玫瑰花鞣质提取物体外抗氧化的活性研究_刘红燕

㈠鞣质对—OH 清除的实验。实验按文献[4]方 法操作，测定其鞣质对 Fenton 反应体系产生的羟自 由基(—OH)的清除率。取若干支 25 mL 试管，按顺 序编号，加入 9 mmol/L FeSO4 溶液 1 mL，9 mmol/L 水杨酸-乙醇溶液 2 mL，不同浓度的鞣质提取物 2 mL 和 8.8 mmol/L H2O2 溶液 2 mL，置于 37 ℃ 下反 应 0.5 h。以蒸馏水为空白，在 510 nm 处测定样品的 吸光度（A1），按下式计算其清除率，即清除率＝[A0－ （A1－A2）]/A0×100%。
清除率（%)
清除率（%）
8080
70
6060
?OH—清除O率H 清除率 O2-O?清2除－的率 清除率
50
4040
30
2020
10
0 0 0.05 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0
0.05 1 2 3 4 5 6
鞣质浓鞣质度浓（度（ρm/gm/mlg)· mL－1)
图 1 鞣质对—OH 和 O2－的清除作用曲线图
抗 感 染 药 学 Anti Infect Pharm 2014 October; 11(4) 刘红燕. 玫瑰花鞣质提取物体外抗氧化的活性研究
ຫໍສະໝຸດ Baidu
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DOI：10.13493/j.issn.1672-7878.2014.04-008
网络出版时间： 2014-10-09 16:37
网络出版地址： http://www.cnki.net/kcms/doi/10.13493/j.issn.1672-7878.2014.04-008.html
（2 mol/L 盐酸和 2 mol/L 氢氧化钠液检验洗脱液至 不产生红色、黄色为洗脱终点），将 60% 乙醇液洗脱 部分，减压浓缩，真空干燥，得纯化玫瑰花色素提取 物。 1.2.2 标准溶液的制备 精密称取“1.2.1 鞣质提取 物的制备与纯化”项下的纯化玫瑰花色素提取物
【基金项目】：*1山东省自然科学基金资助（No：ZR2009CM106）；山东省中医药科技发展计划项目（No：20011-23）
注：公式中 A0为空白对照液吸光度；Ax 为样品 溶液吸光度。 1.2.4 鞣质与抗氧化活性相关性的分析 以羟自 由基清除率（X1）、超氧阴离子自由基清除率（X2）为 横坐标，鞣质浓度为纵坐标，采用 SPSS 17.0 版软件 对实验结果进行线性回归考察。
2 实验结果
2.1 鞣质含量的测定 纯化玫瑰花色素为紫红色结晶性粉末，其得率
[Anti Infect Pharm，11(4):295-297]
玫瑰花是我国名贵药材之一，为蔷薇科植物玫 瑰（Rosa rugosa Thunb.）的干燥花蕾，具有行气活 血，开窍化瘀，疏肝醒脾等功效，在治疗心血管疾 病、免疫炎症、抗肿瘤、抗氧化和利胆、解毒 等 [1-2] 方 面有较好疗效。鞣质是玫瑰花主要有效成分之 一。实验中采用大孔吸附树脂纯化得玫瑰花鞣质， 并采用干酪素法对其含量进行了测定[3]。为了进一 步开发利用该资源，笔者在以往工作的基础上对其 体外抗氧化活性做了初步研究。
玫瑰花资源丰富，食药用历史悠久，开发潜力 较大，尤其是作为替代人工合成色素的天然色素开
发方面具有重要价值，有望开发成为抗氧化功能食 品或天然抗氧化剂。
注：公式中 A0 为空白对照液的吸光度，以蒸馏 水代替样品液的吸光度；A1为样品液吸光度；A2为样 品溶液本身的吸光度，以蒸馏水代替显色剂的吸光 度。
㈡清除超氧阴离子自由基(O2－)的活性。按文献[5] 方法操作，采用邻苯三酚自氧化法在 299 nm 处测定 鞣质对 O2－的清除能力，计算其清除率。取 50 mmol/ L Tris-HCl 缓冲液（pH 8.2）4.5 mL，置于 25 ℃ 水浴 中保温 20 min，分别加入不同浓度的鞣质提取物 1 和 0.4 mL 25 mmol/L 邻苯三酚液，混匀后置于 25 ℃ 水浴中反应 5 min，加入 1 mL 8 mmol/L HCl 液终止 反应，于 299 nm 波长处测定吸光度（Ax）。空白对照 组以相同体积蒸馏水代替样品。按下式计算其清除 率，即 O2－清除率＝100（× A0－Ax）/A0。
玫瑰花鞣质提取物体外抗氧化的活性研究*1
刘红燕*2
山东中医药大学，山东 济南 250355
【摘 要】 目的：研究玫瑰花鞣质提取物体外抗氧化活性的能力。方法：采用 Fenton 体系和邻苯三酚自氧化法评
价了玫瑰花鞣质的体外抗氧化能力，采用多元线性回归对鞣质浓度与抗氧化活性相关性进行了分析。结果：玫瑰
花鞣质提取物浓度在 0.05~4.00 μg/mL 范围内与对—OH 和 O2－清除能力呈量效关系，其最大清除率分别为
约 1.2% ，其 中 鞣 质 含 量 为 84.50% ，RSD＝0.24% （n＝3）。
2.2 体外抗氧化活性的研究 玫瑰花鞣质对—OH 和 O2－的清除能力在 0.05~
5.0 mg/mL 范围内呈一定量效关系，且呈现相同趋 势。当其浓度在 0.05~4.0 mg/mL 范围内时对—OH 和 O2－的清除能力随浓度上升逐渐增强；当浓度在 4 mg/mL 时对—OH 和 O2－的清除能力为最高，其清除 率分别为 62.85% 和 72.67%，之后开始趋于平缓。 鞣质对—OH和 O2－的清除作用曲线，见图 1。
0.5 g，加乙醇稀释定容至 50 mL。再分别吸取上述 定容溶液 1，2，3，4，5 和 6 mL 入 10 mL 容量瓶中， 加乙醇稀释定容至刻度，得系列溶度溶液。精密吸 取此系列溶液中第 5 号溶液 1 mL，加甲醇稀释定 容至 100 mL 容量瓶中，备用。 1.2.3 鞣质体外抗氧化活性的研究 其操作方法， 如下：
【作者简介】：*2刘红燕（1980－），女，讲师
【联系电话】：0531-89628556
E-mail: lhyan0@163.com
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ISSN 1672-7878/CN 32-1726/R Anti Infect Pharm 抗 感 染 药 学 2014 October; 11(4) www.aiph.org.cn E-mail: kgryx@126.com Tel: 86-512-62766009 Fax: 86-512-62766009
62.85% 和 72.67%；浓度对抗氧化能力的线性回归方程为 Y＝－0.517＋1.732X1－0.903X2。结论：玫瑰花鞣质具有
较强的抗氧化能力，是 1 种天然有效的抗氧化剂。
【关键词】 玫瑰花；鞣质；体外抗氧化
【中图分类号】 R 965
【文献标志码】 A 【文章编号】 1672-7878(2014)04-295-003
P值 ＜0.05
回归系数 95%置信区间
下限
上限
－3.529
2.495
ISSN 1672-7878/CN 32-1726/R Anti Infect Pharm 抗 感 染 药 学 2014 October; 11(4) www.aiph.org.cn E-mail: kgryx@126.com Tel: 86-512-62766009 Fax: 86-512-62766009
1 材料与方法
1.1 材料 1.1.1 实验药材 玫瑰花采自山东平阴玫瑰花种 植园，晒干，粉碎，过 60 目筛。 1.1.2 仪器与试剂 UV-3010 型紫外分光光度计
（上海精密科学仪器有限公司）；KQ-250E 型超声振 荡清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）等。试剂均 为分析纯。 1.2 方法 1.2.1 鞣质提取物的制备与纯化 参照前期工作发 表的文献[3]，采用 70% 丙酮液提取，调整 pH 值至 9， 静置，沉淀鞣质。取沉淀鞣质粗品适量，水溶，调 pH 值至 4，过滤，滤液过 DA201 型大孔吸附树脂，依次 用 蒸 馏 水 、20% 乙 醇 液 、60% 乙 醇 液 洗 脱
Study on Antioxidative Activity of Tannin Extraction from Rosa Rugosa*1
LIU Hong-yan*2
Shandong University of TCM，Jinan Shandong 250355，China
ABSTRACT Objective: To study the antioxidant activity of tannin extraction from Rosa Rugosa. Methods: The antioxidative activity was evaluated by hydroxyl radical system and pyrogallol autooxidation methods. The correlation relationship was surveyed by multiple linear regression analysis. Results: The tannin concentrations were bewteen 0.05 and 4.00 μ g/mL，it showed correlation relationship for —OH and O2－clearance abilities. The linear regression equation of concentrations against antioxidative activity was Y=－0.517+1.732X1－0.903X2. Conclusion: The tannin from Rosa Rugosa shows strong antioxidative activities and is an effective natural antioxidant. KEY WORDS Rose Flowers; tannins; antioxidant in vitro
X1－0.903 X2。
3 讨论
实验通过化学模拟体系对玫瑰花鞣质体外抗氧 化活性进行了研究，其结果表明玫瑰花鞣质提取物对 羟自由基和超氧阴离子清除能力在 0.05~5.0 mg/mL 浓度范围内呈一定的量效关系，且呈现相同趋势， 0.05~4.0 mg/mL 对—OH 和 O2－的清除能力随浓度 增大逐渐增大，其浓度为 4.0 mg/mL 时达到最大效 应，之后趋于平缓，其抗氧化能力与鞣质浓度呈正相 关。
2.3 玫瑰花鞣质与抗氧化活性的相关性分析 将鞣质的浓度（Y）作为因变量，对—OH 和 O2－
的清除能力 X1、X2 作为自变量，带入回归方程进行 回归，得 r＝0.915 和决定系数 0.836，反映了总体回 归效果较好。经方差检验，F＝10.22，P＜0.05，回归 标准残差正态 P-P 图，见图 2。
图 2 回归标准残差正态 P-P 图
图 2 显示自变量(Xn)与因变量(Y)服从正态分 布，表明玫瑰花鞣质含量与抗氧化活性之间存在线 性关系；进而对其进行多元线性回归分析，得回归 系数分析表，见表 1。
拟合系数 常数
非标准化系数
B
标准差
－0.517
1.085
表 1 回归系数及检验表
标准系数
t值 －0.476
牛淑敏等报道[6]从体外抗氧化活性追踪到玫瑰 花中没食子酸和槲皮素具有抗氧化活性的能力；这 2 种化合物均属于多酚类物质，因该物质具有邻位 酚羟基结构而具有较强的还原性。此类物质抗氧 化作用的机制主要通过与金属离子发生相互作用[7] 或通过酚羟基与自由基的抽氢反应生成稳定的半 醌 自 由 基 ，中 断 链 式 反 应 [8] 而 具 有 抗 氧 化 活 性 有 关。推测：多酚类物质是玫瑰花中有效成分发挥抗 氧化作用的主要物质。
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拟合系数
X1 X2
非标准化系数
B
标准差
0.185 －0.092
0.071 0.068
续表 1 回归系数及检验表
标准系数
1.732 －0.903
t值
2.631 －1.363
P值
＜0.05 ＜0.05
回归系数 95%置信区间
下限
上限
－0.012 －0.281
0.381 －0.096
由 表 1 得 拟 合 方 程 Y＝－ 0.517 ＋ 0.185X1 － 0.092 X2；标准化后，得拟合方程 Y＝－0.517＋1.732