的制作
血膜板制作
选择适当的血膜板，用吸管吸取少量血浆，均匀滴加在血膜板上，形成圆形血膜。

疟原虫显微镜镜检技术

正确的推片姿势
取血量及涂片法（涂片操作）
厚血膜用推片的一角，从取血部位刮取约4微升血量（相当于火柴头小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转 2~4圈，涂成直径 0.8~1厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。
涂制厚、薄血膜的位置
我国主要是间日疟常见，恶性疟次之，三日疟偶尔发现，卵形疟已无病例报告。
镜检疟原虫方法简述
19世纪后期，显微镜的出现使人们不断发现了传染病的病因。 1880年法国军医拉韦朗第一次见到并描述了人红细胞内的疟原虫，至此才解开了困扰人们数千年的疟疾的病因之谜。
镜检疟原虫方法简述
目前用于疟疾诊断的实验室检测包括病原学检查、免疫学检测和分子生物学检测三类。镜检疟原虫由于具有操作简便、敏感、价廉和可鉴别虫种等优点，广泛用于疟疾的病原学诊断已愈近一个世纪，仍是目前最常用的方法，也是我国疟疾诊断标准确定的实验室检查方法（WS259-2006）。
影响染色效果的因素
血片染色好坏除了与玻片是否清洁，血片制作质量好坏等有关外，还受到以下几个因素的影响：
（1）染料溶剂的质量染料、甲醇和甘油如果不纯，常使配制的染液偏酸或偏碱而影响染色效果。因此必须用分析纯的甲醇和中性甘油，而且在配制时所用的器具必须干净而无水份。
影响染色效果的因素
血膜的制作（取血操作）
取血方法采血部位一般人为耳垂，指头，通常在耳垂取血（现场取血建议用大头针采血，一人一针，避免血传疾病）。先用 75%酒精棉球消毒取血部位（冬季用手捻动耳垂使其充血后再行消毒），待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方，右手持消毒针迅速刺入耳垂下端1~2毫米，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻向挤压出血。

人体疟原虫镜检技术

恶性疟成熟裂殖体红细胞：大小正常，颜色较深，可见茂氏小点。大小：虫体较小。胞浆和核：裂殖子8~32个，常为 8~ 18个，排列不规则或呈二重排列，核红色胞浆兰色。色素：黑褐色，集中于中央或一侧。
薄血膜中成熟裂殖体形态特征

间日疟原虫裂殖体大于正常红细胞；裂殖子12~24个，通常 16~18个，排列不规则；疟色素常集于一侧，黄褐色
恶性疟
恶性疟
厚血膜恶性疟环状体
恶性疟
7个环状体散在于5个白细胞之间，每个虫体可见一个红色的核和蓝色断裂的或皱缩的原浆
厚血膜恶性疟配子体
厚血膜恶性疟配子体
恶性疟
厚血膜中疟原虫的形态特征

厚血膜的优点是能够提高疟原虫的检出率，厚血膜上原虫集中，检出率比薄血膜高出十几倍甚至数十倍，尤其是在轻度感染的情况下。但是，厚血膜的镜检亦受到很多因素的影响：厚血膜层次多、背景深、透光差，虫体收缩，疟原虫的形态结构远不如薄血膜上清晰典型；
镜检工作所需注意的事项
1、在镜检中显微镜的使用：油镜、目镜、视野需按顺序逐个检查。 2、疟原虫镜检工作中，凡是发热病人。疟疾、疑似疟疾、及不明原因的发热病人均需进行疟原虫镜检。 3、做好镜检登记：凡是镜检疟原虫的均需如实登记，阴、阳性片保存待考核。 4、每一个月上报一次镜检数。包括镜检人数、阳性、阴性。 5、如发现恶性疟以最快的通信方法，在24小时内报县、市、省疾病预防控制机构，阳性血片留待上级复核。 6、对每例确诊疟疾病人，在进行抗疟治疗前须采集病人静脉血5－10ml，并制作厚薄血片4张和滤纸血4份，以送省进行分子生物学鉴定。
卵形疟原虫 Plasmodium ovale
环状体
Ring stage

疟原虫实验室镜检-课件(1)

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以下照片在一般发热病人血片中是观察不到的
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寄生的红细胞
染色后，寄生的红细胞溶解，轮廓消失，但有时尚留下一“影子” 或小点。
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实图
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谢谢!
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小于正常红细胞；裂殖子较小，8～26个，通常8、 18个，排列不规则，疟色素成团块状，黑褐色
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雌配子体（薄血膜）
间日疟
恶性疟
大于正常红细胞，圆形；核小．致密，深红色，偏于一侧，胞浆深蓝色；疟色素散在

疟原虫的镜检技术-制片染色

免疫染色技术
利用特异性抗体对疟原虫进行染色，提高疟原虫的染色效果和特异性。
人工智能在疟原虫镜检中的应用
图像识别与分类
利用人工智能技术对显微镜下的疟原虫图像进行自动识别、分类和计数，提高镜检的准确性和效率。
数据挖掘与分析
通过人工智能技术对疟原虫镜检数据进行分析和挖掘，发现数据间的关联和规律，为疟疾防控提供科学依据。
固定涂片时要选用适当的固定剂，避免涂片脱落。
染色时要选用适当的染色剂，按照染色剂的要求进行操作，确保染色效果良好。
镜检时要仔细观察疟原虫的结构特征，避免误诊和漏诊。
冲洗时要彻底去除多余的染料和杂质，避免干扰观察。
03
疟原虫镜检制片染色技术
疟原虫镜检制片染色技术的原理
原理概述
疟原虫镜检制片染色技术是一种用于检测疟原虫的病理学方法。通过制备血液涂片，并对其进行染色，可以观察到疟原虫的存在
疟原虫镜检技术的应用场景
在疟疾流行地区，疟原虫镜检技术常用于对疑似疟疾患者进行快
速诊断，以指导治疗和防控。
在实验室研究中，疟原虫镜检技术可用于研究疟原虫的生物学特性、药物敏感性以及疫苗开发等
方面。
在公共卫生领域，该技术也可用于监测和评估疟疾的流行趋势和
传播风险。
02
制片染色技术
制片染色技术的原理
疟原虫的镜检技术-制片染色
目录
• 疟原虫镜检技术简介 • 制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术的发展趋势
01
疟原虫镜检技术简介
疟原虫镜检技术的定义
01
疟原虫镜检技术是指通过显微镜观察疟原虫在人体内的形态、结构和生长过程，从而对疟疾进行诊断和研究的实验技术。

疟原虫镜检操作规程

疟原虫镜检操作规程疟原虫镜检操作规程1.标本采集1.1标本采集前病人的准备：间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10余小时采血；恶性疟患者，应在发作后20小时左右采血。

1.2标本种类：全血或末梢血。

1.3标本要求：厚血片溶血要及时。

2．标本运送：室温运送。

3．标本拒收标准：被细菌污染。

4．操作步骤 4.1 薄血片法：4.1.1在洁净玻片上，滴血液标本1滴，以常法推制成薄片。

4.1.2 血膜完全干燥后即可用瑞氏法染色，干后用油镜镜检。

4.2厚血片法：4.2.1在洁净玻片上，滴血液标本2滴。

4.2.2用推片将血液由内向外转涂成直径约1cm、厚薄均匀的血膜，在室温中自然干燥。

4.2.3 在干燥的血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血约5分钟后倾去溶血液。

4.2.4 不必待干，进行瑞氏染色，干后镜检。

5．结果判断在油镜下观察，薄片须至少100个视野，厚血片至少20个视野，才能报告“未见疟原虫”；发现虫体后还应在薄血片上进行分类鉴别。

疟原虫胶体金法简易操作步骤原理基于双抗体夹心法工作原理，检测时，滴加5μL全血样本于试剂卡加样孔处，随之滴加4滴裂解液，裂解后的样本在毛细管效应下向上层析。

如样本中含有恶性疟原虫特异性乳酸脱氢酶（pflDH）和疟原虫乳酸脱氢酶（panLDH），将于胶体金标记物panLDH单克隆抗体反应形成复合物，在层析作用下前移，被预先固定在硝酸纤维膜上检测区的pflDH/panLDH单克隆抗体捕获，在检测区内形成1条/2条红色反应线，此时为阳性结果，如样本中无pflDH/panLDH抗原，在检测区内无红色反应线，此时为阴性反应。

步骤1.无菌采集患者EDTA-2K抗凝静脉血2ml。

1. 沿锡箔袋切口，撕开锡箔纸，取出疟原虫抗原检测卡，用铅笔或水写笔编号并做好登记。

2. 吸取5μL全血样本垂直滴加于加样孔A区，同时滴加4滴裂解液于加样孔B区。

3. 15分钟内观察显示结果，超过30分钟无临床意义。

疟原虫镜检技术

•
甘油
3ml
•
纯甲醇
97 ml
• 将瑞氏染剂粉置于研钵内，加入甘油
充分研磨后，然后加入少量甲醇碾磨后倒入有玻塞瓶中，再分次用甲醇冲洗碾钵中的瑞氏染粉甘油液，倒入瓶中，直至洗完。充分摇匀，一般放置一二星期后，再过滤
应用（保存时间愈久，染色力愈佳）。
• 急用时，放置24小时后过滤也可使用。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
（2）缓冲液的配制
PH M/15 Na2HPO4 M/15 KH2PO4
(ml)
( ml)
DW (ml)
6.8
49
51
900
7.0
63
37
900
7.1
68
32
900
7.2
73
27
900
7.4
81
19
900
• 加缓冲液的PH可用试纸或0.02%酚红液测定。
• 亦可用PH7.0中性蒸馏水稀释染剂
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
可用井水、河水、泉水或雨水。为了使血膜着色较好。
• （1）两种贮备液的配制：
• 贮备液I • •
1/15M磷酸氢二钠（Na2HPO4）溶液
Na2HPO4 9.5 g 蒸馏水 1000 ml
• 贮备液Ⅱ 1/15M磷酸二氢钾（KH2PO4 ）溶液
•
KH2PO4 9.07 g
•
蒸馏水 1000 ml
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
一、显微镜镜检用于疟疾诊断
• 显微镜镜检仍是目前广泛应用的疟疾诊断
技术(金标准）
• 主要优点
- 特异高 - 能区分虫种 - 能分期 - 能计数 - 1小时内能完成诊断程序

疟原虫显微镜镜检技术(共74张PPT)

正确的推片姿势
取血量及涂片法（涂片操作）
厚血膜用推片的一角，从取血部位刮取约4微升血量（相当于火柴头小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转 2~4圈，涂成直径 0.8~1厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。
涂制厚、薄血膜的位置
定的实验室检查方法（WS259-2006）。
镜检目的与意义
疟疾诊断标准中把疟疾病例分为疑似病例、临床病例、确诊病例和带虫者，前两者依据流行病学史和临床表现即可做出诊断，而后两者需通过发现病原体方能做出诊断。
通过对发热病人血检达到确诊疟疾病例。及时发现传染源和明确感染的疟原虫种类，以能针对虫种选择正确的治疗方案。
（吉氏染色）散在呈金黄色，集成团块呈黑褐色
在薄血膜上加瑞氏染液5～8滴，染色1～2分钟。单张血片染色：薄血膜经固定干燥后，用2%吉氏染液稀释液1~2毫升，滴入血片标本上染色30分钟左右；虫体占红细胞体积的2/3至3/4 虫体较小，圆形，占满胀大的红细胞涂制成直径1cm的厚血膜由于在制备过程中红细胞已溶解，疟原虫在形态上仍可分辨，但胞浆和胞核不可避免地形成一定程度的固缩。厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。在普查时均应查完整个厚血膜，未查见疟原虫则判为阴性。将瑞氏染剂粉1g置于研钵内，加入15ml甘油充分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用500ml甲醇洗出研钵中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后，置室温下，每天摇动5分钟，3天后即可使用。
血片的染色
一、吉氏染液母液配制
取吉氏粉克置于研钵中，加少量甘油充分研磨，边加边磨，至25毫升加完为止，倒入60或100毫升带有玻
塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量无水甲醇，洗去甘油浓

疟原虫镜检技术

● 如果不知患者的白细胞数，则每微升血以8 000个白
细胞计数(国际标准) 。
白细胞疟原虫计数法
●例如计数200 WBC中有35个疟原虫，在不知患
者白细胞数的情况下，以每微升血8 000个白细胞计数, 由此计算出每微升血液疟原虫密度为： 35（计数的疟原虫数）÷200（计数的白细胞）x 8000（每微升血白细胞数） =1400 / μl 答：该患者的疟原虫密度为1400 / μl。
2. 原虫细胞浆呈条带状或方形
3. 成熟裂殖体呈菊花状 4. 裂殖子数通常为6-12个 5. 齐氏点（西门氏点）较少见
卵形疟原虫形态特征
1. 被寄生红细胞正常大小或略涨大，边缘呈彗星状也称齿轮状 2. 疟原虫通常呈椭圆形 3. 薛氏点与间日疟相似
4. 裂殖子数通常为6-12
● 四种人体疟原虫都有双核和多重感染现象
red cell
A typical Plasmodium malariae presentation
Female patient, arrived from Brazil two weeks previously. Flu like symptoms since arrival.
● 间日疟原虫分布于我国大部分地区, 中部地区病例较多 ● 病程良性, 有复发
三日疟 P.malariae
●遍及热带和亚热带地区，特别是东、西非洲，呈片状、块状分布 ●三日疟在我国非常少见，只在南方有散在报告
卵形疟（蛋形疟） P.ovale
● 主要分布非洲。缅甸、东南亚有散在报告 ● 在我国卵形疟消灭
P. ovale
(P.m.)
(P.o.)
恶性疟 P.falciparum
● 分布热带、亚热带地区，是非洲的重要疾病 ● 我国流行区域为云南省和海南省 ● 四种疟原虫中致病力最强，无免疫力者感染后出现急性症状,不及时治疗可危及生命（脑型疟）

疟原虫的镜检技术-制片染色

注意：蛋白质和氨基酸都是两性电解质，要求染液的pH值7.0-7.2较好。染液偏酸时，所带的正电荷增加，易于伊红结合，使红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，而淋巴细胞和原虫的胞浆着色较差；反之，当染液偏碱时，红细胞和嗜伊红白细胞的颗粒等被染成紫蓝色，不易观察。
姬氏染液的染色方法
血片干燥后,先用甲醇或无水酒精固定薄血膜（瑞氏不需固定）, 再用清水对厚血膜溶脱血红蛋白(新制作的也可直接染色)，然后再进行染色。成批血片染色：将已用甲醇固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入 3%姬氏染液稀释液（3毫升姬氏原液加缓冲液或蒸馏水97毫升，混匀）浸没血片，同时对厚薄血膜染色30-40min（根据当地实际情况，酌情增减染色时间），然后用清水轻轻将染液漂洗干净，将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上晾干，包装，镜检。单张血片染色：将处理好的血膜，加姬氏母液2-3滴，加缓冲液或蒸馏水1ml，混合均匀，染色15-20分钟左右，然后用清水轻轻将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。（勿直接倾倒掉玻片上的染液，防止渣滓附着在玻片上冲不掉影响镜检）较理想的染色结果是红细胞为淡红或淡紫红色，疟原虫的胞质呈蓝色，核为紫红色，疟色素为棕褐色。
染液的种类
疟原虫的染色，目前临床上应用最广泛的是瑞氏（Wright stain）和姬氏染液（Giemsa stain）。这些染液中的主要染剂都包含美蓝、伊红和由美蓝氧化所成的天青，所以称多色性染剂。我们主要用姬氏染液，它具有方便，染色效果稳定，便于长期保存的优点。瑞氏染色，染色时间短，但染色效果不如姬氏稳定，主要在门诊量大的门诊实验室使用。
染液的染色原理
是染料与被染物的阴阳离子互相吸附而结合的一种化学反应。红、白细胞和疟原虫所含蛋白质的氨基酸电离出的阴阳离子与酸碱染料伊红、美蓝有色集团所带的阴阳离子相互结合便被染上不同的颜色。疟原虫和白细胞的胞浆被染成蓝色，红细胞、疟原虫和白细胞核被染成紫红色。

疟原虫镜检技术培训手册

目录第一章疟原虫生活史一、概述二、人体内发育三、蚊体内的发育第二章疟原虫镜下形态一、薄血膜中疟原虫形态二、厚血膜中疟原虫形态第三章显微镜使用及维护一、显微镜的构造二、显微镜使用三、使用注意事项四、显微镜的维护保养第四章血片制作与染色一、血片制作二、血膜的染色第五章疟原虫镜检技术一、血液二、血液中各种正常细胞形态三、薄血膜镜检四、厚血膜镜检五、杂质与疟原虫的鉴别六、疟原虫计数附录：疟原虫图谱第一章疟原虫生活史一、概述疟原虫是疟疾的病原体。

疟原虫为单细胞真核生物，属原生动物亚界顶端复合物门、孢子纲、真球虫目、疟原虫科、疟原虫属。

人体疟原虫有4种：间日疟原虫（Plasmodium vivax）、恶性疟原虫(P.falciparum)、三日疟原虫(P.malariae)和卵形疟原虫(P.ovale)，依次引起间日疟、恶性疟、三日疟和卵形疟。

在我国间日疟较常见，恶性疟次之，但对人体危害较间日疟严重，三日疟偶尔发现，卵形疟已无病例报告。

4种人体疟原虫的生物学特征见表1-1。

疟原虫的发育和繁殖，必须通过脊椎动物与昆虫媒介两个宿主，人体疟原虫的宿主是人和按蚊。

疟原虫在人体分别寄生于肝实质细胞和血液中的红细胞内，在蚊体内则寄生于蚊胃，最后积聚于唾腺。

4种人体疟原虫的生活史基本相同，包括在人体内的红细胞外期和红细胞内期以及在蚊体内的配子生殖和孢子增殖两个阶段。

二、人体内发育疟原虫在人体内的发育分成肝细胞内的发育和红细胞内的发育两个阶段。

（一）红细胞外期按蚊吸人血时，按蚊唾腺中的子孢子随唾液进入人体的末梢血液中，在30分钟内，随血流进入肝脏，在肝实质细胞内发育，进行裂体增殖，此时期称红细胞外期（简称红外期）或肝细胞期（简称肝期），此时期的疟原虫称肝期裂殖体。

成熟肝期裂殖体直径为45～60 m，内含数以万计的肝期裂殖子。

肝期裂殖体成熟致使肝细胞破裂，肝期裂殖子释入血液。

不同种疟原虫的此期所需时间不同，从6～12天不等。

疟原虫镜检技术

恶性疟原虫
●恶性疟原虫红细胞外期发育约需要5天，大约感染后第6天，在周围血液中查见疟原虫。
●恶性疟原虫在红细胞内期发育最初24小时内，一般能在周围血液中查到环状体，亦可能查到大滋养体。
●24小时后聚集在肝、脾、脑、骨髓等内脏的毛细血管内发育进行裂体生殖。恶性疟原虫裂体生殖周期36～48小时。
2. 间日疟原虫大滋养体（ T ）
红细胞：胀大褪色，出现分布均匀，数目较多，红色薛氏小点。
大小：较大。胞浆：不规则，浅蓝色
，出现阿米巴伪足，有空泡。核：红色，一个。色素：细小杆状，黄葛
色，分布不均匀。
间日疟原虫大滋养体
薄血膜间日疟原虫形态
3.间日疟原虫未成熟
裂殖体（ S ）
红细胞:胀大，褪色，可有薛氏小点。
疟色素:无。
2. 恶性疟原虫大滋养体
红细胞：大小正常，颜色较深，可出现较粗、大小不一、分布不匀、数目较少红色茂氏小点。
大小：较小。
胞浆：蓝色，圆形，空泡不显著。
核：一个，红色。
疟色素：细小，金黄色，晚期结成块状，呈黑褐色。
3.恶性疟未成熟裂殖体
红细胞：大小正常，颜色较深，可有茂氏小点。大小:较小。胞浆:规则，圆形或卵圆形，蓝色。核:分裂为二个以上，红色。疟色素:黄褐色颗粒，常集成黑褐色团块。
薄血膜间日疟原虫形态
5.间日疟原虫雌（大）配子体
形状大小：圆或椭圆，大于正常红细胞。
胞浆：深蓝色。
核：一个，较小，致密，深红色，位于一边。核周可见明显不染色带。
疟色素:黄褐色,数目较多，均匀散在分布。
薄血膜间日疟原虫形态
6.间日疟原虫雄（小）配子体

疟原虫的镜检技术

正确使用显微镜步骤
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将载玻片放在载物台上，用压片夹固定。
转动转换器，将低倍物镜对准通光孔。
调节光圈和反光镜，使视野亮度适宜。
转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近载玻片。
一只眼注视目镜内，同时逆时针方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直到看清物像为止。再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。
结果判断失误
应结合临床症状和其他检查结果进行综合判断，避免误诊或漏诊。
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镜检技术在疟疾防控中应用前景
提高镜检技术准确性和效率
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改进显微镜设备
采用高分辨率、高对比度的显微镜，提高疟原虫检测的准确性。
优化镜检流程
建立标准化的镜检操作流程，减少人为因素对结果的影响，提高检测效率。
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常见误区及问题解决方法
涂片制作中常见问题
涂片过厚或过薄
染色时间不足或过长
应掌握适当的涂片厚度，过厚会影响观察，过薄则可能漏检。
应严格控制染色时间，确保疟原虫着色清晰。
血液未充分干燥
涂片后应等待血液完全干燥，否则在染色过程中可能导致颜色不均匀。
观察过程中常见问题
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Hale Waihona Puke 0103显微镜使用不当
100%
流行病学调查
通过对人群进行疟原虫检测，可以了解疟疾的分布情况、流行趋势和传播途径等信息，为制定防治策略提供依据。
80%
药物疗效评价
在治疗过程中进行疟原虫检测，可以观察药物的疗效和患者的恢复情况，及时调整治疗方案。
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镜检技术原理及方法

镜检疟原虫技术课件

卵形疟原虫：主要通过按蚊传播，症状较轻，周期性发作
诺氏疟原虫：主要通过按蚊传播，症状较轻，周期性发作
热带疟原虫：主要通过按蚊传播，症状较轻，周期性发作
疟原虫的生活史
疟原虫是一种单细胞原生动物，属于疟原虫属
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无性生殖阶段：疟原虫在人体内繁殖，产生大量子代疟原虫
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有性生殖阶段：疟原虫在人体内形成配子体，进行有性生殖，产生新的疟原虫
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调整显微镜：调整光源、物镜、目镜等，确保图像清晰
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观察疟原虫：在显微镜下观察疟原虫形态、运动方式等特征
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拍照记录：拍摄疟原虫图像，以便后续分析与研究
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镜检疟原虫Leabharlann 步骤采集血液样本：使用抗凝管采集患者的外周血。
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制备血涂片：将血液样本滴在载玻片上，用推片器均匀涂抹。
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固定和染色：将血涂片用固定液固定，然后用疟原虫染色液染色。
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镜检疟原虫技术的应用
疟疾的诊断与治疗
镜检疟原虫技术是诊断疟疾的重要手段
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镜检疟原虫技术可以指导抗疟药物的选择和剂量
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镜检疟原虫技术可以快速、准确地诊断疟疾
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镜检疟原虫技术可以监测抗疟药物的疗效和耐药性
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疟原虫研究的进展
疟原虫基因组测序：揭示了疟原虫的遗传信息，为抗疟药物研发提供了新思路
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镜检疟原虫时，应仔细观察，避免漏检和误检
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疟原虫检测结果分析
阳性结果的意义
感染疟原虫：阳性结果表示患者体内存在疟原虫感染。
疾病诊断：阳性结果有助于疟疾的诊断和治疗。
疾病监测：阳性结果有助于疟疾的流行病学监测和预防。