2015版药典培养基适用性验证

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R2A琼脂培养基适用性验证方案

R2A琼脂培养基适用性验证方案目的：验证R2A琼脂培养基适合需氧菌计数的测定；验证同一厂家，不同批号，对培养基适用性无明显差异。

范围： R2A琼脂培养基。

内容：1. 概述培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节。

计数测定用培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素，对菌落数量、颜色、形态等指标存在较大差异，从而影响结果判断的客观性。

培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的数量、生长状态或特征来评价判断检验用培养基是否符合检验要求。

2. 验证原因按2015版《中国药典》微生物限度检验要求。

3. 验证过程3.1 验证人员：组长：组员：3.2 验证时间年月日至年月日3.3 验证用仪器3.4 验证用培养基及试剂3.5 验证用菌种3.6 菌液制备分别接种铜绿假单胞菌,枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至50ml 胰酪大豆胨液体培养基中，在32℃培养24小时，然后用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至每1ml 含菌数小于100cfu 的菌悬液。

3.7 适用性检查3.7.1 向两个无菌平皿内分别注入1ml 上述铜绿假单胞菌菌悬液，加入菌液后立即倾注R2A 琼脂培养基；向两个无菌平皿内分别注入1ml 上述枯草芽孢杆菌菌悬液，加入菌液后立即倾注R2A 琼脂培养基；同时制备1个R2A 琼脂培养基平皿做无菌性检查，混匀，凝固，置32℃下倒置培养72小时，计数；3.7.2. 向两个无菌平皿内分别注入1ml 上述铜绿假单胞菌菌悬液，加入菌液后立即倾注R2A 琼脂对照培养基；向两个无菌平皿内分别注入1ml 上述枯草芽孢杆菌菌悬液，加入菌液后立即倾注R2A 琼脂对照培养基；同时制备1个R2A 琼脂对照培养基平皿做无菌性检查，混匀，凝固，置32℃下倒置培养72小时，计数；3.8 检查结果R2A琼脂培养基的适用性检查结果如下4. 结果判定根据上面的数据，可以看出R2A琼脂培养基平皿上的菌落数与R2A琼脂对照培养基平皿上的菌落数的比值为（应在0.5-2范围内），而且菌落形态大少与对照培养基平皿上的菌落，判定R2A琼脂培养基的适用性检查。

版药典培养基适用性验证

造就基验证文件制Array药有限公司制药有限公司验证立项申请表验证计划的审批验证方案目录1.概述2.验证目标3.验证规模4.验证项目小构成员及职责5.验证及格尺度6.实验材料7.菌液制备8.实用性检讨9.验证记载10.验证结论及分解评价计数造就基实用性检讨的验证计划1. 验证目标：需氧菌.霉菌及酵母菌计数用的造就基应进行造就基的实用性检讨.本次验证的目标是确认胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基是否合适需氧菌.霉菌及酵母菌总数测定.2. 参照尺度：《中国药典》2015年版四部1105非无菌产品微生物限度检讨法.3. 验证项目：胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基的实用性检讨.4.验证小组人员及职责：～2规模内,且菌落形态大小与对比造就基上的菌落一致.6. 实验材料：6.1. 被验证产品：胰酪大豆胨琼脂造就基.沙氏葡萄糖琼脂造就基.6.2. 仪器装备：6.2.1. YXQ-LS-100G型立式压力蒸汽灭菌器6.2.2. GHT-00双人净化工作台6.2.3. BSC-110011A2-X 生物安然柜6.2.4.MJ-250I型霉菌造就箱 (20～25℃)6.2.5.LRH-250生化造就箱 (30～35℃)6.3. 验证用造就基6.4. 验证用菌株：(第代)7. 菌液制备按6.4划定程序造就各实验菌株.取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌.白色念珠菌的新颖造就物,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml的菌悬液;取黑曲霉的新颖造就物参加3约为50~100cfu∕ml的黑曲霉孢子悬液.8. 实用性检讨：8.1. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,每株实验菌平行制备2个平皿,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）1ml,注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.8.2. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.9. 验证记载10. 验证结论及分解评价评价人：日期：附表1：计数造就基实用性检磨练证记载实验时光年代日完成时光年代日复核人实验人复核人实验人验证陈述的审批验证报告1. 验证目标：需氧菌.霉菌及酵母菌计数用的造就基应进行造就基的实用性检讨.本次验证的目标是确认胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基是否合适需氧菌.霉菌及酵母菌总数测定.2. 参照尺度：《中国药典》2015年版四部1105非无菌产品微生物限度检讨法.3. 验证项目：胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基的实用性检讨.4.验证小组人员及职责：～2规模内,且菌落形态大小与对比造就基上的菌落一致. 6. 实验材料：6.1. 被验证产品：胰酪大豆胨琼脂造就基.沙氏葡萄糖琼脂造就基. 6.2. 仪器装备：6.2.1. YXQ-LS-100G 型立式压力蒸汽灭菌器 6.2.2. GHT-00双人净化工作台 6.2.3. BSC-110011A2-X 生物安然柜 6.2.4.MJ-250I 型霉菌造就箱 (20～25℃) 6.2.5.LRH-250生化造就箱 (30～35℃)6.4. 验证用菌株：(第代)7. 菌液制备按6.4划定程序造就各实验菌株.取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌.白色念珠菌的新颖造就物,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml 的菌悬液;取黑曲霉的新颖造就物参加3约为50~100cfu∕ml的黑曲霉孢子悬液.8. 实用性检讨：8.1. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,每株实验菌平行制备2个平皿,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）1ml,注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.8.2. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.9. 验证记载10.验证结论及分解评价附表1：计数造就基实用性检磨练证记载实验时光年代日完成时光年代日复核人实验人复核人实验人制药有限公司验证证书。

RA培养基适用性检查方案

题目计数培养基适用性验证方案方案号版本号01批准页起草人审核人签字日期QC经理批准人签字日期QA经理目录1.验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证人员及职责5. 判定标准6. 实验材料7. 菌液制备8. 菌液计数9. 适用性检查 10.阴性对照附件1.检测记录 1.验证目的纯化水微生物计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。

本次验证的目的是确认R2A 培养基适合纯化水中总需氧菌总数测定。

2.参照标准2015版中国药典二部1105微生物限度检查法。

3.验证项目R2A 培养基的适用性检查。

4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员: 4.2验证人员职责及要求 4.3验证中各部门的职责4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。

4.3.1.5负责验证报告的批准工作。

4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。

4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。

4.3.2.3负责验证方案的实施。

4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。

4.3.2.5参与验证结果的评价工作。

4.3.3质量部职责小组人员职务姓名所在部门组长质量部组员质量部组员质量部4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。

4.3.3.2负责验证方案的审核工作。

4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。

证过程中的各项检验工作负责。

5.判定标准被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2的范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。

6.试验材料6.1 被验证产品：R2A琼脂培养基6.2 仪器设备6.2.1 压力蒸汽灭菌器6.2.2 HF1200LC型生物安全柜6.2.3 DNP-9160BS型培养箱6.2.4 DHG90型鼓风干燥箱6.2.5微波炉6.3. 验证用培养基名称生产厂家批号R2A琼脂培养基6.4. 验证用菌株：(第代)试验菌株增菌培养基培养温度培养时间枯草芽孢杆菌胰酪大豆胨液体培养基30—35℃18-24h 铜绿假单胞菌胰酪大豆胨液体培养基23—28℃18-24h 7. 菌液制备分别取铜绿假胞杆菌、与枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，于30～35℃培养不超过18-24h。

抑菌效力检查法-2015中国药典

抑菌效力检查法-2015中国药典录入时间:2014-9-16 9:44:02 来源：国家药典委员会抑菌剂是指抑制微生物生长的化学物质，有时也称防腐剂。

抑菌效力检查法系用于测定灭菌及非灭菌制剂的抑菌活性，以评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂浓度的确定。

如果药物本身不具有充分的抗菌效力，那么应根据制剂特性（如水溶性制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏或使用过程中可能发生的微生物污染和繁殖使药物变质而对使用者造成危害，尤其是多剂量包装的制剂。

在药品生产过程中，抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP 管理，不能作为非无菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。

所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低有效量。

同时，为保证用药安全，成品制剂中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有害的浓度。

抑菌剂的抗菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影响而变化，因此，应验证成品制剂中的抑菌剂效力在效期内不因贮藏条件而降低.本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂培养基培养基的制备胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基?? 照无菌检查法（通则1101）制备。

培养基的适用性检查抑菌效力测定用培养基应进行培养基的适用性检查，包括成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。

菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

培养基适用性检查的菌种及新鲜菌体培养见表1。

菌液制备取表1 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物用pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。

取表2 黑曲霉的新鲜培养物加入3～5ml 含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80 的pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

培养基灵敏度及适用性检查操作规程

培养基灵敏度及适⽤性检查操作规程1. ⽬的：通过培养基适⽤性检查，确保购买的培养基符合实验要求。

2. 范围：本规程适⽤于技术质量部实验员对培养基适⽤性的检查。

3. 职责：质量部实验员负责执⾏此规程。

4. 内容：4.1 检验依据：《中华⼈民共和国药典》2015版4.2 试验⽤具：烧杯、三⾓瓶、酒精灯、接种环、平⽫、试管、吸管、移液枪、滴管、电⼦天平、电热恒温培养箱、⽣化培养箱或恒温恒湿培养箱、单⼈净化⼯作台、⾼压蒸汽灭菌器、微⽣物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查⽤培养基等。

4.3 ⽆菌培养基适⽤性检查：本检查可在供试品的⽆菌检查前或与供试品的⽆菌检查同时进⾏。

4.3.1 培养基：硫⼄醇酸盐流体培养基、胰酪⼤⾖胨液体培养基或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。

4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备⽅法稀释液、冲洗液配制后应采⽤验证合格的灭菌程序灭菌。

a) 0.1%⽆菌蛋⽩胨⽔溶液取蛋⽩胨1.0g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值⾄7.1±0.2，分装，灭菌。

b) pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液取磷酸⼆氢钾3.56g，⽆⽔磷酸氢⼆钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋⽩胨1.00g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。

c) 根据供试品的特性，可选⽤其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%⽆菌氯化钠溶液）。

如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加⼊表⾯活性剂或中和剂等。

4.3.3 ⽆菌性检查：每批培养基随机取不少于5⽀（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应⽆菌⽣长。

4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所⽤的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中⼼获得的⼲燥菌种为第0 代），并采⽤适宜的菌种保藏技术进⾏保存，以保证试验菌株的⽣物学特性。

⾦黄⾊葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕⽣孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕⽩⾊念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕⿊曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种⾦黄⾊葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄胰酪⼤⾖胨液体培养基中或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基上，接种⽣孢梭菌的新鲜培养物⾄硫⼄醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24⼩时；b) 接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄沙⽒葡萄糖液体培养基中或沙⽒葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48⼩时，上述培养物⽤pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液或0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

胰酪大豆胨琼脂培养基培养基适用性验证方案

胰酪大豆胨琼脂培养基适用性验证方案目的：验证胰酪大豆胨琼脂培养基适合需氧菌计数的测定；验证同一厂家，不同批号，对培养基适用性无明显差异。

范围：胰酪大豆胨琼脂培养基。

内容：1. 概述培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节。

计数测定用培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素，对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，从而影响结果判断的客观性。

培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价判断检验用培养基是否符合检验要求。

2. 验证原因按2015版《中国药典》微生物限度检验要求。

3. 验证过程3.1 验证人员：组长：组员：3.2 验证时间年月日至年月日3.3 验证用仪器3.4 验证用培养基及试剂3.5 验证用菌种3.6 菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml 胰酪大豆胨液体培养基中，在32℃培养24小时，然后用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至每1ml 含菌数小于100cfu 的菌悬液。

3.7 适用性检查3.7.1 取上述金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌液各2ml ，分别注入6个无菌平皿内（每皿1ml 菌液），加入菌液后立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，同时制备1个胰酪大豆胨琼脂培养基平皿加入0.9%无菌氯化钠溶液，做无菌性检查，混匀，凝固，置32℃下倒置培养72小时，计数；3.7.2. 取上述金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌液各2ml ，分别注入6个无菌平皿内（每皿1ml 菌液），加入菌液后立即倾注胰酪大豆胨琼脂对照培养基，同时制备1个胰酪大豆胨琼脂培养基平皿加入0.9%无菌氯化钠溶液，做无菌性检查，混匀，凝固，置32℃下培养72小时，计数。

3.8 检查结果胰酪大豆胨琼脂培养基的适用性检查结果如下4. 结果判定根据上面的数据，可以看出胰酪大豆胨琼脂培养基平皿上的菌落数与胰酪大豆胨琼脂对照培养基平皿上的菌落数的比值为（应在0.5-2范围内），而且菌落形态大少与对照培养基平皿上的菌落，判定R2A琼脂培养基的适用性检查。

R2A培养基适用性检查方案

前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 1 of 9题目计数培养基适用性验证方案方案号版本号01前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 2 of 9 批准页起草人审核人签字日期QC经理批准人签字日期QA经理前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 3 of 9目录1.验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证人员及职责5. 判定标准6. 实验材料7. 菌液制备8. 菌液计数9. 适用性检查10.阴性对照附件1.检测记录前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 4 of 91.验证目的纯化水微生物计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。

本次验证的目的是确认R2A培养基适合纯化水中总需氧菌总数测定。

2.参照标准2015版中国药典二部1105微生物限度检查法。

3.验证项目R2A培养基的适用性检查。

4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:小组人员职务姓名所在部门组长质量部组员质量部组员质量部4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。

4.2.2认真观察并做好验证原始记录。

4.2.3对实施验证的结果负责。

4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。

4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。

前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 5 of 94.3.1.3负责验证方案的批准工作。

4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。

4.3.1.5负责验证报告的批准工作。

4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。

4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。

4.3.2.3负责验证方案的实施。

4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。

4.3.2.5参与验证结果的评价工作。

4.3.3质量部职责4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。

培养基适用性验证

.培养基适用性验证方案起草人：方案审核人：方案批准人：XXXXX药业股份有限公司目录1. 验证目的 (2)2. 参照标准 (2)3. 验证项目 (2)4. 验证小组人员及职责 (3)5. 验证可接受的标准 (3)6. 验证步骤 (3)7. 菌液制备 (6)8. 适用性检查 (6)9. 控制菌检查 (7)10. 操作方法 (8)11.结论 (11)1. 验证目的：需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基及控制菌培养基应进行培养基的适用性检查。

本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌、霉菌及酵母菌总数及测定和控制菌适用性检查。

2. 参照标准：2015版中国药典微生物限度检查法。

3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查和控制菌适用性检查。

4.验证小组人员及职责：4.14.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。

4.2.2认真观察并做好验证原始记录。

4.2.3对实施验证的结果负责。

4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。

4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。

4.3.1.3负责验证方案的批准工作。

4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。

4.3.1.5负责验证报告的批准工作。

4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。

4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。

4.3.2.3负责验证方案的实施。

4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。

4.3.2.5参与验证结果的评价工作。

4.3.3质量部职责4.3.3.1负责验证方案的审核工作。

4.3.3.2负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。

4.3.3.3负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。

4.3.3.4负责验证资料和报告的审核工作。

4.3.3.5负责验证文件回收、归档管理工作。

培养基灵敏度及适用性检查操作规程

1. 目的：通过培养基适用性检查，确保购买的培养基符合实验要求。

2. 范围：本规程适用于技术质量部实验员对培养基适用性的检查。

3. 职责：质量部实验员负责执行此规程。

4. 内容：4.1 检验依据：《中华人民共和国药典》2015版4.2 试验用具：烧杯、三角瓶、酒精灯、接种环、平皿、试管、吸管、移液枪、滴管、电子天平、电热恒温培养箱、生化培养箱或恒温恒湿培养箱、单人净化工作台、高压蒸汽灭菌器、微生物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查用培养基等。

4.3 无菌培养基适用性检查：本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。

4.3.1 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。

4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

a) 0.1%无菌蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。

b) pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g，无水磷酸氢二钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。

c) 根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%无菌氯化钠溶液）。

如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。

4.3.3 无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。

4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；b) 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48小时，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

《中国药典》2015年版微生物测定修订情况

常州药检
一、微生物计数法
分别接种不大于100cfu的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板，每一试验菌株平行制备2个平皿，30～35℃培养不超过3天。同时，用相应的对照培养基代替被检培养基进行上述试验。分别接种不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板，每一试验菌株平行制备 2个平皿，30～35℃培养不超过5天。同时，用相应的对照培养基代替被检培养基进行上述试验。
常州药检
一、微生物计数法计数培养基适用性检查
菌种：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉，不得超过5代。
常州药检
一、微生物计数法
常州药检
一、微生物计数法
常州药检
一、微生物计数法
取其新鲜培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9无菌氯化钠溶液制成适宜浓度菌悬液。黑曲霉制备时在缓冲液或氯化钠溶液中加入0.05%（v/v）聚山梨酯80。菌液在室温下2小时内使用，2～8℃时可在24h内使用，黑曲霉孢子悬液可2～8℃保存，在验证过的贮存期内使用。
MPN法
常州药检
一、微生物计数法
平皿法：包括倾注法和涂布法。每株菌每种培养基至少制备2个平皿，以算术平均值计算。使用涂布法应采用适宜的方法使培养基表面干燥，且每个平皿接种的供试液不少于0.1ml。
常州药检
一、微生物计数法
薄膜过滤法：一般取相当于1g（ml、10cm2）的供试品，（若供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌情减量）加至适量稀释液中，混匀，过滤。用适量冲洗液冲洗。每株菌每种培养基至少制备一张滤膜。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。
常州药检

纯化水R2A培养基适用性验证报告

R2A培养基适用性验证报告1.目的因2015版药典纯化水检验用培养基变更,依1105 非无菌产品微生物限度检查方法,通过此次实验对所更换的R2A琼脂培养基进行适用性检查，以证明该方法及所采用的培养基适用于纯化水微生物限度检查日常检测。

2.范围适用于本公司纯化水的微生物限度检查。

3．依据中华人民共和国药典（2015年版）4. 职责权限5. 验证方法5.1R2A培养基的适用性检查5.1.1R2A培养基应进行培养基的适用性检查。

5.1.2菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代,试验用菌种应采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

5.1.3菌液制备铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的微生物培养基质控品,使用前注入1.1ml稀释液充分溶解后,在漩涡混合器上振荡混匀,制成1ml(相当于10～100cfu/0.1ml)菌悬液。

5.1.4适用性检查取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各10～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注R2A琼脂培养基，每株试验菌平行制备2 个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养不少于5天，计数；5.1.5结果判定被检定的固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值在0.5～2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。

判该培养基的适用性检查符合规定。

5.1.6实验前的准备5.1.6.1仪器设备确认人: 日期:5.1.6.2操作环境微生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内进行。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。

单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

5.1.6.3器具无菌培养皿：（直径90mm） 1ml注射器5.2计数方法的验证5.2.1当建立纯化水微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。

7.铜绿假单胞菌检查用培养基适用性检查验证方案

1.概述:培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。

适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制是提供优质培养基的保证。

供试品微生物限度检查中所使用的培养基应进行适用性检查。

2.验证目的：本次验证的目的是确认铜绿假单胞菌检查用培养基适用性检查用的溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基的质量，以及其制备程序、保存条件等是否满足微生物限度检查用要求。

3.验证依据：《中国药典》2015年版四部“1106非无菌产品微生物限度检查：微生物控制菌检查”、“9203药品微生物实验室质量管理指导原则”。

4.验证项目：溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基的适用性检查。

5.适用范围：成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

6.验证周期：除另有规定外，在实验室中，若采用已验证的配制和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同一批脱水培养基的适用性检查试验可以只进行一次。

如果培养基的制备过程未经验证，那么每一灭菌批培养基均要进行适用性检查试验。

7.验证小组人员及职责：7.2验证人员职责及要求7.3验证中各部门的职责，负责全公司验证工作的管理。

，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。

8.合格标准：被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应0.5-2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。

9.验证实施条件9.1验证方案培训：在验证实施前，应对参与验证的人员进行验证方案以及与验证相关的文件进行培训，确保相关人员掌握了验证的相关要求与知识。

9.2微生物限度检测室：检验所使用的检测室应经过HVAC系统确认，并符合要求。

9.3检验用水：验证过程使用的纯化水其制备系统应经过确认并符合要求，纯化水质量应经过检验并符合《中国药典》2015年版二部的要求。

9.4检验仪器设备：验证涉及的检验仪器（设备）与检验方法，应经过技术监督局校验合格或者公司确认/验证合格。

9.5验证菌种：验证所使用的菌种，其种类与传代次数应符合《中国药典》的相关要求。

中国药典2015版无菌检查方法适用性试验（直接接种法）

中国药典2015版⽆菌检查⽅法适⽤性试验（直接接种法）*********公司*********产品⽆菌检查⽅法适⽤性试验1、样品信息2、培养基及试剂3、菌种基本信息：4、菌液制备：2.1接种⾦黄⾊葡萄球菌、⼤肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄胰酪⼤⾖胨培养基中或胰酪⼤⾖胨脂培养基上，30～35℃培养18～24⼩时，培养物⽤0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu的菌悬液。

2.2接种⽣孢梭菌的新鲜培养物⾄硫⼄醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24⼩时，培养物⽤0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu的菌悬液。

2.3接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄沙⽒葡萄糖液体培养基或沙⽒葡萄糖琼脂斜⾯培养基上，20～25℃培养24～48⼩时，培养物⽤0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数⼩于100cfu的菌悬液。

2.4接种⿊曲霉菌的新鲜培养物接种⾄沙⽒葡萄糖琼脂斜⾯培养基上，20～25℃培养5～7天，加⼊3～5ml含0.05%（ml/ml）聚⼭梨酯80的0.9%⽆菌氯化钠溶液，将孢⼦洗脱。

然后，采⽤适宜的⽅法吸出孢⼦悬液⾄⽆菌试管内，⽤含0.05%（ml/ml）聚⼭梨酯80的0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu的菌孢⼦悬液。

6、⽆菌检查直接接种法⽅法适⽤性试验6.1供试品制备：描述供试品制备过程（主要为每个样品的取样部位及⽤量）。

6.2试验组：取装量为 ml硫⼄醇酸盐流体培养基，接种规定的供试品量（同6.1），并接种⼩于100cfu的⾦黄⾊葡萄球菌；⼤肠埃希菌、⽣孢梭菌、枯草芽孢杆菌、⽩⾊念珠菌、⿊曲霉按照上述步骤操作，其中⼤肠埃希菌、⽣孢梭菌加⼊硫⼄醇酸盐流体培养基，枯草芽孢杆菌、⽩⾊念珠菌、⿊曲霉加⼊胰酪⼤⾖胨液体培养基。

6.3对照组：取装量为 ml硫⼄醇酸盐流体培养基3管，分别接种⼩于100cfu的⾦黄⾊葡萄球菌、⼤肠埃希菌、⽣孢梭菌；取相同装量的胰酪⼤⾖胨培养基3管，分别接种⼩于100cfu枯草芽孢杆菌、⽩⾊念珠菌、⿊曲霉。