文献综述 免疫印迹法

免疫印迹法近年发展综述

摘要：简述了免疫印迹法的原理和方法，并对近年来的应用作了简要概括，使读者能对免疫印迹法的近年发展有一定的认识，并对其未来的发展作展望。

关键词:免疫印迹法小分子蛋白间接疫荧光法 HIV抗体糖尿病

前言：蛋白免疫印迹法自发明以来，发展迅猛，本文对其近年来的发展作了简要概述。

正文：

1原理

蛋白免疫印迹技术(Westernblot)由美国斯坦福大学的乔治·斯塔克发明，其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的蛋白样品进行着色，再通过分析着色的位置和深度获得目的蛋白在样品中的表达情况信息[1-3]。蛋白免疫印迹技术集凝胶电泳、蛋白转印和免疫学标记等三部分于一体，在现代生物医学中广泛应用[4,5]。

2方法简述

该项技术通过聚丙酰胺凝胶电泳分离目的蛋白质标本，并将其转移到固相载体（例如硝酸纤维素膜，聚偏二氟乙烯膜等）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与相对应的单克隆或者多克隆抗体起免疫反应，再与酶标记的二抗起反应，经过底物显色检测电泳分离的特异性目的蛋白成分与含量[6-8]。

3应用

蛋白免疫印迹法自发明以来被广泛应用于现代生物学研究中的蛋白质定性和半定量分析[9]。

3.1免疫印迹法、酶联免疫法及放射免疫法对胰岛自身抗体检测的比较

采用免疫印迹法测定81例糖尿病患者胰岛自身抗体,将结果与酶联免疫法测定的GAD-A、ICA,放射免疫法测定IAA结果进行比较。结论是放射免疫法检测IAA、酶联免疫法检测ICA阳性率均高于免疫印迹法,免疫印迹法检测GAD-A阳性率则高于放射免疫法[10]。

3.2检测小分子蛋白的实验条件优化研究

探讨免疫印迹法不同参数对小分子蛋白检测效果的影响，从而优化并获得最佳实验条件。方法：比较不同转膜电压和时间、转移缓冲液甲醇含量、不同化学发光剂对小分子蛋白的检测效果。结论是选用高电压、短时间组合，选择含20%甲醇转移缓冲液和飞克级化学发光剂信号均有助于小分子蛋白免疫印迹检测[11]。

3.3间接疫荧光法检测抗核抗体与免疫印迹法检测抗核抗体谱结果的分析比较

比较间接免疫荧光法筛查抗核抗体与免疫印迹法检测抗核抗体谱（谱）特异性抗体结果的一致性，分析二者的相互关系及临床意义。结论是两种检测无统计学差异，但法对的筛查具有覆盖谱抗体面广的特点，而特异性自身抗体检测具有疾病特异性和较高的检测敏感性，并且两种方法学间存在检测敏感性和特异性的差异[12]。

3.4 HIV抗体不确定血清蛋白免疫印迹法检测条件的正交实验优化及应用

优化蛋白免疫印迹法（WB）对艾滋病病毒（HIV）抗体不确定血清的检测条件,并测试其检测效能。以样本量100μＬ、样本孵育时间2小时、酶联合物孵育时间15分钟,为HIV抗体不确定血清的最优检测条件；同标准检测条件相比,优化检测条件对HIV阴性或阳性血清的检测效能一致，但对19例HIV抗体不确定血清的检测效能更高[13]。

3.5化学发光酶免疫法和免疫印迹法检测糖尿病自身抗体的结果分析

对比分析化学发光酶免疫法和免疫印迹法在糖尿病自身抗体检测中的应用效果。结论CLISA法检测糖尿病自身抗体敏感性及特异性较IB法高，值得在糖尿病诊断中推广应用[14]。

3.6免疫印迹法的改良

通过改变添加抗体方式的不同达到改良的目的。不同总量蛋白的免疫印迹法显并无显著性差异。但是，相比常规方法改进法使用的抗体量更少，条带更容易检测得到。结论：改进后的免疫印迹法能有效的节约抗体，操作方便，实用性强[15]。

结论:综上所述，免疫印迹法在蛋白质的检测方面有着重要作用，尤其在

医疗方面的应用有着巨大的影响和发展空间，近年来在这方面有许多研究。其发展潜力是较大的，但目前更偏向于应用，未来可能在不同的蛋白质研究和人类疾病方面深入发展，以往的技术已较为成熟，对免疫印迹法的改良也可能还会做出更多成果。

参考文献

[1]GreenMR,SambrookJ.Molecularcloning:alaboratorymanual[C].ColdSpringHarbor,

N.Y:ColdSpringHarborLaboratoryPress,2012

[2]KurienBT,ScofieldRH.Proteinblotting:areview[J].JImmunolMethods,2003,

274(1-2):1-15

[3]TowbinH.Originsofproteinblotting[J].MethodsMolBiol,2009,536:1-3

[4]MacPheeDJ.MethodologicalconsiderationsforimprovingWestern

blotanalysis[J].JPharmacolToxicolMethods,2010,61(2):171-177

[5]KumarS,ZhengH,MahajanB,etal.Westernblotassayforquantitativeandqualitative

antigendetectioninvaccinedevelopment[J].CurrProtocMicrobiol,2014,33(18):41

[6]AusubelFM.Shortprotocolsinmolecularbiology:acompendiumof

methodsfromCurrentprotocolsinmolecularbiology.5thed[M].NewYork:Wiley;2002

[7]ChangMM,LovettJ.Alaboratoryexerciseillustratingthesensitivity andspecificityofWesternblotanalysis[J].BiochemMolBiolEduc.2011,39(4):291-297 [8]MacPheeDJ.MethodologicalconsiderationsforimprovingWestern

blotanalysis[J].JPharmacolToxicolMethods,2010,61(2):171-177

[9,11]王文倩，魏颖，王宇，等.蛋白免疫印迹法检测小分子蛋白的实验条件优化研究［A］.现代生物医学进展,2015,15(07):1230

［10］张宇,陈玲,熊中云，等.免疫印迹法、酶联免疫法及放射免疫法

对胰岛自身抗体检测的比较［J］.华西医学,2009,24(3):697

［12］李琦,彭旭娇,尚晓泓,等.间接疫荧光法检测抗核抗体与免疫印迹法检测抗核抗体谱结果的分析比较

［13］麦涛.HIV抗体不确定血清蛋白免疫印迹法检测条件的正交实验优化及应用［A］.中国艾滋病性病2014,20(2):109

［14］赵凯.化学发光酶免疫法和免疫印迹法检测糖尿病自身抗体的结果分析［A］.糖尿病新世界,2015,12(3):12-14

［15］尚蕾等.一种改良型的免疫印迹法［A］.2012,12(32):6368-6370