一种新型Hsp90抑制剂的合成及其抑制活性

收 稿 日期 ：２０１１－０６—１０；修 订 日期 ：２０１ｌ－０６．１６ 作者简介 ：张晓颖（１９８６一），女 ，汉 族 ，江 苏连 云港人 ，硕 士研究 生 ，主要从 事 合成 药 物 的结 构 修饰 及 其构 效关 系 的研究 。
Ｅ—ｍａｉｌ：Ｓｃｏｒｐｉｏ ｚｘｙ＠ １２６．ｃｏｍ —
此 ，Ｈｓｐ９一０Ｎ 已经成为 日益引人关注的新型抗癌药 物 研究 的重要 作用 靶标 Ｊ。
（１）１的合成 在三颈烧瓶中依次加入水 ７０ ｍＬ，无水 乙醇
毗唑类化合物是近期报道的一类活性较高的 １０ ｍＬ，对氨基苯 甲酸 ２．７４ ｇ（２０ ｍｍｏ１）和浓盐酸
一 Ｈｓｐ９０抑 制 剂 ，基 于 ＳＮＸ－２１１２对 ＨＳｐ９０的 亲 和 ６ ｍＬ，搅拌 至 完 全 溶 解 （溶 液 澄 清 透 明 ），置 低 温
（南京 中医药大学 药学 院，江苏 南京 ２１００２９）
摘要 ：对氨基苯 甲酸经重 氮化 后再 与 ２－氯 乙酰 乙酸 乙酯反 应 制得 （ｚ）４－［２一（１一氯－２－乙 氧基－２一羰 亚 甲基 ）肼
基 ］苯 甲酸 （１）；１与二 甲基环 己二酮成 环后再 与对羟基环 己胺 完成 酰胺化 反应 合成 了一种 新 型 Ｈｓｐ９０抑 制
中图分类号 ：０６２６．２；Ｒ９１４．５
文献标识码 ：Ａ
文章编号 ：１００５－１５１１（２０１１）０５－０６５９－０３
Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｎｏｖｅｌ Ｈｓｐ９０ Ｉｎｈｉｂｏｔｏｒ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｏ—ｙｉｎｇ， ＺＨＡＮＧ Ｊｉｅ， ＬＩ Ｗ ｅｉ， ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ—ｌｏｎｇ （Ｉｎｓｔ ｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｎ，ｍｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００２９，Ｃｈｉｎａ）
氯乙酰乙酸乙酯反应制得（ｚ）－４－［２一（１一氯 ＿２一乙氧 搅拌下 缓慢滴加 ２一氯 乙酰 乙酸乙酯 ２．６９ ｇ（２０
基．２一羰亚甲基）肼基 ］苯 甲酸 （１）；１与二 甲基环 ｍｍｏ１）的乙醇 （２０ ｍＬ）溶液 ，滴毕 ，剧烈搅拌下反
己二酮成环 制得 ４一［１一（６，６一二 甲基４一氧一３一乙酰 应 ２４ ｈ（淡黄色固体）。减压抽滤，滤饼真空干燥
ｍｍｏ１）的 乙醇 （５０ ｍＬ）溶 液 ，１，３－二 甲基 环 己二酮 １．４ ｇ（１０ ｍｍｏ１），搅拌使其完全溶解 ，于室温反应 ７ ｈ；加 人 １ ２．７１ ｇ（１０ ｍｍｏ１），于 室温反 应 １ ｈ；于 ９０℃反应过夜 。用 １０％盐酸调至 ｐＨ ７，分液 ，水 层用乙酸乙酯萃取至无色 ；合并萃取液 ，浓缩后经 硅胶柱层析 ［梯度洗脱剂 ： （乙酸 乙酯 ）：Ｖ（石 油醚）＝３：１—１：１］分离 ，用丙酮重结晶得黄色 针状结 晶 ２ ４．５ ｇ，收率 ２０％； Ｈ ＮＭＲ ：８．１４ （ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．５ Ｈｚ， ２Ｈ，ＡｒＨ），４．３４（ｑ，Ｊ＝７．１ Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２）， ２．９９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２），２．４２（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２），１．３２ （ｔ，Ｊ＝７．１ Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ３），１．０４（８，６Ｈ，ＣＨ３）； ＭＳ （ｍ ＋Ｈ） （％ ）：３５７．１７（１００），３５８．１８
通信联 系人 ：王小龙 ，博士 ，教授 ，Ｔｅｌ＿０２５￣６７９８０１５，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘ．ｇｒｅｇ．ｗａｎｇ＠ｇｍａｉｌ．ｔｏｍ
合 成 化 学
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Ｖｏ１．１９，２０１１
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通路 ，从而抑制癌细胞生长 、促使癌细胞凋亡。因 １．２ 合 成
ｔ ｈｙｌ—ｃｙｃｌｏｈｅｘａ ｎ ｅ一１，３－ｄｉｏｎｅ， ｔｈｅｎ ａｍｉｄａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｐ—ｈｙｄｒｏｘｙｌ－ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌａｍｉｎｅ． Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｗａｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ Ｈ ＮＭ Ｒ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｆｒｏｍ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ３ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ｇｏｏｄ ｉｎ— ｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ Ｈｓｐ９０ｏｔ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｈｓｐ９０ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；Ｐ—ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ；ｃｙｃｌｏｈｅｘａ ｎ ｅ一１，３－ｄｉｏｎｅ；ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｐｏｌａｒ ｉｚａ— ｔｉｏｎ；ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ；ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
液 （组 成见 表 １）４５ 。于 室 温 孵 育 ２ ｈ。 在酶 标仪上读取数据 ，记录荧光偏振值（ＦＰ）。
２ 结果 与讨论
采用 ＳＰＳＳ １７．０统计分析软件计算 ３的 Ｉｃ卯 为 ６５７．２５７（经典 ＨＳｐ９０抑制剂 ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ的 Ｉｃ 。为６５．２４ Ｌ５ ）。ｃ（３）对于荧光偏振值 的影响见 图 １。由图 １可见 ，随着 ｃ（３）的降低 ，荧光偏振值 逐渐增 高 ，说 明 ３对 Ｈｓｐ９０ａ有 明显 的亲 和力。 Ｈｓｐ９０抑制剂的作用机制是 与 Ｈｓｐ９０Ｎ端的 ＡＴＰ 活性 中 心 相 结 合 ，从 而 产 生 抑 制 作 用。３与 Ｈｓｐ９Ｏ 的亲和力越高 ，提示其对该酶的抑制活性 越好 。
（肿瘤坏死 因子受体相关蛋 白 １） Ｊ。Ｈｓｐ９０ｃｔ在 肿瘤细胞 中的高表达是许多肿瘤细胞生存的重要 条件 ，因此 抑 制 Ｈｓｐ９０ｏｌ活 性 已经 成 为 抗 肿 瘤 的 重 要 靶 点 Ｊ。 研 究 表 明 ，许 多 原 癌 蛋 白 都 是 Ｈｓｐ９０的作用蛋 白，如 ：酪氨酸激酶、丝氨酸／半胱 氨酸激酶 、缺血诱导因子、端粒酶、突变 ｐ５３等，这 些蛋 白酶 功 能 的 实 现 直 接 依 赖 于 Ｈｓｐ９０的分 子 伴侣作用 。对肿瘤 细胞 内的 Ｈｓｐ９０分子伴侣作 用进行抑制 ，可 以间接地 同时阻断多种原癌信号
Ａｂｓｔｒａｃｔ：（Ｚ）－４一［２一（１－ｃｈｌｏｒｏ－２－ｅｔｈｏｘｙ－２一ｏｘｏｅｔｈｙｌｉｄｅｎｅ）ｈｙｄｒａｚｉｎｙ１］ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ（１）ｗａｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ
ｆｒｏｍ ｐ－ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ ｂｙ ｄｉａｚｏｔｉｚａｔｉｏｎ，ｔｈｅｎ ｒｅａｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｅｔｈｙｌ ２－ｃｈｌｏｒｏ—ａｃｅｔｏａｃｅｔａｔｅ． Ａ ｎｏｖｅｌ
氧基４，５，６，７一四氢吲唑 ）］苯 甲酸（２）；２与对羟 后用无水 乙醇重结 晶得淡 黄色针状结 晶 １ ４．２１
基环己胺完成酰胺化反应合成了一种新型 Ｈｓｐ９０ ｇ，收 率 ７７．７％ ； Ｈ ＮＭＲ ：１２．６４（ｓ，１Ｈ， 。抑 制 剂——Ⅳ－（４一羟基 环 己基 ）４一［１一（６，６一二 甲 ＣＯ２Ｈ），１０．８２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８９（ｄ，Ｊ＝８．７
制 活性 。
（１００），２７３．０４（３２），２７２．０５（１１．９）。
１ 实验 部分
（２）２的合成 在三颈烧 瓶 中依次 加入 乙醇 钠 Ｏ．６８ ｇ（１Ｏ
１．１ 仪 器 与 试 剂
３Ｆ－２０Ｄ型暗箱式紫外分析仪 ；Ｂｒｏｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ １１Ｉ ４００型核磁共 振仪 （ＤＭＳＯ－ｄ６为溶剂 ，ＴＭＳ为 内标 ）；Ｍａｒｉｎｅｒ ５１４０型电喷雾质谱仪 ；Ｂｉｏｔｅｃｈ型 酶标 仪 。
剂——Ⅳ．（４一羟基环 己基 ）．４一［１一（６，６－二 甲基４－氧 一３－乙 酰氧基４，５，６，７－四氢 吲唑 ）］苯 甲酰 胺 （３），其 结构 经
‘Ｈ ＮＭＲ表征。荧光偏振法研 究结 果表 明 ３对 Ｈｓｐ９Ｏ 具有 明显 的抑制活性 。
关 键 词 ：Ｈｓｐ９０抑制剂 ；对氨基苯 甲酸 ；环己二酮 ；荧光偏振法 ；抑制活性 ；合成
一 基４－氧－３＿－乙酰氧基４，５，６，７一四氢吲唑）］苯 甲酰 Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．４１（ｄ，Ｊ：８．８ Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），
胺（３，Ｓｃｈｅｍｅ １），其结构经 Ｈ ＮＭＲ表征。荧光 ４．２９（ｑ，Ｊ＝７．１ Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２），１．２９（ｔ，Ｊ＝７．１
偏振法研究结果表明 ３对 Ｈｓｐ９０ 具有明显 的抑 Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ３）；ＭＳ （ｍ ＋Ｈ） （％ ）：２７１．０５
热休克蛋白（Ｈｓｐ）是生物体 中普遍存在 的高 度保守的蛋 白质 ，根据分子量大小可分为五大类 ： Ｈｓｐｌ００，Ｈｓｐ９０，Ｈｓｐ７０，Ｈｓｐ６０ 和小 Ｈｓｐ。其 中 Ｈｓｐ９０和 Ｈｓｐ７０与信 号 分 子 的关 系 尤 其 密 切 ，在 细胞恶性 转化 和转 移过 程 中发挥 重要 作用 ］。 Ｈｓｐ９０是胞 质蛋 白 ，在 哺乳 动物 细 胞 中包 括 ：胞 质 伴侣 （Ｈｓｐ９Ｏ ，可诱 导型／主要 型 ；Ｈｓｐ９０ｆｌ，组成 型／次要型），同功异 质体 内质 网伴侣 ＧＲＰ９４（葡 萄糖相关蛋 白 ９４），线粒体 同族体 Ｈｓｐ７５／ＴＲＡＰ１
柱色谱用硅胶 （１００目 ～２００目，３００目 一４００ 目），青岛海洋化工厂 ；ＧＦ２５４薄层层析硅胶板 ，烟 台德信生物科技有限公 司；其 余所用试剂均为分 析纯 ，乙醇经镁和碘作无水处理 。ＢＰＳ（分析缓冲 液 ，Ｈｓｐ９０ 酶试 剂 ，Ｃａｔ．Ｎｏ．５０２９８），ＤＴｒ（二 硫 苏糖醇，４０ ｍｍｏｌ·Ｌ ），ＢＳＡ（牛血清 白蛋 白，２ ｍｇ·ｍＬ ）和二 甲亚砜（ＤＭＳＯ），百灵威 。
力与结合方式 已有实验 确证【４］。本文设计 了一 恒温反应浴（０℃ 一５℃）中，搅拌下分批加入亚
条制备 Ｈｓｐ９０抑制剂的新合成路线 ：对氨基苯 甲 硝酸钠 １．４ ｇ（２０ ｍｍｏ１），加毕 ，反应 ３０ ｍｉｎ（淡黄
酸在冰浴冷却下生成重氮盐 ，调节至 ｐＨ ５后与 ２一 色澄清透明液体 ）。用无水 乙酸钠调节至 ｐＨ ５，
Ｈｓｐ９０ ｉｎｈｉｂｏｔｏｒ，ｅｔｈｙｌ １一｛４一［（４－ｈｙｄｒｏｘｙｃｙｃｌｏｈｅｘｙ１）ｃａｒｂａｍｏｙ１］ｐｈｅｎｙｌ｝－６，６－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－４一ｏＸｏ４，５，６， ７－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ一１ Ｈ－ｉｎｄａｚｏｌｅ－３一ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ（３），ｗａｓ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ｂｙ ｃｙｃｌｉｚａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ １ ａｎｄ ５，５－ｄｉｍｅ－
２０１１年第 ｌ９卷 第 ５期 ，６５９—６６１
合 成 化 学
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎ ａｌ ｏｆ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
Ｖｏ１．１９，２０１１ Ｎｏ．５，６５９—６６１
· 快递 论 文 ·
一 种新 型 Ｈｓｐ９０抑 制剂 的 合成 及其 抑 制 活 性
张晓颖 ，张 杰 ，李 伟 ，王 小龙
第 ５期
张晓颖等 ：一种新型 Ｈｓｐｇ０抑制剂 的合成及其 抑制活性
（２０．５）。 （３）３的合 成 在反 应瓶 中加 入 ２ ７０ ｍｇ，用 适 量 ＤＭＦ溶 解
后加入三 乙胺 ５０ ｍｇ（６ ｅｑ），搅 拌 １０ ｒａｉｎ；加入 ＨＢＴＵ（苯并 三氮 唑一Ｊ７＼ｒ，Ⅳ，Ｊ７ｖ ，Ｊ７ｖ 一四 甲基 脲 六 氟磷 酸盐 ）３８０ ｍｇ（５ ｅｑ），搅拌 ２０ ｍｉｎ；再 加 ２ ６８ ｍｇ， 于 ４５ ｑｃ反应 ２４ ｈ。浓 缩后 经硅 胶 柱色谱 层析 ［洗脱剂 ： （乙酸 乙酯）：Ｖ（石油醚 ）＝１：２］分 离 ，用丙酮 重结 晶得 白色或微 黄 色粉末 ３，收率 ７０％ ； Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣＩ３） ：７．９２（ｄ，Ｊ＝８．６ Ｈｚ， ２Ｈ，ＡｒＨ），７．６Ｏ（ｄ，Ｊ＝８．５ Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ））， ６．０７（ｄ，Ｊ＝７．８ Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ），４．４９（ｑ，Ｊ＝７．１ Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２），３．９９～４．０２（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）， ３．８５—３．５６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ），２．８３（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）， ２．５Ｏ（Ｓ，２Ｈ，ＣＨ２），２．１２（ｄｄ，Ｊ＝３８．９，ｌ１．４ Ｈｚ，４Ｈ，ＣＨ２），１．４６（ｔ，Ｊ＝７．１ Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ３）， １．３２～１．５６（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２），１．１２（Ｓ，６Ｈ，ＣＨ３）。