体液蛋白质检验
体液蛋白质检验方法介绍
体液蛋白质检验方法介绍一、背景介绍体液蛋白质检验是临床常用的检查方法之一，用于评估机体健康和诊断疾病。
蛋白质是生命体中最重要的有机物之一，对维持机体正常功能起着重要作用。
通过体液蛋白质检验，可以了解体内蛋白质的含量和特性，判断机体的代谢状态和发生疾病的可能性。
二、体液蛋白质检验的常用方法1. 琼脂凝胶电泳法琼脂凝胶电泳法是一种常用的体液蛋白质分析方法，通过使用特定的电荷和孔隙大小，蛋白质可以在电场作用下分离成不同的带状条带。
这些条带可以用染色剂或特定的抗体进行检测和定量分析。
琼脂凝胶电泳法可以用于分析血清、尿液和其他体液中的蛋白质，可以对蛋白质的组成和浓度进行评估。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种高效的蛋白质分析方法，通过液相色谱柱将混合的蛋白质样品分离。
这种方法具有高分辨率和高灵敏度，可以用于测定体液中特定蛋白质的含量和活性。
HPLC可以用于分析血清、尿液和其他体液中的蛋白质，是一种常用的蛋白质定量和定性分析方法。
3. 免疫测定法免疫测定法是一种常用的体液蛋白质检验方法，通过免疫反应来确定体液中特定蛋白质的含量。
常用的免疫测定方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定和免疫印迹等。
这些方法利用特异性抗体和标记物（如酶、放射性同位素或荧光物质）来检测目标蛋白质。
免疫测定法具有高灵敏度和高特异性，可以用于快速、准确地定量和定性检测体液中的蛋白质。
三、体液蛋白质检验的应用体液蛋白质检验广泛应用于临床诊断和疾病监测中。
以下是一些常见的应用场景：1. 诊断疾病体液蛋白质检验可以帮助医生诊断各种疾病，如肾脏疾病、免疫系统疾病和代谢性疾病等。
通过检测体液中的蛋白质含量和组成，可以判断机体的代谢状态、炎症程度和疾病的类型。
2. 监测疾病进展体液蛋白质检验也可以用于监测疾病的进展和治疗效果。
通过定期检测体液中特定蛋白质的含量和活性，可以评估疾病的严重程度和治疗效果，指导后续治疗方案的制定。
体液蛋白质检验
（十）铜蓝蛋白（ CER ）含铜的糖蛋白，分 子量约12～16万，含糖量约10％，因含铜而呈蓝 色，故名铜蓝蛋白。主要由肝脏合成。
CER具有氧化酶活性，使血液中Fe2+氧化成 Fe3+，故又称亚铁氧化酶。CER还起着抗氧化剂 的作用。防止组织中脂质过氧化物和自由基的生 成。 CER测定方法 免疫化学法或酶活性测定。 【参考范围】0.2～0.5g/L。
6.营养作用 血浆蛋白质可分成 AA，用于合成组织蛋白或氧化供能。 7.催化作用 血浆中有许多酶类， 其中部分在血浆中发挥作用，称血浆功 能性酶，如凝血酶原、纤溶酶原、铜蓝 蛋白、LPL、LCAT、肾素等。
（二）血浆蛋白质的分类
1、根据分离方法分类 盐析法：白蛋白/球蛋白（pH7.0半饱和的硫酸铵溶液）
CRP测定方法 免疫扩散法，火箭免疫电泳 法，ELISA法，放免法， 【参考范围】＜8.0mg/L。
【临床意义】作为急性时相反应的一个极灵 敏指标 ，急性心肌梗死，创伤、感染、炎症、 外科手术、肿瘤浸润迅速上升。
上述蛋白质除PA、Alb、BMG 外都属于糖蛋白，含糖量最高的是 AAG、45％，除BMG外都主要由肝 细胞合成。
【临床意义】急性炎症，恶性肿瘤，肝硬 化或肾炎时下降。
（二）视黄醇结合蛋白
• 视黄醇结合蛋白(Retinol-Binding Protein,RBP)是血液中维生素的转运蛋白，由 肝脏合成、广泛分布于血液、脑脊液、尿液及 其他体液中。 • 测定视黄醇结合蛋白能早期发现肾小管的功能 损害，并能灵敏反映肾近曲小管的损害程度， 还可作为肝功能早期损害和监护治疗的指标。
【临床意义】 TRF 在急性时反应中下降， 如炎症、恶性病变时、 TRF 、 Alb 、 PA 同时下 降，慢性肝病及营养不良亦下降，妊娠、口服 避孕药，注射雌激素TRF上升。
体液蛋白质检验
C-反应蛋白
C-反应蛋白(C-reactive protein，CRP)是第一个被认定 为急性时相反应的蛋白质。主要由肝细胞合成，MW115 ~140kD，。
CRP广泛分布于各部分体液中，如血液、胸腹水、心 包液、关节液等处，具有类似抗体的功能，能激活补体， 促进粒细胞、巨噬细胞的运动和吞噬，有免疫调理作用， 表现炎症反应。对血小板凝聚和血块收缩有抑制作用。
转铁蛋白
【临床意义】 1．缺铁性贫血时TRF升高，而由于铁利用障碍引起的贫 血时TRF正常或降低，血清TRF测定可用于贫血的诊断及 贫血类型的鉴别。 2．TRF是负性急性时相反应蛋白，在急性时相反应时降 低；在慢性肝脏疾病、营养不良等疾病时血清TRF含量亦 降低。 3．妊娠、口服避孕药、注射雌激素类药物等可使TRF含 量升高。
CRP不受红细胞、血红蛋白、脂质和年龄等因素影响， 是反映炎症、感染及疗效的良好指标。
C-反应蛋白
【临床意义】 CRP升高有临床意义。CRP反应非常灵敏，在疾病发生
6～12小时内迅速上升，甚至可达正常时的2 000倍。因此， 血液中CRP的水平可以及时反映病情变化。
但CRP特异性差，不适用于单一疾病的诊断。它的临 床价值主要是在组织损伤的筛查和监测，以及判断病人是 否感染、评估消炎药物的疗效、诊断疾病复发的可能性。
α1-抗胰蛋白酶
α1 -抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin，α1-AT或AAT)主要由肝 脏合成，为一条含394个氨基酸残基的单链多肽，含糖10 ％～12％，MW51kD，。
AAT是一种具有蛋白酶抑制作用的急性时相反应蛋白， 也称丝氨酸蛋白酶抑制物，是血清中最主要的蛋白酶抑制 物，其作用占血清中抑制蛋白酶活力的90%以上。
第八章体液蛋白质检验
医学课件体液蛋白质检验
• • • • • •
检验学部属于蛋白质的实验项目
生化室：总蛋白，白蛋白，球蛋白，载脂蛋白A1，载脂蛋
白B，前白蛋白，脂蛋白（a），高密度脂蛋白，低密度脂蛋 白，极低密度脂蛋白，血清蛋白电泳（白蛋白，α1、α2 、 β 、γ球蛋白），血尿β2微球蛋白，糖化血红蛋白，肌钙 蛋白-T，24小时尿蛋白定量，尿微量白蛋白，酶类。
心
血浆蛋白质的分类
3、血浆蛋白质的分类
• 根据分离方法： ①盐析法：白蛋白和球蛋白两大类（各种蛋白 质的亲水性和所带的电荷均有差别。） ②电泳法（醋酸纤维素薄膜）：白蛋白、α1－ 球蛋白 、 α2 － 球蛋白、 β －球蛋白、纤维 蛋白原、γ－球蛋白。
电泳法分类
白蛋白（40－60％）
α1-球蛋白（α1-抗胰蛋白酶、血清 类粘蛋白、α1-酸性糖蛋白、甲胎 蛋白）
尿中蛋白超过以上数值则称蛋白尿。
2、前白蛋白（prealbumin, PA）
肝细胞合成，分子量54 000，半衰期12小时。 在pH8.6电泳中移速比白蛋白快而得名。 • ⑴功能：①营养 半衰期12小时； • ②运载 结合T3、T4、结合维生素A。
参考范围 PA 0.18~0.45g/ L
生理功能
α2-球蛋白（α-脂蛋白、触珠蛋白、 铜蓝蛋白、α2-巨球蛋白）
β-球蛋白（转铁蛋白、血红素结合 蛋白、 β微球蛋白、纤维蛋白原、 β脂蛋白、补体） γ-球蛋白（各种免疫球蛋白主要位 置及C-反应蛋白）
根据生理功能分类：
பைடு நூலகம்
二、一些临床常检测血浆蛋白质
1、白蛋白（albumin , Alb) 肝实质细胞合成，分子量66 458， 半衰期15～19天，是血浆中含量最多的蛋白质，占40～60％。 在肝细胞中没有贮存。 • 分子结构1975年阐明，含585个氨基酸残基的单链多肽， 分子量66458，含17个二硫键（—S—S—），不含糖的组分。
蛋白测定、电泳
（五）染料结合法
• 考马斯亮蓝常用于需更高呈色灵敏度的蛋 白电泳中，也可用于测定尿液、脑脊液等 的蛋白质，
• 优点：简便、快速、灵敏 • 缺点：不同蛋白质与染料的结合力不一 致，且试剂对比色杯有吸附作用。
（六）紫外吸收法
• 测定原理：蛋白质中的色氨酸、酪氨酸 的共轭双键，在280nm处有一吸收峰。 • 尿酸和胆红素在280nm附近有干扰，不 适合血清、尿液等组成复杂的蛋白质溶 液测定
表3-2
三种比色法和紫外分光光度法测定蛋白质的比较
灵敏度
化学干扰程度 不同蛋白质
快速性和
(最低测定值)
间的误差
复杂性
双 缩脲 100μg 酚试剂 1μg 考马斯亮蓝 1μg 紫外分光光度 10μg
中等 严重 低 较严重
小 大 大 大
快速简单 较复杂 快速简单 快速简单
表3-6
方 法 1．凯氏定氮法
• 用于较纯酶、免疫球蛋白等蛋白质测定
（六）紫外吸收法
• 生物样品也常混有核酸，核酸最大吸收峰为 260nm，在280nm也有较强的光吸收，因而 测定蛋白质可采用两个波长的吸光度予以校 正. • 蛋白质浓度（g/L）＝1.45A2800.74A260nm。
（六）紫外吸收法
• 优点： 操作简便、快速，线性 20-100mg/l 灵敏度高(较双缩脲法约10倍)， 样品少，且无需处理可直接测定 样品可全部回收，特别适用于来源不 便，成本较高的微量蛋白的定量。 • 缺点:不适用成分复杂的蛋白
免疫透射浊度法如图3－23所示
（四）比浊法
• 优点 操作简便、灵敏度高
• 缺点 准确性差、各种蛋白质形成的浊度有
较大差异，影响因素多，包括加入试剂的
手法、混匀技术、反应温度等。 • 一般用于测定尿液、脑脊液等蛋白质浓度 较低的样品
生化检验 体液蛋白质检测 知识点
第八章体液蛋白质检测1、何为急性时相反应蛋白？有哪些？答：发生急性疾病时，血浆中许多蛋白质浓度会发生明显变化，有些蛋白质浓度升高，有些蛋白质浓度降低，随着病情好转，这些蛋白质有逐渐恢复正常。
这种现象称为急性时相反应，而这些浓度会发生改变的蛋白质则成为急性时相反应蛋白。
包括α1-AG，α1-AT，Hp，CER,C3，C4，Fib，CRP,PA,Alb,TRF等。
2、双缩脲法为什么不能用于测定二肽或氨基酸？答：双缩脲法至少需要2个甲酰氨基才能与Cu2+络合，所以氨基酸和二肽无此反应。
3、MM（多发性骨髓瘤）时，血清蛋白质电泳图谱有何特征性表现？答：出现典型的M蛋白峰，是由于多发性骨髓瘤患者浆细胞浸润引起的，M蛋白出现在γ区，称为“γ型”，出现在β区，称为“β型”，是多发性骨髓瘤的一项重要诊断标准。
章节词汇：1、血浆蛋白质：血浆蛋白是指血浆中的蛋白部分，血浆蛋白是多种蛋白质的总称。
2、前清蛋白（前白蛋白PA）：前清蛋白是一种载体蛋白，由肝细胞合成，一种能与甲状腺素结合，称为甲状腺素结合蛋白，一种能运输维生素A，称为维生素A结合蛋白。
3、清蛋白（白蛋白Alb）：由肝合成，是血浆中含量最多的蛋白质，占40%~60%，维持血浆渗透压，缓冲作用，运输作用，调节激素或药物活性。
4、铜蓝蛋白（CER）：主要由肝脏合成，因含铜呈蓝色，具有氧化酶活性，是血液中Fe2+氧化成Fe3+。
5、转铁蛋白（TRF）：血浆中主要含铁蛋白质，由肝及网状皮系统合成，主要运载由消化道吸收的铁和RBC降解释放的铁。
6、结合珠蛋白（Hp）：又称触珠蛋白，是一种糖蛋白，由肝合成，电泳位于ɑ2区带，能与血红蛋白进行不可逆结合，是一种急性时相反应蛋白。
7、AAT（ɑ1-抗胰蛋白酶）：又称ɑ1-AT，电泳时位于ɑ1区带，占90%左右，由肝细胞合成，能抑制多种酶活性。
8、AAG（ɑ1-酸性糖蛋白）：又称ɑ1-AG，由肝细胞合成，是主要的急性时相反应蛋白，急性炎症时上升。
血浆-血清-体液蛋白质组学(完整版 柳满然)
MAIDI-TOF
数据处理 与生物信 息学分析
ESI-MS/MS
13
2DE:Advantages & Disadvantages
• Provides a hard-copy record of separation • Allows facile quantitation • Separation of up to 3000 different proteins • Highly reproducible • Gives info on Mw, pI and post-trans modifications • Inexpensive • Limited pI range (4-8) • Proteins >150 kD not seen in 2D gels • Difficult to see membrane proteins (>30% of all proteins) • Only detects high abundance proteins (top 30% typically) • Time consuming • 30% of spots with multiple proteins from pI 4-7
基本缩略词
IEF: isoelectric focusing (等电聚焦) 2-DE：Two-dimensional gel electrophoresis
第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离； 第二向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离， 把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开
《体液蛋白质检验》课件
调节生理功能
调节蛋白可以调节机体的生理 功能，如激素、生长因子等， 影响生长发育和新陈代谢。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
免疫作用
免疫蛋白能够抵御外来病原微 生物的侵害，维持机体免疫平
衡。
蛋白质的结构和性质
氨基酸组成
蛋白质由20种不同的氨基酸组 成，通过肽键连接形成多肽链
。
二级结构
多肽链通过特定的折叠方式形 成二级结构，如α-螺旋、β-折 叠等。
蛋白质相互作用分析
通过分析蛋白质之间的相互作用，揭 示蛋白质在细胞内的功能和调控机制 。
蛋白质序列分析和结构预测
蛋白质一级结构分析
对蛋白质的氨基酸序列进行分析，了解蛋白质的基本组成和特性 。
蛋白质二级结构预测
利用算法和统计模型预测蛋白质的二级结构，有助于理解蛋白质的 功能和稳定性。
蛋白质三级结构预测
蛋白质提取过程中需要注意避 免蛋白质的降解和交叉污染， 以保证蛋白质的完整性。
蛋白质的分离
蛋白质分离是利用不同蛋白质在物理、化学性质上的差异，将混合蛋白质分离开的 过程。
常用的蛋白质分离方法包括：凝胶电泳、色谱技术等。
蛋白质分离过程中需要选择合适的分离介质和条件，以保证蛋白质的纯度和回收率 。
蛋白质的纯化
监测病情
蛋白质检验可以监测病情的发展和治疗效果。例如，慢性 肝炎患者可以通过蛋白质检验了解肝脏功能状况，评估治 疗效果。
指导治疗
蛋白质检验的结果可以帮助医生制定和调整治疗方案。例 如，对于肾病患者，蛋白质检验的结果可以帮助医生判断 是否需要调整饮食或药物治疗方案。
蛋白质检验的基本概念和原理
基本概念
紫外吸收法
利用蛋白质在紫外光下的吸收特 性进行定量，准确度高，但受干 扰因素较多。
体液蛋白质检验(生物化学检验课件)
（一）血浆蛋白质的分类 1. 根据分离方法分类
盐析法：（pH7.0半饱和的硫酸铵溶液） 分为清蛋白和球蛋白(最简单)
醋酸纤维素薄膜电泳：6种
分
电泳法 (实用)
琼脂糖凝胶电泳：13种 聚丙烯酰胺凝胶电泳：30种
第七章
体液蛋白质检验
教学目标 OBJECTIVES
知识目标
✓ 简述血浆蛋白质的组成、功能及分类。 ✓ 认识血清总蛋白和、白蛋白、纤维蛋白原的测定方法和原理。 ✓ 归纳急性时相反应蛋白的概念、种类和临床意义。
能力目标
✓ 描述血浆中主要蛋白质的来源、功能和临床意义。 ✓ 描述常见相关疾病蛋白质水平的典型变化特征。
(六) α2-巨球蛋白(α2-MG，AMG)
合成部位：肝细胞和单核吞噬细胞系统合成 理化性质：分子量最大的蛋白质，625-800KD 生理功能：是血浆中主要的蛋白酶抑制剂，能与蛋白水解酶 （如纤维蛋白溶酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶及组织蛋 白酶）结合而抑制这些酶的活性
临床意义 ①低蛋白血症（如肾病综合症）时升高，可能是一种代偿机制以 保持血浆胶体渗透压 ②妊娠及口服避孕药时升高 ③新生儿及儿童比成人高2-3倍，是保护作用，抗衡较高浓度的 蛋白酶
生理功能 ①急性时相反应主要蛋白：急性炎症时升高，与免疫防御功能 有关 ②可结合利多卡因和普萘洛尔（心得安），急性心肌梗死时 AAG作为急性时相反应升高，可干扰药物剂量的有效浓度
临床意义 ①作为急性时相反应指标：风湿病，恶性肿瘤，心肌梗死和组 织坏死时增高；一般增加3-4倍 ②随糖皮质激素而增加，包括内源性的Cushing综合征和外源 性强的松、地塞米松等药物治疗时；雌激素使其降低。 ③营养不良，肝严重损伤、肾病综合征、胃肠道疾病致蛋白严 重丢失等情况下AAG降低 ④AAG升高是活动性溃疡性结肠炎最可靠的诊断指标之一 参考范围：0.25-2.0g/L
临床生物化学检验(DOC)
第二章蛋白质与非蛋白含氮化合物检验名词解释：氨基酸血症：氨基酸、或其中间代谢物、或其旁路代谢物在血液中增高称之。
氨基酸尿症：血浆增多的氨基酸及其代谢物均从肾小球滤过超出肾小管重吸收能力从尿排出。
高尿酸血症：血清尿酸浓度超过参考值上限称为高尿酸血症，即男性和绝经后女性大于420μmol/L，绝经前女性大于350μmol/L。
痛风：血液尿酸浓度增高到一定程度时，可出现尿酸盐结晶形成和沉积，并引起特征性急性关节炎、痛风石、慢性关节炎、关节畸形、慢性间质性肾炎和尿酸性尿路结石，即为痛风。
第一节概述一、血浆蛋白质功能1.直接在血液中发挥作用在血浆中运载弱水溶性物质、维持血浆胶体渗透压、组成血液pH缓冲系统、参与凝血与纤维蛋白溶解、血浆固有酶在血浆发挥作用2.需要时进入组织发挥作用对组织蛋白起修补作用、组成体液免疫防御系统、抑制组织蛋白酶、参与代谢调控作用的激素二、醋纤膜电泳或琼脂糖电泳分五个区带：白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白（依次为从阴极到阳极，须按顺序记住）分辨率高时：可有β1和β2；α2中也可有两条采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，在适当条件下可以分出30多个区带【生理功能】血浆蛋白质有多种功能，PA即TTR能转运甲状腺激素，并结合携带视黄醇的RBP；ALB是最重要的血浆营养蛋白和血浆载体蛋白；AAT是最重要的蛋白酶抑制物；AAG是主要的APP；Hp结合Hb并防止Hb从肾脏丢失；α2MG也是主要的蛋白酶抑制剂；血浆铜95％存在于Cp中；TRF携带铁在血液中运输；CRP能结合异物并激活补体。
二、体液氨基酸（AA）作用：合成蛋白质，转变为其他含氮生物活性物质（一）遗传性氨基酸代谢紊乱：氨基酸血症，氨基酸尿症（二）继发性氨基酸代谢紊乱：见于肝脏和肾脏疾患、蛋白质营养不良、烧伤等。
肝功能衰竭时，主要在肝脏降解的芳香族氨基酸浓度升高，主要在肌肉、肾及脑中降解的支链氨基酸分解未减少，因此出现支链氨基酸/芳香族氨基酸比值（BCAA/AAA比值）下降三、嘌呤核苷酸（一）嘌呤核苷酸代谢包括腺苷酸（AMP）和鸟苷酸（GMP）嘌呤核苷酸的合成：从头合成途径、补救途径嘌呤核苷酸的分解：终产物是尿酸，人类不能再分解（二）、高尿酸血症1.嘌呤代谢紊乱在原发性高尿酸血症的病因中约占10％，主要原因是嘌呤代谢酶缺陷2.尿酸排泄障碍终尿排出尿酸盐只占滤过量的6％～10％总量约为2.4mmol～3.0mmol/d3.代谢综合征与高尿酸血症4.高嘌呤饮食啤酒引发痛风的可能性最大，烈性酒次之，葡萄酒基本上不存在这种危险5.各种肾脏疾病6.细胞破坏增多第二节常用体液蛋白质与非蛋白含氮化合物检测项目一、体液总蛋白测定蛋白质时利用蛋白质特有的结构或性质：①重复的肽链结构；②分子中均含有氮原子；③与色素结合的能力；④沉淀后借浊度或光折射测定；⑤酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外光吸收（一）双缩脲法（临床常用方法须掌握原理）【测定原理】蛋白质中两个相邻肽键(-CO-NH-)在碱性溶液与二价铜离子作用产生稳定的紫红色络和物。
第8章 体液蛋白质检验(4课时+2课时病例分析)
血浆蛋白质功能
1.直接在血液中发挥作用
在血浆中运载弱水溶性物质 维持血浆胶体渗透压(清蛋白) 组成血液pH缓冲系统
因在急性炎症病人血清中出现的可以结合 肺炎球菌细胞壁C-多糖的蛋白质而命名 是第一个被认定的急性时相蛋白 由肝细胞所合成，115kD 电泳分布在慢γ区带，有时可延伸到β区带
广泛存在于体液中，具有类似抗体的功能，能 激活补体，促进粒细胞、白细胞的运动和吞噬， 有免疫调理作用和吞噬作用，表现炎症反应
血浆蛋白质有多种功能，PA即TTR能转运甲状 腺激素，并结合携带视黄醇的RBP；ALB是最 重要的血浆营养蛋白和血浆载体蛋白；AAG是 主要的APP；AAT是最重要的蛋白酶抑制物； Hp结合Hb并防止Hb从肾脏丢失；血浆铜95％ 存在于Cp中；TRF携带铁在血液中运输；α2MG也是主要的蛋白酶抑制剂；CRP能结合异 物并激活补体；CEA是非器官特异性肿瘤相关 抗原；AFP是用于诊断肝癌的肿瘤标志物。
C-反应蛋白首先升高 12小时内α1-酸性糖蛋白也升高 然后触珠蛋白 、α1抗胰蛋白酶升高 最后是铜蓝蛋白升，早期C反应蛋白、α1抗胰蛋白 酶、α1酸性糖蛋白、触珠蛋白上升很快，然后相 继在3周内逐步降低至正常。
组织损伤后24小时血中触珠蛋白和α1抗胰蛋 白酶开始升高，同时可有血中纤维蛋白原水平的 上升，使血栓形成的可能性升高。
对血小板凝集和血块收缩有抑制作用。
是炎症、感染及疗效的良好指标。
临床意义
急性时相反应的一个极灵敏的指标。 浓度升高：急性心肌梗死、创伤、感染、炎 症、外科手术、肿瘤浸润、风湿病时血浆CRP浓 度迅速显著升高，可达正常浓度的数千倍。 结合临床病史，有助于随访病程。
体液总蛋白的测定方法和临床常用方法
体液总蛋白的测定方法和临床常用方法请注意，我将提供一些常用的体液总蛋白测定方法和临床常用方法的简要描述。
这些描述将根据提供的信息进行概述，并且可能不会提供详尽的细节。
如果您需要详细的描述，请参考相关文献或咨询专业医生或实验室专家。
1. 光比浊法：使用光比浊仪测量样品中的散射光，并根据其强度来估计总蛋白的浓度。
这种方法简便且容易自动化。
2. 比色法：使用特定试剂（如比昂司蓝B试剂）与体液中的蛋白质反应，产生特定颜色。
根据颜色的强度来估计总蛋白的浓度。
3. 分光光度法：使用分光光度计测量样品吸收的光强度。
根据样品中总蛋白的浓度，可以选择适当的波长进行测量，以提高测定的准确性。
4. 电泳法：通过电泳技术将体液中的蛋白质进行分离，根据蛋白质在凝胶中的迁移距离来估计总蛋白的浓度。
这种方法还可以提供蛋白质在体液中的分布图谱。
5. 免疫测定法：利用特定抗体与样品中的蛋白质结合来测定总蛋白的浓度。
常见的免疫测定方法包括酶联免疫吸附测定法（ELISA）、放射免疫测定法（RIA）等。
6. 筛选法：通过筛选体液中的特定蛋白质来估计总蛋白的浓度。
这种方法通常使用特定的抗体或试剂来与目标蛋白质结合。
常见的筛选方法包括西方印迹法和免疫沉淀法。
7. 比重测定法：根据体液中总蛋白与水的比重之差来估计总蛋白的浓度。
这种方法需要准确测量样品和水的体积。
8. 透析测定法：利用透析技术将体液中的某些成分与溶剂分离，然后测定剩余液体中蛋白质的浓度。
这种方法通常用于血浆或尿液样品中总蛋白的测定。
9. 紫外吸收法：利用紫外光谱对体液样品中的蛋白质进行测量。
不同氨基酸和蛋白质在紫外区域的吸收特性可以用来估计总蛋白的浓度。
10. 球蛋白比例测定法：利用球蛋白总量和总蛋白浓度的比例来估计总蛋白的浓度。
这种方法常用于鉴别肝功能异常。
11. 溶液浓缩法：通过将体液样品浓缩以增加蛋白质的浓度，然后利用其他方法测定浓缩液中蛋白质的浓度。
12. 酸碱滴定法：利用酸碱滴定法测定体液中总蛋白的浓度。
血浆血清体液蛋白质组学
expertise
straightforward
• Showed biases for high Mr
• process is simple
• Can be used to ID posttrans. modifications
proteins and against certain types and classes of proteins
41有可预测性常用预测值predictivevaluepv表示包括阳性预测值ppv和阴性预测值npv能有效地用于临床疾病的分型检测方法可实现标准化易于掌握和推广应用具有非创伤性适合于高通量分析费用适当75petricoin等用疏水型芯片结合并分离了卵巢癌患者血浆相关蛋白在肿瘤和健康血清之间发现了5个差异明显的蛋白质峰它们共同构成卵巢癌诊断模型用该模型对肿瘤和健康人血浆进行盲筛该模型诊断肿瘤的敏感性为100特异性为95血清血浆蛋白组学研究的实例76li等选用金属离子鳌合芯片结合并分离乳腺癌血浆蛋白发现3个乳腺癌特异的差异蛋白峰
Protein digests
Results
Auto MS/MS detection
BioWorks data base search
Tandem MS spectra
17
Shotgun:Advantages & Disadvantages
Advantages
Disadvantages
பைடு நூலகம்
• Alleviate some limitations • Requires more handling for
有效抑制的酶
缺点
PMSF（很常用，使用 浓度为1mM）
多肽水解蛋白抑制剂， 如： 1. 亮肽素leupeptin 2. 抑肽素pepstatin 3. 抑肽酶aprotinin 4. 苯丁抑制剂bestain
主管检验师临床医学检验免疫学和免疫检验 第十八章 体液免疫球蛋白测定
第十八章体液免疫球蛋白测定免疫球蛋白（Ig）是由浆细胞合成和分泌的一组具有抗体活性的蛋白质，按其重链性质共分IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五类。
IgG有4个亚型（IgG l、IgG2、IgG3、IgG4）。
IgA除有IgA1和IgA2两个亚型外，尚有分泌型IgA（sIgA），它们的单体结构基本相同。
IgM也有2个亚型IgM1和IgM2。
第一节血清IgG、IgA、IgM测定IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，其中以IgG1含量最多。
IgG是血液和细胞外液中的主要抗体。
也是机体再次免疫应答的主要抗体。
大多数抗感染抗体与自身抗体都为IgG类。
IgA可分为血清型和分泌型两类。
血清型IgA主要以单体形式存在。
分泌型IgA由J链连接的二聚体和分泌成分组成。
是参与黏膜局部免疫的主要抗体。
主要存在于胃肠道和支气管分泌液、初乳、唾液和泪液中。
IgM为五聚体。
是分子量最大的免疫球蛋白，又称巨球蛋白。
主要存在于血液中。
是个体发育过程中最早合成和分泌的抗体。
是抗原刺激诱导的体液免疫应答中最早出现的抗体。
血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM定量测定方法一般有单向环状免疫扩散法、火箭免疫电泳法、ELlSA、免疫比浊法、放射免疫分析法等。
临床常用单向环状免疫扩散法和免疫比浊法来测定血清免疫球蛋白含量。
一、血清IgG、IgA、lgM测定（一）单向环状免疫扩散法该法的原理是将抗血清均匀地分散于琼脂或琼脂糖凝胶内，胶板上打孔，孔内注入抗原或待测血清，抗原在含有抗血清的胶内呈放射状（环状）扩散，在抗原抗体达到一定比例时形成可见的沉淀环。
在一定条件下，抗原含量越高，沉淀环越大。
（二）免疫比浊法该法具有检测范围宽、测定结果准确、精密度高、检测时间短（一般在几分钟内即可完成测试）、敏感度高、稳定性好等优点。
二、血清IgG、IgA、IgM测定的临床意义（一）年龄新生儿可由母体获得通过胎盘转移来的IgG，故血液中含量较高，接近成人水平。
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3、转铁蛋白（transferrin , TRF 或 Tf）
单链糖蛋白由肝及单核吞噬细胞系统合成，分子量 76500，位于β－球蛋白区带，负责运载消化管吸收 的及 红细胞降解释放的铁，以转铁－Fe3+复合物的 形式进入骨髓，用于合成血红蛋白。半衰期7天。 血浆中TRF的浓度受铁供应的调节，在缺铁状态时， 血浆TRF浓度上升，经铁有效治疗后恢复到正常水 平
3、转铁蛋白（transferrin , TRF 或 Tf）
【参考范围】2.5-4.3g/L 【临床意义】①属急性时相反应蛋白 ②并用 于贫血的诊断,缺铁性低色素贫血血浆转铁蛋 白含量增高,但铁的饱和度很低；红细胞对铁 利用障碍引起贫血时，血浆转铁蛋白正常或 降低，但铁的饱和度增加。
4、β2－微球蛋白（ β2－microgluobin ,BMG 或β2－m）
电泳法分类
白蛋白（40－60％）
α1-球蛋白（α1-抗胰蛋白酶、血清 类粘蛋白、α1-酸性糖蛋白、甲胎 蛋白）
α2-球蛋白（α-脂蛋白、触珠蛋白、 铜蓝蛋白、α2-巨球蛋白）
β-球蛋白（转铁蛋白、血红素结合 蛋白、 β微球蛋白、纤维蛋白原、 β脂蛋白、补体）
γ-球蛋白（各种免疫球蛋白主要位 置及C-反应蛋白）
5、C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP)
★第一个被认定为急性时相反应蛋白, ★由肝细胞合成, 可结合多种细菌、真菌及原虫 体对内的多糖。 ★能激活补体，引发调理作用，增强 细胞的吞噬功能，对血小板凝聚和血块收缩 有抑制作用。
由淋巴细胞合成，存在于所有有核细胞的表 面，特别是淋巴细胞和肿瘤细胞。可自由通 过肾小球滤过膜，但在肾小管几乎全部重吸 收，被重吸收的β2－微球蛋白在肾小管细胞 完全降解。
4、β2－微球蛋白（ β2－microgluobin ,BMG 或β2－m）
【参考范围】1.0-2.5mg/L(血清) ；尿： 0.2mg/L以下
儿童 尿ALB
0～ 13.3mg/24h
尿Alb／Cr(肌酐)<2.5mg／mmol
尿中蛋白超过以上数值则称蛋白尿。
2、前白蛋白（prealbumin, PA）
肝细胞合成，分子量54 000，半衰期12小时。 在pH8.6电泳中移速比白蛋白快而得名。
• ⑴功能：①营养 半衰期12小时；
•
②运载 结合T3、T4、结合维生素A。
【临床意义】 血浆β2－微球蛋白含量升高见于 炎症、肿瘤、各种类型白血病及肾功能衰竭， 尿毒症患者血清β2－微球蛋白可达40mg/L。
2微球蛋白（ 2m）
血清升高： 肾小球滤过功 能低下，慢、 急性肾炎，肾 功能不全
肾前性：病毒感染， 免疫疾患（SLE， Sjogren），恶性 肿瘤。
尿中升高： 肾前性 肾小管障碍： Fanconi， 氨基甙类抗生素， 重金属中毒， Wilwon， 烧伤。 肾小球障碍
★
1）血液中的白蛋白
由于白蛋白在血浆中浓度高而且分子量小，其主 要生理功能是维持血液胶体渗透压（血液中80％ 的渗透压是由白蛋白承担的)/缓冲酸碱。 另外，白蛋白能结合诸如胆红素之类的疏水分子。 在体内担负转运各种离子、酶类、脂溶性物质、 激素和药物的功能。在机体营养作用中也起重要 作用（内源性氨基酸）。
考范围 生理功能
临床意义
PA 0.18~0.45g/ 1、组织修补 降低具有意义：
L
2、运载功能 营养不良、急性炎
症、恶性肿瘤、肝
硬化、肾炎时血清
浓度降低。
Alb 36~46g/L
1、营养
增高：严重失水、
2、胶体渗透 输入过多
压
减少：丢失、肝脏
3、维持PH 疾病、消耗性疾病、
4、运输作用
腹水形成、肾病、
或创伤）或炎症（感染性疾病）引起的白蛋白分解代谢增 加；白蛋白的异常丢失——肾病综合症、慢性肾小球肾炎、 糖尿病、SLE等尿中白蛋白损失，烧伤及渗出性皮炎可以 从皮肤丧失大量蛋白质；白蛋白的分布异常——门静脉高 压引起腹水中有大量蛋白质。是从血管内渗漏入腹腔。
• ⑤白蛋白的遗传变异：已发现20多中种。
一、血浆蛋白质的组成、功能及分类
1、血浆蛋白质的组成：
2、血浆蛋白质的功能：
① 营养作用 ②维持胶体渗透压③维持正常PH ④运输作用⑤免疫与防御功能⑥催化作用⑦抑 制组织蛋白酶⑧代谢调节⑨凝血、抗凝血及纤 溶作用。
蛋白质性质
• 氨基酸性质：两性电离及等电点、紫外吸 收、呈色反应。
• 生物大分子：胶体性质、变性、沉淀和凝 固等特点。
根据生理功能分类：
二、一些临床常检测血浆蛋白质
1、白蛋白（albumin , Alb)
肝实质细胞合成，分子量66 458，
半衰期15～19天，是血浆中含量最多的蛋白质，占40～60％。 在肝细胞中没有贮存。
•
分子结构1975年阐明，含585个氨基酸残基的单链多肽，
分子量66458，含17个二硫键（—S—S—），不含糖的组分。
蛋白质的分离
透析、沉淀、盐析、电泳、层析、超速离 心
血浆蛋白质的分类
3、血浆蛋白质的分类
• 根据分离方法： ①盐析法：白蛋白和球蛋白两大类（各种蛋白
质的亲水性和所带的电荷均有差别。） ②电泳法（醋酸纤维素薄膜）：白蛋白、α1－
球蛋白 、 α2 － 球蛋白、 β －球蛋白、纤维 蛋白原、γ－球蛋白。
2）脑脊液中的白蛋白
• CSF中白蛋白全部来自血液。 CSF中白蛋白增高与血脑屏障通透性增高有关。 可见于多发性硬化症、病毒性脑炎或脑膜炎、 细菌性脑膜炎等颅内和椎管内炎症性疾病和某 些神经系统疾病。
• 参考范围：CSF白蛋白134～237mg／L
3）、微量白蛋白尿（MA）
尿ALB
正常成人尿ALB 大约3.90～24.4mg/24h
参考范围：血清白蛋白35～55g／L
• ⑵临床意义
• ①可以作为个体营养状态的评价指标
• ②血浆白蛋白明显减少时，可以影响许多 配体在循环血液中的存在形式；
• ③白蛋白增高较少见，在严重失水时，对 监测血浓缩有诊断意义；
• ④白蛋白减少在不少疾病时常见：白蛋白的合成减少—— 急性或慢性肝炎；营养不连或吸收不良；遗传性缺陷—— 无白蛋白血症是一种极少见的代谢性缺损，血浆白蛋白含 量常低于1g/L，但可以没有症状（如水肿等），可能部分 由于血浆中球蛋白含量代偿性升高；组织损伤（外科手术