最新寄生虫病检测检验技术

寄生虫病检测

检验技术

1一般检查法

1．1粪便的检查

粪便检查是确定肠道寄生虫病诊断的最主要的方法，也是属于临床化验室常规检查的方法之一。

1．1．1直接涂片法

此法用于检查虫卵、滋养体和包囊。为了避免遗漏，一般需连续检查三张涂片。此法的优点是操作简便，迅速。缺点是阳性率较低，视野中杂质较多，虫卵或原虫少时不易查到。1．1．1．1生理盐水涂片法：

操作方法

（1）取洁净的载玻片一张，于中央滴1~2滴生理盐水。

（2）用便签挑取约火柴头大小的一块粪便（约0.1g），置盐水中涂抹均匀，成半透明的混悬液，其厚薄以透过书上的铅字为宜，如果太厚阻碍光线的透过，太薄则影响检查效果（必要时加盖玻片）。

（3）先用低倍镜观察，从边缘开始来回顺序推动移动器，仔细寻找虫卵。

（4）找到虫卵后，应将虫卵移至视野中央，辨认是何虫卵（必要时可换高倍镜进一步观察）。

注意事项：

（1）检查痢疾阿米巴原虫时，要挑取带有脓血的粪便。

（2）检查原虫包囊时，所取的粪便应再少一些，粪膜涂的再薄一些，否则包囊不易找到。

（3）检查原虫滋养体时，要注意保温，避免化学药品和尿的污染，影响滋养体伪足的运动。

（4）防止涂片变干，可随时滴加生理盐水。一般不用油镜观察。

（5）某些植物细胞很像虫卵，是要加以鉴别，植物细胞的内部结构不象虫卵那样规则，外形多扁平，用嘴轻吹时，植物细胞往往易翻动或变形。

（6）要注意虫卵与人类酵母菌的区别，很易与包囊混淆，酵母菌为无色圆形或卵圆形小体，大小不一，内含一个较大的透明体，其四周有狭窄的细胞浆，浆内含有少数折光形小体和核，有时透明体偏于一边。如用蒸馏水稀释粪便涂片，酵母菌即被裂解消失，而原虫包囊仍存在。

（7）只有雄性寄生虫也无虫卵，切勿随意报告阴性结果。

（8）采集的标本要新鲜，一般不宜超过一昼夜，否则原虫或某些虫卵易变形或者死亡，引起误诊；采集标本的容器要清洁，避免与化学药物或尿混合，否则原虫滋养体很快死亡，影响检出率。

1．1．1．2碘液涂片法：

用碘液代替生理盐水，适用于肠道原虫的检查。

方法

（1）检查原虫包囊时在干净的载玻片上滴一滴碘液，然后取少许粪便，于碘液中，涂抹均匀，便可检查。

（2）检查原虫活滋养体时，可在用生理盐水涂匀的粪膜附近滴一滴碘液，取少许粪便在碘液中涂匀，勿使两块粪膜相混合，盖上盖玻片，便可观察。这样的涂片一半染色，检

查包囊，另一半不染色，可以检查活滋养体。

试剂：

1、碘液染色液：

碘化钾4g

碘2g

蒸馏水100ml

先将碘化钾溶于少量水中，然后加碘溶解后，再加水到100ml。

2、碘伊红染色液

碘液：碘化钾5g溶于生理盐水100ml，加碘至饱和。

伊红液：伊红饱和于生理盐水中。应用时将上述两液等量混合。

注意事项：

（1）碘易升华，放置数日变淡、均以原液瓶底有碘片沉集，每日取少量上清液使用为宜。

（2）碘液过浓，易使标本沉集成块且使原虫染色过深，而致构造不大明显，故在使用时，注意调节碘液量。

（3）碘、伊红染色时背景较深，不如使用碘液时背景清楚。

1．1．1．3快速染色法

快速染色法用于肠道原虫的快速诊断。

固定液的配制

丙酮50ml

冰醋酸50ml

甲醛溶液10ml

邵氏液890ml

以1.25g酚复红与0.5g耐绿混合于上述液中即可使用。混合液应贮存于棕色玻璃瓶中，严密封口，二个月后染液仍稳定，染色结果不变。

操作方法

（1）用棉签将粪便在玻片上涂成薄层。

（2）用滴管将混合液滴在粪涂片上，并将粪膜完全盖住，使之染色并固定。

（3）将载玻片在酒精灯上慢慢加热，待蒸汽出现后，即可缓慢地在火焰上经过2~3次。

（4）立即用自来水轻轻冲洗。

（5）分别依次放置于50%及70%酒精中，每次各需时30秒钟。然后放在95%及纯酒精中，各15秒钟，最后置于二甲苯中透明1分钟。

（6）封固于香胶中，即能做镜检。

用此法染成的标本外观与苏木素染色法相同，呈蓝紫色，核的微细构造与拟染色体特别明显，所需时间仅2.5分钟，不需要特殊的技巧，而且保存液与固定液混合于染液中。染色标本可保存两个月，染色的特征上都没有明显的改变。

1．1．1．4煌焦油蓝、伊红染色法：

此种染色法是一种活体湿片快速染色法，不影响阿米巴原虫的活力，着色不明，便于检出虫体和鉴定虫种。

试剂的配制

甲液：

煌焦油蓝0.2g

氯化钠 6.35g

枸橼酸钠 1.1g

饱和氯化钠溶液0.1ml

蒸馏水100ml

乙液

水溶性金红 1.0g

蒸馏水100ml

用时将甲、乙两液等量混合。

操作方法：

（1）在干净的载玻片上加一滴生理盐水。

（2）用便签挑取少许粪便的粘液部分，与生理盐水混合，涂成适当的粪膜。

（3）加上述混合染色液一滴，混合之，覆置盖玻片。

（4）先用低倍镜找到，然后换高倍镜鉴定。

1．1．2浓集法：

用较多的粪便，将其中的虫卵或包囊集聚在一个小范围内，便于检出，其阳性率比直接涂片法高；缺点是较直接涂片法复杂，时间也较长些。浓集法又分为漂浮法和沉淀法。1．1．2．1漂浮法

利用虫卵和包囊的比重小于液体比重的原理使线虫卵或包囊浮集于液面，以增加单位面积虫卵和包囊的含量，提高检查效果。通常用的方法有饱和盐水漂浮法和硫酸锌离心浮聚法。

（1）饱和盐水漂浮法：

试剂的配制

食盐40g

蒸馏水100ml

加热至沸，冷后取上清液使用。如每95ml内加5ml40%甲醇溶液，可起固定的作用，有利于吸虫卵的上浮。

操作方法

○1取0.5~1g的粪便放入漂浮瓶内（一般可用链霉素瓶代替）。

○2加入少量的饱和盐水（约为容器的1/3即可），用便签搅拌成均匀的混悬液。

○3再加入饱和盐水至漂浮瓶口，使液面略高于瓶口而未溢出为止。

○4在瓶口盖一载玻片，静置10~15min后，将载玻片迅速上提翻转，立即镜检。

注意事项

○1此法适用于线虫卵的检查，如果漂浮时间过长，可使虫卵及包囊变形，甚至下沉。

○2浮集于表面的杂质在放置载玻片前，要清除掉，否则影响检查结果。

（2）硫酸锌离心浮聚法

操作方法

○1取1份粪便与10份温水调合成混合液。

○2取两层纱布过滤于离心管内。

○3用2000~2500r/min的离心速度离心1min，弃去上层液体，再加水少许，将沉淀物调和，再离心，反复2~3次，至水清为止。

○4弃去上清液，加入硫酸锌液（比重1.180即33%的溶液）少许调匀，再加入硫酸锌溶液，随加随调匀，使液面距管口约1cm即可。

○5再离心沉淀1min。

○6用白金耳取表面的液体于玻片上镜检。

1．1．2．2沉淀法

利用虫卵比重大于水的原理，使其下沉在水底。缺点是对于比重略大于1的原虫包囊